Clase 5: 3 de octubre.

Especia bacteriana: Colección de cepas que comparten un número importante de propiedades sean estas bioquímicas o
físicas además de las genéticas y que son estables y que difieren de forma significativa de otras células. Vale decir una
cepa puede formar parte de una especie. Y una especie bacteriana puede estar constituida por un número importante de
cepas. ¿Se entiende la diferencia?

Cepa bacteriana  Especie bacteriana.

Cepa bacteriana: es una población de microorganismos que desciende de un único individuo de una población. Vale decir
de un cultivo puro

¿Cuando ustedes tienen un cultivo puro? En el práctico pasado en la siembra ustedes hicieron el método del pentágono y
¿para qué? Para diseminar ¿para que necesitan diseminar? para obtener colonias bacterianas aisladas y ¿qué es una
colonia bacteriana aislada? un cultivo puro y un cultivo puro representa a una cepa bacteriana.

La especia bacteriana se puede describir en base a tres conceptos en base al:

 Genotipo: conjunto de características que son genéticas de una bacteria

 Fenotipo: conjunto de características que se expresan a través de una propiedad bioquímica. Hay una expresión de las
características genéticas

 Filogenia: tiene que ver con las relaciones de parentesco entre las diferentes especies bacterianas. Diferentes
organismos, sin importar su procedencia, tienen un fin en comun. Coliforme feca  Alimento  Staphylococcus Aureus.

La filogenia, el fenotipo y el genotipo determinan a una especie bacteriana y como esta es una clase de genética bacteriana
vamos a estudiar a una molécula que es la molécula reina del código genético.

Hay dos moléculas en todos los seres vivos que son celulares y que son codificantes ADN Y ARN.. en estas moléculas esta
infinito el código de la vida, lo que cada individuo es esta inscrito en su ADN y transcrito en su ARN mensajero para
finalmente ser traducido en proteínas.. esto que acabo de hablar es el dogma central de la biología molecular. Cuando
hablamos de que el DNA se replica y luego es transcrito en RNA mensajeros aquí estamos hablando de códigos, códigos
que sirven para expresar proteínas y ese conjunto de proteínas son una expresión genotipica que hacen que cada individuo
sea lo que es. Lo que su genotipo determine en base a su genoma es lo que el individuo es.

El ADN es una molécula confeccionada en base:bases nitrogenada, azucares y fosfato.. ¿Cómo se llama ese segmento?
Nucleótidos una secuencia de nucleótidos es la secuencia primaria del ADN o ARN

- ADN: ACIDO DESOXIRRIBONUCLEICO

- ARN: ACIDO RIBONUCLEICO

“AQII NI NIS PIDIMIS QIDIR DIRMIDIS IN ISTI CLISI, TINIMIS QII PIRTICIPIR”

Entonces esta molécula que es el ADN que es una secuencia primaria de nucleótidos. La molécula de ADN es bicatenaria
o sea dos cadenas anti paralelas. ¿Qué significa anti paralelo? No se unen. ¿Pero qué sentido tienen? Sentidos opuestos.
Es bicatenaria pero ambas hebras tienen sentidos opuesto una de ellas tiene sentido 5´a 3´ prima y la otra 3´a 5`eso
significa que son anti paralelos...

Replicación de ADN es una replicación semiconservativa, porque cuando se replica el ADN en todos los organismos vivos
se habla de replicación semiconservativa ¿qué significa eso? Significa que cuando hay replicación siempre va a quedar
una hebra nueva y una hebra vieja (una hebra hija y una hebra parental) ahora lo que tenemos aquí es una base
nitrogenada unida a otra... adenina se une con timina en base a enlaces dobles de puentes de hidrogeno y citosina se una
a guanina en base a tres puentes de hidrogeno, por lo tanto aquí tengo unión de diferente tipos de bases las bases puricas
y las bases pirimidinicas

AG: PURICAS (ADENINA-GUANINA)

CUT: PIRIMIDINICAS (CITOCINA-TIMINA)

Las bacterias son haploides tienen un cromosoma. Y aquí este cromosoma que está representado por el ADN es circular
y covalentemente cerrado por lo tanto es un círculo... Ahora este material genético tiene que estar compactado de cierta
forma al interior de la célula... Imagínense una bacteria ¿cuánto mide? 1 micrómetro, (vale decir un metro fraccionado un
millón de veces) pero su ácido nucleico si lo estiramos mide un milímetro o sea mil veces el tamaño de la célula

Como se compacta este ácido nucleico? Aquí hablamos de estructura terciaria del ácido nucleico y hablamos de súper
enrollamiento y es negativo, vale decir a la izquierda. Esta es la estructura terciaria.

