El microscopio estereoscópico

El microscopio estereoscópico es un tipo de microscopio óptico que permite

observar la muestra generando una imagen en tres dimensiones. Esta es su
característica principal que lo distingue del resto de microscopios donde la
muestra siempre es observada en dos dimensiones.

Microcopio estereoscópico
En los microscopios binoculares convencionales la muestra es siempre
observada a través de un solo objetivo. Esto implica que la imagen que llega
a los dos ojos es exactamente la misma y, por lo tanto, no puede generarse
una visión tridimensional.
Los microscopios estereoscópicos, en cambio, observan la muestra a través
de dos lentes distintas. Esto permite que la imagen que llega a cada ojo sea
ligeramente distinta. La combinación de estas dos imágenes mediante
nuestros ojos produce el efecto tridimensional.
Los microscopios estereoscópicos son en general microscopios de luz
reflejada. Es decir, un foco ilumina la muestra y la luz reflejada por la
muestra es observada a través de los objetivos y oculares. De este modo se
pueden observar muestras sin necesidad de laminarlas como en el caso de
los microscopios de luz transmitida, donde la luz atraviesa la muestra antes
de llegar al objetivo. Este es el motivo por el cual generalmente los
microscopios estereoscópicos tampoco tienen ni condensador ni diafragma.
Este tipo de microscopio es por lo tanto adecuado para observar de forma
aumentada todo tipo de objetos sin necesidad de llevar a cabo un proceso
de preparado de la muestra. Esto los hace muy útiles en todo tipo de
campos y aplicaciones incluyendo el control de calidad de materiales, la
construcción de microcircuitos, el montaje de relojes o procedimientos de
microcirugía. En general, los microscopios estereoscópicos son muy
utilizados en campos donde debe manipularse la muestra mientras se
observa.
Los microscopios estereoscópicos destacan por su versatilidad. Son un gran
instrumento para todas aquellas personas que se inician en el mundo de la
microscopía ya que no requieren ningún tipo de preparación de la muestra.
Aumento del microscopio estereoscópico
El aumento que puede alcanzar un microscopio estereoscópico es siempre
menor que el que se consigue con los microscopios ópticos convencionales.
Esto es debido a las aberraciones ópticas introducidas en este tipo de
microscopios.
Los microscopios estereoscópicos más habituales tienen objetivos de 2 o 4
aumentos, combinados con lentes oculares de entre 5 y 20 aumentos. En
consecuencia, el aumento total está comprendido entre 10 y 80 aumentos.
Es verdad que existen microscopios estereoscópicos que pueden
proporcionar un aumento de hasta 300x. Sin embargo, esto es poco habitual
ya que tampoco existen muchas aplicaciones para las cuales sea necesario
este poder de aumento en un microscopio estereoscópico.

Tabla de aumentos
habituales de un microscopio estereoscópico

Tipos de microscopio estereoscópico

Según la tecnología utilizada en este tipo de microscopio puede distinguirse
entre dos tipos de familias: el microscopio Greenough y el microscopio de
objetivo principal común.
En el microscopio estereoscópico Greenough los dos objetivos tienen una
cierta inclinación entre ellos, normalmente de entre 10 y 12 grados. Esto es
suficiente para crear dos imágenes ligeramente distintas que proporcionan
el efecto tridimensional. Este diseño fue desarrollado por el americano
Horatio S. Greenough y fue el primer tipo de microscopio estereoscópico
que funcionó correctamente. Actualmente es el más usado para tareas
cotidianas, su diseño robusto requiere de poco mantenimiento y suelen ser
más económicos que los microscopios estereoscópicos de objetivo principal
común.
En el microscopio estereoscópico de objetivo principal común la imagen es
observada con un objetivo de gran tamaño. El haz de luz proveniente de la
parte izquierda del objetivo es dirigido hacia un ocular mientras que el haz
correspondiente a la parte derecha es dirigido hacia el otro ocular. De este
modo, las dos imágenes observadas en cada ocular no son las mismas y es
posible generar el efecto tridimensional. Este tipo de microscopio
estereoscópico suele ser utilizado para aplicaciones complejas que
requieren sistemas adicionales de iluminación o accesorios ópticos
avanzados.

