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Las señales se unen específicamente a receptores e inician una respuesta en la célula blanco.
Cada tipo celular expresa una combinación de receptores particular que lo caracteriza y que determina la
naturaleza y el rango de señales extracelulares que puede detectar o sensar.
Los receptores convierten las señales extracelulares en señales intracelulares (transducción de la señal).
Las señales intracelulares se propagan a través del citoplasma y eventualmente el núcleo.
Las señales exhiben rangos de duración y distribución espacial diferentes y característicos.
La propagación requiere de cambios de estado en las moléculas señal.
Los cambios de estado de las moléculas señal se acoplan en tiempo y espacio, organizando vías de
señalización que a su vez se interconectan formando redes.
Las moléculas señal predominante son proteínas que poseen una estructura y función modular.
Proteínas adaptadoras y “scaffolds” utilizan múltiples dominios de interacción para ensamblar
complejos de señalización y anclarse a un compartimiento subcelular.
Ciertas proteínas actúan como interruptores o “switches” moleculares y controlan la activación de múltiples
vías o subredes. Representan centros de conexión/distribución o “hubs” en el interactoma.
Los complejos de señalización facilitan la compartimentalización y la especificidad de los eventos.
Redes de señalización regulan los diferentes sistemas moleculares funcionales de la célula,
por ej. el secretor, el citoesqueleto, el transcripcional, etc.
Múltiples estímulos (señales) regulan el comportamiento celular
proliferation
survival
apoptosis
PO3=
OH
(redes)
bacterias
- sensado de nutrientes (plasticidad metabólica, ej. operon lac)
- quimiotaxis (movilidad direccionada, ej. sistema Che)
- “quorum sensing” (respuesta a la densidad poblacional, ej AHLs)
eucariotas pluricelulares
- gran complejidad de señales (hormonas, citoquinas, adhesión,
factores de crecimiento, etc)
Señales reguladoras de migración en bacterias (quimiotaxis)
Bacterias flageladas responden a gradientes de moléculas atractoras o repelentes
adoptando diferentes patrones de migración: direccionado (A) y al azar (B).
A: movimiento direccionado
Receptores quimiotácticos (sensores)
(rotación de flagelos en
detectan moléculas tóxicas que actúan sentido anti-horario)
como repelentes. El receptor activa una
histidin-quinasa CheA (auto-fosforilación)
y la transferencia del fosfato a CheY
(regulador). CheY fosforilado interacciona adaptador
con el motor del flagelo induciendo su histidin-kinasa
rotación en sentido horario. La fosfatasa
CheZ defosforila CheY y termina la
señalización. Otros mecanismos regulador
regulatorios (no mostrados) producen
adaptación. B: movimiento no direcionado
fosfatasa (rotación de flagelos
en sentido horario)
sentido
horario
motor del
flagelo
Bacterias Gram- sintetizan y secretan moléculas que actúan como autoinductores, un ejemplo son las moléculas de acil
homoserina lactonas (AHLs) sintetizadas por la enzima AHL sintasa (LuxI). En condiciones de confinamiento o alta densidad
bacteriana, la concentración de AHLs supera un umbral requerido para unirse a una proteína que actúa como receptora
(LuxR), que se une al ADN y regula la expresión de numerosos genes blanco que responden al “quorum sensing”.
En ausencia de nutrientes las amebas de Dictyostelium (musgo) secretan cAMP de modo intermitente. El cAMP
estimula receptores acoplados a proteínas G en la superficie de células vecinas y promueve una respuesta
migratoria quimiotáctica que facilita la agregación de células y el subsecuente desarrollo de un cuerpo fructífero.
cuerpo
fructífero
ameba
receptor acoplado
a proteínas G
patrones espiralados de migración
cAMP
regulación del
citoesqueleto,
migración,
transcripción
hopf.chem.brandeis.edu/.../spiral/index.html
Señales reguladoras de crecimiento direccional
(quimiotropismo) en levaduras
Células haploides de levadura secretan un factor de apareamiento
específico (feromona) a o a que estimula receptores acoplados a
proteínas G en células que secretan el factor alternativo. El receptor
activo regula la expresión de ~ 200 genes y también cambios en el
citoesqueleto que promueven el crecimiento direccional.
