Académique Documents
Professionnel Documents
Culture Documents
QUERÉTARO
FACULTAD DE QUÍMICA
ACADEMIA DE QUÍMICA
Clave: 932
Pre-requisito: N/A
ÍNDICE
I. Introducción
En la actualidad, se dispone de la tecnología para descifrar los principios básicos
que rigen la estructura y la actividad de la
célula. Por lo general, las células son muy
pequeñas para observar a simple vista. Se
les visualizó hasta el siglo XVII, cuando se
inventó el microscopio. A partir de ese
momento y durante cientos de años, todo
lo que se supo sobre las células se
descubrió con este instrumento. Con el
empleo de un microscopio simple, Robert
Hooke examinó un trozo de corcho y en
1665 informó que el corcho estaba
compuesto por un conjunto de cámaras
diminutas, que denominó “células”.
-Tipos de microscopios:
Las células vivas están compuestas por un número limitado de elementos, cuatro
de los cuales (CHON) componen el 96.5% de su masa. Los organismos vivos
contienen un conjunto característico y restringido de pequeñas moléculas
compuestas basadas en el carbono que son esencialmente iguales en todas las
especies vivas. Las categorías principales son los azúcares, los ácidos grasos, los
aminoácidos y los nucleótidos.
Los azúcares son una fuente primaria de energía química para las células y se
pueden incorporar a polisacáridos que almacenan energía (almidón, glucógeno).
Los ácidos grasos también son importantes como reserva de energía, pero su
función primordial es la formación de las membranas celulares.
La gran mayoría de la masa seca de una célula está formada por macromoléculas,
que son polímeros de azúcares, aminoácidos o de nucleótidos. Los polímeros
formados por aminoácidos constituyen las proteínas, los de los azúcares, son los
carbohidratos. Los nucleótidos desempeñan una función central en la transferencia
de energía y son subunidades que componen el RNA y el DNA.
Los nucleótidos están formados por un grupo fosfato, una pentosa y una base
nitrogenada que puede ser purina o pirimidina.
III. Objetivo
Aprender a utilizar el microscopio, sus partes y obtener conocimiento de moléculas
orgánicas.
IV. Metodología
1) Material y Equipo
- Microscopio será proporcionado por el maestro.
- Porta y cubre objetos.
- Muestras para observar bajo el microscopio (sangre, papa, flores).
1) Reactivos y Soluciones
Ninguno
2) Requerimientos de Seguridad
Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad, zapato
cerrado y guantes.
3) Disposición de residuos
Ninguno
4) Técnica
Se darán un ejemplo de moléculas orgánicas (carbohidrato, aminoácido, lípido), se
realizara la representación de la estructura con ayuda de modelos moleculares y se
dará la toda la información acerca de la molécula en cuestión.
5) Procedimiento
1. Se escogen muestras para observar
2. bajo el microscopio (sangre, papa, flores) y se cortan en pequeños pedazos.
3. Se ponen las pequeñas muestras en portaobjetos limpios.
4. Se añade una gota de agua o solución a la muestra.
5. Se cubren los portaobjetos con cubreobjetos.
6. Se ponen en el microscopio y con ayuda de los conocimientos previos, se
enfoca la muestra y se analiza.
7. Observar las muestras a diferentes resoluciones para comparar.
V. Resultados
a. Cálculos
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
El ácido desoxirribonucleico (DNA) es el centro de almacenamiento o biblioteca
celular que contiene toda la información requerida para construir las células y los
tejidos del organismo.
Electroforesis
IV. Metodología
1) Material y equipo.
Material
3) Requerimientos de seguridad
Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad, zapato
cerrado y guantes.
4) Disposición de residuos
Colocar en los recipientes correspondientes.
5) Procedimiento.
1. Se corta la cebolla, fresa, etc., en trozos pequeños para poder triturar con
facilidad. Se agregan 15 ml de agua destilada, disolver.
2. Moler las muestras, obtener el jugo y ponerlo en un vaso de precipitado de
150 ml.
3. Agregar 2.5 ml de detergente y se mezcla.
4. Filtrar la solución en un tubo de ensayo con tela porosa (magitel, etc.) o
filtro para cafetera (No Watman).
5. Se pesan en la balanza 0.5g de NaCl (POR CADA MUESTRA). Mezclar la
solución de sales con la muestra en el mortero.
6. Agregar 0.1 g de las enzimas (ablandador de carne) y disolver.
7. Esperar 5 min y agregar cuidadosamente por las paredes del tubo 3ml de
alcohol (etanol) previamente enfriado. Se formarán 2 fases (cuidar de no
mezclarlas).
8. Con un palillo de madera o vidrio largo hacer movimientos rotatorios
lentos justo entre las dos fases.
9. Sacar con el mismo palillo las hebras blancas (DNA) que se forman y,
colocarlas en un microtubo.
Cargar las muestras en los pozos junto con el buffer de carga (azul), tapar la
cámara y correr el gel 30 min a 120V (explicación del profesor). Observar el gel
en la luz UV.
V. Resultados.
VI. Discusión.
VII. Conclusiones.
VIII. Anexos
IX. Bibliografía
Membrana Celular: Transporte Celular y Potencial de Membrana.
Práctica No. 3
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
El Potencial de Membrana se genera cuando los iones en una solución pasan del
interior de la membrana hasta exterior. La teoría que mayor aceptación ha tenido
para explicar el establecimiento del potencial de membrana es la teoría de la
electrodifusión de Nernst-Planck. Esta teoría descansa en los principios de la
termodinámica clásica, al comprender como se establece el Vm con la participación
de un solo ion (potencial de membrana) permite tener una idea clara del
mecanismo básico por el cual se establece el potencial de reposo en condiciones
fisiológicas.
