PRÁCTICA 4

¿QUÉ TIENEN EN COMÚN CARBOHIDRATOS Y PROTEINAS? ¿EN QUÉ SE

DIFERENCIAN?
FECHA DE REALIZACIÓN: 20 de marzo del 2018 FECHA DE ENTREGA: 3 de abril del 2018
ASIGNATURA: Laboratorio de Biología CODIGO: 23025 GRUPO: B3 DOCENTE: Sandy Paola García Atencia
NOMBRES: Acuña Arias Jorge Luis1 y Peralta Rodgers Juana Carolina2

1. PROPOSITO:
Identificar características químicas de carbohidratos y proteínas como moléculas importantes en la estructura de los seres vivos
a través de pruebas colorimétricas.

2. CONCEPTOS CLAVES:
Las macromoléculas más abundantes y comunes presentes en los seres vivos se pueden agrupar en: carbohidratos, proteínas,
lípidos y ácidos nucleicos. Los azúcares y otros carbohidratos son altamente variables en estructura. Los monosacáridos son
monómeros que se polimerizan para formar polímeros llamados polisacáridos, a través de diferentes enlaces glucosídicos. Ellos
alcanzan una amplia variedad de funciones, desde almacenamiento de energía hasta la formación de fuertes fibras estructurales.
Las proteínas están hechas de aminoácidos encadenados que varían en estructura y función debido a que sus cadenas varían
en composición. De acuerdo con la estructura de la proteína, se pueden clasificar en cuatro niveles: a. Primaria: cuando los
aminoácidos se disponen en forma lineal, b. Secundaria: cuando forman hojas plegadas o hélices, c. Terciaria: cuando hay
interacciones entre aminoácidos que permiten conformar una estructura globosa de la proteína y d. Cuaternaria; cuando la
proteína está conformada por más de un polipéptido constituyendo una estructura única. En la célula, las enzimas son proteínas
que trabajan como catalizadores, las reacciones químicas ocurren mucho más rápido cuando ellas son catalizadas por enzimas.
Los lípidos son otro tipo de moléculas de tamaño medio, encontrados en los organismos vivos. Se definen como compuestos
de carbono no polares e hidrofóbicos, es decir, que no se disuelven en agua. La estructura química de los lípidos varia
ampliamente. En las células se encuentran grasas, esteroides y fosfolípidos. Los ácidos nucleicos están compuestos por
nucleótidos, los cuales se forman por la unión de una base nitrogenada, un azúcar y un grupo fosfato. Los ribonucleótidos
polimerizan para formar el ácido ribonucleico (ARN) y los desoxirribonucleótidos polimerizan para formar ácido
desoxirribonucleótido (ADN). La secuencia primaria del ADN consiste en la secuencia de nucleótidos que contiene
información como un código molecular. La estructura secundaria del ADN consiste en dos hebras que corren en direcciones
opuestas, las cadenas se mantienen unidas por apareamiento de bases complementarias y se tuercen en una doble hélice. La
estructura primaria del ARN también consiste en una secuencia de nucleótidos que contienen información como un código
molecular, pero su estructura secundaria incluye hélices dobles, cortas y horquillas. Las moléculas llamadas ribozimas catalizan
importantes reacciones químicas.

3. MATERIALES DE LABORATORIO:
 Bata de laboratorio  1 manzana pequeña
 Guía de laboratorio  250ml de leche entera
 Libreta de apuntes  Jabón para lavar manos
 Lapicero  Cuchillo pequeño, exacto o bisturí
 3 goteros  Lápiz de cera para marcar los tubos de ensayo (en
 Limpión su defecto, utilice cinta de enmascarar para
 1 huevo rotular)
 1 papa pequeña  Materiales del kit de laboratorio

4. DESARROLLO DE CONCEPTOS TEORICOS

4.1 ¿CUÁL ES LA RELACIÓN APROXIMADA ENTRE C:H:O EN CADA UNO DE LOS SIGUIENTES TIPOS DE
MACROMOLÉCULAS? Revise información sobre ejemplos de fórmulas moleculares para cada uno de los grupos y
encuentre una relación aproximada de C:H:O entre ellos

CARBOHIDRATOS LIPIDOS PROTEINAS ACIDOS NUCLEICOS

Contiene C, H, O Contiene más C Y H Contiene C, H, O, N, S, y P Contiene H, C, N, O y P

4.2 ¿CUÁLES DE LOS COMPUESTOS LISTADOS EN LA PREGUNTA 4,1 PUEDEN ESTAR COMPUESTOS
SOLAMENTE DE C, H Y O?
R/: Los carbohidratos son una de las moléculas que siempre contiene C, H, y O.

