EVALUACION DE SUELOS CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS

DEVIT ROJAS 1610865

AURA MOLANO 0580338
ELEINE CARRILLO 1618630
YESENIA MORA 1610978
JORGE FLORIAN 1610075

DOCENTE
ROMINA FUENTES

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE
INGENIERIA BIOTECNOLOGICA
2017
 PROYECTO FINAL DE TRATAMIENTO Y BIORREMEDIACIÓN
ELECTIVA III

EVALUACION DE SUELOS CONTAMINADOS CON HIDROCARBUROS

DEVIT ROJAS 1610865

AURA MOLANO 0580338
ELEINE CARRILLO 1618630
YESSENIA MORA 1610978
JORGE FLORIAN 1610075

DOCENTE
ROMINA FUENTES

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE
INGENIERIA BIOTECNOLOGICA
2017
 RESUMEN

Los problemas de contaminación en suelos se deben principalmente a acciones antropogénicas;

entre las que cabe destacar la extracción de recursos naturales, en este caso en particular de
hidrocarburos. El impacto ambiental que se genera en Colombia debido a esta situación incluye
la contaminación de fuentes hídricas, fauna y flora deteriorada o cambios drásticos en el
ecosistema. En el trabajo de investigación realizado durante el semestre, tratamos un suelo
franco arenoso contaminado por hidrocarburo, como sabemos los derrames de hidrocarburos
de petróleo son una de las principales fuentes de contaminación de suelos, ya que ocasionan
perturbaciones en los ecosistemas al afectar su estructura. Para esta investigación se utilizaron
cinco (5) composteros, compuestos por canastas de aluminio, estos estaban conformados por
los suelos contaminados, a estos se les regaba día de por medio con agua destilada, de una
muestra inicial se realizan pruebas de toxicidad, hidrofobicidad, análisis microbiológico y
TPH.
El objetivo del presente informe es elaborar una síntesis con información sobre la
contaminación de suelos por hidrocarburos y evaluar la fitorremediación como estrategia
biotecnológica para una posible recuperación de este suelo.

SUMMARY

Pollution problems in soils are mainly due to anthropogenic actions; among which we can
highlight the extraction of natural resources, in this particular case of hydrocarbons. The
environmental impact that is generated in Colombia due to this situation includes the
contamination of water sources, deteriorated fauna and flora or drastic changes in the
ecosystem. In the research work carried out during the semester, we treated a sandy loam soil
polluted by hydrocarbons, as we know the spills of petroleum hydrocarbons are one of the
main sources of soil contamination, since they cause disturbances in the ecosystems by
affecting their structure. For this research, five (5) composters were used, consisting of
aluminum baskets, these were made up of contaminated soils, they were irrigated every other
day with distilled water, from an initial sample toxicity, hydrophobicity, microbiological analysis
and TPH. The objective of this report is to prepare a synthesis with information on the
contamination of soils by hydrocarbons and to evaluate phytoremediation as a
biotechnological strategy for a possible recovery of this soil.
 INTRODUCCIÓN

La biodegradación es el proceso natural por el cual los microorganismos degradan o alteran

moléculas orgánicas transformándolas en moléculas más pequeñas y no tóxicas. Sin embargo,
este proceso es muy lento y puede acelerarse introduciendo determinadas bacterias o plantas en
los ambientes contaminados. Esta intervención se denomina “biorremediación” o
“biocorrección” y se define como el empleo de organismos vivos para eliminar o neutralizar
contaminantes del suelo o del agua. En los procesos de biorremediación generalmente se
emplean mezclas de microorganismos, aunque algunos se basan en la introducción de cepas
definidas de bacterias u hongos. Actualmente se están desarrollando microorganismos, algas
(especialmente cianobacterias o algas azules) y plantas genéticamente modificadas para ser
empleadas en biorremediación.
OBJETIVO GENERAL

 Determinar el efecto de la bioestimulación en un suelo franco arenoso contaminado con

hidrocarburos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Estandarizar los diferentes protocolos para reducir la contaminación de un suelo con

hidrocarburos.

 Evaluar la presencia de los hidrocarburos totales de petróleo (TPH) y sus efectos sobre
propiedades del suelo franco arenoso.

