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El principio de las tres erres: reemplazo, reducción y refinamiento

Chapter · January 2016

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2 authors:

Marcos Pérez-López Antonio Gonzalez

Universidad de Extremadura Universidad de Extremadura
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 MANUAL BÁSICO PARA USUARIOS DE
ANIMALES EN LA EXPERIMENTACIÓN EN
CIENCIAS BIOMÉDICAS

   

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© Los autores.

© Editores: Dr. Antonio González Mateos, Profesor

Titular de Universidad, Departamento de
Fisiología; Dr. Marcos Pérez López, Profesor
Titular de Universidad, Departamento de Sanidad
Animal, Unidad de Toxicología.
Facultad de Veterinaria, Universidad de
Extremadura. 10003 - Cáceres, España.
Primera edición, 2015.

Impresión y encuadernación: Librería Técnica

Universitaria Figueroa-2. Avenida Virgen de la
Montaña, 9, - Bajo. 10002 – Cáceres (España).

Cualquier forma de reproducción, distribución,

comunicación pública o transformación de esta
obra sólo puede ser realizada con la autorización de
sus titulares, salvo excepción prevista por la ley.

ISBN: 978-84-606-8032-1.

 

2 
 
CONTENIDOS
 
TEMA 1. EL PRINCIPIO DE LAS TRES ERRES: REEMPLAZO,
REDUCCIÓN Y REFINAMIENTO …………………………… 25
1. Generalidades …………………………………………………… 25
2. ¿Por qué se usan y han usado animales en la
experimentación? …………………………………………………… 27
3. Reemplazo …………………………………………………… 29
4. Reducción …………………………………………………………… 31
5. Refinamiento …………………………………………………… 34
6. Hacia una investigación más… ¿sencilla? …………………… 36
7. Conflictos entre las 3R …………………………………………… 38
8. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 39

TEMA 2. MÉTODOS ALTERNATIVOS Y COMPLEMENTARIOS EN

EXPERIMENTACIÓN ANIMAL …………………………… 41
1. Experimentación animal y alternativas …………………… 41
2. ¿Qué son los métodos alternativos y complementarios? …… 42
3. ¿Qué alternativas existen en la práctica? …………………… 43
3.1. Evitar la repetición innecesaria de experimentos
in vivo e in vitro …………………………………………………… 43
3.2. Mejoras en el diseño de estudios animales …………… 44
3.3. Modelos matemáticos e informáticos de predicción …… 46
3.4. Estudios en humanos ……………………………….…… 47
3.5. Uso de organismos inferiores no protegidos …………… 48
3.6. Vertebrados en etapas iniciales de desarrollo …………… 50
3.7. Modelos en la enseñanza y formación …………………… 50
3.8. Métodos In vitro …………………………………………… 51
5 
 
4. Consideraciones finales …………………………………… 57
5. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 58

Tema 3. ESPECIES ANIMALES DE USO EN LA INVESTIGACIÓN

CIENTÍFICA EN EL LABORATORIO. MODIFICACIONES
GENÉTICAS …………………………………………………… 61
1. Introducción …………………………………………………… 61
2. Especies animales más utilizadas …………………………… 62
2.1. Rata …………………………………………………………… 63
2.1.1. Taxonomía y generalidades …………………………… 63
2.1.2. Peculiaridades anatómicas y fisiológicas …………… 64
2.1.3. Comportamiento …………………………………………… 67
2.1.4. Estabulación …………………………………………………… 69
2.1.5. Nutrición …………………………………………………… 70
2.2. Ratón …………………………………………………………… 71
2.2.1. Taxonomía y generalidades …………………………… 71
2.2.2. Peculiaridades anatómicas y fisiológicas …………… 73
2.2.3. Comportamiento …………………………………………… 75
2.2.4. Estabulación …………………………………………………… 76
2.2.5. Nutrición …………………………………………………… 76
2.3. Cobaya …………………………………………………………… 77
2.3.1. Taxonomía y generalidades …………………………… 77
2.3.2. Peculiaridades anatómicas y fisiológicas …………… 78
2.3.3. Comportamiento …………………………………………… 83
2.3.4. Estabulación …………………………………………………… 84
2.3.5. Nutrición …………………………………………………… 86
2.4. Hámster …………………………………………………… 86
2.4.1 Taxonomía y generalidades …………………………… 86
6 
 