no estimuladas estimuladas
(polarización)
pheromone
Ste24
MAPKKK Ste11
Ste5
MAPKK Ste7
Péptidos con N-formil-metionina (fMLP) secretados por bacterias estimulan receptores acoplados a proteínas G
en la superficie de neutrófilos induciendo una respuesta quimiotáctica, y la liberación de microbicidas.
respuesta:
polarización
respuesta:
migración
hacia la fuente
de péptido
La respuesta al sombreado
es controlada por moléculas
fotoreceptoras, ej. fitocromos.
luz normal luz normal
AUTOCRINE
activity
TNFa LPS
activity
-irradiation UV-irradiation
levels
tiempo de recambio
célula muscular
cardíaca célula muscular lisa
célula muscular
Gq-Ca2+
esquelética
acetilcolina
acetilcolina Na+
Gβ - ↑K+out
receptores contracción
relajación
muscarínicos,
(GPCRs)
receptores
nicotínicos
↑Na+ in ↑Ca2+
célula de glándula salival (ion channels)
contracción
Gq-Ca2+
acetilcolina
secreción
Alberts et al, BMC 2002
El número y afinidad de los receptores celulares pueden cuantificarse
constante de
disociación en
el equilibrio:
[L] x [R]
Kd =
[L-R]
En las células, los receptores poseen una capacidad de unir al ligando saturable (A); la unión del ligando a sitios
inespecíficos no es saturable dentro del mismo rango de concentración (C). La unión específica (B) resulta de restar la unión
inespecífica a la unión total (A) – (C). De la curva B se puede determinar el número de receptores por célula y su afinidad o
fuerza de unión por el ligando (Kd). El valor de Kd equivale a la concentración de ligando que satura el 50% de los receptores en
el equilibrio. El valor de Kd refleja la afinidad de un receptor por el ligando. A menor valor de Kd mayor afinidad.
Lodish et al 5Ed
La respuesta celular máxima puede alcanzarse a concentraciones
no saturantes de ligando
Lodish et al 5Ed
La afinidad es una propiedad absoluta y depende La especificidad es una propiedad
de la fuerza de unión entre las moléculas. relativa y dependiente del contexto.
Superficies complementarias de interacción
hyperbolic sigmoidal
curve curve Las respuestas biológicas
ultra-sensibles ignoran o
filtran estímulos por debajo
de un valor umbral ( ).
Diversos mecanismos
producen una respuesta
ultrasensible. Un ejemplo
es el requerimiento de la
unión cooperativa de
múltiples moléculas de
ligando para provocar a
respuesta.
Control de la respuesta: Sistemas biestables
Retroalimentación positiva. CAM kinase II
sistema biestable
on
off
Retroalimentación positiva (transición G1/S)
phosphorylation
activates the
phosphatase
respuesta
oscilatoria
Mecanismos de desensibilización o adaptación
La oligomerización de los receptores de Fc y TCR inducida por la unión al ligando induce la partición de los
receptores en rafts lipídicos (1) donde son fosforilados por kinasas (2). Los receptores fosforilados reclutan kinasas
citosólicas adicionales (ej. Syk, ZAP) (3) que fosforilan proteínas adaptadoras (ej. LAT) (4) y amplifican la señal.
macrophage or
dendritic cell
mast cell
T cell
Secuencia que muestra la formación de una sinapsis inmunológica. Simons & Toomre, NRMCB2000
péptido-MHC (verde) y la molécula de adhesión ICAM (rojo).
kinasa inactiva
kinasa activa señalización
YAP es una proteína reguladora de la transcripción
Acumulación de fosfotirosina cuya actividad depende de mecanotransducción.
en adhesiones (flechas).
umbral umbral
Tamaño de adhesión
Activación de YAP
Adaptado de Elosegui-Artola et al Nature Cell Biol 2016
En las placas neuromusculares los receptores de acetilcolina
se agregan y maximizan la transmisión de la señal en la sinapsis
Los receptores poseen una estructura modular y en ausencia de ligando interaccionan con proteínas
inhibidoras. La unión de la hormona al receptor desplaza las proteínas inhibidoras y el receptor en
combinación con proteínas co-activadoras regulan la transcripción de numerosos genes blanco.
cortisol
Sintetizado a partir
de colesterol, es una
molécula hidrofóbica
que difunde a través de
la membrana plasmática.
