Universidade Federal do Piauí - UFPI

Centro de Ciências da Saúde - CCS

Programa de Pós-graduação em Odontologia – PPGO
Disciplina: Tecnologia aplicada à odontologia
Professoras: Profa. Dra. Carmem Dolores Vilarinho Soares de Moura
Profa. Dra. Carmen Milena Rodrigues Siqueira Carvalho

Neusa Barros Dantas Neta

Danila Lorena Nunes dos Santos
Jessa Iashmin Alcobaça Gomes Machado
 São células indiferenciadas, que possuem diferentes
graus de potência e plasticidade, capazes de auto-
renovação e de múltiplas
diferenciações.

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
 Totipotentes Pluripotente Multipotente Unipotente

• São capazes • São capazes • Tem • Se divide

de formar de dar capacidade para formar
todos os origem a de gerar uma cópia
tecidos qualquer diferentes de si mesma
tipo de tipos e mais uma
célula, celulares, célula que
exceto a mas em pode dar
placenta número origem a
limitado apenas um
tipo celular

Lodish H, et al. Biologia celular e molecular. Tradução Santiago-Santos ALC. 5 ed. Porto Alegre: Artmed,2005.
Categorias básicas de células-tronco:

 Células tronco embrionárias (ESC)

 Células tronco somáticas (adultas ou mesenquimais –

(MSC)

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
• A pesquisa com células-tronco adultas começou a cerca de
40 anos atrás.

• Na década de sessenta, os pesquisadores descobriram que

a medula óssea contém pelo menos dois tipos de células-
tronco.

Células-tronco Células-tronco do estroma, que são

hematopoiéticas, fazem células progenitoras que geram osso,
todos os tipos de células do cartilagem, gordura e tecido
sangue no corpo. conjuntivo fibroso.

Telles PD, Machado MAAM, SakaI VT, Nör JE. Pulp tissue from primary teeth: new source of stem cells. J Appl Oral Sci 2011;19(3):189-194.
Em 1998
 Primeiras linhagens de células tronco
embrionárias humanas;

 Derivadas de embriões frescos ou

congelados obtidos por fertilização
in vitro.
Google imagens

nd
Ulrich H, Colli W, Ho PL, Faria M, Trujillo CA. Bases Moleculares da Biotecnologia. 1 ed. São Paulo (SP): Roca; 2008.
 Foram isoladas de vários tecidos
◦ Cérebro

◦ Pele

◦ Folículos capilares

◦ Médula óssea

◦ Polpa dentária
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Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
 É uma rede de vasos sanguíneos e feixes nervosos que emanam
da região apical

Caracterizada pela presença dos odontoblastos e pelo fato de

que ela é cercado por um tecido mineralizado rígido

Tecido mesenquimal altamente especializado

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
  Origem embrionária
◦ Ecto-mesenquimal

Células tronco pulpares

Deriva da crista neural

Capacidade
multipotencial e
plasticidade

Google imagens

D’aquino R, De Rosa A, Laino G, Caruso F, Guida L, Rullo R, Checchi V, Laino L, Tirino V, Papaccio G. Human dental pulp stem cells: from biology to clinical applications. J. Exp. Zool. (Mol.
Dev. Evol.) 2008; 310B.
 A polpa é separada da
dentina pela camada
de odontoblastos

Região rica em
colágeno e pobre
Google imagens
em células
Região interna rica em
células tronco Núcleo da polpa
(plexo vascular e
nervo)

D’aquino R, De Rosa A, Laino G, Caruso F, Guida L, Rullo R, Checchi V, Laino L, Tirino V, Papaccio G. Human dental pulp stem cells: from biology to clinical applications. J. Exp. Zool. (Mol.
Dev. Evol.) 2008; 310B.
 Células-tronco da polpa dentária

• Células-tronco da polpa dentária de dentes permanentes (DPSC)

• Células-tronco de dentes decíduos humanos esfoliada (SHED)
• Células-tronco do ligamento periodontal (PDLSC)
• Células-tronco de papila apical (SCAP)
• Células progenitoras folículo dental (DFPC)

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
 Tratamento dentário é muito caro para os sistemas de
saúde.

