TITULO EN ESPAÑOL

TITULO EN INGLES

Laura Muñoz Muñoz1* Dayana Barreto Arenas1 Yina Fernanda Patrana Salgado1

RESUMEN:

Se efectuó el análisis de un microorganismo, que en el caso particular fueron las bacterias. Para este
procedimiento se necesitaron de varias sesiones de laboratorio, las cuales incluían un aislamiento
de microorganismos, caracterización de los mismos, elaborar un medio de cultivo y finalmente un
control de crecimiento. Este proceso de control, estudio y observación de microorganismos se
implementó con el fin de identificar la existencia de microorganismos en determinado medio de
cultivo, identificar las colonias según su morfología y evaluar el crecimiento de los
microorganismos en el medio de cultivo preparado.

falta

SUMMARY:

The analysis of a microorganism was carried out, which in the particular case were bacteria. For this
procedure, several laboratory sessions were needed, which included isolation of microorganisms,
characterization of the same, elaboration of a culture medium and finally growth control. This
process of control, study and observation of microorganisms was implemented in order to identify
the existence of microorganisms in a particular culture medium, identify the colonies according to
their morphology and evaluate the growth of the microorganisms in the prepared culture medium.

Palabras clave: Keywords:

-Bacterias -Bacteria
-Colonia -Colony
-Microorganismos -Microorganisms
-Medios de cultivo -Multies of culture
-Morfologia -Morphology

1
Departamento de Ingeniería Química, Facultad de Ingeniería, Universidad de Antioquia, Medellín,
Colombia
*Autor correspondiente
INTRODUCCIÓN:
Se pretende con el contenido presentado a
continuación, llevar a cabo el desarrollo de un
proceso de laboratorio, en el cual se requirió
de semanas de procedimiento, control,
observación y aprendizaje, en torno a un solo
centro el común, “el análisis de un
microorganismo”, que en nuestro caso en
particular se trata de las bacterias.
El proceso se desarrolló durante un tiempo de
aproximadamente un mes, el cual constó de
cuatro sesiones de práctica en el laboratorio,
incluyendo además de las visitas de control
de crecimiento del microorganismo que se
realizaron durante día seguidos de la semana
final. Las sesiones ya mencionadas fueron:
-Aislamiento de microorganismos con
aplicaciones en la Ingeniería Química
-Caracterización macro y microscópica de los
microorganismos
-Preparación de medios de cultivo específicos
MATERIALES Y MÉTODOS:
Los materiales y métodos que se utilizaron en
las prácticas son respectivamente:
 SESIÓN DE LABORATORIO:
AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS CON
APLICACIONES EN LA
INGENIERÍA QUÍMICA.
MATERIALES:
-Papel Aluminio
-Pipeta
-Tubos de ensayo
-Mechero
-Aza de aro
-Caja de Petri
-Agua destilada
-Determinación cinética de crecimiento y
capacidad metabólica del microorganismo
Los fines y objetivos de este análisis
consecutivo son los siguientes:
-Identificar la existencia de microorganismos
-Realizar un aislamiento de microorganismos
para su estudio
-Entender el uso del microscopio binocular
-Analizar las colonias según su morfología
-Tener en cuenta para identificar una colonia
bacteriana, el método de coloración de Gram
-Preparar medios de cultivo solido (caso
nuestro, para las bacterias)
-Diferenciar ambientes que evidencian la
existencia de microorganismos
-Determinar microorganismos que tienen
capacidad solubilizadora de fosfatos
El procedimiento expresado en detalle, con
análisis, pasos, resultados, se presenta a
continuación
Las bacterias solubilizadoras de fosfato hacen
parte del suelo y materia orgánica, es
preferible realizar su aislamiento en suelos
donde se encuentren cultivos de plantas
leguminosas, tomando una muestra de 10 a
15 cm de profundidad. Dichas bacterias
tienen mucha importancia debido a que una
insuficiencia de fosforo en el suelo puede
disminuir el rendimiento de cosechas, afectar
el tamaño de las plantas, entre otros efectos.
MÉTODOS:
-Método de siembra por las diluciones
sucesivas:
Se tiene la muestra para contar de la cual se
toma 1 mililitro que se añade a un tubo de
ensayo, y se diluye en 9 mililitros de agua
destilada, una vez se agite y se homogenice se
toma 1 mililitro de este y se lo agrega a otro
tubo de ensayo en el cual también se agregan
9 mililitros y se homogeniza.

