Budidaya sel & pengukuran

 pertumbuhan populasi mikroba di lingkungan buatanBudidaya

 Tahap pertama dalam penyaringan untuk mikroorganisme aplikasi industri
potensial adalah isolasi mereka.
 Isolasi (kultur murni atau campuran) diikuti oleh penilaian untuk menentukan
yang melakukan reaksi atau produk yang diinginkan.
 Budaya murni - budaya yang hanya mengandung satu jenis mikroorganisme
 Kultur campuran adalah yang mengandung lebih dari satu jenis
mikroorganisme.

 Kriteria penting dalam pemilihan organisme:

1. Karakteristik gizi organisme.

Medium alami atau yang ditentukan sebelumnya
2. Suhu optimal organisme.
3. Reaksi organisme dengan peralatan yang akan
digunakan
4. Kesesuaian organisme dengan jenis proses yang akan
digunakan.
5. Stabilitas organisme dan kemampuannya untuk
manipulasi genetik.
6. Produktivitas organisme; kemampuan untuk
mengubah media menjadi produk dan memberikan
hasil produk yang tinggi per unit waktu.
7. Kemudahan pemulihan produk dari budaya.
 Metode isolasi culture budaya pengayaan
 Pengayaan budaya adalah teknik yang menghasilkan peningkatan jumlah
organisme relatif terhadap jumlah jenis inokulum asli lainnya.
Untuk mengolah mikroorganisme, media
kultur harus disiapkan di salah satu kapal
kultur yang biasa digunakan: tabung reaksi,
labu, cawan Petri, atau fermentor.
 Untuk mengolah mikroorganisme, media kultur harus disiapkan di salah satu
kapal kultur yang biasa digunakan: tabung reaksi, labu, cawan Petri, atau
fermentor.
 Inokulasi adalah penyemaian kapal biakan dengan bahan mikroba (inokulum).
 Inokulum ini diperkenalkan dengan kawat logam atau loop yang dengan cepat
disterilkan sebelum digunakan dengan memanaskannya dalam nyala api.
 Transfer kultur cair sering dilakukan dengan menggunakan pipet yang
disterilkan.
 Inokulasi biasanya dilakukan dalam tudung aliran laminar untuk meminimalkan
risiko kontaminasi

Langkah-langkah yang diperlukan untuk

budidaya mikroorganisme adalah:
 Langkah-langkah yang diperlukan untuk budidaya mikroorganisme adalah:

1. Mempersiapkan media kultur di mana

mikroorganisme dapat tumbuh dengan baik.
2. Sterilisasi untuk menghilangkan semua organisme
hidup di dalam kapal.
3. Inokulasi mikroorganisme dalam media yang
disiapkan.

Metode penanaman-isolasi
PERTUMBUHAN SEL
  meningkatkan semua komponen kimia: meningkatkan jumlah dan
ukuranpertumbuhan
 Peningkatan massa mungkin tidak benar-benar mencerminkan pertumbuhan
karena sel-sel mungkin hanya meningkatkan ukurannya
 pertumbuhan seimbang - pertumbuhan di mana penggandaan biomassa disertai
dengan penggandaan semua sifat lainnya (misalnya protein, DNA, RNA)
 kultur yang mengalami pertumbuhan seimbang mempertahankan komposisi
kimia yang konstan.
 Dalam media yang memadai untuk beradaptasi, inokulum berada dalam kondisi
pertumbuhan yang seimbang
 Pertumbuhan sel dapat ditentukan dengan mengukur jumlah sel, massa sel, atau
aktivitas sel.

Metode pengukuran
 Nomor telepon genggam
 Hitungan mikroskopis (2)
 jumlah plat yang layak (2)
 Penghitung Coulter
 Massa sel
 Berat kering sel
 kekeruhan

 Metode tidak langsung

 Konsumsi nutrisi
 Pembentukan produk
 Komponen sel
 Evolusi panas
 Viskositas

Nomor sel
Hitungan mikroskopis
 diukur di bawah mikroskop dengan menghitung sel yang ditempatkan di ruang
penghitungan khusus.
 Penangguhan yang sangat padat dapat dihitung jika dicairkan dengan tepat
 Dua jenis kamar yang digunakan (sampel cair):
 1. hemositometer. ruang penghitungan sel darah (>
3um).
2. Ruang hitung Petroff-Hausser, untuk digunakan
terutama dengan bakteri.

hemacytometer
Petroff-Hausser menghitung kamar
Metode yang diinginkan adalah:
 Metode yang diinginkan adalah:

1. Peralatan minimal diperlukan.

2. Hasil diperoleh dengan cepat.
3. Karakteristik morfologis organisme dapat diamati.
 Kerugiannya adalah:

1. Sel mati biasanya tidak dapat dibedakan

2. tidak cocok untuk suspensi sel dengan kepadatan
rendah.
3. Sel-sel kecil sulit dilihat di bawah mikroskop dan
dapat terlewatkan saat menghitung.
4. Prosedur penghitungan yang sebenarnya melelahkan
dan dapat menyebabkan kelelahan mata.
5. tidak cocok untuk miselium.
Jumlah plat yang layak
 Sel yang layak didefinisikan sebagai sel yang dapat membelah & membentuk
koloni.
 Dua cara: hitung-metode spread plate dan metode pour plate.
 Metode piring menyebar: volume tidak lebih besar dari 0,1 mL tersebar di
permukaan agar-agar.

