Laura Daniela Duarte Sabogal

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CINETICA ENZIMATICA

Es una parte de la bioquímica encargada de estudiar las velocidades de reacción de las

enzimas que son catalizadores por las enzimas, la cinética enzimática es una de las
técnicas más viejas para entender los mecanismos enzimáticos.

Esto ha permitido

 Distinguir las enzimas.

 Distinguir entre isoenzimas.
 Reconocer las diferencias entre las actividades de un tejido y otro.
 Permite conocer la afinidad con los sustratos.
 Las unidades se miden en PH óptimo.
 La unidad internacional es: μmol S /min.

Al medir la velocidad de aparición de producto en función del tiempo se obtienen la llamada

curva de avance de reacción, o simplemente, la cinética de la reacción. A medida de que la
reacción transcurre, la velocidad de acumulación del producto va disminuyendo porque se
va consumiendo el sustrato de la reacción. Para evitar esta complicación se procede a medir
la velocidad inicial de la reacción (Vo). La velocidad inicial de la reacción es igual a la
pendiente de la curva de avance a tiempo cero. De esta forma, la medida de Vo se realiza
antes de que se consuma el 10% del total del sustrato de esta forma se puede considerar
[S] como esencialmente constante a lo largo del procesos.

Para estudiar la cinética enzimática se mide el efecto de la concentración inicial de sustrato

sobre la velocidad inicial de la reacción, manteniendo la cantidad de enzima constante. Si
representamos Vo frente a [S]o obtenemos una gráfica como la de la Figura de la derecha.
Cuando [S]o es pequeña, la velocidad inicial es directamente proporcional a la
concentración de sustrato, y por tanto, la reacción es de primer orden. A altas [S]o, el
enzima se encuentra saturada por el sustrato, y la velocidad ya no depende de [S]0. En
este punto, la reacción es de orden cero y la velocidad es máxima (Vmax).

La unidad de actividad enzimática (U) como la cantidad de enzima que cataliza la

conversión de 1 µmol de sustrato en un minuto. La actividad específica es el número de
unidades de enzima por miligramo de proteína (U/mg prot) o por mililitro de disolución
(U/ml). Recientemente, el Sistema Internacional de unidades (SI) ha definido la unidad de
actividad enzimática como la cantidad de enzima que transforma 1 mol de sustrato por
segundo. Esta unidad se llama katal (kat). Como 1 mol son 106 µmoles y 1 minuto son 60
segundos, resulta que 1 katal equivale a 60 x 106 U. Esta unidad es muy grande, de forma
que se utilizan frecuentemente los submúltiplos como el microkatal (µkat, 10-6 kat) o el
nanokatal (nkat, 10-9 kat).
Cuando se conoce el peso molecular del enzima puro y el número de centros activos por
molécula de enzima, las medidas de actividad enzimática permiten calcular el número de
recambio del enzima, o sea, el número de reacciones elementales que realiza el enzima
por cada centro activo y por unidad de tiempo.

1. Curva de progreso
La rapidez de la reacción se obtiene a partir de la pendiente de las tangentes a la curva, es
decir el cambio de concentración de producto y sustrato con respecto al tiempo.

Tiempo Sustrato [A] Producto [P]

0 100 0
5 90 10
10 81 19
15 72,9 27,1
20 65,6 34,4
25 59 41
30 53,1 46,9
35 47,8 52,2
40 43 57
45 38,7 61,3
60 34,9 65,1
 Curva de progreso
120

100

80
[A] o [P]

60

40

20

0
0 10 20 30 40 50 60 70
Tiempo (s)

Ecuación de la recta producto

2.0647x - Vo=2.0647
0.1236 µM/s

2. Determinación de parámetros cinéticos mediante diferentes modelos

[A] V0 1/[A] 1/Vo [A]/Vo Vo/[A]

0 0 0 0 0 0
10,0000 28,6000 0,1000 0,0350 0,3497 2,8600
20,0000 44,4000 0,0500 0,0225 0,4505 2,2200
30,0000 54,5000 0,0333 0,0183 0,5505 1,8167
40,0000 61,5000 0,0250 0,0163 0,6504 1,5375
50,0000 66,7000 0,0200 0,0150 0,7496 1,3340
60,0000 70,6000 0,0167 0,0142 0,8499 1,1767
70,0000 73,7000 0,0143 0,0136 0,9498 1,0529
80,0000 76,2000 0,0125 0,0131 1,0499 0,9525
90,0000 78,3000 0,0111 0,0128 1,1494 0,8700
100,0000 80,0000 0,0100 0,0125 1,2500 0,8000