NOS NOS
L-Arginine
El receptor de NO es
una guanilato ciclasa
soluble.
PLC ↑cGMP PKG ↓Ca++ ↓MLC
señalización parácrina
↓Ca++
La complejidad de los procesos regulatorios depende de la organización y dinámica de los componentes involucrados.
Glucosa
integrinas EGFR IR
Glut4
(min) exocitosis
respuesta PI3K
Src/FAK
Grb2 rápida
Glut4
(seg, min) Akt rab
pax/p130Cas Vía de
señalización
respuesta (varios pasos) redistribución de Glut4
Ras
rápida Rho/Rac/Cdc42
+
(seg, min) GTPasas
citoesqueleto
de actina Erk 20min
respuesta
ciclinas D, c-myc lenta
(horas, días)
Las señales intracelulares se propagan empleando diferentes mecanismos
- modificaciones covalentes
- cambios conformacionales
- interacciones moleculares
- cambios de localización
ras active
kinase
inactive enzymes
ras PLC
propagación
de la señal
propagación
de la señal
Alberts et al., MBC 2008; Lodish et al MCB 2004
Las señales intracelulares se propagan empleando diferentes mecanismos
Los mecanismos moleculares involucrados en la transmisión de señales no son mutuamente excluyentes,
por ej. las modificaciones covalentes y las interacciones moleculares inducen cambios conformacionales.
Cambios alostéricos/interacciones
Modificaciones covalentes
Ras Raf
milisegundos
interruptores moleculares
(GEFs) (GAPs)
Las GTPasas presentan partes móviles o “switches” que interaccionan con GDP o GTP. (a) En la forma
inactiva de la GTPasa Ras, el GDP interacciona solo con el switch I. (b) Los GEFs aceleran la disociación
del GDP. Por ej. una alfa hélice (naranja) del GEF Sos desplaza el switch I y facilita la liberación del GDP.
(c) El GTP interacciona simultaneamente con los switches I y II y estabiliza la conformación activa de Ras.
GDP
FRET
GTPasa Rho Las GTPasas de la familia de
max
Rho se anclan y activan en la
membrana plasmática. Los
sensores de FRET
monitorean la actividad
relativa de GEFs y GAPs.
min
Módulo o dominio representa una secuencia polipeptídica que se pliega independientemente en una
unidad funcional, típicamente de 35-250 aminoácidos. Uno o varios dominios pueden estar presentes
en las proteínas; aquellas involucradas en señalización usualmente contienen varios dominios.
kinasa
inactiva
SH2
kinasa
activa
fosfopéptido
Cys
Superficies de los dominios SH2 de PLC, Src y Grb2 pYIIPLPD
(mostradas en azul) interaccionan con péptidos
fosforilados (en amarillo). La fosfotirosina se localiza a
la derecha (flecha) e interacciona con residuos básicos
del SH2. Note que los SH2 de PLC, Src y Grb2 difieren
en la especificidad de los fosfopéptidos que unen.
Tyr
fosfopéptido
pYEEI
El reemplazo de Cys por Tyr en el dominio SH2 de la PLC
cambia la especificidad de reconocimiento, haciéndose similar Thr
a la del dominio SH2 de Src. El reemplazo Thr Trp en SH2-Src
cambia la especificidad haciéndose similar al SH2 de Grb2.
fosfopéptido
PLC: Fosfolipasa C
Src: quinasa de tirosina pYVNV Trp
Grb2: proteína adaptadora
Li Biochem J. 2005
Los dominios PDZ reconocen péptidos del terminal carboxilo en
numerosos receptores
Los dominios PDZ (~90 aminoácidos) se encuentran en más de 600 proteínas. Reconocen secuencias
cortas (~ 3-5 aa) del terminal carboxilo y que terminan en un residuo hidrofóbico. Algunos dominios
PDZ reconocen la secuencia Ser/Thr-X-F, donde F es el residuo hidrofóbico del terminal carboxilo.
