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“Extracción de ADN”

Curso de Biología celular y molecular (BIO 110) , Escuela de Química,


Facultad de Ciencias Naturales y Exactas, Universidad Autónoma de Chiriquí. David,
Chiriquí, República de Panamá

Polo Beitia, Andrea Viktoria (8-943-2411)


Álvarez Zapata, Byron Elhyel (4-833-2160)
Emails: andyskywalker18@hotmail.com,
Beaz1310@hotmail.com.

I. Introducción

¿Exactamente qué es el ADN? Este polímero aparentemente simple, compuesto solo por
cuatro tipos de monómeros, sirve como el material genético de todos los organismos vivos.
Por ejemplo, tu ADN proporciona las instrucciones para crear y mantener tu cuerpo y puede
heredarse si tienes hijos. Se encuentra en el núcleo en las células eucariotas. Y también se
encuentra dispersa por el citoplasma en las células procariotas. Hay ADN en las mitocondrias
y los cloroplastos en los virus.
Muchas veces, el ADN es comparado con un plano o una receta, o un código, ya que contiene
las instrucciones necesarias para construir otros componentes de las células, como
las proteínas y las moléculas de ARN. Los segmentos de ADN que llevan esta información
genética son llamados genes, pero las otras secuencias de ADN tienen propósitos
estructurales o toman parte en la regulación del uso de esta información genética.
Para que la información que contiene el ADN pueda ser utilizada por la maquinaria celular,
debe copiarse en primer lugar en unos trenes de nucleótidos, más cortos y con unas unidades
diferentes, llamados ARN.
La extracción de ADN se realiza para obtener las moléculas aisladas con alto grado de pureza
y poderlas utilizar en investigación científica, en medicina o para la ciencia forense.
La mayor parte de los métodos que existen para extraer el ADN consisten en lograr primero
la lisis o ruptura de la célula, para luego separar las moléculas de ADN del resto de los
constituyentes de la célula.
A la hora de escoger que método de extracción de ADN utilizar se tienen en cuenta varios
factores:
• La cantidad de muestra de la que se dispone para extraer el ADN.
• El tipo de muestra o fuente de la que se quiere obtener el ADN.
• La pureza con la que se quiere obtener el ADN extraído.
• El tiempo que consume cada método, su costo y el rendimiento esperado.
• Uso que se le va a dar al ADN extraído.

Con la diversidad de métodos conocidos actualmente se puede extraer ADN de muchos


sustratos como son la sangre, la saliva, la orina y otros fluidos corporales, tejidos vivos,
cultivos celulares, líquido amniótico, entre otros. En este trabajo se analizan las diferencias,
ventajas y desventajas de algunos de los métodos existentes para la extracción del ADN.

Ø Lisis por ruptura mecánica y extracción con disolventes orgánicos

Si se opta por realizar el lisado de las células mediante un proceso mecánico hay que tener
en cuenta la posibilidad de ruptura de las moléculas de ADN que se intentan separar, por lo
que este debe bastar para lograr la lisis de las células pero no ser muy agresivo para proteger
el ADN. Este método puede ser usado para extraer ADN de material crudo, liofilizado o
congelado, que puede romperse con un mortero, por congelación-descongelación o usando
ultrasonidos.

Ø Separación magnética
Este método está basado en la unión reversible del ADN a una superficie/esferas/partículas
sólidas magnéticas, las cuales han sido recubiertas con un anticuerpo que une ADN o un
grupo funcional que interactúa específicamente con el ADN. Tras la unión del ADN, las
esferas son separadas de otros componentes celulares contaminantes, lavadas y finalmente el
ADN purificado es eluído utilizando extracción con etanol. Este método es rápido y puede
ser automatizado. Sin embargo, puede ser más costoso que otras metodologías.

