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INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

UNIDAD PROFESIONAL INTERDISCIPLINARIA


DE BIOTECNOLOGÍA.

C .
Carmona Monterrubio Gabriela.
Nava García Ana Luisa.
Pérez Castillo Víctor Daniel.
Medio utilizado
principalmente para la
distinción de
enterobacterias gram
negativas.

F .
F .
Detecta y evalúa la capacidad del m.o. de utilizar el
malonato como única fuente de carbono y sulfato de
amonio como única fuente de nitrógeno, produciendo
hidróxido de sodio, lo que alcaliniza el medio
volviéndose azul debido al azul de bromotimol.

El azul de bromotimol tiene como cambios de


coloración:
● pH 6.0 Amarillo
● pH 6.9 Verde
● pH 7.6 Azul
F .
El malonato es un inhibidor enzimático. Interfiere con la
oxidación del ácido succínico a ácido fumárico
mediante la inhibición de la enzima succinico
deshidrogenasa.

La célula bacteriana debe contar con el ciclo del ácido


glioxílico (permite generar glucosa), regulando la
cantidad de Acetil-CoA introducida en el ciclo para su
continuación, la cual es controlada por la enzima
isositratasa.
F .
F .
Los microorganismos no pueden crecer a menos que
puedan fermentar o utilizar el malonato como única
fuente de carbono.

La bacteria también puede desaminar la fenilalanina


produciendo ácido pirúvico (fermentación de glucosa)
acidificando el medio.
● Extracto de levadura 1,0g/L
● Fosfato dipotásico 1,0 g/L
● Sulfato de amonio 2,0 g/L

C .
● Fosfato monopotásico 0,4 g/L
● Glucosa 0,25 g/L
● Cloruro de sodio 2,0 g/L
(Por litro de agua).
● Malonato sódico 3,0 g/L
● Azul de bromotimol 25 mg/L
● Agua Destilada q.s.p.
● pH final 6,7 ± 0,2
P .
1. Disolver en agua destilada,
dispensar 3 ml en tubos con tapa
a rosca.
2. Esterilizar en la autoclave a 121
ºC durante 15 minutos.
3. Enfriar antes de usar. (El sustrato
es estable por 2 a 3 meses).
4. Rotular los tubos y guardar en
heladera. Si hay cambio de color
en el medio no usar.
P .
A. Con asa estéril tomar material e
inocular el medio.

B. Incubar a 37 ºC por 24 a 48 h.

C. Re-incubar los tubos negativos


hasta 4 días, registrando los
resultados día por día.

NOTA. Se incuban dos tubos: uno Verde: sin reacción.


Azul: reacción alcalina.
aeróbico y otro anaeróbico, que se
Amarillo: reacción
cubre con aceite vegetal o vaselina. ácida.
R .
La mayoría de las especies
Enterobacter y Klebsiella utilizan
malonato de sodio, e incluso
algunas subespecies del género
Salmonella.

EJEMPLOS:

Escherichia coli (negativo)

Klebsiella pneumoniae (positivo).


C f :
★ Composición: complejo o indefinido.
★ Consistencia: líquido.
★ Uso: diferencial y selectivo.
B f .
● http://www.mbiolog.com.br/produtos/Caldo_Malonato.pdf
● https://www.bd.com/europe/regulatory/Assets/IFU/US/L007466(08)(0107)_E
S.pdf
● https://es.renylab.ind.br/wp-content/uploads/2018/05/Caldo-Malonato.pdf
● https://nanopdf.com/download/identificacion-bioquimica-de-los-bacilos-
gram_pdf
● https://es.slideshare.net/AdrianCLoa/carbohydrates-37260838