Equilibrio Donnan.
Este equilibrio se produce entre los iones que pueden atravesar la membrana y los
capaces de hacerlo. Las composiciones en el equilibrio se ven determinadas tanto
por las concentraciones de los iones como por sus capacidades.
La ecuación de Nernst-Planck
Potencial de membrana
La electroneutralidad
Transporte celular
Gracias a que todos los organismos por medio de osmosis mantienen agua, hay
dos términos que definen la retención de agua dependiendo de si la célula es
animal o vegetal.
Turgencia
Presión ejercida por los fluidos y contenido celular sobre paredes de una célula, al
momento de absorber agua, la célula se hincha y se hace más rígida, esto aumenta
la presión de la membrana celular y hace que ésta se tense dando una cierta
firmeza gracias a la dilatación de las células. En este caso, la pared celular protege
a que con toda la presión ejercida no explote. Es el fenómeno que mantiene vivas y
firmes a las plantas.
El proceso equivalente a una célula animal se llama lisis, en el cuál las células al
retener tanta agua, explotan por no tener una pared celular que las proteja.
Plasmólisis
Esto sucede mucho en las plantas cuando hay mucho sol que les está dando
directo, las plantas empiezan a transpirar desprendiendo toda el agua contenida en
ellas, y empiezan a perder agua. En éste fenómeno la presión de turgencia es nula
ya que no hay presión ejercida sobre las paredes celulares y por eso no hay
firmeza.
IV. Objetivos
• Apreciar el fenómeno de potencial de membrana transmembranal para
comprender los efectos que tiene esta con varias soluciones de diferente
concentración.
• Diferenciar entre el proceso de difusión y osmosis por medio de la
observación de ambos fenómenos.
• Observar y diferenciar los efectos de soluciones hipotónica, hipertónica e
isotónica en células animales.
V. Metodología
1) Material y equipo.
- Voltímetro
- 2 Pinzas caimán-caimán
- 2 pinzas banana-caimán
- 5 tubos de ensayo
- Cubreobjetos
- Portaobjetos
- Muestras de sangre
- 1 cascarón de huevo: (retirar la yema y clara en casa para su consumo,
enjuagar con agua común y con mucho cuidado para evitar romper la
membrana interna).
- Microscopio
- 2 electrodos de plata (2 cm c/u, conseguirlos fuera de la facultad con los que
venden joyería de plata)
- 7 vasos de precipitados 100ml
- Pipetas
- Aforados 100ml
- Aforados 5ml
- 1 pila AA
2) Reactivos y soluciones.
5) Procedimiento.
El huevo cuenta con una parte apical estrecha y una basal más ancha. En
el interior del huevo en su parte basal, se encuentra una cámara de aire
que separa a las membranas y se procede de la siguiente manera:
VI. Resultados.
a. Cálculos
VII. Discusión.
VIII. Conclusiones.
IX. Anexos
X. Bibliografía
Organelos Celulares y Demostración de Fosfatasa ácida
Práctica No. 4
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
Organelos
Existen dos tipos de células: las eucariotas y las procariotas. Las primeras son las
que componen a todos los organismos pluricelulares, tanto las células animales
como las vegetales son eucariotas. Las segundas son aquellas que son
autosuficientes en la naturaleza, tales como bacterias y arqueas. Ambos tipos de
células tienen una estructura similar que les permite cumplir con sus funciones;
esta estructura tiene tres componentes principales: La membrana, el citoplasma y
el núcleo (sólo en células eucariontes) estos son conocidos como organelos
celulares.
Las células animales no tienen una pared celular (en el exterior de la célula), son
heterótrofas porque son incapaces de sintetizar su propio alimento, incorporando
los nutrientes de los alimentos que poseen otros seres vivos, ya que no poseen
cloroplastos con clorofila para la fotosíntesis. Además presentan Lisosomas
funcionales para la digestión intra y extracelular (endocitosis y exocitosis).
La célula vegetal tiene una pared celular de celulosa, que hace que tenga rigidez.
Además estas células tienen los cloroplastos, con clorofila, que son los que gracias
a ellos realizan la fotosíntesis y por eso son autótrofos (son capaces de realizar su
propio alimento).
Los cloroplastos son los lugares donde se realiza la fotosíntesis, las células de las
hojas de las plantas verdes. Tienen formas diferentes y, al igual que las
mitocondrias, se dividen por alargamiento y constricción media. Contienen un
pigmento llamado clorofila, cuya función es la fotosíntesis: pueden encontrarse en
ellos otros pigmentos, como la xantofila, que es amarilla, y el caroteno, que es
naranja.
Fosfatasa ácida
En un principio se pensó que los lisosomas serían iguales en todas las células, pero
se descubrió que tanto sus dimensiones como su contenido son muy variables. Se
encuentran en todas las células animales. No se ha demostrado su existencia en
vegetales.
Dado que el fosfato de plomo es incoloro o blanco, se tiene que trans forman en
sulfuro de plomo que tiene fuerte coloración (café o negro cuando se encuentra
concentrado). Al observarse que los tejidos han sido tratados en un pH acido para
producir fosfato de plomo, es probable que el cambio de pH distorsione mucho las
células, se debe sugerir entonces en sulfuro de amonio a un nivel muy alcalino de
pH, para transformar el precipitado en sulfuro de plomo. De aquí que el H2O-H2s
del aparato de kipp, o una solución de sulfato de sodio, se utiliza para este
propósito.
En un principio se pensó que los lisosomas serían iguales en todas las células, pero
se descubrió que tanto sus dimensiones como su contenido son muy variables. Se
encuentran en todas las células animales. No se ha demostrado su existencia en
vegetales.