4.3 ¿CUÁLES COMPUESTOS PUEDEN SER IDENTIFICADOS MIRANDO SOLAMENTE LA RELACIÓN

C:H:O?
R/: Los carbohidratos, proteínas y ácidos nucleicos.
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 4.4 ¿QUÉ OTROS ELEMENTOS SON COMUNMENTE ASOCIADOS CON CADA UNO DE LAS CUATRO
MACROMOLECULAS? MARQUE CON UNA X DONDE SE CUMPLE LA RELACIÓN

RELACIÓN CARBOHIDRATOS LIPIDOS PROTEINAS ACIDOS NUCLEICOS

SIEMPRE CONTIENEN P X X
GENERALMNTE NO
CONTIENEN P
SIEMPRE CONTIENEN N X X
GENERALMNTE NO
CONTIENEN N
FRECUENTEMENTE
X X
CONTIENEN N
GENERALMENTE NO
X X
CONTIENEN S

5. ENSAYOS COLORIMETRICOS.
En esta práctica se realizarán ensayos colorímetros solo para proteínas y carbohidratos escogiendo algunos reactivos específicos
que permitirán determinar la presencia de estos compuestos mediante cambios de color observables.

5.1 ENSAYOS CON SUSTANCIAS CONOCIDAS

 PRUEBA DE BIURET Y XANTOPROTEICA (ÁCIDO NITRÍCO CONCENTRADO) PARA
PROTEINAS
Coloque 1 ml de albúmina de huevo en un tubo de ensayo y agregue 3 a 5 gotas del Reactivo de Biuret,
(PRECAUCION: El reactivo de Biuret contiene hidróxido de sodio al 10%, puede quemar la piel y ropa).

5.1.1 ¿RECONOCE ALGÚN CAMBIO DE COLOR?

R/: No se realizó la prueba de Biuret debido a que el reactivo no funcionó.

5.1.2 ¿A QUÉ SE DEBE ESTE CAMBIO DE COLOR?

R/: No se realizó la prueba de Biuret debido a que el reactivo no funcionó.

Conserve este tubo de ensayo en la gradilla. Tome otro tubo de ensayo y agregue 1 ml de albúmina y 3 gotas de
ácido nítrico concentrado (PRECAUCION: El ácido nítrico puede producir fuertes quemaduras).

5.1.3 ¿OBSERVA ALGÚN CAMBIO EN EL TUBO DE ENSAYO?

R/: Si, cambia de color y de consistencia la sustancia.

5.1.4 ¿APARECE ALGUNA COLORACIÓN?

R/: Si, aparece un cambio de color.

5.1.5 ¿CUÁL?
R/: Aparece un tipo de coloración blanca y coagulada.

5.1.6 ¿QUÉ EXPLICA ESTE CAMBIO DE COLOR?

R/: Esto se debe a la reacción desnaturalizante que tiene el HNO3 (ácido nítrico) sobre las proteínas de la
albúmina.

 PRUEBAS COLORIMETRICAS PARA CARBOHIDRATOS (ALMIDONES Y AZUCARES)

Agregue 2 ml de solución de glucosa al 5% y adicione 6 gotas del reactivo de Benedict, coloque el tubo de ensayo
en un vaso precipitado que contenga agua hirviente (use baño María), caliente durante 4 minutos.

5.1.7 ¿HAY UN CAMBIO DE COLOR MIENTRAS SE CALIENTA EL TUBO DE ENSAYO?

R/: Si, tiende a tornarse un color amarillento.

5.1.8 ¿POR QUÉ DEBE LLEVAR EL TUBO DE ENSAYO AL CALOR?

