IDENTIFICACIÓN DE LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

(IDENTIFICATION OF ENZYMATIC ACTIVITY)

AUTORES: Carlos Andrés Hoyos Acuña, Juan Camilo Pérez Castro, Estefanía Ruíz
Alquichire, Ronald Andrés Charris Parejo.
Universidad del Magdalena, estudiantes del programa de ingeniería ambiental y sanitaria e
ingeniería agronómica, facultad de ingeniería. (Grupo 8)
Carrera 32 No 22-08 Santa Marta Colombia, carlettohoyos8@gmail.com

RESUMEN
Las enzimas son proteínas que catalizan reacciones bioquímicas, lo realizado en esta práctica
fue comprobar la presencia de la enzima catalasa en tejidos animales (hígado), vegetales
(maíz, papa) y otros compuestos como sal y azúcar. Se observó la actividad enzimática de la
catalasa alterando condiciones de temperatura y pH, donde se comprobó que las enzimas
necesitan una temperatura y un pH óptimo para llevar a cabo sus funciones.
PALABRAS CLAVES: Enzima, catalasa, acción enzimática, pH, temperatura.

ABSTRACT
Enzymes are proteins that catalyze biochemical reactions, what was done in this practice was
to check the presence of the catalase enzyme in animal tissues (liver, chicken heart),
vegetables (spinach leaves, mushrooms and potatoes) and other compounds such as salt and
sugar . The enzymatic activity of catalase was observed altering temperature and pH
conditions, where it was found that enzymes need a temperature and an optimum pH to carry
out their functions
KEY WORDS: Enzyme, catalase, enzymatic action, pH, temperature.