- Membrana plasmática
- Citoesqueleto
- Retículo endoplasmático Rugoso, RER
- Ribosomas
- Retículo endoplásmico Liso, REL
- Aparato de Golgi
- Lisosomas
- Peroxisomas
- Mitocondrias
- Centríolo
- Pared celular
- Vacuolas
15. Menciona 6 organelos celulares y describe su función
16. Qué tipo de enzimas se encuentran en los lisosomas
17. Cuál es el fundamento del medio de reacción utilizado en la práctica?
18.
IV. Objetivo
Observar y conocer la función de los plastos y lisosomas en células vegetales y
animales. Así como conocer el manejo de animales de laboratorio.
V. Metodologia
. Material y equipo.
- Cajas Petri
- Porta objetos
- Cubre objetos
- Microscopio
- Vegetales: jitomate, zanahoria, papa, nabo (si se consigue) y algas elodea (se
consigue en acuarios). Traes de cada uno de los vegetales una pequeña
porción o 1 pieza para todo el grupo.
- Microespátula
6) Reactivos y soluciones.
- Cloroformo
7) Requerimientos de seguridad
Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad, zapato
cerrado y guantes
8) Procedimiento para organelos:
1. Hacer varias rebanadas de los vegetales lo más delgadas posible.
2. Pasar los cortes a una caja petri conteniendo agua de la llave durante 2
min.
3. Montar los cortes más delgados a un portaobjetos.
4. Observar al microscopio.
Medio-reacción.
VI. Resultados.
VII. Discusion.
VIII. Conclusiones
IX. Anexos
X. Bibliografia
División Celular: Mitosis y Meiosis
Práctica No. 5
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
El crecimiento y desarrollo de los organismos vivos depende del crecimiento y
multiplicación de sus células, cuando una célula se divide la información genética
contenida en su ADN debe duplicarse de manera precisa y luego las copias se
transmiten a cada célula hija.
El ciclo celular de las células eucariontes se divide en 4 fases. Fase G1, Fase S, Fase
G2 y Fase M. Las primeras 3 Fases son parte de un período denominado Interfase
durante el cual la célula aumenta de tamaño, el DNA de los cromosomas se replica
y se duplica el centrosoma.
III. Objetivo
Observar las diferentes fases del ciclo celular en células eucariontes,
principalmente la etapa de división celular; observar las diferencias entre la
Mitosis y la Meiosis.
IV. Metodologia
1) Material y equipo.
- Microscopio
- Porta y cubreobjetos
- Vaso o recipiente (para sumergir la base del bulbo de la cebolla en agua)
- 1 vaso de p.p. de 125mL
- Plato caliente
- Navaja o pinzas de disección
- Bulbo de cebolla fresca de 5-7cm de diámetro
- Flor de tradescantia
2) Reactivos y soluciones
- Colorante de acetorcamín
3) Requerimientos de seguridad
Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad, zapato
cerrado y guantes.
4) Procedimiento.
PARTE A. MITOSIS
1. Quitar raíces y fibras secas de la base bulbo de cebolla sumergir solo la
base del bulbo de la cebolla en un recipiente con agua. Las raíces crecerán
en 2 o 3 días (hacerlo con anticipación).
2. Cortar 3 mm de la parte inferior de la punta de la raíz, ponerla en un
vidrio de reloj y agregarle gotas de colorante de acetocarmín hasta
cubrirla.
3. Dejar reposando 10 minutos.
4. Calentar el vidrio de reloj de 3 a 5 minutos (el líquido no debe hervir). No
dejar secar, agregar colorante si es necesario.
5. Hacer cortes más delgados de la raíz teñida y disgregar sobre el
portaobjetos, cubrir la preparación con un cubreobjetos presionar
firmemente para convertir el material del portaobjetos en una capa
delgada.
6. Examinar en el microscopio y localizar algunas células en cada etapa de la
mitosis.
PARTE B. MEIOSIS
V. Resultados
VI. Discusión
VII. Anexos
VIII. Bibliografía
Práctica No. 6
FACTORES DE DESNATURALIZACIÓN DE PROTEÍNAS
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
Las proteínas se encuentran en diferentes concentraciones dentro de los
organismos, para conocer cómo determinarla es necesario conocer algunas
propiedades de las mismas.
III. Objetivo
Identificar el efecto de la concentración, la mezcla con otras substancias, el pH en la
temperatura de desnaturalización de las proteínas contenidas en la clara del huevo.
Metodologia
1) Material y equipo
Termómetro
- Tiras de pH
- Vasos de precipitado
- Tubos de ensayo
- Pipetas
- Mechero o plato caliente
- Gradilla para tubos de ensayo
2) Reactivos y soluciones
- Clara y yema de huevo
- Agua destilada
- Sacarosa
- ácido cítrico al 40%
- NaOH 2N
3) Requerimientos de seguridad
- Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad,
zapato cerrado y guantes.
- Manejo cuidadoso del material a utilizar.
4) Disposición de residuos
Desechar cada reactivo en el recipiente correcto
5) Procedimiento
IV. Resultados
Tabla I: Determinación de las temperaturas de desnaturalización de las proteínas
del huevo con distintos factores.
Factores Temperatura de Temperatura de
desnaturalización de la desnaturalización de la
clara (°C) yema (°C)
Muestra sin factor
Dilución 2:1 con agua
Sacarosa
pH Ácido
cítrico
NaOH
pH de la muestra
Ácido cítrico
NaOH
Muestra sin factor
V. Discusión
VI. Conclusiones
VII. Anexos
VIII. Bibliografía
CUANTIFICACIÓN DE PROTEÍNAS POR EL MÉTODO DE BRADFORD Y
PREPARACIÓN DEL GEL DE POLIACRILAMIDA
Para calcular las concentraciones de las proteínas totales es necesario realizar una
curva de calibración, empleando un patrón.
