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Informe de Práctica

Integrantes:
 Anacleto Irene Juan Aldheir.
 Arteaga Requejo José Joel.
 Davila Santur Jherson.
 Díaz Barboza James Eduardo.
 Diaz Ygnacio Loida Eunice.
 Dominguez Rondoy Patricia del Pilar.
 Medina Gonzales Maycol Alexi.
 Perales Delgado Mayte Gianella.
 Torres del Castillo Nadia.
INFORME DE PRÁCTICA – VISITA AL HOSPITAL REGIONAL
LAMBAYEQUE (HRL)

I. INTRODUCCIÓN

En la Sección de Inmunohistoquímica proporcionamos información


complementaria al estudio histopatológico convencional mediante
técnicas basadas en el uso de anticuerpos sobre muestras de tejidos
o citologías. Los anticuerpos se unen a determinados productos
celulares o gérmenes de forma específica gracias a reacciones
antígeno-anticuerpo que se manifiestan por señales de color visibles
al microscopio.
Los datos de alta especificidad que proporciona el análisis
inmunohistoquímico son de gran importancia para el diagnóstico
final. Hoy en día se utiliza para la valoración de la mayor parte de los
factores pronósticos en tumores malignos.
Las técnicas más usadas son las de inmunohistoquímica indirecta,
con polímeros conjugados con anticuerpos y agentes reveladores, y
las técnicas de inmunofluorescencia directa. La mayor parte de los
métodos que utilizamos están automatizados mediante sistemas de
tinción robotizados que aplican los anticuerpos específicos
previamente seleccionados y el resto de reactivos sobre las distintas
preparaciones de los cortes de tejidos.
En nuestra visita al HRL hicimos un reconocimiento del laboratorio de
inmunohistoquímica, repasamos la parte teórica y finalmente
realizamos el procedimiento manual de inmunohistoquímica indirecta
y de una tinción directa (por congelación) de Hematoxilina – Eosina.

II. OBJETIVOS:

 Reconocimiento del laboratorio de inmunohistoquímica y su


estructura así mismo de los materiales y equipos que son
utilizados para los diversos procesos.
 Conocer y aprender la técnica de procesamiento de tejido en
fresco y tejido fijado en formalina al 10%.
 Conocer el uso de cada equipo para la selección de
procesamientos de tejidos.
 Conocer e identificar los distintos marcadores y su aplicación
dentro del procesamiento inmunohistoquímico.

III. MATERIALES:

1. Muestra Biológica:

Hígado de pollo

2. Materiales de Laboratorio:

 Guantes.
 Marcador para Láminas.
 Láminas y laminillas.
 Solución Xilol.
 Gel de Entellan.
 Bisturí.
 Pinza de disección con punta curva fina.
 Criostato.
 Pincel.
 Plumón hidrofóbico.
 Equipo de recuperación antigénica.
 Hematoxilina.
 Eosina.
IV. PROCEDIMIENTO:
A. TINCIÓN DIRECTA (H&E POR CONGELACIÓN):
1. Selección de la muestra constituido por un cilindro de tejido de
0.5 cm de diámetro y 0.5 a 1 cm de longitud.

2. Una vez obtenida la muestra colocar en el pin y para la fijación


colocamos el gel congelante e inmediatamente llevamos al
criostato por 10 minutos.

3. Pasado los 10 minutos aseguramos y fijamos las cuchillas para


proceder al desbastado que realiza a 20 micras y luego se
realiza cuidadosamente el corte a 4 micras.
4. Una vez realizado el corte retiramos el tejido con cuidado con
ayuda del pincel y luego colocamos en una lámina
portaobjetos.

5. Una vez fijado en la lámina se lleva a la batería de tinción de


H&E
a. Hematoxilina 1munuto.
b. Sumergir en agua corriente 30 veces.
c. Eosina 1 minuto.
d. Sumergir en agua corriente 30 veces.
e. Sumergir 30 veces en alcohol (96°) I.
f. Sumergir 30 veces en alcohol (96°) II.
g. Sumergir 30 veces en alcohol (96°) III.

h. Colocar por 10 minutos en la estufa.


6. Una vez pasado los 10 minutos en la estufa procedemos a
realizar el montaje de la lámina, colocando entellan en la
laminilla y una gota de xilol en la lámina portaobjetos, luego se
hace presión para eliminar las burbujas que se pueden
encontrar.

7. se realiza la observación de nuestras láminas.


B. Procedimiento para recuperación antigénica:
1. Realizar el corte histológico y colocar en el corte en una
lámina.
2. Colocar los portaobjetos con el corte en el racks para
recuperación antigénica.

3. Verificar el panel de temperatura y tiempos del equipo.

4. Aperturar el equipo. Dentro del equipo se observa dos


contenedores para la solución recuperadora, en donde se va
a colocada el racks, colocar el racks y cerrar el equipo.
Solución recuperadora de antígenos

5. En el monitor el equipo verificar el grafico de temperatura.


6. Cuando la temperatura haya descendió se podrá aperturar el
quipo para extraer el racks. Una vez retirado el racks, éste se
pondrá en un contenedor lleno de buffer.
Procedimiento para coloración IHQ:

1. Delimitar con plumón hidrofóbico el corte para contener los


reactivos sobre el corte del tejido.
2. Colocar las láminas en una cámara húmeda para realizar la
coloración.
3. Lavado con buffer por 2 minutos 30 segundos.
4. Agregar Peroxidasa por 5 minutos.
5. Lavado con buffer por 5 minutos
6. Agregar el Anticuerpo especificado en la lámina por 20
minutos
7. Dos lavados con buffer por 2 minutos y 30 segundos
8. Agregar el Linker por 10 minutos. Solo cuando la marca
especifica con que anticuerpo se añade.
9. Dos lavados con buffer por 2 minutos y 30 segundos.
10. Agregar el HRP por 20 minutos.
11. Lavado con buffer por 2 minutos y 30 segundos.
12. Lavado con buffer por 7 minutos.
13. Agregar el Cromógeno por 10 minutos.
14. Lavado con buffer
15. Sumergir en Hematoxilina por 1 minutos para dar contrate.
16. Sumergir 30 veces en agua corriente.
17. Colocar por 10 minutos en la estufa.
18. Montaje.

V. CONCLUCIONES:
 Logramos reconocer cada área del laboratorio de
inmunohistoquímica, así como los distintos materiales y equipos
que son utilizados para los procesamientos de los tejidos.
 Aprendimos y pusimos en práctica cada una de las técnicas de
procesamiento de tejidos de tal forma que fortalecimos nuestros
conocimientos teóricos a través de la práctica.
 Aprendimos la importancia de realizar un buen procesamiento así
como de los cuidados que debemos tener ya que un simple
descuido puede terminar con todo nuestro procesamiento.