PDZ: acrónimo de las primeras letras de las proteínas PSD-95, DlgA y ZO-1, donde se descubrió el dominio PDZ.
Lodish et al MCB2004
Los dominios PH interaccionan con fosfoinosítidos fosforilados
Los dominios PH (~120 aa) se encuentran en ~ 300 proteínas en humanos. Los dominios PH reconocen
específicamente fosfoinosítidos fosforilados (PIPs) en la membrana plasmática y en otros compartimientos.
Algunos PH reconocen selectivamente PIP3,4 y PIP3,4,5, que son productos de la enzima PI3K. Las
proteínas con estos dominios PH selectivos cambian de localización en respuesta a un estímulo específico.
capa de
A B cadenas
hidrocarbonadas
PIP
capa de
grupos polares
capa de
fosfatos
PH
Visualización de la relocalización de la GFP fusionada al dominio PH de la kinasa Akt.
La estimulación con insulina activa la enzima PI3K y aumenta el nivel de PIP3,4,5 en
la membrana, produciendo la relocalización de la GFP-PH a la superficie (flecha).
Este efecto es bloqueado por Wortmanina, un inhibidor de PI3K.
ras
G
D
P
vía 1
Signaling
vía 2
enzymes
adrenalina
(AMPAR)
cAMP
cAMP
PKA
Las proteínas scaffold Axina y APC secuestran a b-catenina en un complejo. Las quinasas GSK-3b y CK1 fosforilan
a β-catenina en el complejo marcándola para su ubiquitinación por UbL y degradación en el proteosoma. El factor
extracelular Wnt estimula una vía de señalización que inhibe a las proteínas scaffold, permitiendo la acumulación de
b-catenina y su translocación al núcleo donde se asocia a factores de transcripción y regula la expresión génica.
Neuronas en cultivo SV
anti-PSD95 y actina
pre-sinapsis
dendrita con spinas sinápticas
VGCC
post-sinapsis
(espina sináptica)
En células de mamíferos las proteínas En levaduras las proteínas scaffold Ste5 y Pbs2 ensamblan
scaffold JIP y Ksr ensamblan complejos vías de señalización que controlan la respuesta al
que activan a las MAP kinasas JNK y Erk, apareamiento y al estrés hiperosmótico, respectivamente.
respectivamente.
Raf
MAPKKK
MEK Ksr
MAPKK
(MAPK) Erk
(MAPK) (MAPK)
(MAPK)
subunidad
Bases estructurales del mecanismo de señalización del receptor
ligando
intracelular
sitios hidrofóbicos
Receptor β-adrenérgico inactivo (izquierda) y activo, unido al ligando (derecha). Cambios en la red de interacciones mantenida
entre hélices de trans-membrana, producidos por la unión del ligando (marrón), se propagan en cambios estructurales de
mayor magnitud en el dominio citoplasmático, exponiendo regiones hidrofóbicas que interaccionan con la proteína G.
https://www.nobelprize.org/nobel_prizes/.../2012/advanced-chemistryprize2012
La estimulación del receptor activa una proteína G específica que
modula la actividad de efectores
Lodish et al MCB2004
Proteínas G diferentes regulan la actividad de diversas proteínas efectoras
y la concentración
G Subclass* Effect
de segundos mensajeros
Associated Effector 2nd Messenger
a
Ga Subclass* Effect Associated Effector
Protein 2nd Messenger
Protein
G subclass* Effect Effector 2nd messenger/effect
La unión del ligando (primer mensajero) al receptor acoplado a proteínas G (GPCRs) promueve el incremento
(o disminución) en la concentración de moléculas de vida media corta denominados segundos mensajeros.