Esquema
de los dos tipos de microscopio estereoscópico
Historia del microscopio estereoscópico
El primer instrumento parecido a un microscopio estereoscópico del que se
tiene conocimiento fue construido por el fraile capuchino Chérubin d’Orléans
en 1671. Este microscopio observaba la muestra con dos objetivos distintos
pero la imagen obtenida mostraba los relieves de la muestra de forma
invertida (esto se conoce como imagen pseudoscópica).
No fue hasta dos siglos más tarde que Charles Wheatstone escribió un
tratado describiendo las bases teóricas para construir un microscopio
estereoscópico. Poco después, a mitades del siglo XIX Francis Herbert
Wenham consiguió construir el primer microscopio estereoscópico utilizando
un prisma para dividir el haz de luz proveniente de un solo objetivo. A pesar
del sistema de prismas en este microscopio, la imagen obtenida carecía de
la calidad suficiente para competir con los microscopios monoculares del
momento.
Estos primeros microscopios estereoscópicos eran conocidos como
microscopios de disección. Su desarrollo tardío es consecuencia de que en
sus inicios no había una necesidad clara para este tipo de instrumentos.
Muchas de las aplicaciones en las que se utiliza actualmente el microscopio
estereoscópico han sido campos desarrollados durante el siglo XX (cirugía,
producción de circuitos y procesos industriales de alta precisión).
El primer microscopio estereoescópico plenamente funcional fue diseñado
por Horatio S. Greenough a finales del siglo XIX. Greenough presentó su
diseño a la empresa alemana fabricante de microscopios Carl Zeiss. Esta
empresa introdujo algunas mejoras en el diseño presentado por Greenough
y decidió comercializar el nuevo microscopio. Más tarde, nuevos tipos de
microscopios estereoscópicos fueron desarrollados pero el diseño inicial de
Greenough sigue siendo utilizados actualmente por todos los fabricantes de
microscopios estereoscópicos.
 Microscopio
estereoscópico Olympus SZIII
En 1957, la American Optical Company introdujo el microscopio
estereoscópico de objetivo principal común (conocido por sus siglas en
inglés CMO: Common Main Objective). Este microscopio está basado en un
diseño modular que le permite añadir accesorios ópticos resultando así en
una mayor versatilidad que el diseño Greenough. Este nuevo concepto fue
también adoptado por todos los fabricantes de microscopios
estereoscópicos.
Actualmente la mayoría de fabricantes construyen microscopios
estereoscópicos con los dos principios. La decisión entre uno u otro
depende sobretodo de la aplicación para la que vayan a ser utilizados y del
presupuesto ya que los microscopios de objetivo principal común suelen ser
más caros debido a su mayor complejidad.
Diferencia entre el microscopio
estereoscópico y el microscopio binocular
Ocurre a menudo que se utilizan indistintamente los términos
estereoscópico y binocular. Esto es en general un error ya que
estereoscópico y binocular no son necesariamente sinónimos. Para evitar
confusiones, es importante conocer las similitudes y diferencias entre un
microscopio estereoscópico y un microscopio binocular.
La principal diferencia es que en un microscopio estereoscópico la muestra
es observada en tres dimensiones mientras que en el microscopio binocular
la imagen observada es bidimensional. Esto es así porque en el microscopio
estereoscópico las imágenes que llegan a cada uno de los dos oculares son
ligeramente distintas mientras que en el microscopio binocular la imagen es
exactamente la misma en los dos oculares.
La confusión existe porque los microscopios estereoscópicos tienen siempre
dos oculares y, por lo tanto, no es incorrecto decir que un microscopio
estereoscópico es binocular. Sin embargo, la afirmación inversa es falsa ya
que un microscopio binocular no es necesariamente estereoscópico.