 Determinar el grado de toxicidad de a muestra de suelo.

 MARCO TEORICO

El suelo, como resultado de la interacción de la atmósfera, litosfera, hidrosfera y biosfera,

tiende en cada circunstancia a alcanzar un equilibrio natural, que sólo se ve modificado cuando
uno de estos sistemas varía. Pero es la intervención del hombre, un componente singular de la
biosfera, lo que de forma más violenta puede modificar un suelo y degradarlo. Por tanto, la
degradación de un suelo, o modificación que produce un deterioro, es consecuencia directa de
la utilización en cualquiera de sus vertientes (agrícola, forestal, ganadera, industrial, transporte,
etc.) Un tipo especial de degradación es la producida por la presencia de sustancias químicas
nocivas y en este caso se la denomina contaminación. Un contaminante es un elemento o
compuesto químico situado fuera de lugar, o presente en concentraciones mayores de las
normales que en general tiene un efecto adverso sobre algún organismo. Se deben distinguir los
1. Introducción y Objetivos 3 contaminantes de origen natural (los gases nocivos emitidos por
un volcán a la atmósfera) de los antropogénicos (. metales pesados en un suelo procedentes de
la actividad minera). Los conceptos de contaminación y de contaminante deben ser acordados
por quienes los utilizan y pueden variar de una a otra persona según sus intereses. Así, el uso
de insecticidas puede ser aceptable para unos si sólo ejercieran el efecto para el que se
suministran al suelo y no se movilizaran por debajo de las raíces de los cultivos, o se
dispersaran por la superficie, porque entonces podrían considerarse contaminantes, al
encontrarse en otros lugares no apropiados y en concentraciones suficientemente altas como
para causar daños a organismos; sin embargo, para otros ningún insecticida debe usarse porque
todos son contaminantes.

El suelo está compuesto por minerales, materia orgánica, diminutos organismos vegetales y
animales, aire y agua. Es una capa delgada que se ha formado muy lentamente, a través de los
siglos, con la desintegración de las rocas superficiales por la acción del agua, los cambios de
temperatura y el viento. Las plantas y animales que crecen y mueren dentro y sobre el suelo
son descompuestos por los microorganismos, transformados en materia orgánica y mezclados
con el suelo. Los hidrocarburos son compuestos de gran abundancia en la naturaleza integrados
por átomos de carbono e hidrógeno. Éstos se clasifican según la estructura de los enlaces
existentes entre los átomos de carbono que componen la molécula. Los hidrocarburos estipulan
una actividad económica de primera importancia a nivel mundial ya que son los principales
combustibles fósiles, además sirven de materia prima para todo tipo de plásticos, ceras y
lubricantes. Pero son estas formas de elevado valor económico (petróleo y derivados) las
responsables de graves problemas de contaminación en el medio natural.
METODOLOGÍA

Para la realización del proyecto de grupo, se menciona a continuación las condiciones de

trabajo: En la figura 1 y en la tabla 1 se presenta un diagrama general y las condiciones de
proceso para llevar a cabo la Biorremediación de suelo contaminado con hidrocarburos
empleando la técnica de bioestimulación.

Suelo

Secado y tamizado

Determinación
-Textura
-Capacidad de campo

Preparación de microcosmos

C C T T T T
1 2 1 2 3 4

Evaluación proceso de Biorremediación

Hidrofobicidad Heterótrofos totales

%TPH Toxicidad
Figura 1. Diagrama general para la evaluación de un proceso Biorremediación de suelo
contaminado con hidrocarburos.
 GRUPO DE TRABAJO
 Suelo franco-arenoso + crudo al 7% TPH, sin
materia organica

 Composteros (5)

 Suelo franco-arenoso + crudo al 7% TPH * 3

replicas

 Control (2) * 2 replicas

Tabla 1. Información del suelo y composteros

del grupo de trabajo.

CONDICIONES DE PROCESO
 C/N = 60
 C/P = 800
 sin materia orgánica
 Aireación= 1.5 días.
 Humedad 60 % Capacidad de campo
 90 días de proceso
 Peso total/microcosmo= 500 gramos

Tabla 2. Condiciones de proceso para la Biorremediación de un suelo

contaminado con hidrocarburos.