Ca 2+
controla la actividad
de kinasas, fosfatasas
Lodish et al MCB2004
Toxinas bacterianas inhiben irreversiblemente proteínas G que
activan la Adenilato Ciclasa (ej. toxina del cólera)
Cholera toxin
Gas
CFTR es un canal de Cl- que se expresa
en intestino y en otros órganos. La PKA
fosforila el dominio regulador (R) de CFTR
e incrementa la permeabilidad al Cl-.
Adenilato
cyclase
cAMP
PKA
CFTR
En células intestinales
produce una pérdida de
CFTR: Cystic Fibrosis Transmembrane
Na+ and Cl- Conductance Regulator
Algunas respuestas mediadas por la estimulación de la subunidad Gs
y el incremento en AMPc
Las subunidades reguladoras (R) inhiben a las subunidades catalíticas (C) de la enzima. Los dominios R además
interaccionan con proteínas scaffold (AKAPs), que restringen espacialmente la actividad de PKA. La unión del cAMP
(ligando activador) a las subunidades R es cooperativa e induce la disociación y activación de las subunidades catalíticas.
La PKA exhibe una respuesta hipersensible (abrupta).
cAMP
R C
R C
AMP/ATP
CREB
dephosphorylation
AC
glicógeno
active sintasa inactive cAMP
active
PKA
Lodish et al MCB2004
Los procesos de señalización organizados en cascada pueden amplificar
la señal extracelular inicial en varios órdenes de magnitud
(adrenalina)
Lodish et al MCB2004
La activación de la PKA puede visualizarse en la célula viva mediante FRET
FRET: Fluorescence Resonance Energy Transfer
no FRET excitación FRET excitación
433 nm emission
emisión 433 nm
El biosensor de FRET consta de la YFP, emisión
476 nm
un péptido substrato de la PKA, un dominio de
unión al substrato fosforilado en serina (14-3-3),
y la CFP. Para medir FRET, las células se PKA
iluminan con luz que excita a la CFP (433 nm) y
se registra la emisión de luz de la YFP (527 nm). S
Respuesta celular del biosensor. La droga (Fsk) activa la vía adenil ciclasa cAMP PKA.
Esta activación es abolida cuando la serina del substrato de PKA se reemplaza por alanina (S475A).
Las AKAPs (A-kinase anchoring proteins) son una familia de proteínas “scaffold” que anclan la PKA a
subcompartimientos celulares específicos, restringiendo espacialmente la actividad de la enzima. La
concentración de cAMP y la activación de PKA es limitada por la acción de fosfodiesterasas (PDE).
antagonista
La fosfolipasa C se asocia a membrana plasmática mediante dominios de unión a lípidos como PH y C2. La isoforma
de la PLC se asocia a receptores tirosina-quinasa de transmembrana activos (ej. EGFR) mediante dominios SH2.
PLC
5
1 4
El dominio C2 de la PKC requiere de calcio para su interacción con los fosfolípidos de la membrana.
En la membrana los dominios C1 de PKC interaccionan con el DAG causando un cambio
conformacional que desplaza el pseudo-substrato inhibidor del sitio catalítico y activa la enzima.
dominio C2
catalytic site Ca2+
Existen numerosas isoformas de PKC implicadas en la regulación de diversos procesos celulares. La PKC
fosforila e inhibe receptores acoplados a proteínas G, al EGFR, otras isoformas activan la vía de la MAPK, etc.
Mecanismos de retroalimentación positiva y negativa
generan patrones espacio-temporales de Ca2+ en el citoplasma
medio extracelular
citosol citosol
calmodulina
activación de
CaM-KII
CaM-KII autofosforilada
activa ya no depende de
Ca2+/calmodulina y fosforila
otras moléculas de CaM-KII
aun después de disociarse
de Ca2+/calmodulina .
(retroalimentación positiva)
autofosforilación
Varias enzimas son activadas por complejos calmodulina-calcio. Ej:
- MLCK MLC contracción actino-miosina
- fosforilasa kinasa glucogenólisis
-CaM-KII tyrosine hydroxylase catecolaminas (Adrenalina, DA, etc)
- cAMP fosfodiesterasa 5´- AMP
- Ca2+ -ATPasa disminución del Ca2+ citosólico
- calcineurina NFAT
- NO sintasa NO (nitric oxide)
Ca2+/calmodulina estimula la NO sintasa y la producción de NO
El óxido nítrico (NO) es un gas que actúa como mediador local (acción paracrina).