 Novas técnicas tem sido utilizadas para a melhoria de

materiais que possam substituir tecidos danificados ou
em falta.

Mitsiadis TA, Feku A, Papaccio G, Catón J. Dental pulp stem cells, niches, and notch signaling in Tooth Injury. Adv Dent Res 2011; 23(3):275-279.
Objetivo:

 Recriar in vitro o processo embrionário de

desenvolvimento dos dentes.

 As células tronco pulpares demonstram que serão

um modo de tratamento promissor para a
odontologia.

Mitsiadis TA, Feku A, Papaccio G, Catón J. Dental pulp stem cells, niches, and notch signaling in Tooth Injury. Adv Dent Res 2011; 23(3):275-279.
 Nova fonte de células tronco adultas.

 Podem ser removidas de dentes decíduos ou

permanentes, ampliadas e colocadas no mesmo
indivíduo.

 Este transplante autólogo eliminaria a necessidade de

imunossupressão.

Mitsiadis TA, Feku A, Papaccio G, Catón J. Dental pulp stem cells, niches, and notch signaling in Tooth Injury. Adv Dent Res 2011; 23(3):275-279.
 Algumas propriedades das células tronco pulpares já
estão sendo comparadas às presentes na medula
óssea.

 Pouca possibilidade de desenvolver tumor.

Nakahara, T. Potential feasibility of dental stem cells for regenerative therapies:

stem cell transplantation and whole-tooth engineering. Odontology (2011) 99:105–111
Gronthos et al. (2000)

 Células da polpa dental de

terceiro molar permanente;

◦ Foram descritas como

células capazes
de produzir osteoblastos e
condrócitos in vitro e Imagem: D’aquino et al., 2009.

odontoblastos in vivo.

Gronthos S, Mankani M, Brahim J, Robey PG, Shi S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci USA 2000;97:13625–30.
 População de células heterogêneas obtidas a partir da
polpa de dentes permanentes

 Caracterizadas pela sua capacidade de se diferenciar em

estroma de células de múltiplas linhagens e à sua
capacidade clonogênica

 Também podem diferenciar-se em células da linhagem

odontoblástica

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
 Miura et al. (2003)

 Células tronco de dentes decíduos incisivos

o Multipotentes
o Semelhantes as células do cordão umbilical
Neurais Adipócitos

Odontoblásticas Osteoblásticas Condrócitos

Miura M, Gronthos S, Zhao M, Lu B, Fisher LW, Robey PG, et al. SHED: Stem cells from human exfoliated deciduous teeth. Proc Natl Acad Sci USA 2003;100:5807–12.
 População de células altamente
proliferativas, clonogênicas que se
diferenciam em uma diversidade de
tipos de células, incluindo células
neurais, os adipócitos, e odontoblastos

 Diferenciam-se em células endoteliais

funcionais
Imagem: Soares et al., 2007.
 Diferenciam-se em odontoblastos
funcionais

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
 O ligamento periodontal possui população de células que
podem se diferenciar em cemento ou células formadoras de
osso

 PDLSC são capazes de auto-renovação e expressam os

marcadores de células mesenquimais CD146 / MUC18,
CD105, CD166 e STRO-1 (17)

 São células multipotentes com potencial para

diferenciação osteogênica, adipogénicos e condrogênicos

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
 Foramisolados a partir da papila dental embrionária
como o tecido que origina a polpa dentária durante a
formação da coroa

 Constituem uma população heterogênea capaz de

diferenciação osteoblástica e odontoblástica, e menor
diferenciação em adipócitos

Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
  Relatos suportam a utilização de células-tronco
derivadas de dentes como um
recurso celular exclusivo para terapias de
neuroregeneração.

No entanto, a capacidade para promover

a recuperação funcional em transtornos
neurológicos permanece em grande parte
desconhecido.

