PROTEÍNA TOTAL

Método Kjeldahl- Gunning- Arnold. Adaptado Griffin 1955.

Reactivos:
- 18,77g de sulfato de cobre penta hidrato (CuSO45H2O)
- 900g de sulfato de Potasio (K2SO4)
- 0,4g de selenio (Se)
- 40g de H3BO3
- 25cm3 de solución alcohólica de azul de metileno al 0,05%
- 25cm3 de solución de rojo de metileno al 0,1%.
- Ácido sulfúrico comercial (H2SO4).
- Soda comercial (lejía al 60%)
- Ácido clorhídrico 0,1 N
- Agua destilada
Equipos:
- Unidad de digestión Kjeldahl
- 1 Aparato destilador Kjeldahl
- 1 balanza analítica de precisión
- 1 Matraz aforado de un litro
- 1 Probeta 10 ml
- 1 Pipeta aforada 25ml
- 1 Erlenmeyer de 250cm3
- 1 Erlenmeyer de 500cm3
- 1 Cronometro
- 3 balón Kjeldahl
- Papel tornasol
- Equipo para titulación

Figura No2. Unidad de disgestion Kjeldahl

Figura No1. Extractor de

Soxhlet. Análisis de
Alimentos. Inés Bernal de
Ramírez.
-
Para su determinación se utiliza el método de Kjeldahl, el cual consiste en;
Oxidación de la muestra
𝐻2 𝑆𝑂4
𝑁2 𝑜𝑟𝑔𝑎𝑛𝑖𝑐𝑜 → 𝐶𝑂2 +𝑁𝐻4 𝐻𝑆𝑂4 + 𝐻2 𝑂
Descomposición sulfato acido de amonio

𝑁𝐻4 𝐻𝑆𝑂4 + 2𝑁𝑎𝑂𝐻 → 𝑁𝐻3 +𝑁𝑎2 𝑆𝑂4 + 2𝐻2 𝑂

𝑁𝐻4 𝑂𝐻 + 𝐻3 𝐵𝑂3 → 𝑁𝐻4 𝐻2 𝐵𝑂3 +𝐻2 𝑂

Titulación del borato de amonio formado
𝑁𝐻4 𝐻2 𝐵𝑂3 + 𝐻𝐶𝑙 → 𝑁𝐻4 𝐶𝑙 +𝐻3 𝐵𝑂3
Preparación de Reactivos:
- Mezcla sulfatos selenio: Mezclar 18,77 g de CuSO4 5H2O, 900g de K2SO4 y 0,4g de Se finamente
pulverizados.
- Ácido bórico al 4% disolver 40 g de H3BO3 en agua caliente si es necesario. Enfriar y completar a
1000cm3. Añadir unas gotas de indicador de Tashiro.
- Indicador de Tashiro: Mezclar 25cm3 de solución alcohólica de azul de metileno al 0,05% y 25cm3
de solución al 0,1% de rojo de metileno.
- Ácido sulfúrico comercial.
- Soda comercial (lejía al 60%)
- Ácido clorhídrico 0,1 N

Preparación de una solución de HCl 0,1 N

Medir en una probeta 10cm3 de HCl R.A (densidad de 4,19 con 37 % de HCL) y pasar a un matraz aforado
de un litro: completar el volumen con agua destilada.

Titulación

Medir exactamente 25 cm3 de esta solución con una pipeta aforada y colocar en un Erlenmeyer de 250
cm3. Agregar 2 gotas de solución de fenolftal. De una bureta deje caer una solución valorada de hidróxido
de sodio hasta la aparición de una coloración débilmente rosada que persista por 30 segundos.
Determinación Macro
a) Digestión
 Pesar de 0,25g a 2,0g de muestra y pasar a un balón Kjeldahl agregar 10,0g de mezcla y 15,0 cm3
de H2SO4 comercial y poner en digestión en los digestores Kjeldahl de 500 a 800 cm3 hasta que se
aclare completamente (color verde claro).

Dejar enfriar completamente y agregar 240 cm3 de agua destilada.

b) Destilación
El destilado se recibe sobre 100cm3 de ácido bórico en un balón o erlenmeyer de 500cm3.

Agregar al balón Kjeldahl 75 cm3 de soda comercial (sin agitar) y unas pocas granallas de cinc,
luego colocar cuidadosamente en destilador Kjeldahl, con el calentador previamente prendido y
balón para recibir el destilado, previamente colocado en el destilador.

Ajustar el balón de la trampa de destilación y agitar cuidadosamente .no se debe omitir el abrir el
agua de refrigeración. La destilación no debe ser muy rápida, pues el amoniaco no alcanza a
solubilizase en el ácido bórico produciéndose el escape de este.

Mantener el calentamiento hasta que ya no se detecte desprendimiento de amoniaco por medio de

papel tornasol en 1 gota del destilado. Debe terse otro recipiente con agua destilada para lavar el
tubo de inmersión sobre la solución de bórico y sumergirlo en agua una vez terminada la
destilación. Retirar el balón con el borato de amonio.

Retirar el calor sin desconectar el equipo. Por enfriamiento el agua de lavado subirá hasta el balón.
Permitiendo mantener limpio el equipo de destilación.

Titular borato de amonio con solución =0,1 N de HCl

14 100
%𝑁 = 𝑉. 𝑁. .
1000 𝑝𝑒𝑠𝑜 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

% 𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 = %𝑁. 6,25

Calcular el título de la solución de ácido por la fórmula.

𝑉𝑎 𝑥 𝑁𝑎 = 𝑉𝑏 𝑥 𝑁𝑏
En la cual
Va= Volumen medio de ácido (25 cm3)
Na= Normalidad buscada del ácido
Vb= Volumen usado en la titulación. Medido en la bureta
Nb= Normalidad conocida de la solución de NaOH

Determinación micro

Pesar 30 mg de muestra. Pasarlos cuantitativamente a un balón Kjeldahl de 50 a 100 cm3, añadir

100 mg de catalizador y 2 cm3 de H2SO4 concentrado.
Seguir procedimiento de digestión, dilución y destilación como se describe en el método macro,
diluyendo con 25 cm3 de agua destilada, alcalinizando con 10 cm3 de NaOH al 40% recibiendo el
destilador sobre 10ml de ácido bórico y titulado con HCl 0,1N.

Diagrama de proceso

Muestra + Mezcla +
H2SO4, en balón
Kjeldahl
Pasar a digestor
hasta alcanzar
color verde claro.

Agregar agua
destilada.

Dejar enfriar

Agregar soda
comercial y cinc

Colocar en el destilador con

balón para recibir con ácido
bórico

Agitar, mantener calentamiento hasta

que no se detecte desprendimiento del
amoniaco en el papel tornasol.

Lavar tubo de inmersión sobre la

solución de ácido bórico y sumergirlo
en agua.

Retirar calor

Titular el borato de amonio con

0.1 N de HCl