INFORME

N.º 4 DE INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS

Las operaciones en el análisis microbiológico

REALIZADO POR:
Arroyo Baldarrago, Jerson
Bernabé Huallpa, Ángel
Meléndez, Livi
Guillen, Jheyson

Fecha de realización:
Fecha de entrega: 29/11/2018
SECCIÓN: C1-04-A
PROFESOR: Salmon Barrantes, Laurence Rommel
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Objetivos

• Realizar la prueba de tinción Gram en distintas muestras.

• Realizar la limpieza del área de trabajo
• Determinar si existen hongos en las áreas de TECSUP
• Realizar la tinción Graham
• Por medio de cultivos realizar un control microbiano de la biblioteca y del baño
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Procedimiento experimental:

Experimento 1: Preparación de placas para siembra y control microbiológico

Recomendaciones:
-Se debe tener en todo momento de trabajo, el mechero prendido, la cual ayudará a eliminar bacterias o
cualquier microorganismo patógeno.
-Se recomienda no trabajar con guantes, ya que se utiliza un mechero el cual puede provocar daños a
la piel si es que se trabajan con guantes
-Al momento de realizar la tinción se debe tener cuidado con el lavado, ya que se puede caer la muestra.
-Se recomienda cerrar las puertas y ventanas al momento de realizar un cultivo.
-Al ingresar el cultivo a la incubadora se debe tener una temperatura de 25 a 30 °C.
-Se recomiendan no hacer demasiados toques a la placa para evitar posible contaminación.
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Experimento 2: Control de Áreas

Control de área de trabajo

dejar abiertas las

esterilizar por via cerrar las placas petri
placas petri por 3
termica las placas y regresar al
minutos en un sitio
petri laboratorio
determinado

llevar a cierta llevar al autoclave y

mantener cerrado la
distancia la placa dejar las placas por
placas mientras son
abierta a la llama del 60 horas a una
trasladadas
mechero temperatura de 25 ºC

luego observar los

esperar a que se agregar el medio de
cambios presentados
enfrien las placas cultivo a las placas
en las placas

Control microbiano: Medio MacConkey

Composición del medio

Peptona 17 g
Proteasa
3g
peptona
Lactosa 10 g
Sales biliares 1.5 g
Cloruro de sodio 5g
Agar 13.5
Rojo neutro 0.03 g
Cristal violeta 0.001 g
Agua destilada 1000 mL
pH 7.1

Las enterobacterias no son inhibidas a determinadas concentraciones de colorantes ni por la presencia de

sales biliares, lo que hace del medio MacConkey un medio de cultivo selectivo para ellas. Este medio
contiene también lactosa y un indicador de pH, lo que nos permite diferenciar aquellas colonias que
fermentan la lactosa con producción de ácidos (cambio de color del medio de cultivo a rojo) de las que no
lo hacen.
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Control microbiano: Medio Sabouraud

El agar dextrosado de Sabouraud, con un pH de 5,6, se utiliza para aislar hongos que se desarrollan mejor
que la mayor parte de las bacterias a este pH. El crecimiento de los hongos es favorecido por las altas
concentraciones de peptonas y glucosa. En estas condiciones aumenta la esporulación típica y proporciona
una morfología más característica para el análisis.

composición del medio

Glucosa 40 g/L
Pluripeptona 10 g/L
Agar 15 g/L
Cloranfenicol 0.05 g/L
pH 5.6

Resultados después de 7 días:

El MacConkey que se realizó en la biblioteca dio negativo , es decir no existio bacterias en el área de toma.
Por otro lado
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Experimento 3: Tinción de Gram

PROCEDIMIENTO

TINCION GRAM:

La tinción de Gram es una técnica muy utilizada en los laboratorios donde se manejan pruebas
microbiológicas. Puede utilizarse para separar la mayoría de las especies bacterianas en dos grandes
grupos, a saber, las que captan el colorante básico, cristal violeta (es decir, las bacterias grampositivas),
y las que pierden ese colorante por lavado con el decolorante alcohol o acetona (es decir, las
gramnegativas). Casi todas las bacterias de importancia clínica pueden detectarse con este método; las
únicas excepciones son los microorganismos que se hallan casi con exclusividad dentro de las células
huésped, los que carecen de pared celular y los que tienen un tamaño insuficiente para ser observados
con el microscopio óptico.
La pared celular de las bacterias Gram negativas está constituida por una capa fina de peptidoglicano y
una membrana celular externa, mientras que las bacterias Gram positivas poseen una pared celular
gruesa constituida por peptidoglicano, pero no cuentan con membrana celular externa; así pues, la
composición química y el contenido de peptidoglicano en la pared celular de las bacterias Gram negativas
y Gram positivas explica y determina las características tintoriales.
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Diferencias estructurales entre bacterias Gram positivas y Gram negativas.

Existen variaciones de esta técnica, pero en términos generales, la tinción de Gram involucra
varios pasos:

1. Tinción inicial: Las células se tiñen con cristal violeta, el cual es el colorante primario. En
este paso todas las células se tiñen de morado. Este colorante tiene afinidad con el
peptidoglicano de la pared bacteriana
2. Mordente: se adiciona yoduro (Lugol) que reacciona con el cristal violeta y forma un
complejo cristal violeta-yoduro que satura los espacios del peptidoglicano de la pared
bacteriana. En este punto todas las células continúan de color morado.
3. Decoloración: se adiciona un solvente no polar, el cual actúa lavando el complejo cristal
violeta-yoduro de las células Gram negativas. De esta manera las bacterias Gram
positivas continúan moradas y las Gram negativas quedan incoloras. Este es el paso
crítico de esta tinción, pues si se exagera, decolora la Gram positivas y si se hace muy
débil no decolora a las Gram negativas.
4. Contratinción: Se vuelve a teñir con safranina la cual funciona como un colorante
secundario, de manera que las bacterias Gram negativas, que habían sido decoloradas,
se tiñen de rosado a fucsia según el colorante empleado; en tanto, las bacterias Gram
positivas no se afectan con la contratinción y permanecen moradas debido a lo intenso
de esta coloración.
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CONCLUSIONES

• Luego de 60 horas se pudo determinar la presencia de hongos en la biblioteca y de

bacterias en el baño utilizando los cultivos MacConkey y Sabouraud. Como es sabido en
el baño existen una gran cantidad de bacterias por lo que la cantidad de ellas se hizo
notar en la placa Petri donde permaneció en la incubadora. Lo que se observo fue unas
líneas con pequeños cortes por toda su extensión. Mientras que en la biblioteca existe
una mayor cantidad de hongos por lo cual se observó unas pequeñas manchas en el
cultivo.
• Se realizó el procedimiento de tinción Gram en distintas muestras y se realizó un posterior
análisis de la tinción Gram.
• Se logró determinar que no existe presencia de bacterias en la biblioteca (Prueba de
MacConkey)
• Se logró determinar que existe presencia de hongos en el baño de hombres,
específicamente en el seca manos (Prueba de Sauburand)

BIBLIOGRAFÍA

• Jorge Danilo García. (1956). Bacteriología General. San José: Universidad de Costa
Rica.
• Forbes.Sahm.Weissfeld. (2009). Bailey & Scott; Diagnóstico Microbiológico. Buenos
Aires: Médica Panamericana.
• Extraido de:
http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf
• Métodos de esterilización y desinfección. Medios de cultivo.
• Extraido de:
http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursos/Diagnostico/Esteril_desinf_medios2015.pdf
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