¿Cómo se produce esta compactación en las eucariotas? a través de las histonas del collar de perlas. En las bacterias no
tenemos proteínas que cumplen el rol de las histonas... Por lo tanto el súper enrollamiento es el que genera esta
compactación... y cuando va a haber replicación hay una zona un sector que produce una disociación local en un sector
del cromosoma que se desenrolla hay enzimas que son las topoisomerasas las encargadas de disociar el cromosoma en
un sector y producir un origen replicativo y es allí donde comienza la replicación...

Todos los procesos que tengan que ver con los acidos nucleicos en procariotas ocurren en el citoplasma porque aca no
tenemos un nucleo definido, en eucariotas solo la transducción ocurre en el citplasma. Además en eucariotas nos
encontramos con un DNA con presencia de exones y intrones, sin embargos en procariota tenemos el DNA y sectores
codificantes. Si hacemos una analogía solo encontramos la presencia de exones y no de intrones en procariotas y todo
ocurre en el citoplasma.
al Genoma bacteriano va a contener todas las características biológicas de la especie que es distinto al genotipo porque
el ADN tiene sectores que son codificantes, vale decir ¿cuáles son los sectores codificantes? Los que tienen genes, pero
también hay sectores que son no codificantes y también forman parte de este ácido nucleico por lo tanto el genoma
contempla solamente los genes, ya sean estos genes cromosomales o los genes extra cromosómicos que pueden estar
presentes en plásmidos, eso se denomina genoma y el genoma otorga las características biológicas.

Genotipo estamos hablando de toda la molécula de ácido nucleico, referido a las variaciones específicas de los genes.

Genoma bacteriano está compuesto por todos los genes ya sean cromosomales o extra cromosómicos

Todos pertenecemos a la misma especie y por lo tanto nuestro genoma es el mismo, pero nuestro genotipo es distinto,
todos tenemos los ojos de distinto color.

¿Cómo funcionan los genes de las bacterias? Tenemos un promotor único que puede comandar la expresión de diferentes
genes, del gen 1, gen 2, gen 3... Y esa expresión es secuencial y este ordenamiento secuencia se denomina Operon (grupos
de uno o más genes estructurales que codifican enzimas y una de ellas específica.)

en las eucariotas: Tenemos un promotor y un gen... ese promotor comanda la expresión de ese gen (promotor-gen,
promotor-gen).

Ustedes saben que los genes hay de dos tipos genes estructurales y genes reguladores... los promotores podrían ser genes
reguladores... así se organizan entonces los genes dentro del material genético..

“Watson y Crick” el origen de la vida en base al mundo del ARN. Porque se han reconocido varios tipos de moléculas que
contribuyen a reafirmar esta teoría como por ejemplo: hoy día se sabe que el ARN tiene capacidad replicativa, existen
unas enzimas las ribosimas que son ARN con capacidad explicativa.. Lo reafirma la presencia de la transcriptasa reversa
(producción de ADN a partir de ARN).

Priones (producción de proteínas sin pasar por el resto del dogma, ni por replicación)... vale decir los priones son proteínas
produciendo a otras proteínas sin necesidad de ácido nucleico, bueno y como estamos en genética bacteriana y hemos
hablado de genes es importante que definamos lo que es un gen...

Gen: va a definir como una unidad informativa, acotada, discreta, transmisible y que es responsable de una característica
que va a pasar de una generación hacia otra o sea va a pasar a la descendencia. También podemos decir que es una
secuencia de ADN con toda la información necesaria para la síntesis de una proteína en particular (o sea la síntesis de una
proteína requiere necesariamente de la información que este codificada en un gen)

Y el conjunto de proteínas que surgen a partir del genoma van a dar origen a un conjunto de características físicas y
químicas en la célula y esas características que se expresan originan lo que se denomina el fenotipo
 En procariotas ese origen replicativo se llama ORIC- C y ese ORIC- C tiene dos arquillas replicativas y dos puntos de
crecimiento en la hebra en la replicación...bueno evidentemente aquí la compactación del acido nucleico viene dado por
el súper enrollamiento de la estructura terciaria. En eucariotas ocurre la presencia de histonas. También aquí tenemos
la presencia de operones, mas no ocurre eso en eucariotas donde cada gen tiene su propio promotor...

Y es necesario hablar de variabilidad genética... hablamos en la primera diapo de cepas bacterianas... ¿porque se producen
la diferencia dentro de una especie?..Porque existen pequeñas variaciones si no, no existirían las cepas y si todos los
individuos de la especie fueran idénticos no existirían las cepas bacterianas. Por ejemplo hay unas bacterias que son las
escheriachia colli que son capaces de tomar la lactosa que están presentes en el medio de cultivo y hay otras que no son
capaces.. Ahí hay variabilidad genética.. a través del tiempo de la evolución se ha seleccionado esa característica y un
grupo la ha tomado y otro no.

