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Profesores:
M en C Aura Hernández Olicón
M en C Elizabeth Jiménez Gutierrez
M en C Hilda Pérez Cervantes
Dr. Luis R. Carreno Durón
INTRODUCCIÓN
En fotómetros que utilizan celdas, el adicionar un volumen menor al adecuado ocasiona
lecturas erróneas y como resultado se obtienen resultados incorrectos.
En las determinaciones fotométricas es importante que el volumen de la muestra que se
deposita en la celda de lectura sea el suficiente para asegurar que el haz de luz incida en
la solución en la zona donde no interfiera el menisco, ya que cuando se coloca un volumen
de muestra insuficiente, el haz de luz incide directamente en el menisco provocando que la
luz se difracte, lo que se conoce como efecto menisco. Cabe mencionar que en los
instrumentos automatizados igualmente se da dicho efecto análogo al del menisco el cual
es llamado efecto burbuja.
Otro de los factores que afectan la calidad analítica, es la interferencia entre dos
mediciones. Cuando el reactivo de la muestra previamente realizada, no ha sido bien
eliminado, interfiere con la siguiente determinación, lo que se conoce como “efecto acarreo”.
El efecto acarreo es muy evidente en equipos automatizados, aunque también puede
manifestarse en equipos semiautomatizados si no te tienen los cuidados necesarios.
OBJETIVO
• Determinar el volumen mínimo que un fotómetro puede utilizar, para obtener lecturas
confiables
• Evaluar la magnitud del efecto con que el menisco afecta las mediciones, cuando se
utilizan volúmenes inferiores al mínimo
• Determinar si un sistema analítico o equipo presenta o no el efecto acarreo, a partir
del empleo de soluciones coloridas de 2 diferentes concentraciones, mediante un
procedimiento sencillo.
FUNDAMENTO
Los fotómetros y espectrofotómetros utilizan celdas de diferente volumen, que van desde
menos de 200 µL hasta 3mL, los espectrofotómetros, la fuente de luz que proporciona es
un haz policromático que es colimado al atravesar la ranura de entrada. Este haz llega al
selector de longitud de onda, el cual permite generar un haz monocromático de la longitud
de onda deseada. El rayo de luz monocromático atraviesa la segunda ranura e incide
perpendicularmente sobre la cara lateral de la cubeta, la cual contiene la muestra. El haz
de luz transmitido por la muestra es detectado al impactar sobre el detector. Los
espectrofotómetros son una herramienta importante del laboratorio, y de su buen
funcionamiento depende la calidad de los resultados que se obtienen. Por lo tanto es
importante conocer y controlar determinados parámetros, analizarlos y verificar si se
encuentran dentro de los rangos de aceptabilidad permitidos y en caso contrario, proceder
a calibrar, reparar, llamar el servicio técnico. Algunos controles espectrofométricos se les
realizan a los equipos cada vez que se los usa, y otros periódicamente son:
Control de volumen mínimo. Este control asegura que toda la luz pase por la solución y no
“por arriba” o por el menisco, lo que produciría resultados erróneos. Desde el punto de vista
económico, este control es importante ya que cuanto menor sea el volumen mínimo, más
economía se puede lograr en el uso de reactivos. Puede realizarse con agua o con una
solución coloreada transparente. Se considerará volumen mínimo aquel en el cual la lectura
no varía con el agregado de más líquido.
La contaminación de reactivos entre determinaciones, provoca interferencias por el efecto
de acarreo, el cual se produce por un deficiente lavado de las celdas. Estas interferencias
pueden causar: que la concentración del mensurado anterior sea elevada y el residuo que
queda aumente la concentración de la siguiente determinación; que la concentración sea
baja debido a residuos de agua de lavado que diluye la concentración de la muestra; que
la matriz que contiene la reacción previa tenga la capacidad de afectar alguna prueba
siguiente.
PREGUNTA EXTRA
Incerto de glucosa oxidasa de Randox:
De acuerdo al inserto de la determinación de glucosa menciona que para dicha prueba se
usan 20 µL de muestra/patròn con 2000 µL de reactivo y el blanco usando una cubeta de
volumen completo (macro), por el contrario si se requieren volúmenes menores igualmente
se pueden usar 10 µL de muestra/patròn con 1000 µL de reactivo y el blanco usando una
cubeta de volumen reducido (semi-micro).