R/: Porque el calor sirve como catalizador, es decir, que acelera la reacción sin participar en ella, esta es la
función que cumple el calor en la prueba Benedict

5.1.9 SI RECONOCIÓ UN CAMBIO DE COLOR, ¿CUÁL CREE QUE ES LA RAZÓN DE ESTE

CAMBIO?
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 R/: El cambio de color se debe a que prueba de Benedict identifica azúcares reductores, aquellos que tienen
libre su OH del C anomérico, en medio alcalino este presenta un cambio de color a amarillo-naranja (color
durazno)

Tome un cuarto tubo de ensayo y agregue 1 ml de solución de almidón (1%, MEZCLE BIEN ANTES DE
TOMAR EL ALMIDON). Adicione 0.5 gotas de solución de Lugol.

5.1.10 ¿QUÉ COLOR PUEDE RECONOCER EN EL TUBO DE ENSAYO?

R/: Azul muy oscuro, casi negro.

5.1.11 ¿CUÁL ES LA RAZÓN DE ESTE CAMBIO DE COLOR?

R/: Este cambio de color indica la presencia de polisacáridos como el almidón, glucógeno, entre otros, en la
muestra.

FIGURA 1. Ensayos con sustancias conocidas

5.2 ENSAYOS CON SUSTANCIAS PROBLEMAS

Una vez que se han hecho las pruebas preliminares y cuenta con cuatro tubos de ensayo rotulados con los resultados de los
ensayos preliminares, proceda a llenar la siguiente tabla usando sustancias como leche, manzana y papa. Para esto prepare
extracto de papa y manzana en beakers separados. Pele la papa y la manzana, macere con agua de grifo y filtre para contener
el extracto.
Utilice la tabla adjunta para anotar sus resultados con cada sustancia. Se requieren cuatro muestras para cada reactivo a
probar. Anote sus resultados en términos de positivo (+), si el color obtenido es igual a los del as pruebas preliminares,
negativo (-) si el color no es igual al obtenido en las pruebas preliminares o dudoso (?) si no tiene certeza del parecido del
color.

SUSTANCIA REACTIVO
PROBLEMA BIURET XANTOPROTEICA BENEDICT LUGOL MACROMOLECULA
AZUCAR REDUCTOR
LECHE NO (?) + --
(LACTOSA – C12H22O11)
EXTRACTO CARBOHIDRATOS
NO -- -- +
DE PAPA (AMILOSA – (C6H10O5)n)
AZUCARES REDUCTORES
(FRUCTOSA – C6H12O6 Y
EXTRACTO
NO -- + + GLUCOSA - C6H12O6)
DE MANZANA
CARBOHIDRATOS
(SACAROSA - C12H22O11)

FIGURA 2. Leche FIGURA 3. Extracto de Papa FIGURA 4. Extracto de Manzana

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 5.2.1 ¿CUÁL SERIA UNA POSIBLE EXPLICACIÒN DE LOS DATOS CONSIGNADOS EN ESTA
TABLA?
5.2.2 R/: En las pruebas que el resultado arrojó positivo o negativo, se debe a la presencia no ausencia de las
macromoléculas que detecta cada uno de los reactivos:
- Prueba Xantoproteica: Detecta proteínas con aminoácidos portadores de grupos aromáticos.
- Reactivo Benedict: Detecta azucares reductores libres de OH anomérico.
- Prueba de Lugol: Detecta la presencia o alteración de almidón y otros polisacáridos.
Al momento de realizar la Prueba Xantoproteica en la Leche, se observó un resultado dudoso (?) debido a que en
la muestra no se produjo el cambio de color a amarillo oscuro. La leche contiene Caseína que es una proteína con
aminoácidos portadores de grupos aromáticos, por ende, esta prueba debía dar positiva (+). A nuestro parecer esta
prueba no resultó positiva por alguna de las siguientes razones:
- No se realizó la neutralización con una base (álcali) para que se tornara el color amarillo.
- Las propiedades de la leche utilizada no son completamente eficientes.
- El ácido nítrico utilizado para realizar esta prueba no estaba en las mejores condiciones de efectiva.
5.2.3 ¿QUÉ SUSTANCIA PROBLEMA DE LAS QUE INVESTIGÓ CONTIENE TODAS LAS
MACROMOLECULAS ESTUDIADAS?
R/: La leche contiene Carbohidratos (Lactosa) y Proteínas (Caseína).