Variabilidad genética: es la tendencia que tienen los genotipos de una población para diferenciarse hay bacterias que
ganan genes de resistencia a los antibióticos a través de la variabilidad. Las bacterias pueden captar información desde
células que son de la misma especie o células que no son de la misma especie y aquí hablamos de transferencia horizontal
de genes...

Cuando se traspasa información genética de una célula a otra que no está emparentadas filogenéticamente hablamos de
transferencia horizontal...

Transferencia vertical: Cuando están emparentadas ej.(madre-hijo)… pero cuando no hay relación filogenética
hablamos de transferencia horizontal, por ejemplo un bacillus sereos le pasa información a un Staphylococcus
aureus ambos contaminantes de los alimentos y uno puede ser más resistente a otro.

¿Cómo podemos lograr la variabilidad genética a través de mutaciones y a través de recombinación genética?

Las mutaciones se logran en el genoma a través de la captura de elementos genéticos móviles… ¿Qué elementos?
Transposones, plásmidos y fagos esos de modo natural, pero también a través de la acción de diferente agentes
mutagenos. luz ultravioleta que produce mutaciones,
Y por otro lado ¿cómo se logra variabilidad genética a través de la recombinación de la nueva información que se captura?
Si una bacteria pasa información genética a otra pueda que esa información genética se pierda pero también puede que
se recombine, que esa bacteria tome esa información y la haga propia ¿cómo la hace propia? A través de diferentes
procesos : la transformación , la transducción y la conjugación bacteriana..

Y llegamos a lo que es la mutación porque estamos hablando de la variabilidad porque yo acabo de decir que la variabilidad
se lograr a través de la mutación, de los mutagenos y de la transferencia génica.

Mutación: hoy día nos habla de un cambio físico en uno o más pares de nucleótidos y que ese cambio debe ser heredado
por cada descendiente lo que hace que cada descendiente sea una célula mutante, por lo tanto se trata de conservarse a
través del tiempo

Ahora antes se definía como un evento espontaneo y al azar, es cierto son espontaneas y al azar en la naturaleza, porque
también se pueden crear por la biotecnología y la ingeniería genética y ustedes tienen que haber escuchado de plantas
transgénicas y esos es ingeniería genética y ahí se aprovechas las mutaciones… ahí no son espontaneas son dirigidas…

Una mutación puede ocurrir dentro de un gen, este puede presentar perdida de su función o ganancia en su función y
esa ganancia puede implicar la sub expresión de su función. Ahora una mutación que produce la perdida puede dar lugar
a que el producto génico sea no funcional. Ahora cuando produce ganancia hace que la característica que es expresada
por ese gen sea extracervada. Por ejemplo: si la bacteria es capaz de producir un antibiótico. Si hay una mutación en el
gen que está encargado de ese antibiótico y esa mutación es de ganancia va a hacer que se produzca una gran cantidad
de antibióticos, pero si es de perdida va a ser que la expresión no se produzca o que sea mínima.

¿Cómo detectar mutaciones? En eucariotas pueden o no ser fácil identificar, porque hay mutaciones que expresan
cambios en el fenotipo, generan cambios en la apariencia pero no siempre, y eso tiene una respuesta y está en el código
genético. En eucariotas a veces hay una expresión producto de una mutación que hace fácil saber cuando el organismo
esta mutado, pero en bacterias ¿cómo observo una mutación? Es más complejo. ¿Ustedes ya han sembrado en césped?
Cuando ustedes siembran y no tienen colonias bacterianas, pero se ve como una especie de nata sobre la placa, eso se
llama siembra en césped no hay colonias. Si yo hago ese siembra en césped con una bacteria y staphylococcus aureusy
coloco un disco de un antibiótico después debo llevar la placa a incubar para que crezcan las bacterias.. Bueno si el
antibiótico no es efectivo frente a la bacteria toda la placa se va a llenar con crecimiento, pero si es efectivo se va a producir
lo que se llama aleo (no se le entiend bien) inhibitorio y eso significa que el antibiótico difunde a través del disco y en esa
zona la bacteria no logra crecer porque el antibiótico es efectivo frente a la bacteria..

¿Qué es lo que paso aquí? Aquí estaba el disco pero lo sacaron, también hay bacterias que crecen que son resistentes
porque aun cuando tuvieron contacto con el antibiótico igual crecieron, no les importo que el antibiótico estuviera ahí..
entonces ¿qué diferencia tienen estas respecto al resto?.. Que son resistentes al antibiótico, por lo tanto puedo decir que
están mutadas.. Que puedo concluir con este experimento.. que el ambiente (placa con medio de cultivo con antibiótico)
selecciona a los organismo mutados, no induce las mutaciones solo selecciona.