II. Metodología

Para iniciar con esta experiencia iniciamos con la homogenización del tejido animal para dar
inicio con la extracción de ADN animal, pesamos 5 gramos de hígado y preparamos un
homogenizado, cortamos pequeños pedazos del hígado de pollo para que así obtuviésemos
porciones pequeñas y uniformes de tejido. Luego en un mortero trituramos el el hígado para
romper la membrana del hígado para que quedasen los núcleos sueltos. Agregamos poco a
poco 50mL de agua destilada, y con una varilla de vidrio revolvimos la mezcla hasta
homogenizarla. Después de esto filtramos en una gasa o papel filtro, el homogenizado, varias
veces para separar los restos de tejido que hallan quedado . Después recogimos el filtrado en
un matraz Erlenmeyer. Observamos los resultados y anotamos en la página de informe.
Obtenido este homogenizado procedimos a colocar 50mL del filtrado en un vaso químico y
agregamos 50mL de NaCl 2M. Con esto conseguimos producir el estallido de los núcleos
para que queden libres las fibras de cromatina. Añadimos 1mL de detergente líquido, a la
mezcla de filtrado+NaCl 2M. La acción de este detergente fue formar un complejo con las
proteínas y separarlas de ADN, así quedó el ADN libre de las proteínas que tienen asociadas.
Agregamos 50mL de alcohol etílico a 94º enfriado a 4ºC, haciéndolo resbalar por las paredes
del vaso. Luego dejamos reposar por 5 min hasta que se forme una zona turbia entre las dos
capas. Se observaron 3 fases: la del alcohol (arriba) , la del homogenizado (abajo) y la del
ADN precipitado. Luego introducimos un policial en la zona turbia del precipitado de ADN
y fuimos removiendo con movimientos circulares la varilla. Sobre la varilla observamos que
se iban adhiriendo algunas fibras blancas, las mismas son el fragmento del ADN de mayor
tamaño. Después de un minuto de revolver, alzamos la varilla para que atravesara la capa
superior que era la del alcohol, donde el mismo se desenrrolló y precipitó. Luego de esto
realizamos los mismos procedimientos descritos previamente para la cebolla y el tomate. Los
principales objetivos de este laboratorio son extraer ADN de diferentes tejidos, tanto
animales como vegetales y observar la estructura fibrilar del ADN.
III. Procedimientos:

Extracción de ADN animal:

Filtrado de hígado triturado


Hígado homogenizado
con H2O

ADN aislado
Extracción de ADN vegetal (tomate) :

Tomate homogenizado
Filtrado de tomate triturado con H2O

ADN aislado
Extracción de ADN vegetal (cebolla) :

Filtrado de cebolla triturado


Cebolla homogenizada
con H2O

ADN aislado
IV. Discusiones

Para iniciar este laboratorio procedimos a utilizar en los 3 casos de tejido (tomate, cebolla y
hígado) 5 gramos de cada uno y los colocamos en el mortero para triturarlos lo más posible,
esto se realiza para que las células presentes en el tejido se rompan y así resulta más fácil
obtener el núcleo en el cual se encuentra el ADN de los tejidos utilizados. En cuanto más
cebolla, hígado o tomate trituremos, mayor será la cantidad de núcleos se romperán y mucho
más eficiente será la experiencia por el simple hecho de el aumento de los ácidos nucleicos
en la mezcla. Utilizamos el papel filtro en todos los casos observados para que así quedase
los tejidos, los cuales son innecesarios para poder obtener el ADN que queríamos observar.
Luego de esto agregamos agua destilada para homogenizar el sistema para así obtener en el
agua destilada que agregamos el ADN requerido. Luego de esto procedimos a agregar 50ml
de solución de NaCl 2M. ¿Por qué se le agrega esta solución? Pues, según
(McDoogleburger, Amelia, 2018) agregamos solución salina para tornar el medio en una
condición de diferencia osmótica mayor, y así los núcleos que aún no se habían roto logren
romperse en totalidad por el fenómeno conocido como plasmólisis, en el cual el agua se
desplazará de menor a mayor concentración (de dentro hacia fuera) y con ella se muevan las
fibras de ADN las cuales son muy pequeñas y logran atravesar la membrana nuclear.
La solución tampón tiene afinidad con sustancias que son grasas y con sustancias y que son
hidrofóbicas y hidrofílicas, el jabón contenido en la solución tampón se unirá a todos los
lípidos que se encuentran en la solución preparada que anteriormente pertenecían a la
membrana nuclear y celular en la célula las cuales contienen fosfolípidos. Logrando así que
todos esos lípidos queden precipitados al unirse con el jabón y que únicamente queden libres
los ácidos nucleicos. Según (Guzmán-Maldonado, 1995) Para realizar una extracción pura
ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el cual limpia los trastes
removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en el protocolo de extracción
de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que
rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado
de la célula.
Cuando subimos el policial al revolver en la fase media hasta la fase del alcohol, esta nos
permite que se vallan diferenciando los ácidos nucleicos, porque los mismos se precipitan y
se los cuales observamos y eran traslucidos, los cuales eran posibles de observar por lo densas
que eran. Cabe destacar que según (González, M. 2010) El producto filamentoso obtenido
de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una
extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN
e impiden que se unan al ADN.