CONOCIMIENTOS PREVIOS
1395.8≤l de H2ODD
IX. Resultados
a. Cuantificación de proteína
Muestra Concentración
Muestra Concentración
Problema
Identificación de Aminoácidos
Práctica No. 7
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
Un aminoácido es una molécula orgánica con un grupo amino (-NH2) y un grupo
carboxilo (-COOH).
III. Objetivo
Identificar aminoácidos mediante reacciones específicas de sus grupos
estructurales.
IV. Metodología
1) Material y equipo
- Termómetro
- Vasos de precipitado
- Tubos de ensayo
- Pipetas
- Mechero o plato caliente
2) Reactivos y soluciones
- Clara y yema de huevo
- Agua destilada
- Ninhidrina
- Reactivo de Millon
- HNO3 concentrado
- NaOH 40%
- Ácido acético concentrado
- Ácido sulfanílico
- Nitrito de sodio 0.5%
- Pedir 0.5g de 2 aminoácidos de distintos grupos: metionina, triptofano,
tirosina, arginina, fenilalanina, cisteína.
3) Requerimientos de seguridad
- Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad,
zapato cerrado y guantes.
- Manejo cuidadoso del material a utilizar.
- Reglamento general del laboratorio.
4) Disposición de residuos
Desechar cada reactivo en el recipiente correcto
5) Procedimiento
1. Colocar en 1 tubo de ensayo 1mL de agua, en otro 1mL de clara SIN diluir
y 1mL de la muestra problema.
2. Añadir 1 mL de reactivo de Millon a cada tubo.
3. Colocar en baño maría y caliente hasta observar un cambio de color. Si el
color de la muestra problema da igual al de la clara de huevo indica
presencia del aminoácido fenólico (melón-café).
V. Resultados
VI. Discusión
VII. Conclusiones
VIII. Anexos
IX. Bibliografía
Millon-fenólicos
Xantoporteca- tirosina
Acetato de plomo-azufrados
Sakaguchi- arginina
Ac glioxilico- triptofano
Práctica No. 8
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
La electroforesis de proteínas en geles con una matriz de poliacrilamida,
comúnmente denominada electroforesis en poliacrilamida (PAGE, 'polyacrilamide
gel electrophoresis') es sin duda una de las técnicas más ampliamente usada para
caracterizar mezclas complejas de proteínas. La electroforesis en poliacrilamida es
un método conveniente, rápido y económico a nivel de muestra pues se requieren
sólo cantidades del orden de microgramos de proteína.
Las proteínas presentan una carga eléctrica neta si se encuentran en un medio que
tenga un pH diferente al de su punto isoeléctrico y por eso tienen la propiedad de
desplazarse cuando se someten a un campo eléctrico. La velocidad de migración es
proporcional a la relación entre las cargas de la proteína y su masa. Cuanto mayor
carga por unidad de masa más rápida será la migración. Empleando geles de sílice
o de acetato de celulosa y aplicando las proteínas en una zona estrecha en torno a
los electrodos se pueden determinar diferencias de carga neta (carga total/masa)
entre proteínas. Este método se denomina electroforesis zonal. La matriz de
poliacrilamida no es un buen soporte para este método pues la migración de las
proteínas en su seno no sólo es proporcional a la carga neta sino también al tamaño
y forma de las proteínas. Una ventaja importante de los geles de poliacrilamida es
que son químicamente inertes, transparentes y estables en un rango amplio de
pHs, temperatura y fuerza iónica.
Como medio de soporte se puede usar (de más antiguo a más reciente): papel,
acetato de celulosa, agarosa, poliacrilamida y electroforesis capilar. La muestra
cuyas proteínas se quieren separar se inserta en un medio de soporte y se aplica
una diferencia de potencial durante un tiempo determinado para separar las
proteínas. Cada proteína migrará más o menos en función de su carga (que
también determina hacia qué polo se dirigirá la proteína, ánodo (-) o cátodo (+) y
su tamaño. A mayor carga y menor tamaño, más velocidad de migración.
III. Objetivo
• Obtener el conocimiento teórico y práctico de la técnica de electroforesis
de proteínas (SDS-PAGE).
• Realizar la preparación de geles para electroforesis.
• Realizar una cuantifica de proteínas por el método de Bradford para saber
la cantidad a utilizar en la electroforesis.
IV. Metodología
1) Material y Equipo
- Equipo para electroforesis
2) Reactivos y Soluciones
- Solución A Acrilamida (30% acrilamida, T, 2.67% C)
- Solución B Amortiguador para el gel inferior separador (1.5 M Tris-HCl pH
8.8)
- Solución C Amortiguador de gel superior o concentrador (o.5 M Tris-HCl
pH 6.8)
- Solución D SDS 10%
- Solución F Amortiguador de electrodo (de corrida) 5X pH8.3
- Solución E amortiguador de la muestra (Tris-HCl 0.05 M 10% SDS pH 6.8)
- PSA persulfato de amonio 10%
- Solución para teñir geles (azul brillante de coomassie R-250 0.1%)
- Metanol 40%
- Ácido acético 10%
- Etanol
3) Requerimientos de Seguridad
- Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad,
zapato cerrado y guantes.
- Manejo cuidadoso del material a utilizar.
- Reglamento general del laboratorio.
4) Disposición de Residuos
Desechar cada reactivo en el recipiente correcto.
5) Procedimiento
Preparación de soluciones
1. Lavar los vidrios con agua y jabón con las yemas de los dedos y secar con
aire. Limpiar los vidrios con solución amoniacal al 10% o con alcohol con
gasa con el objeto de quitar la grasa, ya que esta no permite polimerizar la
acrilamida.