PHmetro

Un pHmetro o medidor de pH es un instrumento científico que mide la actividad del

ion hidrógeno en soluciones acuosas, indicando su grado de acidez o alcalinidad
expresada como pH. El medidor de pH mide la diferencia de potencial eléctrico
entre un electrodo de pH y un electrodo de referencia. Esta diferencia de potencial
eléctrico se relaciona con la acidez o el pH de la solución. El medidor de pH se
utiliza en muchas aplicaciones que van desde la experimentación de laboratorio
hasta control de calidad.

Espectrofotómetro

El espectrofotómetro es un instrumento con el que se apoya la espectrofotometríapara

medir la cantidad de intensidad de luz absorbida después de pasar a través de una solución
muestra.
 ESPECTROFOTÓMETRO
Con el espectrofotometro, la cantidad de una sustancia química conocida
(concentraciones) también puede determinarse midiendo la intensidad de la luz detectada.
Dependiendo del rango de longitud de onda de la fuente de luz, se puede clasificar en dos
tipos diferentes:
 Espectrofotómetro UV-Vis: utiliza luz en el rango ultravioleta (185 – 400 nm) y rango
visible (400 – 700 nm) de espectro de radiación electromagnética.
 Espectrofotómetro de infrarrojos: utiliza luz en el espectro de infrarrojos (700 –
15,000 nm) del espectro de radiación electromagnética.
La estructura básica de los espectrofotómetros consiste en una fuente de luz, un colimador,
un monocromador, un selector de longitud de onda, una cubeta para la solución muestra, un
detector fotoeléctrico y una pantalla digital o un medidor.

PARTES DEL ESPECTROFOTÓMETRO

El espectrofotómetro, en general, consta de dos dispositivos; un espectrómetro y un
fotómetro. Un espectrómetro es un dispositivo que produce, dispersa y mide la luz. Un
fotómetro tiene un detector fotoeléctrico que mide la intensidad de la luz.


o Espectrómetro: Produce un rango deseado de longitud de onda de luz. Primero un

colimador (lente) transmite un haz recto de luz (fotones) que pasa a través de un
monocromador (prisma) para dividirlo en varias componentes de longitudes de
onda (espectro). Entonces un selector de longitud de onda (ranura) transmite sólo
las longitudes de onda deseadas.
 Fotómetro: Después de que el rango deseado de longitud de onda de luz pasa a través
de la solución muestra en la cubeta, el fotómetro detecta la cantidad de fotones que se
absorbe y luego envía una señal a un galvanómetro o una pantalla digital.

Colorímetro

El colorímetro es un aparato que permite realizar esa labor, pues este tiene como objetivo
ayudarnos a identificar los colores y sus matices, con los cuales podemos conseguir las
medidas exactas o el valor numérico de los colores, además el colorímetro nos permite
recoger mediciones de colores para hacer comparaciones con otras medidas recogidas. Pos
su parte, la colorimetría es la ciencia que estudia los colores para tener una escala de
valores numéricos.

COLORÍMETRO
Las sustancias químicas absorben diferentes frecuencias de luz, por lo que
el colorímetro basa sus funciones en la ley de absorción comúnmente conocida como
¨Lambert-Beer¨ esta teoría indica que la absorbancia de una sustancia es ajustable a su
concentración y por eso las sustancias más concentradas reflejan una lectura de absorbancia
elevada.

¿Cómo funciona el colorímetro?

El colorímetro usa filtros (tres filtros de color rojo, verde y azul) para elegir el color de luz
que mas absorberá el soluto, para asegurar la exactitud de la lectura, el color de luz
absorbida es lo opuesto al color de la muestra. Los sensores miden la cantidad de luz que
traspasó la solución y compara la cantidad que entró y el resultado de la cantidad absorbida.
Luego se pasa a realizar una serie de soluciones de concentración conocidas de las
sustancias químicas en análisis y se mide la absorbancia para cada concentración.
La medición del color en forma de tres variable, L, a y b.