Difunde a través de la membrana y se une y activa proteínas receptoras intracelulares
con actividad de guanilato ciclasa. El cGMP formado activa la PKG y esta inhibe la
interacción actina-miosina promoviendo la relajación de la célula muscular lisa.
Lodish et al MCB2004
La subunidad Gat activa una fosfodiesterasa de cGMP en fotoreceptores
Transducina o Gat participa del mecanismo de transducción de la señal lumínica en bastones y conos de la retina.
cromóforo
eventos 2 y 4 amplifican la propagación de la señal.
trans-retinal
cis-retinal rodopsin
(opsin + retinal) Gat
dark current
Na+
hiperpolarización
(glutamate)
Lodish et al MCB
Las subunidades Gb regulan canales de potasio en el músculo cardíaco
La acetilcolina induce la relajación del músculo cardíaco (A) uniéndose a receptores muscarínicos,
los cuales activan una proteína G. El complejo Gβ se une y regula la apertura de canales de potasio
provocando la hiperpolarización de la membrana plasmática.
A. músculo cardíaco
hiperpolarización
hiperpolarización
Relajación
Lodish et al MCB2004
Diversos mecanismos regulan la sensibilidad de los receptores
acoplados a proteínas G
Los GPCRs pueden desensibilizarse por:
Otros mecanismos que terminan la señalización iniciada por las proteínas G son: la hidrólisis del GTP en la proteína G, evento
que es acelerado por los mismos efectores o por proteínas RGS (Regulator of G protein Signaling) que actúan como GAPs.
Las b-arrestinas interaccionan con AP2 y clatrina promoviendo la endocitosis y la disminución del
número de receptores en la superficie. Los receptores internalizados pueden ser defosforilados y
reciclados a la superficie o degradados en los lisosomas. Algunos receptores endocitados unidos a
arrestinas activan vías de señalización dependientes de quinasas citosólicas como Src y JNK.
Lodish et al MCB2004
RECEPTORES ASOCIADOS A
QUINASAS CITOSÓLICAS
Las JAKs constituyen una familia de tirosina quinasas citosólicas asociadas constitutivamente a receptores de
citoquinas (1). En ausencia de estimulación JAK es inactiva. La estimulación de los receptores induce la
autofosforilación y activación de la JAK asociada (2), la cual fosforila tirosinas en el dominio citosólico del receptor (3).
(F. de transcripción)
(adaptadores)
(enzima)
ciclinas D, c-myc
La estimulación de FcR y TCR en el sistema inmune
induce la activación de tirosina quinasas
La estimulación de los receptores de Fc (FcR) en mastocitos y de los TCR en células T induce su partición en
rafts lipídicos (1) y su fosforilación por tirosina-quinasas de la familia de Src (Lyn, Lck, Fyn) (2), Syk y
ZAP70 (3). Todas estas quinasas poseen dominios SH2 que reconocen secuencias fosforiladas (ITAM:
Immunoreceptor Tyrosine-based Activation Motif) y contribuyen a la propagación de la señal intracelular.
pY pY
SH2 SH2
PLC PLC
T cell
↑PLC ↑Ca2+ histamine secretion
↑PLC ↑Ca2+ Calcineurin NFAT
PKC NF-B
DAG GEF Ras-MAPK AP-1
Los receptores con actividad de quinasa tienen un dominio extracelular que une
el ligando y un dominio intracelular con actividad catalítica. Los ligandos son
péptidos o proteínas solubles o asociados a la membrana plasmática.
El genoma humano codifica para ~ 60 receptores de transmembrana
con actividad tirosina-quinasa distintos, agrupados en 20 familias
Los receptores no estimulados poseen una actividad de tirosina-quinasa basal (1). La unión del ligando provoca la
dimerización y autofosforilación del receptor (2), evento que activa el dominio catalítico y promueve la fosforilación de
varias tirosinas del dominio citosólico, generando sitios de unión para proteínas de señalización con dominios SH2 o PTB (3).