2.4.2. Peculiaridades anatómicas y fisiológicas …………… 87
2.4.3. Comportamiento …………………………………………… 90
2.4.4. Estabulación …………………………………………………… 91
2.4.5. Nutrición …………………………………………………… 92
3. Modificaciones genéticas …………………………………… 93
3.1. Líneas consanguíneas …………………………………… 95
3.2. Híbridos F1 …………………………………………………… 96
3.3 Roedores no consanguíneos (exocriados u outbred
stocks) …………………………………………………………… 98
4. Mutaciones …………………………………………………… 100
5. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 102

TEMA 4. ASPECTOS FISIOLÓGICOS DE LOS RITMOS

BIOLÓGICOS Y LAS ESPECIES ANIMALES
DE LABORATORIO …………………………………………… 105
1. Factores que pueden afectar a los resultados
experimentales …………………………………………………… 105
1.1. Factores ambientales …………………………………… 105
1.2. Factores químicos …………………………………………… 107
1.3. Factores microbiológicos …………………………………… 107
1.4. Factores fisiológicos …………………………………………… 107
1.4.1. Determinantes biológicos y funciones metabólicas …… 107
1.4.2. Ritmos biológicos …………………………………………… 108
2. Cronobiología y ritmos biológicos …………………………… 110
2.1. Ritmos circadianos …………………………………………… 113
2.1.1. Características de los ritmos circadianos …………… 114
2.1.2. Estructura del sistema circadiano …………………… 117
3. Ritmo circadiano del indol melatonina. Efectos
7 
 
fisiológicos …………………………………………………………… 119
3.1. Propiedades inmunoestimuladoras …………………… 121
3.2. Actividad cronobiológica …………………………………… 121
3.3. Actividad antioxidante …………………………………… 122
4. Relevancia del triptófano y serotonina en la regulación de las
funciones fisiológicas …………………………………………… 122
5. ¿Qué sucede durante el envejecimiento? …………………… 123
6. Consideraciones metodológicas en experimentación
animal …………………………………………………………… 125
Bibliografía y otros recursos …………………………………… 126

TEMA 5. MANTENIMIENTO, MANEJO/ COMPORTAMIENTO Y

EUTANASIA DE LOS ANIMALES DE LABORATORIO …… 131
1. Beneficios de un buen manejo y adiestramiento …………… 132
2. Familiarización y manejo …………………………………… 134
2.1. Familiarizar al animal con su cuidador …………………… 134
2.2. Manejo …………………………………………………………… 135
2.3. Sujeción …………………………………………………………… 136
3. Manejo de los animales de experimentación …………… 136
3.1. Manejo de la rata …………………………………………… 136
3.2. Manejo del ratón………………………………………………… 137
3.3. Manejo del cobaya …………………………………………… 138
3.4. Manejo del hámster …………………………………………… 139
3.5. Manejo del conejo …………………………………………… 140
3.6. Manejo del perro …………………………………………… 140
3.7. Manejo de ovejas y cabras …………………………………… 141
3.8. Manejo del cerdo …………………………………………… 142
4. Manejo de los animales más habituales …………………… 143
8 
 
4.1. Estabulación …………………………………………………… 143
4.2. Dieta (Comida y bebida) …………………………………… 143
4.3. Temperatura y humedad relativa …………………………… 144
4.4. Ruido – Sonido …………………………………………… 145
4.5. Luz e iluminación …………………………………………… 145
5. Eutanasia…………………………………………………………… 146
6. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 149

TEMA 6. ASPECTOS RELEVANTES EN LA NUTRICION Y LA

REPRODUCCION DE LOS ANIMALES UTILIZADOS EN LA
EXPERIMENTACION CIENTIFICA …………………………… 151
1. Nutrición y requerimientos nutricionales …………………… 151
1.1. Particularidades del aparato digestivo y necesidades nutricionales
de los animales de laboratorio …………………………………… 151
1.2. Necesidades energéticas …………………………………… 154
1.3. Necesidades de prótidos …………………………………… 155
1.4. Necesidades vitamínicas …………………………………… 156
1.5. Necesidades minerales …………………………………… 157
1.6. Alimentación y variabilidad del reactivo animal …… 158
1.6.1. Inmunología y Bacteriología …………………………… 159
1.6.2. Toxicología y Cancerología …………………………… 161
1.6.3. Teratología …………………………………………………… 163
2. Comportamiento reproductivo de los animales más habitualmente
utilizados en experimentación …………………………………… 163
2.1. Comportamiento reproductivo de la rata …………………… 163
2.2. Comportamiento reproductivo del ratón …………………… 166
2.3. Comportamiento reproductivo del cobaya …………… 168
2.4. Comportamiento reproductivo del hámster …………… 171
9 
 
3. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 173

TEMA 7. ASPECTOS INFECCIOSOS DE LOS ANIMALES DE

LABORATORIO …………………………………………………… 175
1. Introducción …………………………………………………… 175
2. Clasificación de los animales de laboratorio de acuerdo al estatus
sanitario …………………………………………………………… 176
2.1 Animales axénicos …………………………………………… 176
2.2. Animales gnotobióticos (gnotoaxénicos) …………………… 176
2.3. Animales heteroxénicos …………………………………… 177
2.4. Animales holoxénicos o convencional …………………… 177
2.5. Animales silvestres …………………………………………… 177
3. Principales patologías infecciosas de los animales de
laboratorio …………………………………………………………… 178
4. Control microbiológico de los animales de laboratorio …… 184
4.1. Elección de los agentes infecciosos a controlar …………… 187
4.2. Frecuencia de los controles y tamaño de la muestra …… 191
4.3. Pruebas y métodos diagnósticos …………………………… 193
4.4. Resultados …………………………………………………… 196
5. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 200

TEMA 8. BIENESTAR ANIMAL. RECONOCIMIENTO DEL

DOLOR, SUFRIMIENTO Y ANGUSTIA. PUNTO FINAL
HUMANITARIO …………………………………………………… 203
1. Bienestar animal …………………………………………… 203
1.1. Perspectiva histórica …………………………………………… 205
1.2. Las cinco libertades (5L) …………………………………… 211
1.3. Estrés y distrés …………………………………………… 211
10 
 
1.4. Beneficios del bienestar animal …………………………… 213
1.4.1. Beneficios éticos …………………………………………… 213
1.4.2. Beneficios científicos …………………………………… 214
1.5. Condicionantes del bienestar animal …………………… 215
2. Reconocimiento del dolor, sufrimiento y angustia …… 217
2.1. Clasificación de la severidad de los procedimientos …… 219
2.1.1. Criterios de clasificación …………………………………… 221
2.2. Ejemplos de procedimientos …………………………… 223
3. Punto final humanitario …………………………………… 233
4. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 238

TEMA 9. ADMINISTRACIÓN DE SUSTANCIAS EN ANIMALES DE

EXPERIMENTACIÓN …………………………………………… 241
1. Introducción …………………………………………………… 241
2. Vías de administración…………………………………………… 242
2.1. Vía entérica …………………………………………………… 242
2.2. Vía parenteral …………………………………………………… 244
2.3. Vía intracerebral …………………………………………… 253
2.4. Vía intratorácica …………………………………………… 253
2.5. Vía intranasal …………………………………………………… 254
2.6. Vía intravaginal …………………………………………… 254
2.7. Vía intra-articular …………………………………………… 255
2.8. Minibombas osmóticas …………………………………… 255
3. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 256

TEMA 10. RECOGIDA DE MUESTRAS EN ANIMALES DE

EXPERIMENTACIÓN …………………………………………… 261
1. Introducción …………………………………………………… 261
11 
 
2. Toma de muestras en animales vivos …………………… 263
2.1. Sangre …………………………………………………………… 263
2.2. Heces …………………………………………………………… 264
2.3. Orina …………………………………………………………… 265
2.4. Leche …………………………………………………………… 265
2.5. Exudados oro-nasales …………………………………… 265
2.6. Exudados traqueo-bronquiales …………………………… 266
2.7. Exudados del tracto reproductivo y semen …………… 266
2.8. Secreciones y líquidos corporales …………………………… 267
2.9. Raspados y biopsias …………………………………………… 268
3. Toma de muestras durante exámenes post mórtem …… 268
4. Toma de muestras ambientales …………………………… 270
5. Información necesaria para el envío de muestras …………… 271
6. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 275

TEMA 11. INTRODUCCIÓN AL DISEÑO DE EXPERIMENTOS Y

ANÁLISIS DE DATOS …………………………………………… 277
1. Introducción …………………………………………………… 277
1.1. Tipos de estudio …………………………………………… 277
1.2. Ensayos clínicos …………………………………………… 284
1.3. El grupo control …………………………………………… 286
1.4. Asignación de los animales a los grupos de
tratamiento …………………………………………………………… 287
1.5. Métodos de aleatorización …………………………………… 290
1.6. Evitar sesgo en el procedimiento de evaluación …………… 294
1.7. Incrementando la precisión de la estimación …………… 296
1.8. Etapas en el diseño de experimentos …………………… 300
2. Comparación de dos tratamientos …………………………… 302
12 
 