Bueno y este es un experimento muy bonito que se llama el Método de réplica en placa que es la variación del
experimento de lederbeg en el año 1952 aquí como ustedes lo pueden ver hay un tronco que tiene un genero encima que
es terciopelo y aquí hay una placa con colonias pero en un medio rico.. en un medio rico ¿que crece? Crece todo porque
hay de todos los nutrientes necesarios para el desarrollo.. Entonces tomamos el tronco con el género enzima y con un
abrazadera que está sujeto el género (el terciopelo tiene como unos pelitos) y usamos el tronco como timbre y tenemos
dos placas una placa con medio poooobre que no tiene nada( tiene solo agua, unas pocas sales) y por otro lado un medio
rico..¿ que esperaría? .. si yo tomo el tronco y estampo aquí y aquí al estampar estoy haciendo replica de las placas.. si las
bacterias fueran iguales yo esperaría que en las dos placas crecieran lo mismo (son replicas) pero en el medio pobre van
a crecer solamente las bacterias que sean capaces de sobrevivir en un medio que casi no tiene nutrientes y las que
necesitan de los nutrientes no van a crecer allí..

¿Las bacterias que no tienen nutrientes se generan esporas? (PREGUNTA FRANCHESCAXD)

R: Si son bacillus podrían producir esporas. Pero aquí estamos suponiendo que no son bacterias esporuladas que son
como Staphylococcus aureus y que no esporula pero contamina alimentos..

Las mutantes auxotroficas (Por que no pueden nutrirse) no crecen, solamente crecen las prototreoficas…

Y hablando de mutaciones hay de dos tipos las que son pequeñas y las que son grandes y asi vamos a hablar de
microlesiones y macrolesiones ..

Las microlesiones es la alteración en un nucleótido, mutaciones puntuales (Transiciones y Transversiones) y la macro una
alteración en un conjunto de nucleótidos del cromosoma..

 Las transiciones son puntuales cuando se cambia una base purica por una purica o una pirimidinica por una
pirimidinica. Antes de abordan en esto si ustedes miran la primera línea en la estructura primera del ADN esta
normal.. en esta secuencia vamos a ver transiciones cuando se cambia una base purica con otra purica se cambio
adenina por guanina o una pirimidinaca por otro pirimidinica y ¿ cuando vemos transversiones? cuando se cambia
una pirimidinica por una purica..

Siempre la secuencia primaria del ADN se va a leer en el RNA mensajero como un marco de lectura en base a tripletes..
el RNA de transferencia tiene anticodones que son complementarios de los tripletes del RNA mensajero.. A esa
sencuencia primaria del ADN que luego es transcrito en el RNA mensajero se le llama marco de lectura, cada triplete es
un codón

Codón. Un aminoácido en el código genético y pensando en esto es que hay mutaciones que tienen una consecuencia
aparenté y hay otras que no tienen consecuencia aparente.. porque acuérdense que el código genético es ambiguo y
¿esto que significa? Un triplete codifica para un único y exclusivo aminoácido,..

Aquí tenemos la secuencia primaria de una proteína en base a tripletes este es el marco de lectura porque esto va a ser
transcrito en el RNA mensajero y luego va a ser traducido en una secuencia primaria de proteínas, pero miren lo que
ocurre.. aquí se altera el marco de lectura cuando no hay una base nitrogenada.. cuando se altera se perdió el primer
nucleótido del tercer codón y eso que va a implicar alteración en el marco de lectura y produjo una proteína defectuosa,
no termino la traducción, se produjo un codón de termino en la secuencia y a esto se le llama alteración del marco de
lectura y cambio en la secuencia aminoacidica

- Siempre las proteínas en bacterias comienzan con formil, metionil, TRNA.

- En eucariotas es metionil. TRNA

Aquí hay otra diferencia en la traducción

Aquí esto sería lo normal, pero ¿que ocurre cuando hay una sustitución? aquí es el triplete ATG y aquí es el tiplete ATA…
ahí cambio la A por la G que tipo de mutación seria esta G por A una transición, cambio y al cambiarse se produce un
codón de termino el codón UGA y al cambiarse se produce una mutación que se denomina sin sentido

Cada vez que se produce un codón de termino por una alteración en el cambio de lectura se produce una mutación sin
sentido.. y una adición cuando se agrega una base, aquí por ejemplo entre la A y la G también se agrega una A también
se altera el marco de lectura al insertarse un nuevo nucleótido y se alteran los tripletes
Bueno y las macro lesiones es cuando un conjunto de nucleótidos se pueden perder ahí hablamos de delesiones, se pueden
duplicar dentro del cromosoma, se pueden insertar en el mismo sector, se pueden invertir (se toma el bloque y se da
vuelta) o se pueden translocar dentro del cromosoma.. particularmente las translocaciones se deben a las actividades de
elementos genéticos móviles como los: transposones.