Lodish et al MCB2004
El receptor activo es autofosforilado en varios sitios
EGFR Cbl
pY
dominio pY pY pY pY pY pY
catalítico
992 1045 1068 1086 1148 1173
dominio dominio intracelular
extracelular
membrana
cinética de
activación
del EGFR actividad de
fosfatasas
Kholodenko et al
J. Biol Chem 1999
0 1 2
Time (min)
Fosfatasas defosforilan y inactivan el receptor
PTPs
EGFR
pY
dominio pY pY pY pY pY pY
catalítico
992 1045 1068 1086 1148 1173
dominio
extracelular dominio intracelular
membrana
La endocitosis es un mecanismo de desensibilización de los receptores
tirosina quinasas
En ausencia de ligando, el EGFR se endocita con una cinética 5-10 veces más lenta que cuando está unido
al EGF (ligando). Aproximadamente un 50% del complejo EGF-EGFR endocitado es derivado a lisosomas.
reciclado
degradación
Cbl es una ubiquitina ligasa que agrega
una ubiquitina al EGFR endocitado
(monoubiquitinación), marcándolo para
su degradación en lisosomas. Este
mecanismo disminuye transitoriamente
la capacidad de las células para
responder al estímulo extracelular.
Algunos RTK señalizan a través de la PLC
La fosfolipasa C se une varios RTKs fosforilados (ej. EGFR, PDGFR) mediante dominios SH2. El
receptor activo fosforila y activa la PLC promoviendo la síntesis de los segundos mensajeros IP3 y DAG
a partir de PIP2. El aumento de Ca2+ citosólico y el DAG activan la PKC, y el Ca2+ activa la calmodulina.
La PLC se encuentra
autoinhibida en el citosol. La
activación depende de su
relocalización a la membrana, la
fosforilación y cambios
↑PKC conformacionales.
↑Ca2+
↑calmodulina
membrana
plasmática
PIPK PIPK
Akt (=PKB) es una Ser/Thr quinasa citosólica que en estado basal adopta una conformación inactiva,
estabilizada por la interacción del dominio PH con residuos del dominio catalítico. La síntesis de PIP3
por PI3K promueve el reclutamiento y anclaje a la membrana de PKB y PDK1, mediado por el dominio
PH de ambas enzimas. La interacción con la membrana induce cambios conformacionales en Akt que
sumados a la fosforilación por PDK1activan a la enzima.
PI-3K PH PH PH
La activación de la vía PI-3K Akt promueve crecimiento y supervivencia. La fosfatasa PTEN antagoniza el efecto de PI3K y
defosforila los lípidos fosforilados (PIP3) productos de PI3K. Por lo tanto la actividad de PTEN atenúa la activación de Akt.
PH PH
Cell
growth
PTEN
(fosfatasa)
mutaciones de PTEN
promueven el desarrollo
de cáncer
Bcl2
Bcl2
Bcl2
mTOR forma 2 complejos multiproteicos, mTORC1 y mTORC2, los cuales integran señalización de diferentes
procesos o “inputs”. Por ejemplo, quinasas activadas por receptores de factores de crecimiento, convergen en
la activación de la GTPasa Rheb, la cual a su vez activa el complejo mTORC1. La activación de los complejos
mTORC1 y 2 regula la función de numerosos substratos involucrados en el crecimiento y supervivencia celular.
(↑Akt FOXO)
(S6K, eIF4
↑síntesis de
proteínas) (Rho/Rac activity)
Lodish et al MCB2004
La GTPasa Ras es activada en la membrana plasmática
membrane
concentration
Ras-GTP
cytosol
10 20 30
Time (min)
GEF
Lodish et al MCB2004
La activación de la MAP quinasa requiere de la fosforilación dual
de una treonina y una tirosina en el segmento activador
N lobe
activation
segment
cinética de activación de Erk
estimulando las células con EGF.