Volumen mínimo que miden los siguientes equipos
SpinLab: 220 µL
MicroLab: 32 µL
Selectra XL: 200 µL
RESULTADOS
Efecto menisco
0.4
0.35
0.3
0.25
Absorbencia
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 500 1000 1500 2000
-0.05
Vol μL
Efecto acarreo
Cálculos:
Efecto acarreo
Solución A intercaladas:
S 0.0482
CV= X̅ x 100 = 0.4052
x 100= 11.895
Solución B intercaladas:
S 0.01221
CV= X̅ x 100 = 1.4812
x 100 = 0.824
%Error:
Solución A:
valor observado- valor real 0.4052- 0.3396
%E= = x100= 19.31%
valor real 0.3396
Solución B:
valor observado- valor real 1.4812-1.5684
%E= = x100= -5.55%
valor real 1.5684
¿El sistema analítico presenta efecto acarreo? Si.
Observaciones:
Para buenas prácticas de laboratorio llevar al volumen mínimo la muestra para una
buena lectura.
Usar volumen mínimo considerando los costos de reactivo.
Usar mayor volumen hace evitar de mejor manera el efecto menisco cuando no
son tan costosas las soluciones
Acciones preventivas para los procedimientos:
- En primera instancia hay que trabajar con celdas en buen estado y siempre
considerar el volumen mínimo que podemos colocar en cada celda para que
nuestro espectrofotómetro lo pueda leer.
- Lavar y secar entre cada lectura las celdas para evitar el efecto acarreo, evitando
que nuestras lecturas aumenten dado al acarreo de concentraciones de la lectura
pasada o que las lecturas disminuyan dado a la dilución de nuestra muestra debido
al mal secado
INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
Discusión
Cabe mencionar en primera instancia que para poder evaluar las celdas o cubetas
manejadas experimentalmente e igualmente en un laboratorio clínico, es importante
conocer el volumen mínimo el cual puede ser detectado por mi método instrumental en este
caso el espectrofotómetro, para ello se llevo a acabo la prueba de efecto menisco, el cual
debe ser un control al momento de leer las muestras para evitar errores. De acuerdo a la
primera experiencia de la determinación del efecto menisco con respecto a la celda
trabajada de volumen completo se puede observar en la figura 1 que al inicio de las lecturas
de absorbancia se mantienen constante dado a que se transmite toda luz dado a que no es
absorbida ya que no hay muestra solo hay aire, por lo tanto pasa directamente al detector,
a medida que se va agregando 100 en 100 µL el reactivo utilizado dicromato de potasio
(K2Cr2O7), se observa un incremento de la absorbancia hasta llegar a un punto
donde se da un pico de absorbancia máxima el cual hace referencia al punto donde
se formo el menisco, dado a que en dicho punto se llegan a leer muestra y aire se
llega a difractar la luz disparando los valores de absorbancia, después desciende
llegando a una meseta con valores constantes los cuales refieren al volumen
mínimo necesario de la celda para poder ser detectada por el espectrofotómetro el
cual se encuentra en 1500 µL.
Con respecto a los datos de la Tabla 3, es posible observar que los valores observados con
respecto a los reales, es posible discernir el cambio drástico de absorbancia al no enjuagar
y limpiar las celdas en cada medición ya que se acarrea muestra de la anterior lectura
aumentando la concentración de la siguiente modificando las absorbancias con respecto a
las reales. Cabe mencionar que las concentraciones diluidas fueron las que se vieron màs
afectadas, dado al efecto de variación de soluciones, dicho efecto se vio con el porciento
de veracidad en donde cuyos valores fuera >5% presentaban acarreo ese fue el caso con
Cris/Luisa, Dany/Alexis, Toño/Carlos, Gabriel/Alex, Diana/Sharon y Andrea/Merari, esta
falta de veracidad en donde los resultados sean fidedignos se comprueba que el trabajo de
esa manera no es el adecuado, y menos el laboratorio clínico ya que una mala práctica de
trabajo dado a la falta de diligencia del analista puede comprometer los resultados del
paciente llevàndolo a incrementar posiblemente sus niveles de glucosa los cuales no están
en esos niveles llevandolo a un mal diagnostico de posible diabetes, cancer pancreàtico,
hipertiroidismo.
Conclusiones
Referencias
Archivo PDF, Randox: insertos de laboratorio, disponible en:
http://sistemainterno.com/web/wp-
content/themes/aaaclientesflash/gaamsa2011/pdf/MANUAL_QC_2013.pdf
file:///C:/Users/sixce/Downloads/1792222420.Espectrofotometr%C3%ADa.pdf