Nosrat IV et al. Dental pulp cells provide neurotrophic support for dopaminergic neurons and differentiate into neurons in vitro; implications for tissue engineering and repair in the nervous system.
Eur J Neurosci. 2004;19(9):2388–2398.
Huang AHC et al. Putative dental pulp-derived stem/stromal cells promote proliferation and differentiation of endogenous neural cells in the hippocampus of mice. Stem Cells. 2008;26(10):2654–2663.
Arthur A et al. Implanted adult human dental pulp stem cells induce endogenous axon guidance. Stem Cells. 2009;27(9):2229–2237.
 Lesão da medula espinal (SCI), muitas vezes leva a
persistentes déficits funcionais devido à perda de neurônios e
células da glia e limitação na regeneração axonal após a lesão.

• Verificar a recuperação das funções locomotoras dos membros

inferiores de ratos com lesões na médula espinhal após o
Objetivo transplante de células tronco pulpares.
 • Isolamento e cultura de DPSCs e SHEDS
• SHEDS obtidas de indivíduos com 6 a 12 anos
• DPSCs obtidas de indivíduos com 18 a 30 anos
• Células tronco mesenquimais da médula óssea de seres
humanos (5 com idades entre 20 e 22 anos)
• Lonza
• Linhas de fibroblastos da pele de seres humanos (3 com
idades entre 36 e 40 anos)
Metodologia • Health Science Research Resources
• Bank Japan
 Ela foi digerida em
solução em 3 mg/ml de
Extração da polpa Após o isolamento da
colagenase tipo 1 e 4
dentária polpa
mg/ml dispase por 1h a
37ºC

As suspensões de
cultura das células
Incubadas a 37ºC em
foram colocadas em
CO2
placas com DMEM e
soro fetal de vitelo
 • Análise de PCR em tempo real

• Análise de microArray
Metodologia
• Análise de citometria de fluxo
 • Modelo animal e procedimento cirúrgico
• Ratas fêmeas adultas Sprague Dawley®
Metodologia
 Ratas foram
anestesiadas com Incisão em níveis
xilazina (100-150 mg / vertebrais (9 a 11 Dura-máter foi aberta
kg) e cetamina vértebras)
(60-90 mg / kg)

Injetou-se células- Médula espinhal foi

Antibiótico
tronco na parte rostral seccionada e retraída
(ampicilina, 10mg / kg)
e caudal em 1-2mm

Ciclosporina (Novartis) a 10 mg /
Ratos foram mantidos
kg no dia antes
sob os cuidados pós-
cirurgia de transplante, em
operatória durante 8
seguida, todos os dias após a
semanas
cirurgia
 • Análise imuno-histoquímica

• Estudo de rastreamento neuronal anterógrada

• Testes neurocomportamental dos membros inferiores foi

realizada usando escala BBB de classificação locomotora
Metodologia
• Análise apoptótica
 • Estatística
• Teste t de Student foi usado para comparações simples
• Análise dos resultados PCR em tempo real e em pontuações
de campo aberto utilizou-se medidas repetidas ANOVA com
Metodologia pós teste de Tukey hoc
 • A análise citométrica
Resut mostrou:
ados

SHEDS e DPSCs expressam um

conjunto de marcadores de
células-tronco mesenquimais
(MSC) (ou seja, CD90, CD73, e
CD105)
Não expressaram marcadores
endotelial /
hematopoiéticas (CD34, CD45,
CD11b/c, e HLADR)

Apresentaram marcadores de
linhagem neural
 • A expressão do fator neurotrófico por
PCR mostrou:
Resutados

• células gliais (GDNF)

• fator neurotrófico derivado do cérebro
(BDNF)
• fator neurotrófico ciliar (CNTF)

Fatores neurais das SHEDS e DPSCs foram

expressos mais do que 3 a 5 vezes que os
fibroblastos derivados da pele ou BMSCs
Sakai K, Yamamoto A, Matsubara K, Nakamura S, Naruse M, Yamagata M, Sakamoto K, Tauchi
R, Wakao N, Imagama S, Hibi H, Kadomatsu K ,Ishiguro N, Ueda M. Human dental pulp-derived
stem cells promote locomotor recovery after complete transection of the rat spinal cord by
multiple neuro-regenerative mechanisms. J Clin Invest. ; 122 (1) :80-90.

