Opto genética: Un Interruptor de Neuronas

Facultad de ciencias naturales e ingenierías, Unidades Tecnológicas de Santander

Bucaramanga, Colombia.

un organismo modelo biológico especialmente bien estudiado, en

RESUMEN
Este documento pretende dar a conocer los estudios realizados
alrededor de la optogenetica desde un punto de vista de la ingeniería,
se van a evidenciar estudios con sus respectivas observaciones,
beneficios de la optogenetica y sobre todo que papel juega la parte
óptica en todo este nuevo método.
parte debido a su facilidad de cultivo y la capacidad de manipular su
genética. Cuando se ilumina, C. reinhardtii puede crecer
fotoautótroficamente, pero también puede crecer en la oscuridad si se
le suministra carbono orgánico. Comercialmente, C. reinhardtii es de
interés para producir productos biofarmacéuticos y biocombustibles,
además de ser una herramienta de investigación valiosa en la
fabricación de hidrógeno

Palabras clave: Optogenetica, óptica, luz, neuronas, Opsinas.

Abstrac – This document aims to publicize the studies conducted

around the optogenetics from an engineering point of view, they will
show studies with their respective observations, benefits of
optogenetics and especially what role the optical part plays in this
new method .

Key words: Optogenetics, optics, light, neurons, Opsins.

I. Introducción.

La posibilidad de controlar las neuronas ha sido un tema que se

maneja desde varios años atrás, la optogenetica tiene pioneros desde
1999 pero no fue hasta 2005 que se hizo publico el primer uso de foto
estimulación genéticamente orientado. La optogenetica en sus inicios
tuvo como estimulante el láser, aunque no genéticamente dirigido,
pero actualmente usando métodos genéticos y ópticos con luz a través
de hilos de fibra óptica.

II. Opsinas

Las opsinas son unas proteínas propias de microorganismos que son

capaces de regular el flujo de carga eléctrica (mediante el movimiento
de iones) a través de sus membranas en respuesta a la luz.

En el año 2000 se consiguió aislar una nueva proteína de un

organismo unicelular, el alga Chlamydomonas reinhardtii, a la que se
le dio el nombre de Channelrodopsina 2 (ChR2). Ante la Fig 1. Comparativo de varias algas y su funcionamiento.
estimulación con un haz de luz azul el ChR2 se abre permitiendo el
paso de iones a favor del gradiente electroquímico de la célula
(H+>Na+>K+>Ca+), lo que permite que el alga se desplace.