INTRODUCCIÓN
Las enzimas son moléculas de proteínas
cuya función es acelerar la velocidad de
las reacciones químicas que se producen
en el organismo y que son necesarias para
mantener su actividad biológica. Para
reaccionar, las moléculas deben poseer
suficiente energía, la energía de
activación, a fin de chocar con suficiente
fuerza para superar su repulsión mutua y
debilitar los enlaces químicos existentes.
Las enzimas son catalizadores biológicos.
Un catalizador es una sustancia que
modifica la velocidad de una reacción
química participando en su mecanismo,
pero sin sufrir un cambio químico
permanente en el proceso.
Una sola molécula de enzima puede
catalizar la reacción de decenas de miles
de moléculas iguales en tiempos del orden
de un segundo. Por esto, las enzimas son
particularmente efectivas en cantidades
muy pequeñas.
En los ciclos catalíticos, las enzimas
interactúan con los reactantes (Sustratos)
con una altísima especificidad. Así, las
enzimas pueden acelerar un solo tipo de
reacción química en un sistema en el que
están ocurriendo cientos de miles de
reacciones diferentes; disminuyen la
energía de activación incrementando
enormemente la velocidad a la que se
producen las reacciones químicas en las
células. Una reacción no catalizada
requiere más energía de activación que una
catalizada, como una reacción enzimática.
La menor energía de activación en
presencia del catalizador frecuentemente
está dentro del intervalo de energía que
poseen las moléculas, de tal modo que la
reacción puede ocurrir rápidamente, sin
adición o con poca adición de energía. Las
enzimas son grandes moléculas de
proteínas globulares cuyo modo de
plegamiento asegura que grupos
particulares de aminoácidos formen un
MATERIALES Y MÉTODOS
sitio activo. Cuando las enzimas pierden su
estructura tridimensional característica, se
dice que están desnaturalizadas. Las
moléculas reactivas, conocidas como
sustrato, se ajustan con precisión a este
sitio activo. Aunque la conformación de
una enzima puede cambiar temporalmente
en el curso de una reacción, no se altera
permanentemente. La velocidad de las
reacciones enzimáticas también se ve
influida por la temperatura y por el pH, que
afectan la atracción entre los aminoácidos
de la molécula proteica y también entre el
sitio activo y el sustrato. Muchas
coenzimas, como el NAD, funcionan
como transportadores de electrones, y
diferentes coenzimas mantienen a los
electrones en niveles energéticos
ligeramente distintos. Muchas vitaminas
son parte de coenzimas. En la interacción
entre la enzima y el sustrato, el sitio activo
de la enzima se ajusta a la superficie
enfrentada de la molécula de sacarosa. El
ajuste es tan exacto, que una molécula
compuesta, por ejemplo, de dos
subunidades de glucosa, no se vería
afectada por la acción de esta enzima. Las
miles de reacciones que constituyen el
metabolismo están bajo el control de miles
de enzimas.
Las enzimas también pueden estar
reguladas por inhibición competitiva, en la
cual una molécula, semejante al sustrato
normal, compite por el sitio activo. La
inhibición competitiva puede ser revertida
aumentando las concentraciones de
sustrato. Los objetivos de esta práctica
son: Identificar en una reacción las
enzimas y su respectivo sustrato, además
observar la actividad de algunas enzimas
en tejidos animales y demostrar los efectos
de la temperatura, el pH y concentración
sobre la actividad de una enzima, así
mismo demostrar la forma en que una
enzima es específica para cierto sustrato.
MATERIALES:
Instrumentos de laboratorio: Beakers, Número del Mililitros de
tubos de ensayo, baño María, gradilla, tubo extracto de hígado
placas petri, pinzas para tubos de ensayo, 1 1 ml
probetas, pipetas, refrigerador, guantes. 2 1 ml
Reactivos y soluciones: 100 ml de 3 1 ml
solución de peróxido de hidrogeno al 6%, 4 1 ml
agua destilada, agua en bolsa, hielo, ácido 5 1 ml
acético, hidróxido de sodio, solución Luego se agito cada uno de los tubos,
salina (suero fisiológico), solución de agregándole al mismo tiempo a cada uno
almidón y saliva. las siguientes cantidades de peróxido de
Biológico: 200 gramos de hígado fresco hidrogeno
licuado con un poco de agua.
Número del Mililitros de
MÉTODOS: tubo Peróxido de
Para esta práctica se utilizaron tubos de hidrogeno
ensayos grandes. Teniendo las muestras de 1 0 ml
la solución de peróxido de hidrogeno por 2 1 ml
separado en tubos de ensayos antes de 3 2 ml
agregar la muestra del extracto de hígado
4 4 ml
en los respectivos tubos de ensayos. Esto
5 6 ml
con el fin de que las soluciones de
Esto para luego describir y explicar cómo
peróxido sean agregadas al mismo tiempo
afecta la cantidad de sustrato la actividad
en cada uno de los tubos que contengan la
enzimática.
muestra.
PARTE 3. Para esta parte de la práctica se
Acción de la invertasa
rotularon y se prepararon tres tubos de
PARTE 1. Se rotularon y prepararon
ensayos de la siguiente forma:
cuatro tubos de ensayos de la siguiente
forma:
Número Mililitros Temperatura
Número del Mililitros de
del tubo de extracto °C
tubo extracto de hígado
de hígado
1 0 ml
1 2 ml Baños con
2 1 ml
hielo
3 2 ml
2 2 ml Temperatura
4 4 ml Ambiente
Una vez realizado el procedimiento,
3 2 ml Agua
fueron agitados bien los tubos, luego se
hirviendo
agregaron al mismo tiempo, 2 ml de
Se esperó que el material que estaba dentro
peróxido de hidrogeno en cada uno de los
de los tubos tuviera la misma temperatura
tubos. Para luego describir cómo afecta la
que la de los respectivos baños;
cantidad de enzima su actividad
posteriormente se agito y se procedió a
enzimática.
agregar al mismo tiempo 2 ml de peróxido
PARTE 2. Se procedió a rotular y así se
de hidrogeno a cada uno de los tubos.
prepararon cinco tubos de ensayos de la
Describiendo de igual manera lo
siguiente forma:
observado para explicar así mismo cómo
afectó la temperatura la velocidad de una posterior a esto se agregaron 3 gotas de
reacción enzimática. Lugol en cada uno de ellos para luego
describir todo lo observado y así explicar
PARTE 4. Posteriormente se rotuló y se cómo fue la reacción en el tubo que
prepararon tres tubos de ensayos de la contiene saliva y se le adiciona H2O2 y
siguiente forma: cómo fue la reacción en el tubo que
contiene extracto de hígado y que se le
Número Mililitros PH adicionó almidón.
del tubo de extracto RESULTADOS
de hígado PARTE 1.
1 2 ml 5 gotas de
ácido acético
2 2 ml 5 gotas de
solución PARTE 2.
salina
3 2 ml 5 gotas
hidróxido de
sodio
En esta parte se agitaron cada uno de los
tubos, agregándole al mismo instante 2 ml
de peróxido de hidrogeno en cada uno de
ellos. Para de la misma manera describir
cómo afecta el pH la velocidad de una
reacción enzimática.