2. Atemperar soluciones metiendo los frascos en un baño de agua.
3. Colocar el ensamblador en la cuneta de la torre con las pestañas hacia
arriba, tornillos hacia atrás; empujar con la placa de plástico los
separadores hasta que se encuentren en los extremos del ensamblado
totalmente verticales. Con el acrílico transparente presionar el ensamblado
y apretar los tornillos superiores. Verificar la alineación y apretar tornillos
inferiores.
4. Acomodar los ensambles en la torre. Presionar el acrílico del ensamble
sobre el hule hasta que se inserte el ensamble en la pestaña de la torre (45º
empuje hacia abajo y atrás).
5. Pesar el persulfato de amonio (la solución debe ser preparada fresca cada
vez). Hidratar 0.0100g en 100 microlitros aproximadamente (10%).
Preparar la solución del gel separador según la concentración requerida
(ver tabla: para 10 ml suficiente para 2 geles de 5x9 cm de un mm de
grosor), sin el SDS ni los catalizadores para desgasificar durante 5
minutos. Una vez desgasificado, añadir los catalizadores.
Gel resolvedor 7.5 10% 12% 12.5 % 15% Gel concentrador (4%)
Para vidrios de 1 %
mm
H2O (ml) 4.85 4.35 3.35 3.2 2.35 H2O (ml) 3.05
Solución B (ml) 2.5 2.5 2.5 2.5 2.5 Solución C (ml) 1.25
Solución A (ml) 2.5 3.0 4.0 4.15 5.0 Solución A (ml) 0.65
Desgasificar 5 minutos (quitar burbujas)
Solución D 100 100 100 100 100 Solución D 50
(microlitros) (microlitros)
TEMED 5 5 5 5 5 TEMED 5 ó10
(microlitros) (microlitros)
PSA 10% 50 50 50 50 50 PSA 10% 25
(microlitros) (microlitros)
6. Llenar el espacio de entre los vidrios hasta una altura de 2 cm antes del
extremo del vidrio pequeño. Con una jeringa Hamilton, cubrir con agua la
interfase para evitar la formación de meniscos (también puede utilizarse
alcohol isopropílico).
7. Esperar a que se complete la gelificación, aproximadamente, 30 minutos.
8. Secar el agua introduciendo un pedazo de papel filtro.
9. Preparar la solución del gel concentrador (4%) con las mismas
indicaciones para desgasificar. Aplicar la solución sobre el gel separador
ya formado casi hasta el borde. Introducir el peine según el grueso de los
separadores utilizados, así como la cantidad de pozos requerida. Aplicar
más solución hasta cubrir los bordes.
PARTE B. ELECTROFORESIS
V. Discusión
VI. Conclusiones
VII. Anexos
VIII. Bibliografía
Catálisis Enzimática
Práctica No. 9
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
Las enzimas son proteínas que se encargan de catalizar reacciones biológicas
específicas, actuando por reducción de energía de activación de las mismas
reacciones.
Las amilasas son enzimas que catalizan la hidrólisis de enlaces α-1,4 glucosídicos
de las moléculas de almidón y glucógeno. Dentro de las amilasas existen dos
grupos: α y β amilasas.
IV. Metodología
1) Material y Equipo
- 15 Tubos de ensaye de los más pequeños
- 1 gradilla
- 3 pipetas de 1 ml
- 3 pipetas de 5 ml
- Baño María
- Matraz 50 mL
- Vasos de precipitado de 100 mL
- Pipetas pasteur o goteros (uno para cada tubo)
2) Reactivos y soluciones.
- Almidón al 1% en agua o en regulador de fosfatos 0.02 M
- Solución de yodo (lugol)
- Amilasa salival (ptialina): esta la proveerá el alumno en el momento de la
práctica. Se obtendrá de la saliva. Se necesita fresca.
- Cloruro de sodio al 5%
- Amortiguador de fosfato 0.02 M de pH 7
- H2O2 0.05M en amortiguador de fosfato 0.02M de pH 7
- Agua destilada
- KCN 5x10-4
- Catalasa: el estudiante la proveerá en el momento de la práctica. Se obtendrá
de la sangre.
- KMnO4 0.05M
- H2SO4 6N
3) Requerimientos de seguridad
Bata, lentes, guantes y reglamento general.
4) Disposición de residuos
Desechar cada reactivo en el recipiente correcto.
5) Procedimiento.
Preparación de Reactivos
- Lugol: Pesar 1 g de KI y 500 mg de yodo y disolverlos en 100 mL de agua
destilada.
- Regulador de fosfatos 0.02 M pH 6.9: Pesar 7.12 g de Na2HPO4•12H2O y
aforar a 1000mL con agua destilada. Pesar 2.72 g de KH2PO4 y aforar a 1000
mL con agua destilada. Mezclar en proporción 6:4. Ajustar el pH si es
necesario. Ajustar las cantidades de los reactivos para el volumen que se
utilizará en la práctica.
PARTE A. AMILASA
Preparación de la amilasa:
4.
5. Pruebas:
1. Se prepara una serie de 7 tubos de ensayo debidamente etiquetados de
acuerdo a la tabla, utilizando 5 diluciones diferentes de enzima.
2. Antes de agregar la enzima y a intervalos de 1 minuto después de
adicionada, haga la prueba de gota del contenido de cada tubo con
solución diluida de yodo (lugol). Transcurridos 10 minutos, haga las
determinaciones cada 2 minutos, que las lecturas se parezcan al tubo
testigo.(ANTES DE AGREGAR LA ENZIMA RESUSPENDA LA
SOLUCIÓN DE ALMIDÓN, YA QUE ÉSTE SE ASIENTA EN EL VASO
DE PRECIPITADO).