III. Pasos de la opto-genética

Chlamydomonas reinhardtii es una alga verde de una sola célula de
aproximadamente 10 micras de diámetro que nada con dos flagelos.
A. Construcción genética (paso 1).
Tiene una pared celular hecha de glicoproteínas ricas en
hidroxiprolina, un gran cloroplasto en forma de copa, un pirenoide
El proceso de la técnica comienza juntando una construcción
grande y una "mancha ocular" que detecta la luz.
genética que comprende una secuencia promotora y un gen.
Channelrhodopsin (ChR) o Halorhodopsin (NpHR) son dos
de los genes más utilizados en la codificación de proteínas
Las especies de Chlamydomonas están ampliamente distribuidas en sensibles a la luz en las células objetivo. En presencia de luz
todo el mundo en suelos y agua dulce. Chlamydomonas reinhardtii es azul (longitud de onda 470 nm) ChR sufre un cambio para
 permitir que la afluencia de iones Na + de sodio despolarice
la célula, activándola efectivamente. Mientras que en el caso
de NpHR, la célula se apaga de manera efectiva por la
presencia de luz amarilla (longitud de onda 580 nm) al
permitir que los clones de los Cliones hiperpolaricen la
célula.
A.
Fig 2. Proteínas sensibles a la luz ChR (izquierda) y NpHR
(derecha)
B. Entrega de genes a la célula objetivo (paso 2 y 3).
Hay tres métodos principales para la entrega de genes que
codifican proteínas sensibles a la luz en células objetivo.
Consisten en transfección, líneas de animales transgénicos y
el método más popular de transducción viral. Con el uso de
vectores virales, se pueden dirigir células precisas utilizando
un promotor específico administrado por una inyección
específica de localización.
Fig 3. Entrega de genes a la célula objetivo
B.
C. Entrega de luz a la celda objetivo (paso 4 y 5).
El suministro de luz in vivo para estimular la célula objetivo
se realiza comúnmente mediante una luz láser acoplada a
fibras ópticas guiadas a través de una cánula al tejido
transducido.
Fig 4. Entrega de luz a la celda objetivo
IV. Fibra Óptica.
Elección de fuente de luz.
Hay tres parámetros críticos para seleccionar una
fuente de luz: tipo de fuente, longitud de onda e
intensidad. Las dos opciones para el tipo de fuente
incluyen láseres de estado sólido bombeados por diodo
(DPSS) y diodos emisores de luz (LED). Los láseres
DPSS son fáciles de usar y lo suficientemente potentes
para garantizar la máxima activación de las proteínas
opsinas. Se caracterizan por la longitud de onda y la
intensidad de la luz que emiten, así como también por
si pueden ser impulsadas por señales digitales y
analógicas. Como un láser emite luz a una longitud de
onda específica, es importante usar el láser apropiado
para activar una proteína opsina específica. ChR2 se
activa al máximo con 473 nm de luz azul. La proteína
inhibitoria halorhodopsina se activa al máximo con 593
nm de luz amarilla; sin embargo, puede ser activado
por un láser verde de 532 nm, que es
significativamente menos costoso que un láser
amarillo. Los láser pueden ser impulsados por señales
de computadora digital (pulsos TTL) o señales
analógicas. Los láseres con tecnología TTL son fáciles
de usar y, a menudo, vienen con perillas de potencia
que permiten ajustar la intensidad del láser. Los láseres
controlados analógicamente requieren electrónica más
compleja para activarlos, pero permiten la entrega de
formas de onda más complejas, como los sinusoides.
Cuando utilice un láser en un modo controlado
analógico, tenga cuidado de limitar el voltaje
suministrado a lo que el láser puede aceptar (a menudo
5 V). Es posible dañar el controlador del láser
activándolo con un paso de voltaje demasiado grande.
Fibra óptica
Las fibras ópticas se clasifican en modo único o
múltiple. Las fibras monomodo tienen menos de diez
micras de diámetro y son demasiado delicadas para
aplicaciones optogenéticas típicas. Las fibras
multimodo tienen un diámetro de núcleo superior a 10
um y pueden ser relativamente fáciles de manejar. El
tamaño del núcleo altera el ancho del haz de luz, pero
no afecta la cantidad de luz total que puede atravesar la
fibra. La geometría del tejido que uno espera iluminar
debería influir en la elección del tamaño del núcleo de
la fibra: las fibras más pequeñas pueden causar menos
daño tisular si se implantan in vivo , pero se rompen
 más fácilmente, especialmente cuando son más estándar y son prácticas para experimentos de ratas in
pequeñas que 100 um. vivo.

El núcleo de una fibra óptica está rodeado por un V. Aplicaciones.