Aquí está el código genético y lo que yo les decía que las mutaciones tienen diferentes consecuencias y esas están dadas
en bases al código genético.. porejmplo: ustedes se fijan en la C esta la serina, hay cuatro tipletes que codifican para el
mismo aminoácido, sin embargo UCU siempre va a codificar específicamente para serina nunca para otro aminoácido,
pero hay cuatro que codifican para serina,… por lo tanto si ocurre una mutación y se llegara a cambiar en el triplete la U
POR LA C siempre se seguiría codificando serina y a eso se le llamada mutación silenciosa porque aun cuando la mutación
ocurre no hay cambio en el genotipo..

¿Cuándo es sin sentido?

Cuando llegamos a un codón de termino.. hay tres UAA-UAG-UGA cualquiera de esos tres va a producir una mutación sin
sentido, todo el resto son mutaciones con sentido y las mutaciones con sentido pueden ser de tipo conservativo o no
conservativo.. y aquí está el resumen…

Esto que esta aquí es el DNA normal TTC codifica normalmente para lisina estamos claros.. cuando es silenciosa cuando
se cambia una C POR UNA T .. TTT sigue modificando para lisina la mutación ocurrió pero fue silencio sigue siendo lisina
por lo tanto ahí no hay cambio en el fenotipo.. la mutación existe pero sin cambio.. ahora cuando es sin sentido cuando
llegamos a producir un codón de termino UAG no seguimos con la secuencia de lectura

Mutaciones con cambio de sentido cuando se cambia un aminoácido derechamente por otro TCC ahora codifica A arginina
sin embargo es conservativa porque ej lisina y arginina son aminoácidos básicos ambos.. Ahora cuando el aminoácidos es
de otro tipo cuando un aminoácido básico se cambia por uno polar ahí hablamos de una mutación no conservativa TGC
ahora va a codificar para treonina que es un aminoácido polar distinto al aminoácido básico que es lisina y ahí estamos
frente a una mutación con cambio de sentido no conservativa... ¿quienes inducen mutaciones los elementos genéricos
móviles: los plasmidos, los transposones, los fagos y los mutagenos.

Los transposones: son elementos genéticos que tienen la capacidad de movilizarse por el material genético a través del
cromosoma y instalarse en diferentes sectores... se van a instalar y puede que se instalan dentro de un gen y al alterarse
dentro de ese sector pueden alterar la actividad génica.. Bueno aquí está el tranposon y este se puede mover porque tiene
una enzima la transposasa le otorga la capacidad de movilizaciones…

Aquí por ejemplo tenemos un operon donde está el promotor P que comanda la actividad de ABC si el transposon cae se
inserta sobre el gen A va a alterar toda la expresión del operon porque no va a poder expresarse ni A ni B ni C puesto que
la expresión es secuencial (como se los comente)... entonces aquí no hay expresión

Cuando cae el transposon y se inserta en un sector no codificante del ADN ¿tenemos alteración? No porque no hay una
mutación que se traspase por lo tanto no vamos a tener una alteración en ese genoma y aquí tenemos un promotor y un
solo gen comandado... el transposon cae dentro del gen lo que se altera la expresión de ese gen normalmente estas
mutaciones son mutaciones polares.

Normalmente estas mutaciones, son mutaciones polares

Trasposon= es un segmento de adn que tiene ambos lados secuencias repetidas de orden inverso y en medio tiene adn
codificante para una enzima, que es la transposasa, que es la enzima que le otorga la capacidad de moverse dentro del
cromosoma.

Secuencia de inserción= es el transposon más pequeño.

Transposones compuestos= son transposones que normalmente protegen genes de resistencia, genes de bienestar, genes
de adaptación al bien ambiente, o genes que sirven para nutrirse.

Se instala siempre donde hay secuencias repetidas de orden directo, miren el cromosoma encuentran cromosomas de
orden directo y ahí se instalan, haya o no gen. Y así alteran la secuencia genética, de esta forma se producen las mutaciones
por transposones.

También los plásmidos producen mutaciones, porque son elementos genéticos que pueden estar con un formando parte
del cromosoma, cuando un plásmido se inserta en el cromosoma, cambia a episoma; confieren carga genética extra, de
genes que anteriormente no tiene, los plásmidos pueden otorgar diferentes características como producción de toxinas,
de Hemolisina, etc.

¿Por qué tienen un efecto mutagenico? Porque interrumpen el código genético, los transposones pueden tener codones
de término que pueden hacer que la traducción de una proteína sea de término y pueden contener promotores que
activan genes cercanos al punto de inserción lo que hace que se haga la excreción de genes, que pudieron estar silenciados
en la célula normal.