2.1. Comparación de proporciones y asociación entre variables
categóricas …………………………………………………………… 303
2.2. Prueba para igualdad de varianzas …………………… 306
2.3. Comparación de dos medias de muestras
independientes …………………………………………………… 308
2.4. Comparación de dos medias de muestras
relacionadas …………………………………………………………… 311
3. Experimentos con un solo factor – Análisis de varianza …… 314
3.1. Diseños completamente al azar (DCA) …………………… 316
3.2. Anova para el DCA …………………………………………… 318
3.3. Comparaciones múltiples post hoc …………………… 321
3.4. Tamaño de muestra …………………………………………… 322
3.5. Profundización en la verificación de los supuestos del
modelo DCA …………………………………………………………… 323
3.5.1. Residuales del DCA …………………………………… 325
3.5.2. Independencia …………………………………………… 326
3.5.3. Normalidad …………………………………………………… 327
3.5.4. Varianza constante …………………………………………… 328
4. Regresión logística …………………………………………… 341
4.1. Regresión logística simple …………………………………… 342
4.2. Odds y odds ratio …………………………………………… 343
4.3. Inferencia del modelo de regresión logística simple …… 345
4.3.1. Contraste de hipótesis …………………………………… 345
4.3.2. Intervalos de confianza …………………………………… 347
4.4. Variables predictoras …………………………………… 349
4.4.1. Variables predictoras categóricas …………………… 349
4.4.2. Variables predictoras contínuas …………………………… 350
4.5. Regresión logística múltiple …………………………… 350
13 
 
4.6. Estrategias para la selección de modelos …………………… 354
5. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 370

TEMA 12. ANESTESIA, ANALGESIA Y PRINCIPIOS BÁSICOS DE

CIRUGÍA. CUIDADOS PRE Y POSTOPERATORIOS …… 373
1. Cuidados preoperatorios …………………………………… 373
1.1. Periodo de aclimatación …………………………………… 373
1.2. Ayuno preoperatorio …………………………………………… 373
1.3. Valoración preanestésica …………………………………… 374
2. Principios básicos de cirugía …………………………………… 375
2.1. Elección de la técnica correcta …………………………… 375
2.2. Elección del material adecuado …………………………… 376
2.3. Preparación del animal para la cirugía …………………… 376
2.4. Preparación del cirujano …………………………………… 377
2.5. Fluidoterapia …………………………………………………… 378
2.6. Mantenimiento de la temperatura corporal …………… 378
2.7. Principios quirúrgicos …………………………………… 379
2.8. Técnicas de sutura más habituales …………………… 379
2.9. Técnicas quirúrgicas más habituales …………………… 381
3. Anestesia …………………………………………………………… 384
3.1. Anestesia general …………………………………………… 385
3.1.1. Preanestesia …………………………………………………… 385
3.1.2. Inducción …………………………………………………… 389
3.1.3. Mantenimiento anestésico …………………………… 390
3.2. Bloqueantes neuromusculares …………………………… 394
3.3. Anestesia locorregional …………………………………… 395
3.4. Monitorización …………………………………………… 395
4. Cuidados postoperatorios …………………………………… 396
14 
 
4.1. Antibioterapia …………………………………………………… 397
4.2. Analgesia …………………………………………………… 398
5. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 402

TEMA 13. ZOONOSIS Y PATÓGENOS PELIGROSOS …… 403

1. Principios generales y conceptos …………………………… 403
2. Principales zoonosis …………………………………………… 407
2.1. Zoonosis de origen bacteriano …………………………… 408
2.2. Zoonosis de origen vírico …………………………………… 411
2.3. Zoonosis de origen fúngico …………………………………… 413
2.4. Zoonosis de origen parasitario …………………………… 413
2.4.1. Protozoos …………………………………………………… 413
2.4.2. Trematodos …………………………………………………… 414
2.4.3. Cestodos …………………………………………………… 415
2.4.4. Nematodos …………………………………………………… 415
2.4.5. Artrópodos …………………………………………………… 416
2.5. Zoonosis de origen priónico …………………………………… 417
3. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 417