3. Se anota el tiempo inicial y final de la digestión en cada tubo.
PARTE B. CATALASA
Preparación de la Catalasa:
1. Se utiliza como fuente de enzimas una disolución de sangre fresca de
1:1000. Se ponen 10 mL de agua destilada fría en un matraz de 50 mL
rodeado de hielo picado. Se recoge una muestra de sangre fresca capilar
del dedo, del orden de 10 lambda (10 µL), mediante la punción de una
lanceta estéril.
2. Se deja caer la sangre en el agua fría. Se toma agua con la pipeta varias
veces para asegurar que toda la sangre pasó al agua. Se agita el matraz
durante un minuto para tener una mezcla homogénea. La sangre diluida
se mantiene a temperatura baja todo el tiempo para evitar una
inactivación de calor.
3. Los reactivos se preparan a partir de la tabla
4. Se preparan los tubos de ensayo de 18 x 150. Todos los reactivos deben
encontrarse a temperatura de hielo fundente, y la reacción se lleva a cabo
a 0 °C. Después de añadir cada componente, se mezcla el contenido de los
tubos por movimientos de rotación.
5. El tubo 1 es un blanco de reactivo y representa la cantidad total de H 2O2
añadida en cada tubo. En este tubo se añaden 2 mL de H2SO4 6 N antes de
añadir la enzima; el ácido debe añadirse a ese tubo antes de iniciar las
reacciones en los demás tubos. Se calcula la cantidad de KMnO4 0.005M
que se necesita para que reaccione con 2 mL de H2O2 0.05. Si el tubo 1 no
da un valor vecino calculado, se descompuso la solución en peróxido y
debe prepararse otra nueva.
6. En los tubos 2 a 5, la reacción se detiene 5 minutos exactamente después
de empezar, por adición de 2 mL de H2SO4. Después de terminar la
reacción en el momento indicado, la mezcla de enzima inactivada se pasa
a un vaso de 50 mL.
7. El H2O2 que no fue descompuesto por la catalasa permanece estable en la
solución ácida durante media hora aproximadamente. Durante este
periodo se termina la titulación del peróxido con KMnO4 0.005 M. La
primera gota de permanganato en exceso respecto a la cantidad necesaria
para la oxidación del peróxido vuelve rosa la solución.
Número de tubo 1 2 3 4 5
Amortiguador de fosfatos 0.02 M (mL) 10 10 10 10 10
2 2 2 2 2
H2O2 0
.05 M en amortiguador de fosfato 0.02 M (mL)
Agua (mL) 1.0 1.0 1.0 0.5 0
KCN 5x10-4 M (mL) 0 0 0 0.5 1.0
Catalasa (mL) 0.5 0.5 0 0.5 0.5
Catalasa calentada (mL) 0 0 0.5 0 0
V. Resultados
PARTE A.
a.
b. Indique el tiempo necesario para que la reacción sea completa en cada
tubo.
c. Calcule las unidades de amilasa en cada tubo, definiendo una unidad de
amilasa como “Número de milímetros de solución de almidón 1% que
pueden ser hidrolizados en 30 minutos, por 1 mL de extracto puro,
condiciones de pH y temperatura a la que haya trabajado”.
d. Explique brevemente, ¿Cómo demostraría que la reacción fue completa?
PARTE B.
Para empezar, puesto que se utilizó una solución 0.05 M de H2O2 al iniciar el
experimento, existían en este momento 100 µmoles de H2O2 en cada tubo. Para los
cálculos, el testigo de tiempo 0 es el número de µmoles de H2O2 encontrados en el
tubo 1; si se produjo alguna reacción enzimática, se encontrará una cantidad de
H2O2 inferior a los 100 µmoles existentes al principio. La estequiometría de la
descomposición del H2O2 por el permanganato indica que por cada 2 moles de
MnO4- que se añaden se descomponen 5 moles de H2O2. El factor es 2.5. Para
calcular los µmoles restantes de H2O2 deben multiplicarse por 2.5 los µmoles de
MnO4- que se añadieron. Restando la cantidad de H2O2 que no fue atacado de la
cantidad de H2O2 existente al principio (tubo 1) se pueden conocer los µmoles de
H2O2 descompuestos. Como se trabajó con una disolución de sangre de 1:1000, y el
ensayo se realizó con una muestra de 0.5 mL, los µmoles de H2O2 descompuestos
por la catalasa deben multiplicarse por 2000 para obtener la actividad específica de
catalasa correspondiente a la definición antes mencionada.
Práctica No. 10
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
Los carbohidratos son las biomoléculas más abundantes en la naturaleza. Se
conforman por monosacáridos (unidades básicas), oligosacáridos (oligómeros) y
polisacáridos.
III. Objetivos
Comprender e identificar enlaces glucosídicos así como las reacciones que pueden
llevarse en los carbohidratos dependiendo de su conformación.
IV. Metodologia
1) Material y equipo
- Tubos de ensaye
- Gradillas
- Perilla
- Baño maría
- Termómetro
- Pipetas 1ml
- Pipetas 2 ml
- Gotero
2) Reactivos y soluciones
- Glucosa al 1%
- Sacarosa al 1%
- Furfural al 1%
- Arabinosa al 1%
- Almidón al 1%
- Maltosa al 1 %
- Lugol
- Reactivo de Molish al 1%
- Reactivo de Fehling, sol. A y B
- Reactivo de Tollens
- Ácido sulfúrico concentrado
- Reactivo de Seliwanoff
3) Requerimientos de seguridad
Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad, zapato
cerrado y guantes.
4) Disposición de residuos
Desechar cada reactivo en el recipiente correcto.
5) Procedimiento
Preparación de soluciones y reactivos
- Glucosa al 1%: Disolver 1g de glucosa en 100mL de agua destilada.