Los mútagenos

Bases análogas que actúen durante la replicación, los modificadores de base nitrogenada que actúan durante el reposo.
Los intercalentes que son los que se introducen entre las bases nitrogenadas. Los agentes físicos como las radiaciones
ultravioleta y radiaciones ionizantes. Estos Producen transiciones, transversiones, y alteraciones generales.

Por ejemplo cuando son bases nitrogenadas análogas por ejemplo el 5 bromouracilo (SBU) (difiere en la posición 5 y en
vez de un metilo tiene un bromo con la timina) y la 2 aminopurina (2AP) (Base análoga de adenina) son dos bases
nitrogenadas análogas, que quiere decir esto, que se parecen mucho a las bases originales. La enzima que hace el proceso
replicativo es la ADN polimerasa, esta nunca se equivoca pero cuando hay bases nitrogenadas análogas en el ambiente es
evidente que se puede equivocar y tomar una de estas y colocarla en el lugar de una base normal. Estas dos bases
nitrogenadas análogas producen mutaciones del tipo “transiciones”.

Lo normal es que la timina enlace con adenina, pero al equivocarse el enlace se produce con guanina, y la adenina se va a
enlazar con timina, pero al equivocarse el enlace entre 2AP será con citosina en enlace doble.

Y los modificadores de base nitrogenada producen transversiones, como el nitrosoguanidina, toma la guanina la modifica
y produce metilguanin, y así va a enlazar con timina.

La luz ultravioleta lo que hace es formar dímeros de timina o de citosina dentro de la misma hebra de adn, si hay dos
timinas que están juntitas esta la toma y las junta y produce ciclobutano, es decir, lo que hace la luz ultravioleta es impide
la replicación del adn a través de la formación de diferentes compuestos como el ciclobutano dipirimidinas. Cuando se
unen dos citosinas adyacentes se forma pirimidinas pirimidonas.

Que desventaja tiene para usarla en laboratorio, es que la luz ultravioleta no es selectiva porque puede alterar el adn o
arn del manipulador como el de las bacterias por lo tanto siempre utilizar en ambientes cerrados.
Los agentes intercalantes como el bromuro de etidio es un agente que se utiliza para revelar ponerlo en evidencia el adn,
y este fluorece cuando uno lo ve bajo luz violeta.

Reversión de mutaciones.

Un organismo que fue mutado puede recuperar su fenotipo mediante una segunda mutación y esta mutación puede
ocurrir en el mismo sitio de donde fue la mutación inicial (mutación verdadera) o también en un sitio distante al inicial
(mutación supresora). Esto va a producir una compensación que va a restaurar la actividad del producto genético alterado,
por lo tanto lo que provoca es una modificación para obtener un fenotipo normal, pero no un genotipo este sigue mutado.

Para hacer transferencia génica en laboratorio, lo más común es la transformación, hay de baja eficiencia y hay de alta
eficiencia, también se puede usar la conjugación o la transducción.

Donde hay mayor intercambio génico es en la conjugación.

Transformación bacteriana: a partir de un adn externo es decir exogenote, que proviene de una célula MUERTA que ha
vaciado su contenido citoplasmático al ambiente, libra este adn y este puede ser capturado por células bacterianas que
están dispuesta a transformarse, es decir, hacer propia esa información de una célula que ha muerto, ven beneficioso
tomarla, recombinarla y hacerla propia.

En el proceso de transducción hay una célula original esta célula es infectada por un fago, este fago tiene la característica
de infectar solo a bacteria, es decir, bacteriófago, este se multiplica la interior y en eso que se multiplica por algún motivo
se va a equivocar y se va a llevar un trozo de material genético proveniente de esta célula. Este fago se multiplica en un
ciclo lítico, esa información va a parar a una célula que es infecta, y aquí es recombinado.

En la conjugación ya no hay fago ni exogenote, lo que hay son dos células vivas que se comunican entre sí y se traspasan
información genética, con esto se comprueba los procesos sexuales de la bacteria. El plásmido, se denomina plásmido de
fertilidad y es capaz de pasar una hebra de ese plásmido hacia una batería receptora, simultáneamente el plásmido se va
sintetizando para hacer doble hebra en ambas células, así cada una va a tener una copia del plásmido.

En la transformación puede suceder además que no sea una célula la que transfiera la información genética a través del
exogenote, puede ser un fago que se rompe y libera su contenido y este que anda flotando libre, llega a una célula es
combinado, y ya no se llama trasformación, se llama transfección.