PARTE 5. Para finalizar se rotularon y

fueron preparados cuatro tubos de ensayos
de la siguiente forma: Observación de la muestra de 1 ml de extracto de
hígado y 0 ml de H2O2.
Número Material Sustancia
del tubo
1 1 ml Saliva Peróxido de
hidrógeno
2 1 ml Peróxido de
extracto de hidrógeno
hígado
3 1 ml 2 ml de
extracto de almidón
hígado
4 1 ml Saliva 2 ml de
almidón
Para finalizar este procedimiento se
procedió a agitar cada uno de los tubos; a Observación de la muestra de 1 ml de extracto de
los dos primeros se le agregaron 2 ml de hígado y 1 ml de H2O2
peróxido de hidrogeno, A los tubos 3 y 4 Se observó un significante burbujeo, y en
fueron agregados 2 ml de solución de la parte superior una capa espumosa, Todo
almidón se agitaron durante 3 minutos y esto a causa del peróxido de Hidrógeno
que actúa como catalizador.
Observación de la muestra de 1 ml de extracto de
hígado y 2 ml de H2O2.
Se observó un burbujeo con mayor
intensidad, obteniendo ahora una capa
tornada de un color más claro. Cabe
recalcar que todo esto fue mayor que el
experimento anterior.
Observación de la muestra de 1 ml de extracto de
hígado y 4 ml de H2O2.
Se observó con mayor intensidad la
actividad Enzimática, Tornándose un
color más claro, perdiendo así su color
original. La intensidad de este
experimento fue mayor que el anterior.
Observación de la muestra de 1 ml de extracto de
hígado y 6 ml de H2O2.
Se observó cómo al añadirle mayor
cantidad de peróxido de hidrógeno se
obtiene un resultado diferente, en este caso
el burbujeo fue tan grande que se precipitó
por el tubo de ensayo.
PARTE 3.
PARTE 4.
Observación de la muestra de 2 ml de extracto de
hígado y 5 gotas de ácido acético.
Se evidenció que, en este tipo de enzimas,
o en estas actividades enzimáticas, si el pH
es más ácido la reacción va a ser mayor y
por ende hizo que se precipitara.
Se logró apreciar, diferenciar y concluir de
los anteriores experimentos que, las
enzimas tienen distintas formas de
reaccionar dependiendo del tipo de pH, de
su temperatura u otras características.
Teniendo en cuenta esto, se observó en
esta última muestra que, como se esperaba,
la reacción no fue tan fuerte en
comparación con los experimentos (tubos)
anteriores, ya que la sustancia utilizada en
este experimento fue más alcalina
(NaOH).

PARTE 5.

Observación de la muestra de 2 ml de extracto de

hígado y 5 gotas de solución salina (suero
fisiológico).

Se observó que, cuando la reacción se hizo

una sustancia más neutra, esta se no se
precipitó, pero sí logró llenarse por
completo del burbujeo blanco.

Observación de la muestra de 2 ml de extracto de

hígado y 5 gotas de hidróxido de sodio (NaOH).
DISCUSIÓN
Se caracterizó cualitativamente las dos
enzimas ocupadas en la práctica realizada
y se puede afirmar que ambas enzimas son
de naturaleza distinta, la amilasa es una
hidrolasa, esto quiere decir que
descompondrá por hidrólisis enlaces 1-4
del componente α-Amilasa al digerir el
almidón para formar azúcares simples,
mientras que la catalasa es una enzima de
naturaleza oxidorreductasa, que mediante
procesos REDOX descompone el
peróxido de hidrógeno en agua y en
oxígeno molecular.
Se pude determinar la presencia de la
enzima catalasa en una muestra de hígado,
y se llegó a la conclusión de que la catalasa
se encuentra en alto contenido en la
superficie del tejido liso que conforma este
órgano vital para el animal, esta
afirmación se la fundamenta con el intenso
y prolongado burbujeo que existió al
momento de colocar una pequeña cantidad
de peróxido de hidrógeno en la muestra de
hígado.