Refrigerar.
- Sacarosa al 1%: Disolver 1g de sacarosa en 100mL de agua destilada.
Refrigerar.
- Fructosa al 1%: Disolver 1g de fructosa en 100mL de agua destilada.
Refrigerar.
- Arabinosa al 1%: Disolver 1g de arabinosa en 100mL de agua destilada.
Refrigerar.
- Furfural al 0.01%: Tomar 0.01mL (10 microlitros) de furfural y disolver en
100 mL de agua destilada.
- Solución de almidón al 1%: Pesar 1g de almidón y disolver en 100mL de
agua caliente.
- Maltosa al 1%: Pesar 1g de maltosa y disolver en 100mL de agua destilada.
- Lugol: Pesar 1g de yodo metálico, 2g de KI (2 partes de KI por una de yodo).
Mézclese en un mortero y agregue agua destilada poco a poco hasta
disolución total. Aforar a 300mL con agua destilada y conservar en un frasco
ámbar.
- Reactivo de Molish: Disolver 5g de α-naftol en 100mL de alcohol de 96°.
- Reactivo de Fehling: Solución A. Disolver 34.65g de sulfato de cobre en
300mL de agua destilada. Aforar a 500mL con agua y conservar en frasco
con tapón de hule.
- Solución B. Disolver 125g de KOH y 173g de tartrato de sodio y potasio.
Aforar con agua destilada a 500mL.
- Reactivo de Tollens: Mezclar 10mL de HCl concentrado con 2mL de
floroglucina al 2% y aforar con agua destilada hasta 18mL.
- Reactivo de Seliwanoff: Disolver 0.05g de resorcinol en 100mL de HCl
- diluido 1:3.
Pruebas de identificación
PARTE A. REACCIÓN DE MOLISH
14. En un tubo de ensayo (para cada muestra marcada con * en la tabla
1) coloque 1mL de la solución a probar y 2 gotas del reactivo de
Molish
15. Mezclar bien y dejar resbalar por la pared 1 mL de ácido sulfúrico
concentrado, de tal manera que se forme una capa bajo la solución
del carbohidrato. En la interfase aparecerá un anillo de color violeta
rojizo lo cual indica la presencia de carbohidratos.
Solubilidad:
1. Ensayar la solubilidad en agua fría y caliente tomando 50mg de almidón y
disolviendo en 2 o 3mL de agua destilada.
2. Repetir esta prueba con sacarosa, glucosa y fructuosa.
Reacción del yodo:
V. Resultados
a. Tabla 1. Resultados de las pruebas de identificación en carbohidratos.
Mollish Tollens Seliwanoff Fehling Solubilidad Yodo
(carboh) (pentosas) (cetosas) (Azúcar Frío (polisacarid)
Reduct) Caliente
Blanco H2O * * * * * * *
Glucosa * * * * * * *
(aldohexosa)
Arabinosa * * * *
Maltosa * * * * *
Sacarosa * * * * * *
Fructosa * * * * * *
Furfural * * *
Almidón * * * * * *
Interpretación
CÁLCULOS:
La cantidad indicada a continuación para preparar cada uno de los reactivos está
considerada para un solo equipo, por lo tanto las cantidades mostradas se tienen
que multiplicar por el número total de equipos, y deben considerar un equipo
extra por lo del pipeteo.
VI. Discusion
VII. Conclusion
VIII. Anexos
IX. Bibliografía
Extracción y separación de lípidos totales de tejidos animales Práctica
No. 11
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
Los lípidos son moléculas orgánicas que presentan funciones de reserva de
energía, estructura celular, biocatalizadores y como medio de transporte. Los
lípidos se pueden dividir en saponificables, estos en simples (acilgliceridos y
céridos) y en complejos (fosfolípidos y glucolípidos), y en insaponificables
(terpenos, esteroides, prostaglandinas).
Los lípidos son insolubles en agua y menos densos que ella. Se disuelven bien en
disolventes no polares, tales como el éter sulfúrico, sulfuro de carbono, benceno,
cloroformo y en los derivados líquidos del petróleo. Se encuentran lípidos tanto en
vegetales como en los animales. Muchos vegetales acumulan considerables
cantidades de lípidos en los frutos y semillas. Los animales tienen grasa en las
diferentes partes de su cuerpo, especialmente entre la piel y los músculos, en la
medula de los huesos y alrededor de las vísceras.
III. Objetivo
• Realizar la identificación y cuantificación de lípidos en los tejidos
animales.
• Determinación del contenido graso de una muestra de leche en polvo
mediante extracción solido- liquido (extracción Soxhlet).
IV. Metodología
1) Material y equipo
- 2 Vaso de precipitado de 50 mL
- Embudo de vidrio
- Tubos de ensaye
- Mortero
- Termómetro
- Plato caliente
- Varilla de vidrio
- Papel filtro
- Equipo de extracción de Soxhlet (MICROKIT)
- Bomba recirculadora
- Mangueras
- Pipetas
2) Reactivos y Soluciones
- ¼ Yema de huevo (alcanza para 4 equipos)
- Éter de petróleo
- Alcohol
- Acetona
- Hígado animal (1g)
- Éter etílico
- Sulfato sódico anhidro (2g)
- Muestra de leche en polvo a analizar (comprar leche nido u otra marca no
descremada, bolsa pequeña para todos los equipos)
3) Requerimientos de Seguridad
Equipo de seguridad completo: bata de algodón, lentes de seguridad, zapato
cerrado y guantes.
4) Disposición de residuos
Desechar cada reactivo en el recipiente correcto.
5) Procedimiento
PARTE A. EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE LECITINA Y CEFALINA DE
HUEVO
1. Separe 1/4 yema de huevo en un vaso de precipitados o en un matraz
Erlenmeyer de 50 mL.