La transformación bacteriana es uno de los procesos que ha sido más estudiado, los primeros estudios datan de 1928 con
Griffth donde se estudió Streptococcus pneumoniae, vulgarmente neumococo, que produce colonias que son muy
mucosas, chiclosas, brillantes y que cuando se siembran en una placa de sangre dan colonias bastante mucosas y lisas.
Griffith se dio cuenta que cuando tomaba a esta streptococcus y la sembraba en varias placas de agar sangre, no todas las
colonias eran iguales, había algunas secas y rugosas. ¿Qué es lo que paso? Las S son las lisas y brillantes y las R son rugosas
y opacas, Las lisas son de bacterias virulentas que producen la enfermedad y las R de no virulentas. En el experimento de
los ratoncitos cultivo del tipo s, se lo inyecto al ratoncito y este murió, después tomo las del tipo R cultivo crecieron y las
inyecto y el ratón vivió. En el tercer paso tomo bacterias S muertas (quemadas) y se las inyecto, el ratón vivió. Después
mezcló las bacterias muertas S con bacterias R vivas, las inyecto, el ratón murió, y cuando le extrajo sangre al raton y la
sembro observo que habían de los dos tipos de bacterias siendo que la lisas (s) estaban muertas, lo que sucedió que existió
un cambio de información genética, las muertas liberaron su contenido al citoplasmas y las R lo capturaron y lo hicieron
propio.

En el año 1944 Avery, MacLeod, y McCarty trataron de explicar molecularme este experimento, lo replicaron en placas, y
comprobaron que hay traspaso de información genética, y se concluyó que el ADN es el principio transformante.
Durante la transformación la célula receptora tiene que estar dispuesta a aceptar la información y a recombinarla para
transformase en una célula transformada, porque si no esta información genética puede ser degradad por las enzimas
exonucleasas, enzimas de restricción que están en el citoplasma de la bacteria.

Griffth tuvo suerte porque son pocas las bacterias que son transformantes naturales, y Streptococcus pneumoniae es un
bacteria que transforma naturalmente no hay que inducirla, no así escherichia coli o salmonella que tienen que ser
inducidas artificialmente. La tranformacion natural se explica de la siguiente forma:

Las bacterias presentan pillus, estos capturan la

información genética del exogenote, y en la superficie de
la membrana citoplasmática hay proteínas receptoras que
son expresadas por un conjunto de de genes, que se
denominan genes com, genes de competencia, y estas
proteínas son capaces de secuestrar el adn y comenzar a
incorporarlo al citoplasma, y una vez que se incorpora
comienza el proceso de cocmbinacion, hay fases reversible
e irreversible, si captura es revesible, pero si comienza a
entrar por el canal es irreversible.

Existen métodos de laboratorio para hacer

transformación: Antiguamente se toma la célula y se le
hacían poros en su superficie a través de un tratamiento
de frio y cloruro de calcio (crea los poros), y casi por fuerza
ingresaba, es muy poco efectivo. Hoy en día se utiliza
electroporación, en donde es más efectivo, y se utiliza cuando por ejemplo uno tiene una bacteria que genere bacteriosina,
que es un producto que produce algunas especies y se utiliza como antimicrobiano (para matar otras bacterias) En los
alimentos hay una que se denomina nisina que proviene del lactococcus lactis, es un bioperseverante de alimentos, se
añade a los lácteos, mata a otros bacterias y es inocua.

Además se puede inducir a las bacterias que acepten genes eucariotas, como el caso de los tomates con las heladas, a
través de plásmidos que se inyectan a la célula y transfieren el gen.

La insulina humana no puede ser producida en cantidades elevadas, pero si toman una bacteria y le inyectan el gen de la
insulina humana, la bacteria les va a producir a mil% insulina.

Transducción

Antes de empezar hay que aclarar los ciclos líticos y lisogénico de un fago

Para el proceso de transducción es un fago el que secuestra una información genética y la lleva hacia otra para que la haga
propia, el fago es intermediario, vector.

Tenemos una célula y un bacteriófago con material genético, este fago va a infectar a una célula, y esta puede vivir o
morir, es decir, ciclos líticos o lisogénicos. Si hace ciclo lítico quiere decir que el fago va a inyectar su material genético y
este va a conducir procesos moleculares al interior y va a hacer que trabaje para producir fagos, estos se van a multiplicar
al interior y finalmente cuando estén listos la célula va a explotar y va a liberar los fagos al medio. (Ciclo lítico= muerte de
la célula)
En el ciclo lisogenico, dps de inyectar el material genético, este se integra al cromosoma bacteriano, y este cromosoma
con el fago integrado será llamado profago, y está cada vez que se divida va a generar una copia integrada de su fago, y
así va a llegar a la descendencia y no va a morir, hasta que se active el ciclo lítico.

La transducción fue descubierta por Lederberg y Zinder, trabajando sobre una Salmonella spp.