• Tempo de recuperação funcional

neuro-regenerativa após o
transplante de células-tronco
Resutados

Os escores de SHEDS e DPSCs para

função locomotora foram maiores
que BMSCs e Fbs

O nível de recuperação dos ratos com

transplante de SHEDS e DPSCs foi
semelhante
Sakai K, Yamamoto A, Matsubara K, Nakamura S, Naruse M, Yamagata M, Sakamoto K, Tauchi
R, Wakao N, Imagama S, Hibi H, Kadomatsu K ,Ishiguro N, Ueda M. Human dental pulp-derived
stem cells promote locomotor recovery after complete transection of the rat spinal cord by
multiple neuro-regenerative mechanisms. J Clin Invest. ; 122 (1) :80-90.

• Regeneração de tanto
o trato corticoespinhal e
os axônios
espinhais serotonérgicos
descendente é
importante para a
Resutados recuperação da
função locomotora dos
membros pélvicos em
ratos

Estes resultados
demonstram que SHEDS
enxertados promoveram a
recuperação da locomoção
dos membros posteriores
através da preservação e
regeneração de axônios
seccionados, mesmo no
microambiente do SNC
danificadas
Sakai K, Yamamoto A, Matsubara K, Nakamura S, Naruse M, Yamagata M, Sakamoto K, Tauchi
R, Wakao N, Imagama S, Hibi H, Kadomatsu K ,Ishiguro N, Ueda M. Human dental pulp-derived
stem cells promote locomotor recovery after complete transection of the rat spinal cord by
multiple neuro-regenerative mechanisms. J Clin Invest. ; 122 (1) :80-90.

• Atividades neurogênicas das células tronco

derivadas de dentes preenchem muitos
requisitos para a recuperação funcional após a
lesão medular
Conclusão
Sakai K, Yamamoto A, Matsubara K, Nakamura S, Naruse M, Yamagata M, Sakamoto K, Tauchi
R, Wakao N, Imagama S, Hibi H, Kadomatsu K ,Ishiguro N, Ueda M. Human dental pulp-derived
stem cells promote locomotor recovery after complete transection of the rat spinal cord by
multiple neuro-regenerative mechanisms. J Clin Invest. ; 122 (1) :80-90.

• SHEDS e DPSCs podem ser obtidas a partir de

decíduos esfoliados e dentes do siso
impactados adultos sem efeitos adverso à
saúde.
Conclusão
Sakai K, Yamamoto A, Matsubara K, Nakamura S, Naruse M, Yamagata M, Sakamoto K, Tauchi
R, Wakao N, Imagama S, Hibi H, Kadomatsu K ,Ishiguro N, Ueda M. Human dental pulp-derived
stem cells promote locomotor recovery after complete transection of the rat spinal cord by
multiple neuro-regenerative mechanisms. J Clin Invest. ; 122 (1) :80-90.

• As células tronco derivadas do dente pode ser

um excelente e prático recurso celular para o
tratamento de lesões medulares

Conclusão
Objetivo

Demonstrar que DPCs poderia ser utilizado para

reparar defeitos ósseos em seres humanos.
 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Objetivo
- Estudo clínico tinha como objetivo reparar defeito ósseo alveolar secundário a
extração de rotina
-Após extração do 3º molar impacto ou erupcionado parcialmente, uma proporção de
pacientes possuem risco de reabsorção da crista alveolar distal às raízes dos 2º molares

-Esta condição clínica, em que a perda vertical tem uma profundidade de sondagem de
pelo menos 7 mm, compromete o segundo molar em uma média de cinco anos ou
menos, e não permite a reparação óssea com técnicas normais
 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia
- Foi aprovado pelo CEP
*Second University of Naples Internal Registry
-Pacientes foram convidados e assinaram um TCLE
D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia

Critérios de inclusão
Extração necessária para todos os dentes do siso, com condições estreitamente comparáveis ​para o menor
de dois dentes impactados

Não ter doença sistêmica

Não estar grávida (para mulheres)

Não usar drogas rotineiramente

 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia

- Pacientes com duas molares inferiores semelhantes foram necessárias para o estudo
*Um sítio de ensaio (T) e o outro como um controlo local (C).
- Dezessete dos 100 pacientes consentiram a cirurgia.
*Desses 17 pacientes, 7 (6 mulheres e 1 homem) retornou para o ano de seguimento.
-Os pacientes foram submetidos a higiene oral profissional uma semana antes da cirurgia
*Foram instruídos a realizar higiene domiciliar da cavidade oral
*Lavar a boca com 0,2% Gluconato de clorexidina (CHX), após a escovação dos
dentes, duas vezes por dia até a realização da cirurgia
 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia

