2º Congreso Nacional de Química Médica Jiménez-Wences y col.

INTERLEUCINA 18 (IL-18) Y SU RECEPTOR

(IL-18Rα
α) EN LA CARCINOGÉNESIS CERVICAL

1 1 1
Jiménez-Wences Hilda , Padilla-Islas Fabiola , Martínez-Carrillo Dinorah Nashely , Romero-
Neri Patricia2, Illades-Aguiar Berenice1, Fernández-Tilapa Gloria1. 1Unidad Académica de
Ciencias Químico Biológicas, Universidad Autónoma de Guerrero, 2 Clínica de Displasias
“Alameda”, Chilpancingo, Guerrero. wences2009@hotmail.com

RESUMEN

Determinar la expresión del mRNA de la IL-18 y de la cadena α de su receptor

(IL-18Rα) en lesiones premalignas y cáncer del cérvix uterino. Entre agosto de 2005 y
abril de 2006, se analizaron 225 muestras de cDNA de las cuales 192, procedían de
casos de lesión premaligna o cáncer cérvico uterino (CaCU), diagnosticados por
histopatología, distribuidos en tres estratos: a) lesión escamosa intraepitelial de grado
bajo (LEIGB) n= 119, b) lesión escamosa intraepitelial de grado alto (LEIGA) n= 38 y c)
CaCU n= 35. Se incluyeron también 33 muestras de raspados cervicales provenientes
de mujeres citológicamente normales (CN). La expresión del mensajero de la IL-18 y
de IL-18Rαse detectó mediante RT-PCR utilizando oligonucleótidos específicos para
cada gen, como control positivo para IL-18 se utilizóRNA de células HeLa y para IL-
18Rαse utilizóRNA células mononucleares de sangre periférica de una paciente con
Leucemia Granulocítica Crónica. La proporción de muestras que expresaron el mRNA
de IL-18, fue mayor en los estratos de CN y CaCU con un 45.7% y 48.5%
respectivamente, mientras que sólo el 27.7% de muestras de LEIGB y 23.7% de
aquellas con LEIGA expresaron ese mensaje. De las 225 muestras, sólo el 0.9%
expresaron IL-18Rα; todas con diagnóstico de CN. La presencia del mRNA de la IL-18
se detectóen los 4 estratos, sin embargo la expresión del mensajero de la IL-18Rα fue
nula en lesiones intraepiteliales y CaCU. Estos hallazgos pueden sugerir una
modulación negativa de la respuesta inmune TH1, favoreciendo así la carcinogénesis.
En el caso de las dos muestras de CN que expresaron ambos mensajeros, es posible
que provengan de mujeres en las que se estaba llevando a cabo un proceso
inflamatorio local con activación de la respuesta TH1.

Palabras clave: Interleucina 18, cadena α del receptor de la IL-18, Cáncer cérvico uterino.

INTRODUCCIÓN

México y América Central presentan la tasa de incidencia y mortalidad por

Cáncer cérvico uterino (CaCU) más altas. En el año 2003 el INEGI reportó una tasa de
mortalidad de 8.3 casos por cada 100 000 mexicanas.1,2

Tipos de alto riesgo oncogénico del virus del papiloma humano (VPH) son el
factor etiológico del CaCU, sin embargo, son necesarios factores adicionales que en
conjunto inducen la progresión de una infección viral persistente a lesiones
intraepiteliales y CaCU. La respuesta inmune celular tiene un papel importante en el
control de las neoplasias asociadas a VPH, las cuales frecuentemente revierten como
resultado de una eficiente respuesta inmune celular, tipo Th1. Se ha considerado que
uno de los mecanismos por medio de los cuales las células infectadas por VPH y
células malignas escapan a la vigilancia inmune involucran cambios en la producción
local de citocinas y/o la pérdida de respuesta a éstas, provocando una alteración en el
balance Th1/Th2 de la inmunidad local.3,4
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La IL-18 es una citocina con actividad antiviral y antitumoral, juega un papel