C lobe
Activity
segment
10 20 30 40
Time (min)
Lodish et al MCB2004
adaptado de Bidkhori et al PlosOne2012
Complejos de activación de MAP kinasas específicas
depende de proteínas scaffold
En levaduras las proteínas adaptadoras Ste5 y Pbs2 organizan vías
En células de mamíferos las proteínas de señalización en respuesta a estímulos diferentes. Ste5 recluta una
adaptadoras JIP1 y Ksr coordinan la activación combinación de proteínas involucradas en la respuesta de apareamiento
de la MAP kinasa JNK y Erk, respectivamente. mientras que Pbs2 desencadena la respuesta al estrés hiperosmótico.
Raf
MAPKKK
MEK Ksr
MAPKK
(MAPK) Erk
(MAPK) (MAPK)
(MAPK)
nasal nasal
NGFR
temporal
temporal
- NGF anterior
tectum
posterior
EphR
+ NGF
PTK domain
NGF: Nerve Growth Factor
Eph RTKs participan en la decodificación de señales o moléculas guía
durante el crecimiento axonal
Ephexin es un
GEF de RhoA
Los receptores RTK usualmente activan diversas vías
de señalización paralelas
Adipocitos transfectados
con GLUT4-GFP. Note la
translocación a la membrana
después de la estimulación.
ECM
integrins
FAK
Src
Rho/Rac
MLCK
PD
PD: phosphodiesterase
TGF: Transforming Growth Factor; SARA: Smad Anchor for Receptor Activation
Alberts MBC, 2008
Flujos de componentes de señalización de la vía de TGF-b
Entre los genes activados por Smads están los que codifican para Smads inhibidoras o I-Smads.
Las I-Smads compiten con las R-Smads por la unión al receptor activo, interaccionan con
factores de ubiquitinación Smurf, promoviendo la degradación de receptores y Smads en
proteosomas, y también reclutan fosfatasas que defosforilan a los receptores y Smads.
TAK1:
TGFβ-Activating El inhibidor I-Ba
Kinase-1 enmascara una NLS
en NF-B.
(IKK)
Lodish et al MCB2004
La vía de señalización de Wnt inhibe la proteólisis de b-catenina
En ausencia de estimulación b-catenina es reclutada a un complejo con axina y APC donde es fosforilada por las kinasas
casein kinasa I y GSK-3b. El residuo fosforilado es reconocido por una E3 ubiquitina ligasa que marca la b-catenina para su
degradación en el proteosoma. El factor extracelular Wnt estimula al receptor frizzled (B), y activa una vía que inhibe la
formación del complejo, permitiendo la acumulación de b-catenina en el citosol y su translocación al núcleo donde regula la
expresión de numerosos genes involucrados en proliferación y diferenciación.
Notch y Delta son proteínas de transmembrana involucradas en un mecanismo de diferenciación celular denominado
“inhibición lateral”. En Drosophila este mecanismo es empleado para regular la diferenciación de neuronas sensoriales en
la epidermis de la mosca. La expresión del ligando Delta en la superficie de precursores neuronales interacciona con el
receptor Notch en las células adyacentes, induciendo la proteólisis de Notch y la generación de un fragmento intracelular
que se transloca al núcleo e inactiva la expresión de genes proneurales y promueve la diferenciación epitelial.
El etileno es un gas que actúa como un importante factor regulador del crecimiento y mecanismos de defensa en plantas. Los
receptores de etileno son proteínas de transmembrana localizadas en el retículo endoplásmico. En ausencia de etileno los
dominios citosólicos de los receptores interaccionan y activan una quinasa de Ser/Thr denominada CTR. CTR fosforila y promueve
la degradación de factores de transcripción (EIN) que activan la respuesta transcripcional al etileno. La unión del etileno al receptor
inhibe la activación de CTR, lo cual permite que los factores EIN se acumulen y regulen la expresión/represión de cientos de genes
controlados por etileno. La deleción de EIN produce un fenotipo insensible al etileno (Ethylene Insensitive).
Sistema de señalización por auxinas