El microscopio electrónico

Microscopio electrónico en la
universidad de Regensburg (Fuente: High Contrast, Licencia: CC-BY-3.0-DE)
El microscopio electrónico es un instrumento de gran utilidad en la investigación
científica gracias a su gran poder de aumento. Mediante este tipo de microscopio es
posible aumentar imágenes de muestras hasta niveles muy superiores a los
del microscopio óptico.
Para entender cómo funciona un microscopio electrónico es necesario definir
algunos conceptos físicos. Uno de estos conceptos es la longitud de onda.
Dada una onda periódica, la longitud de onda es la distancia entre dos ciclos
consecutivos. En el caso de la luz visible, cada onda de un determinado color tiene
una longitud de onda específica. Este concepto es importante en el campo de la
microscopía óptica porque está relacionado con el máximo aumento que puede
alcanzarse. El máximo aumento de un microscopio es proporcional a la longitud de
onda del medio con el que se observa. A menores longitudes de onda,
mayor resolución puede obtenerse. Por este motivo, el máximo aumento que se
puede obtener con un microscopio óptico difícilmente supera los 1500 aumentos.

El principio de funcionamiento de un microscopio electrónico se basa en

utilizar electrones en lugar de luz visible. La longitud de onda con la que se mueve
un electrón es inversamente proporcional a su velocidad. Esto significa que si los
electrones son acelerados a altas velocidades pueden obtenerse longitudes de onda
muy cortas.
Un microscopio electrónico utiliza esta idea para observar las muestras. A un nivel
muy básico consiste en una fuente de electrones que son acelerados a gran
velocidad. Estos electrones impactan con la muestra de modo equivalente a como
la luz podría iluminarla. Algunos de estos electrones son reflejados por la muestra y
otros la atraviesan. Mediante la detección estos electrones es posible reconstruir una
imagen de la muestra.
Los microscopios ópticos pueden clasificarse entre microscopios de luz transmitida
y microscopios de luz reflejada. De un modo similar, dependiendo de la técnica
utilizada en los microscopios electrónicos, puede distinguirse entre microscopios
electrónicos de transmisión y microscopios electrónicos de barrido.
A continuación presentamos los elementos principales de este tipo de microscopio.
También presentamos brevemente la historia de este invento y una explicación en
detalle de los distintos tipos de microscopio electrónico.

Partes del microscopio electrónico

Las partes principales de un microscopio electrónico incluyen aquellos elementos
utilizados para generar electrones y dirigirlos hacia la muestra. Esto incluye:
Fuente de electrones

Es equivalente a la fuente de luz en un microscopio óptico. En este caso es necesario

disponer de un emisor de electrones. En general se utiliza un filamento de tungsteno.
Este filamento es calentado de modo que la energía de sus átomos y electrones
aumenta. A partir de un cierto nivel energético los electrones poseen suficiente
energía para escapar de sus átomos. Estos electrones libres son a continuación
dirigidos hacia la muestra.
Lentes electromagnéticas
Los microscopios ópticos utilizan lentes convergentes y divergentes para desviar los
rayos de luz y aumentar así la imagen de la muestra. Este mismo procedimiento no
puede ser aplicado para desviar la trayectoria de los electrones. En lugar de utilizar
lentes de vidrio, los microscopios electrónicos utilizan lentes electromagnéticas.
Estas lentes generan campos eléctricos y magnéticos de modo que su interacción con
los electrones hace que sus trayectorias diverjan o converjan en un punto.
Cámara de vacío

El procedimiento expuesto anteriormente debe llevarse a cabo dentro de una cámara

de vacío. De lo contrario, los electrones interactuarían con las moléculas del aire y
no sería posible determinar sus trayectorias adecuadamente. La muestra que se
observa debe colocarse también dentro de la cámara de vacío. Este es uno de los
motivos por el cual no es posible observar muestras vivas con un microscopio
electrónico.
Detector (Pantalla fluorescente)