El fago inyecta el material genético (bacteriófagos T son fago de tipo ADN), hace que la célula haga el ciclo lítico, la
multiplicación del fago dentro de la célula, y una vez que se arme dentro se puede equivocar y llevarse un trozo de material
celular en vez de material genético viral. Cuando sale inyecta ese material genético viral, y pasa a ser patrimonio genético
de esa nueva célula infectada.

Hay dos tipos de transducción:

la especifica siempre transfiere una secuencia específica de adn, por ejemplo el fago lambda que siempre hace
transducción de los genes de la galactosa, y la generalizada se insertan en cualquier parte. Hay eventos raros y más
frecuentes.

Cuando el fago está dentro de la célula en una generalizada, el fago se puede equivocar y en vez de tomar material
genético viral, toma material genético celular “fago transductor” y este cuando llega a la otra célula, hace la infección e
inyecta material genético celular, la célula lo toma y lo recombina y gana
información genética celular.

En este evento raro está el fago en estado de profago, pero este se libera del
cromosoma, se corta, si recirculó y condujo un ciclo lítico, porque al liberarse
dejo de hacer el ciclo lisogenico y se activó el lítico, pero que ocurre a veces,
que cuando se libera se lleva un trozo de gen, se recircula y se lo lleva, se
conduce con el ciclo lítico pero ahora cada fago tiene un trozo de ese gen,
se produce la liberación y ahora cada célula que se infecte va a adquirir ese
gen.

Hay muchos factores de resistencia que pueden transmitirse por la

transducción y sirve para la elaboración de diferentes mapas genéticos.

En la conjugación es el proceso en donde se transfiere la más grande cantidad de material genético.

El primer experimento (Lederberg y Tatum 1946) que se hizo fue en donde una bacteria auxotrofica (a-) más una cepa
bacterias b- mezclada que da un X (no se sabe)

Bacterias auxotroficas son bacterias que no pueden sobrevivir en un ambiente donde les falta un nutriente en especial,
por ejemplo si la bacteria es histidina- no puede vivir en un ambiente sin histidina, si es histidina+ puede vivir en cualquier
ambiente (prototrófica)

Tenemos dos fenotipos distintos A (met- bio- Thr+ leu+ thi+) y B (met+ bio+ thr- leu- thi-) que son complementarios.

Si yo siembro en una placa pobre A, no va a crecer nada, si siembro B en un ambiente pobre tampoco van a crecer, pero
si yo mezclo las dos AB, las siembro en un ambiente pobre, dan colonias y están vivas, hubo intercambio de material
genético, cambio el fenotipo es todo prototrofico (todas +) solamente porque había complementariedad.

El plasmido F o plasmido de fertilidad de una célula macho es capaz de generar un pillus que va a atraer a la otra célula
hacia su cercanía.
Por tener el plásmido f es capaz de generar un pilus sexual, que su función es generar cercanía (solo proximidad) y por
esto se producen poros en la membrana, y se ponen entre contacto, por el porito va a pasar una hebra del plásmido f
hacia la célula receptora y el sistema de traspaso se llama “sistema de circulo rodante” como se replica DNA de la bacteria,
se replica en una replicación sigma porque pasa una hebra mediante el sistema de circulo rodante. En donde estaba el
plásmido se va sintetizando una hebra nueva complementaria inmediatamente cuando va pasando la hebra hacia la otra
célula, y las dos células quedan con plásmidos, y es semi conservativa la replicación porque queda una hebra nueva y una
vieja, se separan y cada una se convierte en una célula conjugante.

Cuando tiene plásmido F se llama F+ y si no lo tiene se llama F-; cuando estas se cruzan el resultado es dos células F+.

El plasmido F puede tener diferentes formas, puede estar como factor f suelto en el citoplasma o integrado al cromosoma
como forma de episoma (hfr) o en la forma de F prima porque como los virus se puede integrar al cromosoma y liberarse
llevándose genes cromosomales y recircularse.

Los cruces son hfr x f(-) da hfr; fprima x f(-) da fprima.

En general la conjugación se hace entre miembros de la misma especie aun cuando hoy se ha visto que especies
filogenéticas diferente lo han hecho como bacterias con células vegetales y células animales con hongos.

Alimentos transgénicos (OGM) son aquellos que fueron producidos a partir del organismo modificado genéticamente
mediante ingeniería genética. Significa darle propiedades beneficiosas a alimentos que tienen otros alimentos. Como que
los tomates crezcan en el norte. Por ejemplo el dulzor de una fruta para pasarse a la otra, como se hace se tiene una
bacteria que sirva como vector, se extrae y aísla un trozo de adn que nos vamos a utilizar, se hace una clonación de estos
genes se incorporan estos genes dentro del vector y una vez que está listo se incorporan a la célula, se cultivan y crecerá
la plata genéticamente modificada.