PREPARACIÓN DE LOS MICROCOSMOS

Los suelos deben ser pasados a través de un tamiz de poro de 2mm de diámetro,
seguidamente contaminados con crudo a una concentración final de 7% (p/p) y mezclados
con materia orgánica con el fin de evaluar su efecto en el proceso de biorremediación. De
esta forma se constituyen 4 tratamientos correspondientes a T 1, T2, T3 y T4 con 2 controles
correspondientes a C1 y C2, tal como se observa en la tabla 2.
 TRATAMIENTO COMPOSICIÓN
C1 Suelo arcilloso
T1 Suelo arcilloso + 7% crudo
T2 Suelo arcilloso + 7% crudo + 10% materia
orgánica
C2 Suelo franco-arenoso
T3 Suelo franco-arenoso + 7% crudo sin M.O

T4 Suelo franco-arenoso + 7% crudo + 10%

materia orgánica

Tabla 3. Composición de Tratamientos y controles.

La estabilización del crudo se hizo durante 2 días a temperatura ambiente con el fin de
eliminar los componentes volátiles del mismo y así evitar incluir en el análisis las pérdidas
inherentes a volatilización.

BASE DE CÁLCULO  500g/ Compostero

 Urea = 46%N2 Pureza

 Sulfato de amonio = 46% Pureza asimilable

Evaluación del proceso

Las variables seleccionadas para la evaluación del proceso de Biorremediación y los tiempos
de toma de muestra se presentan en la tabla 4. Las muestras deben ser tomadas totalmente al
azar con 3 repeticiones por cada extracción.
 VARIABLE Tiempo de
evaluación
*TPH t0, t1,5, t3
Hidrofobicidad t0, t1,5, t3
Análisis t0, t1,5, t3
microbiológico
Toxicidad t0, t3

Tabla 4. Variables en evaluación.

EVALUACIÓN DE TOXICIDAD EMPLEANDO SEMILLAS DE Latica sativa (Tarache

et al., 2010).

Se colocan en
Se utilizan 5g de muestra una caja de
COMPOSTERO Pesar 100g para Petri.
realizar el análisis de incluyendo el control
la prueba. negativo. (Replicas*3).

Evaluar la germinación y Se incuban en

el efecto del crudo sobre Se colocan 20 Se añaden 10ml
cámara oscura por
las plántulas. semillas de de H2O destilada.
5 días.
lechuga.

Tomar las medidas del

crecimiento con ayuda de
una hoja milimetrada.
Apuntar resultados.
Finalizado el periodo de incubación, cuantificar el número de semillas germinadas y medir
longitud de los hipocótilos de las mismas. Para ello, tomar cada una de las plántulas de la
cápsula y estirar el hipocótilo sobre un papel milimetrado.

Parámetro Condición

Tipo de ensayo Estático

Temperatura 22± 2 °C
Calidad de luz Oscuridad
Cantidad de muestra 5 gramos
Agua de dilución Agua mineral
Semillas por réplica 20
Número de réplicas 3
Tiempo de incubación 120 h
Aceptabilidad de Germinación control
los resultados negativo (>90%)

Tabla 5. Condiciones de proceso para la evaluación de toxicidad de hidrocarburos en suelos

Empleando Lactuca sativa.

Evaluación de índice de germinación (Celis et al., 2006)

El índice de germinación (IG) posee la ventaja de permitir la evaluación de la toxicidad baja

(que afecta el crecimiento del hipocótilo) y la toxicidad pesada que afecta la germinación), a
través de la expresión:

Donde IG es el índice de germinación (%), G es el promedio de las semillas germinadas en la

muestra, Gc es el promedio de las semillas germinadas en el control negativo, L es el promedio
de longitud del hipocótilo en la muestra (mm), y Lc es el promedio de longitud del hipocótilo
en el control negativo (mm). Se considera como criterio de germinación la aparición visible de
la radícula.
 Figura 3. Esquema de plántulas de Lactuca sativa al finalizar el período de exposición

HIDROFOBICIDAD

Se toman 10g de suelo por cada muestra. (3 réplicas)