- Obtenção das células-tronco pulpares através da exodontia dos 3º Molares superiores

* Exodontia dos 3ºs Ms
* Obtenção da polpa
* Enxágue da polpa com solução salina e dissociação mecânica
* Cultivo da polpa por 2 semanas
 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia

- Exodontia dos 3ºs Mi

- União das células tronco pulpares a esponja de colágeno
* o conjunto é levado para encher o espaço deixado pela extração (sítio
experimental)
* a esponja de colágeno é colocada do outro lado (sítio controle)
- Sutura
 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia

- Controle pós-operatório
*controles clínicos e radiológicos foram realizados
* 1º controle - 7 após a cirurgia – radiografia, observação clínica e remoção
da sutura
#Edema, presença de inflamação e funcionalidade
* Pacientes foram controladas, uma vez por mês depois, até
para o terceiro mês.
 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia

- Controle pós-operatório
* 4º controle
#Avaliação da profundidade de sondagem
#Amostra dos sítios T e C foram coletados para imunofluorescêncica e histologia
+Cada amostra de osso foi coletado com uma broca com um modelo de
substituição
* Um ano, a partir de cirurgia, análises posteriores foram realizados.
 D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Metodologia

- Análise estatística
* Teste t de Student (bicaudal)
* Nível de significância foi estabelecido em p <0,05.
D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Resultados

As células da polpa dentária dos 3ºMs foi fortemente

positiva para ambos CD34 e Flk-1 para realizar
experimentos in vivo.
D’Aquino R, De Rosa A, Lanza V, Tirino V, Laino L, Graziano A, Desiderio V, Laino G, Papaccio G. Human mandible
bone defect repair by the grafting of dental Pulp stem/progenitor cells and collagen sponge biocomplexes.
European Cells and Materials, 2009; 18.

Resultados

Pacientes selecionados foram submetidos a uma cirurgia para extrair 3ºMi e

regenerar defeitos ósseos
 Resultados

Sete dias após a implantação do biocomplexo, controles clínicos e radiológico revelou

que sítios T e C não mostraram diferenças

Observação clínica revelou cicatrização normal,sem formação de tecido cicatricial ou

perturbações funcionais; sem sangramento, sem efeitos colaterais inchaço ou outros
foram observados.
Resultados

30 dias após a
cirurgia
Parâmetros clínicos
estavam bem
equilibrado em todos
os pacientes

Sítio T apresentado
com uma elevada
taxa de mineralização
 Resultados

Três meses após a cirurgia

Radiografia confirmou que
As análises profundidade os sítios Trevelou
de sondagem foram umcompletamente regenerada
aumento de clínico e que
de inserção o
maior
nível cortical foi muito mais elevada do que
no sítio T queno
nosítio
C C.
Sítio C apresentou ganho de 4,4 ± 1,2 mm
Sítio T ganho de 6,2 ± 2,3mm
 Sítio T: osso bem
organizado
e vascularizado com
uma arquitetura
lamelar circundante
dos canais de Havers
A expressão da
Osteonectina foi
Sites de C: imaturo, com o
ligeiramente
osso diferente
fibroso aprisionado
entrenolamelas
sítio T de
e Cnovo,
incompleto e grandes canais
A Imunofluorescência
de Haversque
mostrou e evidência de
a esponja
reabsorção óssea
de colágeno foi
reabsorvida
completamente
A expressão da
Osteocalcina foi
ligeramente diferente
no sítio T e C
 A expressão da BAP
(fosfatase alcalina
óssea) foi ligeramente
diferente no sítio T e C

A expressão da BMP 2
foi significamente
diferente no sítio T e C

A expressão da VEGF
foi significamente
diferente no sítio T e C
Um ano após a cirurgia
Pacientes apresentaram cavidade oral normal
Sem sinais de alterações
Análise radiográfica confirmou que a regeneração óssea no local T estava completa e
estável
Conclusão

As DPCs autólogas podem ser usadas em uma estratégia de baixo

risco e terapêutica eficaz para a reparação de defeitos ósseos.