2. Agregue 10 mL de éter etílico
3. a la yema y agite con una varilla de vidrio para homogenizar bien.
4. Agregue lentamente y sin dejar de agitar 10mL de acetona. Se observara
que la acetona provoca la precipitación de los fosfolípidos, en tanto que las
grasas y el colesterol permanecen disueltos.
5. Dejar en reposo unos minutos y filtrar.
6. El precipitado que contiene lecitina y cefalina (en el papel filtro) se lava
con 5 mL de alcohol bien frio, recibiendo el filtrado en un tubo limpio y
seco.
7. La lecitina es más soluble en el alcohol frío por lo tanto queda en el
filtrado. En el papel filtro únicamente queda cefalina. Para obtener la
lecitina, evapore el alcohol lentamente en el plato caliente.
8. Deje secar los dos precipitados y péselos (pesar en un inicio el papel filtro
y el vaso).
1. Pesar 1gr de la leche en polvo. Hacer con el papel filtro un paquete de tal
forma que la muestra quede segura. Colocar el paquete en la cámara de
extracción.
2. Pesar el balón vacío, en el cual posteriormente se depositara la grasa,
anote el peso. Fije el balón a la parte inferior del Soxhlet en forma segura,
con la finalidad de evitar la fuga del éter etílico.
3. Por la parte superior del Soxhlet vierta el éter etílico o de petróleo hasta
que por diferencia de presión baje a través del cuello de Soxhlet al balón,
luego añada éter etílico hasta cubrir el paquete. Fije bien el Soxhlet a la
parte inferior del refrigerante.
4. Empezar la extracción, extraer por 60 min.
5. Transcurrido el tiempo desmontar el aparato y secar el solvente que quedo
en el matraz y pesar para sacar por diferencia el peso de los lípidos.
6. Evite que la grasa depositada en el balón se queme.
V. Resultados
16. Cálculos
El porcentaje en grasa G (%) se calcula según la siguiente expresión:
𝑥 𝑔 𝑑𝑒 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
𝐺(%) = 𝑥100
1𝑔
Práctica No. 12
- Realizó:
- Revisó:
- Autorizó:
- Fecha de Realización:
- Fecha de Entrega:
I. Introducción
Los lípidos, son un grupo heterogéneo de compuestos, de naturaleza antipática, es
decir que contienen regiones hidrofóbicas y regiones hidrofílicas. La mayor parte
de los lípidos abundantes en la naturaleza (triacilgliceroles), están formados por
ácidos grasos de cadenas hidrocarbonadas pares, saturados o insaturados. Los
lípidos llevan a cabo múltiples funciones en el organismo, como: almacenamiento
de energía, de transporte, cumplir funciones hormonales, actuar como vitaminas,
formar parte de las membranas celulares confiriéndoles la propiedad de
permeabilidad selectiva, al permitir el paso o no de algunas sustancias y en
determinada dirección, así como la conducción nerviosa y el transporte activo
como la bomba de Na+/K+. A diferencia de los carbohidratos, proteínas y ácidos
nucleicos, no forman polímeros, son más bien moléculas pequeñas que presentan
una fuerte tendencia a asociarse mediante fuerzas no covalentes. Algunas de las
propiedades de los lípidos pueden ser usadas para su reconocimiento, ya que
pueden reaccionar con una variedad de agentes originándose productos
coloreados, desprendimiento de vapores, formación de jabones, entre otros.
IV. Metodología
1) Material y Equipo
- Tubos de ensaye
- Gradilla
- Pipetas graduadas de 10ml o de 5ml
- Pinzas para tubos de ensaye
- Vaso de precipitado para baño María
- Vaso de precipitados para calentar agua destilada
- Varilla de agitación
- Gotero
- Cápsula de porcelana
- Mechero bunsen
- Tripié
- Tela de asbesto
- Plato caliente
2) Reactivos y soluciones
- Éter
- Cloroformo
- KHSO4
- H2SO4
- KOH
- Glicerina
- Aceites vegetales distintos por equipo.
- Reactivo de Hübl
- Anhídrido acético
- Yodo
- Cloruro de mercurio
- Alcohol etílico al 95%
ACEITES
Oliva, soya, girasol, canola, coco, almendras, ricino, mantequilla. Traer suficiente para
todas las pruebas y para todos los equipos.
3) Requerimientos de seguridad
Equipo de seguridad completo (bata de algodón, lentes de seguridad, zapato
cerrado y guantes).
4) Disposición de residuos
Desechar cada reactivo en el recipiente correcto.
5) Procedimiento
Las pruebas de solubilidad, yodo y acroleína se realizarán con todos los aceites que
se hayan llevado.
1. A los tubos usados para la prueba de solubilidad con éter, agregar 1 gota
del reactivo de Hübl, mezclar y esperar 5 min para observar cambios en la
coloración.
6.
Nota: Para preparar el reactivo de Hübl disolver 2.5g de yodo y 3g de cloruro de
mercurio (HgCl2) en 100mL de etanol al 95%. Ajustar la cantidad a preparar a lo
que realmente se necesite en la práctica.
Colocar 1ml de aceite en un tubo de ensayo para cada muestra, agregar 0.5 g de
KHSO4 y calentar fuertemente. Observar desprendimiento de vapores blancos e
irritantes y olor desagradable (prueba positiva).
V. Resultados.
a. Tabla 1. Resultados de las pruebas de identificación de lípidos.
Muestra
Agua
Solubilidad Éter
cloroformo
P. acroleína
P. Lieberman
P. yodo
P. Saponificación
VI. Discusión
VII. Conclusión
VIII. Anexos
IX. Bibliografía