Se colocan en una caja de Petri

Se añade una gota y se contabiliza el tiempo que demora

en absorberse

El procedimiento se realiza 5 veces en cada caja. (5 gotas)

 T(s) Nivel de persistencia de repelencia al agua
<5 No repelente al agua
5-10 Ligeramente repelente
60-600 Fuertemente repelente
600-3600 Severamente repelente
>3600 Extremadamente repelente
Tabla 6: Grado de Repelencia de los Suelos Según los Tiempos Requeridos para la
Determinación WDPT

PRUEBA DE TPH (EVALUACIÓN DE LOS HIDROCARBUROS TOTALES DE PÉTROLEO

Crudo=0,844
Muestra teorica
Suelo=10,479

Método de Solvente
extracción: Ciclohexano
Soxhlet acetona
PRUEBA DE TEXTURA

La textura del suelo constituye una propiedad física muy importante para la ecología de los
microorganismos, ya que determina el área de superficie disponible como hábitat para el
crecimiento de los microorganismos. La textura del suelo es establecida por la distribución
de tamaño de las partículas individuales de suelos, teniendo en cuenta la influencia del
tamaño de estas partículas sobre las propiedades físicas, biológicas y químicas del suelo,
que se han clasificado por medio del análisis granulométrico.

Figura 4. Triangulo de texturas

 Secar la muestra a analizar ( 105ºc/ noche ) pesar 50gr de muestra
adicionar 30 ml de oxalato de sodio , mezclar por 15 minutos.
1. Se transfirió a probeta de 1 ml , y se aforó a 1ml con agua destilada

Mezclar tres veces por inmersión , esperar 40s y tomar 25ml d muestra a
10cm de profundidad , se dejó 2h en reposo, se tomó 25ml de muestra de la
fase superior.
2. Se secó la muestra a 105ºc

Se calculó el peso seco de la muestra ,se calculó el porcentaje de limo y

arena.
3. Se determinó el tipo de suelo de acuerdo al triangulo de textura.

PRUEBA DE HETEROTROFOS TOTALES

El método de recuento en placa es muy utilizado para la enumeración de microorganismos

viables, especialmente para bacterias y hongos. Las técnicas de recuento en placa se
emplean con mayor frecuencia el agar como agente solidificante ya que la mayoría de
bacterias carecen de las enzimas necesarias para despolimerizarlo.

45ml de s/s
5gr de suelo
(0,85%)

tomar muestra
160 rpm / 5"
sobrenadante

diluciones

ANALISIS Suelo
Suelo no MICROBIOLOGICO
contaminado contaminado
 Realizar diluciones 10-6, Servir 0,10ml en las cajas
Se toman 5g de suelo
10-7, 10-8 de petri con agar LB

Con el asa de hockey

Se realiza dilucion en Tomar muestra del expandir, sellar, envolver.
solucion salina 0,85g sobrenadante
Preservar por una semana

Se agita en shaker Dejar reposar por 5 Leer las cajas y reportar

15minutos a 160rpm minutos resultados

RESULTADOS
Determinación de % TPH (porcentaje de hidrocarburos del petróleo presentes en la

muestra)

 Prueba de TPH (En esta prueba se evaluaba el porcentaje de hidrocarburos del

petróleo presentes en la muestra de suelo a evaluar, se realizaron 3 evaluaciones.)

 C1: Suelo Franco Arcilloso NO contaminado

 C2: Suelo Franco Arenoso NO contaminado

 T1: S. F. Arcilloso + Crudo 7%.

 T2: S. F. Arcilloso + Crudo 7% + Materia orgánica.

 T3: S. F. Arenoso + Crudo 7%.

 T4: S. F. Arenoso + Crudo 7% + M.O.