Cuestionario:

1. ¿Solo los seres vivos tienen ADN?

Todos los seres vivos tienen una cosa en común: utilizan ADN (y ARN) como moléculas
para transmitir información de una generación a la siguiente. Esto, además, hace posible otra
característica necesaria para poder hablar de Vida, es decir, la capacidad de evolucionar. El
ADN se encuentra en el núcleo de las células y es esta la unidad básica para la vida por lo
que el ADN solo se encuentra en las células.
2. ¿Dónde se encuentra localizado el ADN humano?

En los organismos llamados eucariotas, el ADN se encuentra dentro de un área


compartimentalizada dentro de la célula llamada núcleo. Debido a que la célula es muy
pequeña, y porque los organismos tienen muchas moléculas de ADN por célula, cada
molécula de ADN debe estar empaquetada de forma muy compacta y precisa. Esta forma
súper empaquetada del ADN se denomina cromosoma.

3. ¿Cual es la estructura y función del ADN?

El ácido desoxirribonucleico o ADN es la molécula que contiene las instrucciones necesarias


para que un organismo pueda desarrollarse, vivir y reproducirse. Estas instrucciones se
encuentran en el interior de cada célula y se transmiten de padres a hijos.
La estructura del ADN
El ADN se compone de moléculas llamadas nucleótidos. Cada nucleótido contiene un grupo
fosfato, un grupo azúcar y una base de nitrógeno. Los cuatro tipos de bases de nitrógeno son
la adenina (A), timina (T), guanina (G) y citosina (C). El orden de estas bases es lo que
determina las instrucciones del ADN o código genético. Similar a la forma en que el orden
de las letras en el alfabeto se puede utilizar para formar una palabra, el orden de bases
nitrogenadas en una secuencia de ADN forma los genes, que en el lenguaje de la célula indica
cómo hacer proteínas. Otro tipo de ácido nucleico, el ácido ribonucleico o ARN, traduce la
información genética del ADN en proteínas.
Todo el genoma humano contiene aproximadamente 3 mil millones de bases y unos 20.000
genes.
Los nucleótidos están unidos entre sí para formar dos cadenas largas en espiral para crear una
estructura llamada doble hélice. Si se piensa en esta doble hélice como una escalera, las
moléculas de fosfato y azúcar serían los lados, mientras que las bases serían los peldaños.
Las bases en una hebra se unen con las bases de la otra, la adenina hace pareja con la timina
y la guanina con la citosina.

4. ¿Porque es útil el estudio de el ADN de las células?

Estudiar el ADN o ácido desoxirribonucleico es muy importante ya que este contiene la


información genética de las células, por lo tanto este estudio nos ayudaría a descartar
cualquier posibilidad de existencia de alguna enfermedad o
malformación congénita hereditaria.

5. ¿Qué finalidad tiene el exponer a la célula a un detergente fuerte?

El jabón tiene la finalidad de precipitar todos los fosfolípidos y dejar solamente en la parte
superior la cromatina rica en ADN.

6. Factores que afectan el rendimiento, calidad y pureza del ADN:

Ø Cantidad de material de partida


Ø Número de copias de las moléculas de AN
Ø Cantidad de tejido.
Ø Condiciones en las que se encuentra el material de inicio(fresco, congelado, fijado)
Ø Contaminantes e interferentes en el material biológico

Conclusiones:

Ø El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las


instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo
vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia idéntica de
ADN. Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso
hay células con diferentes formas y funciones.

Ø En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy claramente.


Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor.

Bibliografías:

• González, M. (25 de Octubre de 2010). Obtenido de La Guía Quimica, Enzima


Catalasa: http://quimica.laguia2000.com/conceptos-basicos/enzima-catalasa
• McDoogleburger, Amelia. (2018, February 01 Geniolandia).
• Guzmán-Maldonado H, Paredes-López O (septiembre de 1995). «Amylolytic
enzymes and products derived from starch: a review».