material de revestimiento transparente. Este
revestimiento mantiene la luz en el núcleo por
reflexión interna total y no se puede quitar de la fibra.
Un material amortiguador rodea el revestimiento de
una fibra óptica y esto puede eliminarse con un
separador de fibras para fines de terminación de fibra,
empalme o implantación cerebral.
Los rayos láser divergen a medida que se propagan en
el espacio y la dispersión es más o menos lineal con la
distancia. La extensión de esta extensión es una
propiedad de la fibra óptica conocida como apertura
numérica, un número adimensional que describe el
rango de ángulos sobre los cuales la fibra puede
aceptar o emitir luz. Cuanto mayor es la apertura
numérica de una fibra, mayor es la divergencia del haz
una vez que la luz sale de la fibra. De nuevo, la
geometría del tejido que debe iluminarse debe ser un
factor al considerar qué apertura numérica usar. Existe
una aplicación en línea para calcular la transmisión de
la luz a través del tejido cerebral en el sitio web del
laboratorio Diesseroth
( http://www.stanford.edu/group/dlab/cgi-
bin/graph/chart.php ). Calcula la dispersión de la luz y
la profundidad de penetración usando varios factores,
que incluyen la longitud de onda de la luz, la apertura
de la fibra, la intensidad de la luz y el radio del núcleo
de la fibra.
C. Implantación tisular
1. Ha servido para controlar ataques epilépticos en modelos
animales experimentales.
2. Al manipular las neuronas dopaminérgicas que forman parte
del circuito de recompensa del cerebro, se ha podido potenciar o
evitar la adicción a la cocaína o tratar a animales enfermos de
Parkinson.
3. El control neuronal del sueño y la vigilia ha podido ser
manipulado a voluntad. La activación optogenética de unas
neuronas llamadas hipocretinas interrumpe el sueño de un animal
profundamente dormido, mientras que la inhibición optogenética
de estas neuronas provoca un estado inmediato de sueño profundo
en animales que estaban despiertos al momento de aplicar el
estímulo luminoso. Estos hallazgos han sentado las bases para
desarrollar fármacos que modulen el sueño y para el tratamiento
de trastornos como la narcolepsia.
4. Con la ayuda de métodos optogenéticos, se pudo activar
selectivamente a un grupo de neuronas del hipotálamo que co-
expresan AGRP/NPY. La activación de estas neuronas por sí solas
fue suficiente para inducir apetito, incluso en animales saciados y
sin necesidad de previo entrenamiento, demostrando que una
conducta compleja como la alimentación puede ser controlada
optogenéticamente. Por otra parte, la activación de otro grupo de
neuronas, que expresan POMC- localizadas en la misma región
del cerebro, reduce el apetito y produce pérdida de peso corporal
en menos de 24 horas, lo que podría ser utilizado como futuro
tratamiento para pacientes con obesidad.

Para experimentos in vivo , la punta de la fibra óptica 5. Si se produce una arritmia cardíaca, el corazón nuevamente
debe colocarse en el tejido cerebral. Hay dos métodos puede bombear sangre al ritmo de la luz. De hecho, se ha
de colocación de la fibra, que implican la implantación desarrollado el primer marcapasos basado en la optogenética.
crónica de una cánula guía o una fibra óptica unida a
una férrula. La implantación de la guía de la guía
VI. Conclusiones
(Apéndice 4A) permite un diseño simple de cable de
fibra óptica, con un solo cable conectado directamente Los métodos ópticos han ayudado a la medicina a hacer grandes
a la fuente de luz. La principal desventaja de este avances y la opto-genética es sin duda uno de los más grandes
enfoque es que las fibras ópticas pueden dañarse descubrimientos ya que gracias a esta activación y desactivación de
durante el enhebrado dentro y fuera de la cánula guía. células se va poder mejorar la calidad de vida de muchas personas,
Un enfoque alternativo es implantar crónicamente una aunque aún no se han hecho pruebas en las personas se tienen grandes
fibra en el cerebro, que está conectada a una férula expectativas para este descubrimiento.
fijada al cráneo del animal. Esta férula es el punto de
conexión donde la fibra proveniente de la fuente de luz
se adherirá a la fibra implantada en la cabeza del
animal. Los casquillos suelen estar hechos de una
aleación de acero inoxidable o zirconia y vienen en dos
tamaños: 2.5 o 1.25 mm de diámetro. Las férulas más
pequeñas de 1.25 mm de ancho tienen una longitud de
6.4 mm y pueden acomodar fibras ópticas de menos de
330 mm de ancho (tamaño del núcleo igual o inferior a
300 um). Debido a su peso ligero y tamaño pequeño,
estas férulas son particularmente buenas para el trabajo
del ratón en vivo . Las fibras más grandes de 2.5 mm
de ancho tienen 10.5 mm de largo y pueden acomodar
fibras de menos de 500 um de ancho. Estas son las
férulas utilizadas en conexiones de fibra óptica FC / PC