TEMA 14. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO …… 421

1. Principios generales y conceptos …………………………… 421
2. Clasificación de microorganismos en grupos de riesgo …… 424
3. Clasificación de los laboratorios …………………………… 425
3.1 Laboratorio básico - nivel de bioseguridad 1 …………… 428
3.2 Laboratorio básico – nivel de bioseguridad 2 …………… 431
3.3 Laboratorio de contención – nivel de bioseguridad 3 …… 433
3.4 Laboratorio de contención máxima – nivel de
bioseguridad 4 …………………………………………………… 437
15 
 
4. Sistemas de contención primaria …………………………… 440
4.1 Cabinas de seguridad biológica (CSB) …………………… 440
4.2 Equipos de seguridad …………………………………………… 444
5. Transporte de sustancias peligrosas …………………… 446
6. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 448

TEMA 15. SEGURIDAD Y SALUD OCUPACIONAL. PREVENCIÓN

DE RIESGOS LABORALES …………………………………… 451
1. Seguridad y salud ocupacional …………………………… 451
2. Enfermedades profesionales …………………………………… 455
3. Riesgos químicos …………………………………………… 457
3.1. Clasificación de los agentes químicos …………………… 457
3.2. Evaluación de la exposición a agentes químicos …… 462
4. Riesgos biológicos …………………………………………… 464
4.1. Vías de entrada …………………………………………… 467
4.2. Fuentes de contaminación …………………………………… 467
4.3. Clasificación de los agentes biológicos …………………… 470
4.4. Medidas de control …………………………………………… 472
4.5. Principio de precaución universal …………………………… 475
5. Alergias …………………………………………………………… 477
5.1. Prevención …………………………………………………… 481
6. Riesgos psicosociales …………………………………………… 483
7. Vigilancia de la salud de trabajadores …………………… 485
8. Gestión de residuos …………………………………………… 493
8.1. Obligaciones de los productores de residuos …………… 497
8.2. Manipulación, transporte y almacenamiento de los
residuos …………………………………………………………… 500
8.3. Retirada de cadáveres …………………………………… 501
16 
 
9. Primeros auxilios …………………………………………… 503
10. Bibliografía y otros recursos …………………………………… 507

17 
 
TEMA 1. EL PRINCIPIO DE LAS TRES ERRES:
REEMPLAZO, REDUCCIÓN Y REFINAMIENTO

Dr. Marcos Pérez López, Unidad de Toxicología, Facultad de

Veterinaria. Universidad de Extremadura. 10003 - Cáceres, España

Dr. Antonio González Mateos. Departamento de Fisiología, Facultad de

Veterinaria, Universidad de Extremadura. 10003 - Cáceres, España

1. GENERALIDADES. animales tengan que sufrir

miedo, angustia o incluso dolor.
El tema de la experimentación
Por tanto, esta situación lleva al
con animales en el marco de la
público en general y al
investigación enfrenta al público
investigador en particular a una
en general con un importante
serie de preguntas: ¿la
dilema ético. Por un lado,
investigación requiere
muchas personas apoyarán sin
realmente tantos animales como
dudar la realización de
se usan?, ¿puede la
investigaciones básicas, el
experimentación con animales
desarrollo de medicamentos
realizarse de una manera tal
eficaces y los estudios para
que los animales no sientan
garantizar la seguridad de los
angustia o dolor?, o lo que es
productos químicos, sin
más “radical”… ¿puede llevarse
confrontarse siquiera a un
a cabo esa investigación sin
pequeño dilema moral frente al
recurrir al empleo de los
empleo de animales. Por otro
animales? Estas son
lado, sin embargo, en general
exactamente las tres preguntas
nadie quiere que estas
que, tras plantearse en los foros
actividades impliquen que los
25 
 
 studies in experimental Pharmacol (2012) 63(1): 140-
animals: role in the risk 154.
assessment of chemicals under
Pardo, A. Ética de la
the new European Chemicals
experimentación animal.
Legislation (REACH). Arch
Directrices legales y éticas
Toxicol (2008) 82: 211-236.
contemporáneas. Cuad Bioét
Madden, J.C., Hewitt, M., (2005) XVI: 393-417.
Przybylak, K., Vandebriel, R.J.,
Roi, A.J., Grune, B. The
Piersma, A.H., Cronin, M.T.D.
ECVAM Search Guide- Good
Strategies for the optimisation
Search Practice on Animal
of in vivo experiments in
Alternatives, European Union,
accordance with the 3Rs
2011.
philosophy. Regul Toxicol

40 
 

V i e w p u b l i c a t i o n s t a t s