Esponjas de colágeno podem ser consideradas um apoio ótimo

para as células-tronco na regeneração guiada
 Um novo protocolo novo para diferenciar
SHED e DPSCs em células hepáticas de alta pureza.

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 Dentes decíduos e terceiros molares (formação
radicular completa).

 Decíduos : a polpa foi obtida pela raíz reabsorvida.

 Molares permentes: foram seccionados no limite

amelocementário e a polpa foi retirada.

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 Digerida em uma solução de 3mg/3ml de colagenase
tipo 1 por 1 hora a 37ºC.

 Meio de cultura : Dulbecco modified Eagle medium

(DMEM).

 FBS 10%, Penicilina, 100 mg/mL kanamycin.

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 Separação magnética

1º dia DMEM + 10% de FBS

1º dia DMEM + 10% de FBS 1º dia DMEM + 10% de FBS 1º dia DMEM + 10% de FBS
2º dia SFM
2º dia SFM 2º dia SFM 2º dia SFM

Número suficiente de células para separação magnética (SFM)

Ligação de células (DMEM + 10% de FBS)

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 5º dia foi adicionado fator de crescimento hepatócito
humano recombinante (HGF) + oncostatina e
dexametasona.

 15 dias.

 A cada 3 dias o meio era trocado.

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
Isolamento e separação magnética com CD117:

 Receptor de membrana.

 Fator de células tronco relacionados a linhagens de

células mesenquimais, endoteliais e endodermais.

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 Imunofluorescência
◦ Anti-citocina 19.
◦ Anti- CD117....

 Marcadores específicos hepáticos:

◦ Alexa Flúor 568.
◦ Anti-alfa fetoproteína....

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 Imunofluorescência de células diferenciadas hepática.

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 Elevado grau de pureza das células
hepáticas foi observada.
 Os mesmos anticorpos foram
utilizados como controles
negativos. * P <.001

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 A maioria das células positivas para CD117-
foram diferenciadas em linhagens de células
hepáticas de alta pureza.

Ishkitiev N et al. High-purity Hepatic Lineage Differentiated from Dental Pulp

Stem Cells in Serum-free Medium. J. Endod. 2012;38:475–480.
 Reconstruir a superfície ocular de coelhos com células
tronco pulpares de dentes decíduos humanos, após
lesão química.

Gomes et al., Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell

Sheets Composed of Human Immature Dental Pulp
Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
Células tronco
 Mantidas em meio DMEM + 15% de FBS

 Penicilina, estreptomicina e aminoácidos.

 As células foram lavadas e tamponadas com fosfato

salino (PBS).

 Enzimaticamente tratadas e incubadas a 37ºC.

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 3 dias antes do transplante as células foram semeadas em
meio de cultura até formarem uma "lâmina" de células
(72h).

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 No dia do transplante a célula foi colhida através da
diminuição da temperatura, 20ºC.

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 Coelhos de 2 a 2,5kg.

 Foram anestesiados.

 Foi induzida a deficiência de células tronco do limbo

através de queimadura química com NaOH.
◦ Olho direito 25s (MCB).
◦ Olho esquerdo 45s (SCB).

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 O olho foi irrigado com PBS.

 Dexametasona e Gentamicina duas vezes por dia

durante uma semana.

1 mê após a lesão:
Tecido fibrovascular removido
para expor o estroma
transparente da córnea.

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 Colocação da lâmina de células tronco sobre o tecido
exposto.

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 A lâmina se aderiu ao estroma da córnea.

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 Uma membrana aminiótica foi colocada sobre a lâmina
e suturada.

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Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
 Depois de 3 meses os animais foram mortos, suas
córneas coletadas e processadas.

 Análise histológica:
◦ Fixadas em paraformaldeído a 4%.
◦ Embebidos em parafina.
◦ Xileno (remoção da parafina).
◦ Etanol (reidratação da amostra).
◦ Hematoxilina e eosina (corantes).

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 Comparação da opacificação e
revascularazação após lesão
química entre o grupo MCB (A1 –
E1) SCB(F1 – L1).