Una vez los electrones han impactado contra la muestra es necesario medir algún
tipo de información para poder reconstruir la imagen de la muestra. Una opción
consiste en utilizar una pantalla fluorescente. Esta pantalla reacciona de modo
distinto según cual sea el número de electrones que impactan en ella. De este modo
es posible detectar las zonas donde impactan más o menos electrones y deducir así la
imagen de la muestra. Existen alternativas a las pantallas fluorescentes, por ejemplo,
sensores CCD.
A continuación, la información capturada por la pantalla fluorescente es transmitida
a un ordenador que puede asignar colores artificiales a la imagen obtenida. En los
microscopios ópticos estos componentes no son necesarios porque la luz proveniente
de la muestra es directamente observada con el ojo humano. Dado que nuestros ojos
no están preparados para detectar electrones debemos incorporar este elemento
detector en un microscopio electrónico.
Partes del microscopio electrónico
Tipos de microscopios electrónicos
Existen dos tipos principales de microscopios electrónicos. Los microscopios
electrónicos de transmisión y los microscopios electrónicos de barrido. A
continuación presentamos sus detalles:
Microscopio electrónico de transmisión (MET)
La principal característica del microscopio electrónico de transmisión es que se
utilizan los electrones que atraviesan la muestra.
En primer lugar los electrones son conducidos hacia la muestra mediante las lentes
electromagnéticas. Cuando los electrones impactan contra la muestra, algunos de
ellos consiguen atravesarla y otros son dispersados. Los electrones que pueden pasar
al otro lado de la muestra son capturados por un detector dando lugar así a una
imagen.
La cantidad de electrones que atraviesa la muestra sin desviarse varía en función de
las características internas de la muestra. Dicho de otro modo, hay partes de la
muestra que presentan más transparencia a los electrones que otras. Esto da lugar a
zonas más oscuras (menos electrones atraviesan la muestra y llegan al detector) y
zonas más claras (más electrones atraviesan la muestra y llegan al detector).
Para utilizar esta técnica es necesario preparar la muestra para que sea muy delgada
(espesor inferior a 2000 ángstroms). De lo contrario, demasiado espesor impide que
los electrones puedan atravesarla.

Leucocito (Glóbulo
blanco) observado con un microscopio electrónico de transmisión
Esta técnica de microscopía es muy útil para visualizar los detalles internos de una
muestra, por ejemplo, estructuras cristalinas. A nivel conceptual esta técnica es
similar a realizar una radiografía de la muestra.
La principal limitación que tiene esta técnica es que no permite extraer información
de la superficie de la muestra. Es decir, no permite observar detalles como la forma
o rugosidad de la muestra que se observa. Para observar este tipo de características
es necesario utilizar la microscopía electrónica de barrido.
Video explicativo del microscopio electrónico de transmisión:

(Subtítulos disponibles en español) / Autor: Jubobroff / Licencia: CC-BY-SA 4.0

Microscopio electrónico de barrido (MEB)

En el microscopio electrónico de barrido también es necesario que los electrones

impacten contra la muestra. En este caso, los electrones no iluminan toda la muestra
simultáneamente sino que se hace un escaneado recorriendo los distintos puntos de
la muestra.
Cuando los electrones impactan con la muestra estos pierden parte de su energía
debido a distintas interacciones. Parte de su energía inicial se transforma en calor o
en emisiones de rayos X. Además, se produce también la emisión de electrones que
se desprenden de la superficie de la muestra. Estos electrones se conocen como
electrones secundarios.
El principio de funcionamiento de los microscopios electrónicos de barrido se basa
en medir alguna de estas propiedades para extraer información de la muestra
observada. Generalmente, esto consiste en medir la cantidad de electrones
secundarios que emite la superficie cuando es bombardeada con electrones.