 Metode tuang piring: sampel dicampur dengan agar-agar yang meleleh dan
dituangkan ke dalam piring yang steril.
 dihitung.Piring diinkubasi sampai koloni muncul
 Adalah penting bahwa jumlah koloni tidak boleh terlalu besar atau terlalu kecil

Coulter cou nter

 tidak hanya nomor sel, tetapi ukuran sel dapat diukur
 Penghitung Coulter yang khas memiliki satu atau lebih microchannels yang
memisahkan dua ruang yang berisi larutan elektrolit. Ketika partikel atau sel
yang mengandung cairan ditarik melalui masing-masing microchannel, masing-
masing partikel menyebabkan perubahan singkat pada hambatan listrik
cairan. Penghitung mendeteksi perubahan ini dalam hambatan listrik
 Kerugiannya:
 itu tidak bisa membedakan antara sel dan pengotor.
 Sulit digunakan dengan organisme dalam rantai dan tidak berguna dengan
miselium

Pengukuran Massa Sel: berat kering sel

 Berat Kering Sel: langsung dengan mengambil alikuot suspensi sel dan
disentrifugasi upsupernatant dibuang, sel-selnya dicuci bersih dengan air suling
untuk menghilangkan semua zat terlarut.
 Suspensi baru-baru ini disulut dan sel-sel yang sudah mantap dikeringkan
dalam oven dan ditimbang.

 pendekatan yang paling langsung dan mungkin yang paling dapat diandalkan
dan dapat direproduksi untuk kuantitatif massa sel
 (-) memakan waktu dan relatif tidak sensitif terhadap perubahan kecil massa
sel.
 hanya dapat digunakan dengan suspensi sel padat, dan sel harus benar-benar
bebas dari semua materi asing
Kekeruhan
 Sel diukur secara optik dengan menentukan jumlah cahaya yang tersebar oleh
suspensi sel.
 Teknik ini didasarkan pada fakta bahwa partikel-partikel kecil menyebarkan
cahaya secara proporsional, dalam batas-batas tertentu, ke konsentrasi mereka.
 Ketika seberkas cahaya dilewatkan melalui suspensi organisme, pengurangan
jumlah cahaya yang ditransmisikan sebagai akibat dari hamburan dengan
demikian merupakan ukuran kepadatan sel.

 Pengukuran semacam itu biasanya dilakukan dalam spektrofotometer, yang

berbunyi dalam satuan serapan (A).
 Kurva kalibrasi dapat diperoleh dengan mengukur absorbansi sampel dengan
konsentrasi sel yang diketahui
 Biasanya pada 600-700 nm.

Metode tidak langsung

 berdasarkan stoikiometri keseluruhan untuk pertumbuhan dan pembentukan
produk, yang dapat ditulis dalam bentuk umum:
 Perubahan massa sel dapat dipantau secara tidak langsung dengan mengukur:
konsumsi nutrisi, pembentukan produk, komponen sel, evolusi panas, atau sifat
fisik kaldu lainnya.

1. Konsumsi nutrisi
 diperlukan untuk memilih nutrisi yang tidak mungkin digunakan untuk
mensintesis produk metabolisme.
 yaitu: Fosfat, sulfat, atau magnesium
 Ketika massa sel adalah produk utama, konsentrasi sumber karbon dapat diukur
untuk memperkirakan massa sel

2. Formasi Produk :
 produk yang terbentuk terkait dengan pertumbuhan.
 Beberapa produk terbentuk setelah massa sel mencapai fase diam dari siklus
pertumbuhan dan, oleh karena itu, tidak terkait dengan pertumbuhan.
 Evolusi karbon dioksida dapat diukur

3. Komponen Sel :
  Untuk kultur yang mengalami pertumbuhan seimbang, komponen sel makro-
molekul seperti protein, RNA, dan DNA dapat diukur sebagai ganti massa sel.
 Namun, perawatan diperlukan karena proporsi bahan-bahan ini dalam sel dapat
berubah seiring waktu jika kultur tidak mengalami pertumbuhan seimbang

4. Evolusi Panas
 Pertumbuhan sel berevolusi menjadi panas
 Panas pembakaran organisme cukup konstan dengan nilai tipikal 5 kkal / g.
 Jumlah panas yang dikembangkan tergantung pada efisiensi pemanfaatan
energi karbon. Oleh karena itu, pengukuran panas fermentasi dapat dikaitkan
secara tidak langsung dengan pertumbuhan sel.
 Namun, total panas yang terakumulasi dalam sistem fermentasi adalah efek
gabungan dari berbagai sumber pembangkitan dan penghilangan panas seperti
panas dari agitasi dan penguapan, panas yang dibuang ke lingkungan melalui
dinding fermentor, dan panas yang masuk akal di aliran udara .
 Oleh karena itu, untuk mengukur pertumbuhan dengan evolusi panas,
keseimbangan energi lengkap dari sistem fermentasi harus dibuat, yang
mungkin bukan tugas yang mudah

5. Viskositas
 Pertumbuhan miselia atau pembentukan polisakarida meningkatkan viskositas
kaldu fermentasi.
 Oleh karena itu, pengukuran viskositas kaldu berguna dalam banyak fermentasi
komersial.
 Seringkali, kaldu fermentasi menunjukkan perilaku non-Newtonian, yang
membuat pengukuran viskositas aktual menjadi sangat rumit.