 Tiempo Cero

Tabla 7: Prueba de Múltiples Rangos para la Determinación de %TPH. Tiempo Cero

Gráfica 1: Tratamiento vs % TPH. Tiempo Cero

 Tiempo 1.5

Tabla 8. Prueba de Múltiples Rangos para la Determinación de %TPH. Tiempo 1.5

Gráfica 1. Tratamiento vs % TPH. Tiempo 1.5

  Tiempo 3

Tabla 9. Prueba de Múltiples Rangos para la Determinación de %TPH. Tiempo 3

Gráfica 2 Tratamiento vs % TPH. Tiempo 3

MULTIFACTORIAL TEXTURA 0 - 1,5 - 3

Tiempo 0
 - Tiempo 1,5

Variable dependiente: Biorremediación 1,5.TPH

Factores:
Biorremediación 1,5.Textura
Biorremediación 1,5.MO
Biorremediación 1,5.Crudo
Tiempo 3
EVALUACIÓN DE HIDROFOBICIDAD

 Tiempo Cero

Tabla 10 Prueba de Múltiples Rangos para la Evaluación de Hidrofobicidad. Tiempo Cero

 Gráfica 3: Tratamiento vs Grado de Repelencia de los Suelos. Tiempo Cero

 Tiempo 1.5
- Tiempo 3
MULTIFACTORIAL TEXTURA 0 – 1,5 – 3

- Tiempo cero
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

2,03
Biorremediación.Hidrofobicidad

1,83

1,63

1,43

1,23

1,03

0,83
Arcilloso Franco arenoso
Biorremediación.Textura

- Tiempo 1,5
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

1,01
Biorremediación 1,5.Hidrofobicidad

0,91

0,81

0,71

0,61

0,51

0,41
Arcilloso Franco arenoso
Biorremediación 1,5.Textura

- Tiempo 3
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

1,01
Biorremediación 3.Hidrofobicidad

0,91

0,81

0,71

0,61

0,51

0,41
Arcilloso Franco arenoso
Biorremediación 3.Textura

MULTIFACTORIAL M.O. 0 – 1,5 – 3

- Tiempo cero
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

3
Biorremediación.Hidrofobicidad

2,5

1,5

0,5

0
Con Sin
Biorremediación.MO

- Tiempo 1,5
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

1,5
Biorremediación 1,5.Hidrofobicidad
1,2

0,9

0,6

0,3

0
Con Sin
Biorremediación 1,5.MO

- Tiempo 3
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

1,5
Biorremediación 3.Hidrofobicidad

1,2

0,9

0,6

0,3

0
Con Sin
Biorremediación.MO

MULTIFACTORIAL CON CRUDO 0 – 1,5 – 3

- Tiempo cero
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

2
Biorremediación.Hidrofobicidad

1,6

1,2

0,8

0,4

0
Con Sin
Biorremediación.Crudo

- Tiempo 1.5
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

1
Biorremediación 1,5.Hidrofobicidad
0,8

0,6

0,4

0,2

0
Con Sin
Biorremediación 1,5.Crudo

- Tiempo 3
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

Biorremediación 3.Hidrofobicidad
1

0,8

0,6

0,4

0,2

0
Con Sin
Biorremediación 3.Crudo

RESULTADOS ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO

 Tiempo Cero

Tabla 13. Prueba de Múltiples Rangos. Análisis Microbiológicos. Tiempo Cero.

- Tiempo 1,5
- Tiempo 3
 MULTIFACTORIAL TEXTURA 0 – 1,5 – 3

- Tiempo cero
- Tiempo 1,5

- Tiempo 3
 MULTIFACTORIAL CON M.O. 0 – 1,5 – 3

- Tiempo cero
- Tiempo 1,5
- Tiempo 3
 MULTIFACTORIAL CON CRUDO 0 – 1,5 – 3

- Tiempo cero

- Tiempo 1,5
- Tiempo 3
 RESULTADOS DE TOXICIDAD

- Tiempo 1,5
- Tiempo 3

MULTIFACTORIAL TEXTURA. 1,5 – 3

- Tiempo 1,5
- Tiempo 3
 MULTIFACTORIAL MO 1,5 – 3

- Tiempo 1,5
- Tiempo 3
 MULTIFACTORIAL CON CRUDO 1,5 – 3

- Tiempo 1,5
- Tiempo 3
 Medias y 95,0% de Fisher LSD

135

115
Biorremediación 3.Toxicidad

95

75

55

35
Con Sin
Biorremediación 3.Crudo
CONCLUSIONES
ANEXOS