Grano de polen observado

con un microscopio electrónico de barrido
Esta técnica de microscopía es muy útil para observar los detalles de la superficie de
microorganismos. Es habitual realizar una preparación de la muestra depositando
primero una capa de metal sobre la muestra. De esta forma, existen más electrones
secundarios que pueden desprenderse cuando se aplica el haz principal de
electrones. Este proceso de preparación es en general más sencillo que el que se
debe realizar para la microscopía electrónica de transmisión.
El aumento que alcanzan este tipo de microscopios es menor que el que se puede
obtener con un microscopio electrónico de transmisión. Sin embargo, la información
tridimensional que proporciona esta técnica lo convierte en un instrumento muy útil
para determinados tipos de muestras.
Video explicativo del microscopio electrónico de barrido:

(Subtítulos disponibles en español) / Autor: Jubobroff / Licencia: CC-BY-SA 4.0

Historia del microscopio electrónico
El microscopio electrónico es un invento del siglo XX que fue posible gracias a los
avances en el campo de la física de las partículas. Uno de los avances importantes
fue el descubrimiento de la naturaleza ondulatoria del electrón por parte de Louis-
Victor de Broglie. Esto le valió el premio Nobel en 1929.
Los ingenieros alemanes Ernst Ruska y Max Knoll se dieron cuenta de que estos
conocimientos justificaban la viabilidad del microscopio electrónico. En seguida se
pusieron a construir el primer prototipo con la intención de alcanzar aumentos a un
nivel sin precedentes. En 1931 presentaron su primer prototipo funcional. Esto
demostró que era posible construir un microscopio electrónico. No obstante, el
aumento obtenido con este primer prototipo estaba lejos del que se podía obtener
con un microscopio convencional. Mientras que un microscopio óptico puede
alcanzar aumentos cerca de 1500x, este primer prototipo solo alcanzaba los 400x.
Los resultados fueron, sin embargo, muy prometedores y solo dos años más tarde
fueron capaces de construir un microscopio electrónico con mayor aumento que el
de un microscopio óptico. En 1938 Siemens empezó a comercializar el primer
microscopio electrónico.
Los microscopios electrónicos construidos por Ernst Ruska eran microscopios
electrónicos de transmisión. Esto significa que los electrones atraviesan la muestra
y a continuación impactan contra un detector que reconstruye la imagen. Este
principio es el mismo que se utiliza en los microscopios electrónicos de transmisión
actuales, llegando a alcanzar aumentos de 2000000x.
A finales de los años treinta, Manfred von Ardenne empezó a desarrollar un nuevo
tipo de microscopio electrónico: el microscopio electrónico de barrido. En este
microscopio los electrones no atraviesan la muestra sino que son parcialmente
reflejados. Con los procedimientos adecuados resulta posible también reconstruir la
imagen de la muestra.
El microscopio electrónico resultó ser de gran utilidad una vez alcanzó la madurez
tecnológica. Ernst Ruska recibió en 1989 el premio Nobel de física por sus
aportaciones en este campo.
En el año 2010 el centro de investigación Jülich de Alemania empezó a construir el
microscopio electrónico más potente del mundo. Su construcción costó 15 millones
de euros y duró dos años. Este microscopio, conocido con el nombre PICO, puede
alcanzar una resolución de 50 picómetros.

Resumen
 El microscopio electrónico es un tipo de microscopio con una capacidad de
aumento muy superior a la del microscopio óptico.
 Su principio de funcionamiento se basa en utilizar electrones en lugar de luz
para obtener una imagen de la muestra.
 Las partes principales del microscopio electrónico son: una fuente de
electrones, un conjunto de lentes electromagnéticas, una cámara de vacío y
una pantalla fluorescente. Adicionalmente es necesario un ordenador para
operar el microscopio y procesar las imágenes obtenidas.
 Los dos principales tipos de microscopio electrónico son el microscopio
electrónico de transmisión y el microscopio electrónico de barrido.
 El microscopio electrónico de transmisión es utilizado para observar las
estructuras internas de una muestra. En cierto modo, es similar a hacer una
radiografía de la muestra con un gran aumento.
 El microscopio electrónico de barrido se utiliza para visualizar la forma
tridimensional o topografía de una muestra.