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Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
 3 meses após o transplante, melhora
na transparência da córnea.
◦ MCB : córnea mais clára com menos
revascularização (A2 – E2).
◦ SCB : F2 – L2.

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 Grupo controle:
◦ Opacificação
 1 mês (J1 – K1)
 3 meses (J2 – K2)

Gomes et al., Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell

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Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
MCB
 Epitélio bem organizado da córnea
com o estroma corneano preservado.

Gomes et al., Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell

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Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
SCB
 Epitélio menos organizado com células inflamatórias
subepiteliais e no estroma.

 Um animal mostrou epitélio

Fino e revascularização superficial.

Gomes et al., Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell

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Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
Grupo controle
 Epitélio desorganizado, presença de
células inflamatórias dentro do estroma, e
revascularização.

Gomes et al., Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell

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Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
 O epitélio da córnea e as camadas estromais de olhos
normais de coelho apresentaram morfologia semelhante
à que a observada no grupo de animais MCB.

Gomes et al., Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell

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Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
 No geral, lâminas de células tronco pulpares de dentes decíduos
(hIDPSC) horam bem sucedidas para a reconstrução do epitélio
corneano no grupo MBC.

 No modelo de SCB, procedimentos adicionais podem ser

necessários para determinar se este método poderá ser usado.

Gomes et al., Corneal Reconstruction with Tissue-Engineered Cell

Sheets Composed of Human Immature Dental Pulp
Stem Cells. Investigative Ophthalmology & Visual Science, 2010; 51(3): 1408 -1414.
 Células tronco pulpares suínas promoveram
neurogênese e vasculogênese em uma área peri-
infarto em induzida em cerebro de ratos.

Sugiyama ei al., Dental Pulp-Derived CD31-/CD146-Side Population Stem/Progenitor Cells Enhance

Recovery of Focal Cerebral Ischemia in Rats. TISSUE ENGINEERING: Part A 2011; 17(9 and 10): 1303 – 1311.
 Células tronco pulpares e do ligamento periodontal de
cães geraram novo cemento e fibras do ligamento
periodontal, bem como o osso alveolar na periodontite
avançada em cães beagle.

Park J, Jeon SH, Choung P. Efficacy of Periodontal Stem Cell Transplantation in the
Treatment of Advanced Periodontitis. Cell Transplantation 2011; 20 (2): 271-285.
 Células tronco autólogas do ligamento periodontal foi
o melhor candidato para a aplicação clínica potencial
no tratamento de periodontite.
◦ Melhor qualidade e quantidade do tecido regenerado.

Park J, Jeon SH, Choung P. Efficacy of Periodontal Stem Cell Transplantation in the
Treatment of Advanced Periodontitis. Cell Transplantation 2011; 20 (2): 271-285.
 As células tronco pulpares de dentes decíduos foram
capazes de :
◦ Reabilitar a medula óssea de ratos.
◦ Produzir hepatócitos bem diferenciados.
◦ Reconstruir epitélio corneano em coelhos.
 As células tronco pulpares adultas foram capazes de
regenerar:
◦ Reabilitar a medula óssea de ratos.
◦ Regeneração óssea na região dos terceiros molares.
◦ Produzir hepatócitos bem diferenciados.
 Células tronco pulpares suínas foram capazes de
promover neurogênese e vasculogênese em cérebro
de ratos.

 Células tronco pulpares autólogas de cães foram

capazes de produzir osso alveolar em cães com
periodontite.
 Demarco FF, Conde MCM, CavalcantI BN, Casagrande L, Sakai VT, Nör JE. Dental Pulp Tissue Engineering. Braz Dent J 2011; 22(1): 3-14.
 Lodish H, et al. Biologia celular e molecular. Tradução Santiago-Santos ALC. 5 ed. Porto Alegre: Artmed,2005.
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TISSUE ENGINEERING: Part A 2011; 17(9 and 10): 1303 – 1311.
 Park J, Jeon SH, Choung P. Efficacy of Periodontal Stem Cell Transplantation in the Treatment of Advanced Periodontitis. Cell Transplantation 2011;
20 (2): 271-285.