importante en la respuesta de tipo Th1 a través de la inducción de la síntesis de
interferón gamma (IFN-) y el aumento de la actividad citotóxica de los LTC y de las
células NK. Posee también la capacidad de inducir la producción de otros mediadores
proinflamatorios, tales como el factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), IL-1β, IL-6 e IL-
8, que aumentan la proliferación de células T, y la activación de los LTC. La IL-18
cumple sus actividades biológicas a través de un receptor heterodimérico compuesto
por una cadena α y una cadena β (IL-18Rα y IL-18Rβ). La IL-18Rα se une al ligando,
mientras que la IL-18Rβ es la cadena transductora de señal. El papel de la IL-18 en la
patogénesis por VPH no se ha determinado. La falta de producción de IL-18 bioactiva
inducida por las células tumorales, se ha propuesto como un mecanismo probable a
través del cual las células transformadas pueden inhibir la síntesis local de IFN-γ y así
la respuesta de tipo Th1. Se ha reportado que la proteína E6 del VPH se une a la IL-18
y la degrada por la vía de la ubiquitinación, o por cualquier otra, y que las
oncoproteínas E6 y E7 del VPH 16 se unen de forma competitiva a la cadena α del IL-
18R e inhiben así la producción de IFN-γ inducida por IL-18 en células NK y células
mononucleares de sangre periférica humana, al reducir la unión de la IL-18 a su
receptor. De esta forma las oncoproteínas del VPH contribuyen a la patogénesis viral y
a la carcinogénesis cervical. 5,6,7

En la literatura no encontramos reportes acerca del estudio de esta citocina y

de su receptor en pacientes con lesiones cervicales ocasionadas por el VPH, por tal
razón el objetivo de la presente investigación fue determinar la expresión del RNAm de
la IL-18 y de la cadena α de su receptor (IL-18Rα) en lesiones premalignas y CaCU.

MATERIAL Y MÉTODOS

Entre agosto de 2005 y abril de 2006, se analizaron 225 muestras de RNA de

las cuales 192, procedían de casos de lesión premaligna o CaCU, diagnosticados por
histopatología, distribuidos en tres estratos: a) lesión escamosa intraepitelial de bajo
grado (LEIBG) n= 119, b) lesión escamosa intraepitelial de alto grado (LEIAG) n= 38 y
c) CaCU n= 35. Se incluyeron también 33 muestras de raspados cervicales
provenientes de mujeres citológicamente normales (CN). La expresión del mensajero
de la IL-18 y de IL-18Rα se detectó mediante RT-PCR semicuantitativa utilizando
oligonucleótidos específicos para cada gen. Como control positivo de la expresión de
IL-18 se utilizó RNA de células HeLa y para IL-18Rα se utilizó RNA células
mononucleares de sangre periférica de una paciente con Leucemia Granulocítica
Crónica. En todos los casos se usaron 2.5 µg de RNA total para la síntesis de cDNA.
Se incluyeron en el estudio sólo los cDNA que amplificaron un fragmento del
mensajero de β-actina. Las muestras incluidas en esta investigación contaban con
diagnóstico previo de infección por VPH por el método de PCR.

RESULTADOS

Todas las muestras negativas a lesión intraepitelial o malignidad fueron VPH

negativas. El 83.2% de las muestras con LEIGB fueron VPH-positivas, en LEIGA la
infección se detectó en un 76.3% y en CaCU en un 100%; siendo los VPH de alto
riesgo oncogénico los más frecuentes en un 95.4%. El genotipo con mayor prevalencia
fue el VPH 16, 68%; seguido por el VPH-18 (8.5%), VPH- 31 (6.5%) y el VPH 58
(5.2%), todos clasificados como de alto riesgo oncogénico.

Expresión del RNAm de IL-18 y de IL-18Rα. Para valorar la integridad del RNA,
la síntesis correcta del cDNA y posteriormente semicuantificar el nivel de expresión del
RNAm de IL-18 y de IL-18Rα, las muestras fueron sometidas a PCR para amplificar un
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fragmento de 540 pb del gen constitutivo β-actina (Figura 1c). La expresión del
transcrito de IL-18 se detectó por PCR y los productos de amplificación, de 587 pb, se
muestran en la figura 1a. La proporción de muestras que expresaron el RNAm de IL-
18 fue mayor en los estratos de CN y CaCU con un 45.7% (16/35) y 48.5% (16/33)
respectivamente, mientras que en lesiones premalignas de bajo y alto grado se
encontró que 27.7% (33/119) y 23.7% (9/38) respectivamente, expresaron el
mencionado transcrito (Cuadro 1). La expresión del RNAm de la IL-18Rα se detectó
también por PCR y los productos de amplificación de 422 pb, se muestran en la figura
1b. De las muestras analizadas, sólo el 5.7% de las muestras de mujeres
citológicamente normales (CN) expresaron la cadena α del receptor de la IL-18 (2/35);
las muestras con LIEGB, LIEGA y CaCU fueron negativas a la expresión del RNAm
del la IL-18Rα (Cuadro 1).