5.2.4 ¿DE QUÉ MANERA EL COLOR NATURAL DE LAS SUSTANCIAS PROBLEMA PUDO
AFECTAR EL RESULTADO DE LA PRUEBA?
R/: En el caso del extracto de papa, al momento de ser procesado en el mortero, este tiene un color amarilloso,
muy parecido al que arroja el reactivo de Benedict al ser sometido al calor, pero ya que este reactivo es de color
azul, al momento de agregarlo al extracto de papa y someterlo al calor no ocurrió ningún cabio, por ende, no se
produjeron confusiones.

5.2.5 ¿PARA QUÉ SON USADOS LOS REACTIVOS DE MILLÓN, SAKAGUCHI, MOLISH Y
SULLIVAN?
R/:
- REACTIVO DE MILLÓN: El reactivo de Millón se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en
una parte de ácido nítrico (HNO3). De esta forma, la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio
conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio fuertemente ácido
reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración roja característica. Al finalizar
la reacción, durante la cual se desprende gran cantidad de óxidos de nitrógeno, el reactivo se puede diluir con
dos veces su volumen en agua y deberá ser decantada algunas horas después la solución clara sobrenadante.
- REACTIVO DE SAKAGUCHI: Es una reacción de los compuestos que contengan grupo guanido o
guanidino. De ahí quesea una indicación de la presencia de arginina libre de proteínas que contengan arginina.
La prueba consiste en tratar la muestra con alfanaol e hipoclorito de sodio o hipobromito de sodio, con lo
cual se desarrollará un color rojo intenso. El desarrollo del color se altera por completo por
la presencia de amino, histidina triptófano.
- REACTIVO DE MOLISH: La prueba de Molish permite detectar la presencia de hidratos de carbono en
una muestra; está basada en la formación de furfural o derivados de éste (originado por los ácidos
concentrados que provocan una deshidratación de los azúcares) a partir de los carbohidratos para obtener el
furfural que se combina con el -naftol sulfonato originando un complejo púrpura. Es una reacción muy
sensible puesto que soluciones de glucosa al 0.001% y sacarosa al 0.0001% dan positiva la prueba. También
sirve para el reconocimiento general de carbohidratos donde polisacáridos y disacáridos se hidrolizan
formando monosacáridos formando un color púrpura violeta.
- REACTIVO DE SULLIVAN: Es un método de identificación de aminoácidos que da positivo al grupo
sulfhídrico (R-SH) de la cisteína con una coloración entre rosa y rojo, y amarillo para negativo.

6. REVISE Y NALICE INFORMACIÓN SOBRE.

La tabla de este inciso esta anexada al final del informe, debido a que era una tabla de gran tamaño y que necesitaba estar bien
desplegada.

7. COMENTE SUS RESULTADOS

R/: La prueba de Biuret no se pudo realizar debido a que el reactivo no se encontraba en las mejores condiciones. En la prueba
Xantoproteica tuvimos ciertos inconvenientes ya que esta prueba arrojó positivo en la muestra conocida (albúmina de huevo),
pero en las muestras problemas, como la leche, nos arrojó un resultado dudoso, y como ya explicamos anteriormente la leche
contiene Caseína, en el caso del ácido nítrico y la albúmina que, al ser unidos, lo que hace es desnaturalizar las proteínas de X
sustancia, provocando su coagulación y una coloración blanquecina. En la prueba de Benedict, obtuvimos que en las muestras
problemas, leche y extracto de manzana, las dos contienen azucares reductores, que son los que identifica esta prueba. En la

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 prueba de Lugol, obtuvimos que en el extracto de papa y de manzana, encontramos almidón y sacarosa respectivamente, debido
a la amilosa contenida en estas dos sustancias.

8. LITERATURAS SUGERIDAS COMO CONSULTA

 Caselles-Osorio, A y J. C. Gutiérrez. 2002. Manual de experiencias de Laboratorio para Biología general y celular.
Universidad del Atlántico, Barranquilla Colombia
 Freeman, S. 2011. Biológica Sáciense. 4th edición Persona Editorial. New York. 1122 p
 Información disponible en la web
www.nature.com/scitable

9. BIBLIOGRAFÍA ADICIONAL
 www.macromoleculas-quimica.blogspot.com.co
 www.monografias.com

10. OBSERVACIONES DOCENTES

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