2.1 MODELO MICHAELIS – MENTEL

Este modelo adopta la hipótesis de estado estacionario, según el cual la concentración del
complejo enzima-sustrato es pequeña y constante a lo largo de la reacción, por lo tanto, la
velocidad de formación del complejo es igual a la de su disociación.
 Vmax 80
Vmax/2 40
Km 17,215

SISTEMA DE HENRI (MICHAELIS)

90
80
70
60
50
VO

40
30
20
10
0
0 20 40 60 80 100 120
[A]

2.2 MODELO LINEWEAVER - BURK

Se emplea como herramienta grafica para calcular los parámetros cinéticos de una enzima,
se emplea una linealizacion para determinar los diferentes parámetros.

𝟏 𝑲𝑴 𝟏 𝟏
= ∗ +
𝑽𝟎 𝑽𝑴𝒂𝒙 [𝑨] 𝑽𝑴𝒂𝒙

Al momento de hacer la linealizacion se emplean los términos de la ecuación de la recta

y=mx + b para obtener los diferentes parámetros Vmax y Km

Donde:
𝒌𝒎 𝟏
𝒎= 𝒃=
𝑽𝒎𝒂𝒙 𝑽𝒎𝒂𝒙

𝑘𝑚 1 1
0.2498 = 0.01 = = 𝑉𝑚𝑎𝑥 =
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑣𝑚𝑎𝑥 0.01
= 100

𝐾𝑚 = 0.2498 ∗ 100 = 24.98

Km 24,98
Vmax 100
 SISTEMA DE LINEWEAVER - BURK
0.0400

0.0350

0.0300

0.0250

0.0200
y = 0,2498x + 0,01
0.0150 R² = 1

0.0100

0.0050

0.0000
0.0000 0.0200 0.0400 0.0600 0.0800 0.1000 0.1200

2.3 MODELO DE HANES

En este modelo las constantes se determinan teniendo en cuenta la ecuación de la recta.

[𝑨] 𝟏 𝑲𝑴
= 𝑨+
𝑽𝒐 𝑽𝑴𝒂𝒙 𝑽𝑴𝒂𝒙

Al momento de hacer la linealizacion se emplean los términos de la ecuación de la recta

y=mx + b para obtener los diferentes parámetros Vmax y Km

Donde:

𝟏
𝒎=
𝑽𝑴𝒂𝒙
𝑲𝒎
𝒃=
1 𝑽𝒎𝒂𝒙
0,01 =
𝑉𝑀𝑎𝑥
𝐾𝑚 = 100 ∗ 0.2502 = 25.02
1
𝑉𝑚𝑎𝑥 = = 100
0.01

Vmax 100
Km 25,02
 SISTEMA DE HANES
1.4000

1.2000

1.0000

0.8000

0.6000
y = 0.01x + 0.2502
0.4000

0.2000

0.0000
0.0000 20.0000 40.0000 60.0000 80.0000 100.0000 120.0000

2.4 MODELO DE HOFSTEE

En este modelo las constantes se determinan teniendo en cuenta la ecuación de la recta.

𝑉𝑜
𝑉𝑜 = − 𝐾𝑀 + 𝑉𝑀𝑎𝑥
[𝐴]

Al momento de hacer la linealizacion se emplean los términos de la ecuación de la recta

y=mx + b para obtener los diferentes parámetros Vmax y -Km

Donde:

𝒃 = 𝑽𝒎𝒂𝒙 𝒎 = −𝑲𝒎

100.01 = 𝑉𝑚𝑎𝑥 25.007 = 𝐾𝑚

 SISTEMA DE HOFSTEE
90.0000
80.0000 y = -25.007x + 100.01
R² = 1
70.0000
60.0000
50.0000
40.0000
30.0000
20.0000
10.0000
0.0000
0.0000 0.5000 1.0000 1.5000 2.0000 2.5000 3.0000 3.5000

Vmax 100,01
Km 25,007

- Los resultados obtenidos mediante los diferentes modelos son

Modelo Km Vmax
Michaelis-Mentel 18 80
Lineweaver-Burk 24.98 100
Hanes 25.02 100
Hofstee 25.007 100.01

Bibliografía

 http://biokzo.freetzi.com/enzimologia.htm
 https://www.ecured.cu/Cinetica_enzim%C3%A1tica