Expresión del RNAm de IL-18 e infección por VPH en lesiones precancerosas y

CaCU. De las muestras analizadas, el 59.5% resultó VPHpositiva/RNAm de IL-18 negativa y
el 25.3 % fueron VPHpositiva/RNAm de IL-18 positivas. De las muestras con infección por
VPH 16 el 71 % fueron negativas al RNAm de IL-18, y de aquellas que contenían el
DNA del VPH 18, el 85% expresaron el mensaje de esa citocina (Cuadro 2).

MPM 1 2 3 4 5 6 7
123 pb
a)
615 pb 540 pb IL-18
492 pb
b) 492 pb 422 pb IL-18Rα
369 pb

c) 615 pb β- actina
492 pb 587 pb

Figura 1. Expresión del RNAm de IL-18, IL-18Rα y β-actina. a) MPM: Marcador de peso
molecular DNA ladder de 123 pb. Control negativo, se sustituyó el cDNA por agua (1). Control
positivo (cDNA sintetizado a partir de RNA de células HeLa) (2). Muestras de CaCU que
expresan el mensaje de IL-18 (3-6). Muestra de CaCU negativa al RNAm de la IL-18 (7). b)
MPM: Marcador de peso molecular DNA ladder de 123 pb. Control negativo, se sustituyó el
cDNA por agua (1). Control positivo (cDNA sintetizado a partir de RNA de CMSP de una
paciente con leucemia granulocítica crónica) (2). Muestra de CN positiva al RNAm del gen IL-
18Rα (4). Muestras negativas al RNAm del gen IL-18Rα (3, 5 y 7). c) MPM: Marcador de peso
molecular DNA ladder de 123 pb. Control negativo, se sustituyó el cDNA por agua (1).
Muestras positivas al RNAm del gen constitutivo β-actina (2-7).

TIPO DE EXPRESION DE IL-18 EXPRESION DE IL-18Rα

LESION NEGATIVO (%) POSITIVO (%) NEGATIVO (%) POSITIVO (%)
CN* 19/35 (54.3) 16/35 (45.7) 33/35 (94.3) 2/35 (5.7)
LEIBG 86/119 (72.3) 33/119 (27.7) 119/119 (0) 0/119 (0)
LEIAG 29/38 (76.3) 9/38 (23.7) 38/38 (0) 0/38 (0)
CaCU 17/33 (51.5) 16/33 (48.5) 33/33 (0) 0/33 (0)
* Negativo a lesión intraepitelial o malignidad
Cuadro 1. Frecuencia de la expresión del RNAm de IL-18 e IL-18Rα con respecto al grado de
lesión. Mujeres del estado de Guerrero.
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Semicuantificación del transcrito de IL-18 en CN, LEIGB, LEIGA y CaCU. La

semicuantificación de los transcritos del RNAm de la IL-18, se llevó cabo en un
fotodocumentador Bio Rad, el cual nos permite medir la intensidad de las bandas de
los productos de PCR presentes en el gel. El valor obtenido se normalizó con la
expresión del gen constitutivo β-actina de cada muestra (unidades de densidad del
RNAm de IL-18/unidades de densidad del RNAm de la β-Actina). Se calcularon
cuartiles para determinar niveles de expresión de IL-18 en los diferentes estratos. En
el 67% de las 225 muestras estudiadas, no se detectó el mensajero de esa citocina y
se les clasificó como expresión nula. De las muestras que expresaron el RNAm de IL-
18 el 24% presentaron una expresión mínima, el 8% una expresión moderada y solo el
1% presentaron expresión alta y correspondieron a mujeres citológicamente normales
(Cuadro 3).

Expresión del RNAm IL-18

GENOTIPO DE VPH
POSITIVO NEGATIVO
16 30/104 (29%) 74/104 (71%)
18 2/13 (15%) 11/13 (85%)
31 4/10 (40%) 6/10 (60%)
33 1/3 (33%) 2/3 (67%)
45 3/6 (50%) 3/6(50)
58 7/8 (87%) 1/8 (13%)
59 - 2/2 (100%)
61 - 1/1 (100%)
66 - 2/2 (100%)
CP8304 - 2/2 (100%)
81 - 1/1(100%)
IM - 2/2 (100%)
NT 1/7 (14%) 6/7 (86%)
IM: Infección múltiple, NT: No tipificado
Cuadro 2. Frecuencia de los genotipos virales del VPH y expresión del RNAm de IL-18.

Nivel de expresión de la IL-18

Nula Mínima Moderada Alta TOTAL
(0 – <0.49) (0.49 – 0.99) (1.0 – 1.49) (1.50 – 1.99)
CN 19/35 (54%) 12/35 (34%) 2/35 (6%) 2/35 (6%) 35 (100%)
LIEGB 86/119 (72%) 23/119 (19%) 10/119 (9%) - 119 (100%)
LIEGA 29/38 (76%) 5/38 (13%) 4/38 (11%) - 38 (100%)
CaCU 18/33 (55%) 13/33 (39%) 2/33 (6%) - 33 (100%)
Cuadro 3. Nivel de expresión del RNAm de la IL-18 en CN, lesiones precancerosas y CaCU.
Mujeres del estado de Guerrero.

DISCUSIÓN

La expresión de IL-18 en una alta proporción de muestras negativas a lesión

intraepitelial o malignidad podría explicarse por la presencia de estímulos distintos a la
infección por VPH, ya que todas fueron negativas al DNA de ese virus. Se ha
reportado que la producción de IL-18 en líquido peritoneal de pacientes con
endometriosis es dependiente de la fase del ciclo menstrual e incrementa
significativamente con el estadio de la endometriosis (I y II). La falta de expresión de
IL-18 en lesiones precancerosas pudiera estar evitando que se desencadene una
respuesta inmune antiviral eficaz, de tal forma que es posible que en estas lesiones se
esté produciendo una modulación negativa de la respuesta inmune de tipo Th1 que
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favorece así a la patogénesis viral y la carcinogénesis cervical. Es posible que la IL-18

esté jugando un papel importante en la patogénesis temprana del CaCU, ya que la
proporción de muestras que expresaron el mensaje de esta citocina fue mayor en
CaCU. Este comportamiento se ha reportado por otros autores en otros tipos de
cáncer, en los cuales conforme avanza el estadio de la neoplasia los niveles de
expresión de la IL-18 son mayores. Adicionalmente habrá que considerar que para que
la IL-18 pueda cumplir con sus funciones, debe ser biológicamente activa y se ha visto
que células inmunes y no inmunes pueden secretar de forma constitutiva IL-18 pero no
es funcional. Cho y colaboradores y Lee y colaboradores han reportado que la
expresión y la función de IL-18 pueden ser moduladas por las oncoproteínas E6 y E7
del VPH, lo cual está en acuerdo con nuestros resultados que muestran que en
presencia del VPH-16 la proporción de muestras que expresan el RNAm de la IL-18
disminuye en un 71%.

La falta de expresión del RNAm de la IL-18Rα en lesiones precancerosas y

CaCU, sugiere otra vía probable de modulación negativa de la respuesta inmune Th1
en el proceso de carcinogénesis cervical. En el caso de las dos muestras de CN que
expresaron ambos mensajeros, es posible que provengan de mujeres en las que se
estaba llevando a cabo un proceso inflamatorio local con activación apropiada de la
respuesta Th1.

CONCLUSIONES

El comportamiento de la IL-18 en diversos tipos de cáncer al parecer tiene un

comportamiento similar, debido a que se ha visto que conforme avanza el estadio del
carcinoma, la expresión de esta citocina es mayor. La presencia del RNAm de la IL-18
se detectó en los 4 estratos, sin embargo la expresión del mensajero de la IL-18Rα
fue nula en lesiones intraepiteliales y CaCU. Estos hallazgos pueden sugerir una
modulación negativa de la respuesta inmune TH1 inducida por IL-18 e IL-18Rα,
favoreciendo así la carcinogénesis. Aunque el papel de la IL-18 en la patogénesis por
VPH no se ha determinado se ha propuesto que el virus puede modular la respuesta
desencadenada por esta citocina, por lo que es importante indagar sobre los posibles
mecanismos por los cuales el VPH puede modular la respuesta a IL-18.

La mayoría de las muestras que expresaron el RNAm de IL-18 tuvieron una

expresión moderada de ese mensaje y solamente en muestras de CN se encontró una
pequeña proporción en que se detectó alta expresión.

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