-Método de siembra por agotamiento o en
estría:
Inicialmente se esteriliza el asa de siembra en
el mechero hasta que nuestra asa se
encuentre roja, se continua tomando la
muestra de nuestro tubo de ensayo y se
siembra la primera estría (tal como se muestra
en la figura) se esteriliza nuevamente y se
continua con la segunda estría pero está
saliendo de la última línea de la primera
estría, y así sucesivamente hasta que
complete el ciclo.
Según la guía de esta práctica se toman 5
gramos de tierra y se diluyen en 45 mililitros
de agua destilada. Pero en realidad se tomó
un gramo de tierra disuelto en 9 mililitros de
agua destilada, obteniendo así nuestra
solución madre. A partir de esta se aplicó el
método de las diluciones sucesivas descrito
anteriormente, teniendo así tres tubos de
ensayo: el de la solución madre, el de la
primera dilución y el de la segunda dilución.
De cada uno de estos tubos se toma una
muestra con el asa de siembra y se lleva a
cabo el método de siembra por agotamiento o
estría en su respectiva caja Petri, la cual tiene
el medio de cultivo NBPRI. Después se
incuban estas cajas por 7 días.
 SESIÓN DE LABORATORIO:
CARACTERIZACIÓN MACRO Y
MICROSCÓPICA DE LOS
MICROORGANISMOS
MATERIALES:
-Cajas Petri con colonias microbianas
-Colorantes Gram
-Mechero
-Microscopio
-Estereoscopio
-Porta objetos
-Cubre objetos
-Aceite de inmersión
MÉTODOS:
Para esta sesión se debió de entender
previamente el uso del microscopio
compuesto binocular, debido a que es este el
que se usa en esta práctica para su
correspondiente caracterización.
Para la caracterización de microorganismos
se encuentra el aspecto macroscópico
relacionado con el color, forma y tamaño de
las colonias; y el aspecto microscópico, el
cual hace referencia a la forma, tamaño y
propiedades de la pared del microorganismo.
Es necesario que el cultivo tenga una
determinada pureza para su posterior análisis,
es decir, que las colonias deben de ser de un
solo tipo.
Con el microscopio se debe de observar una
uniformidad de tamaño y absorción de
coloración de los microorganismos. Y
además para la caracterización de la
composición de la pared celular se utiliza la
coloración de Gram.
La forma de la célula bacteriana es constante
para cada especie y su morfología puede
agruparse en las siguientes formas:
Los microorganismos son incoloros entonces
se usan métodos para verlos y tienen la
ventaja de
Contraste con la bacteria y el medio que lo
rodea, diferenciando los tipos morfológicos
Células aisladas.
Helicoidales Las bacterias cortas y de espiral
(espirales) incompleto: bacterias en coma o
vibriones
Bacterias que desarrollan en un
Bacilos comienzo un micelio
miceliares rudimentario que luego se
fragmenta.
-Coloración de Gram: Esta coloración divide
a las bacterias en dos grupos: Gram positivas
y Gram negativas.
-Gram positiva: Las bacterias Gram positiva
no se decoloran y retienen el color violeta.
Después de la decoloración se utiliza la
safranina que es un colorante de contraste de
color rojo, este colorante da un color rosado a
las células decoloradas.
Este tipo de bacterias presentan una capa
gruesa de peptidoglicano como estructura
fundamental sobre la membrana
citoplasmática. Además estas bacterias no
poseer una membrana externa.
-Gram negativa: Este tipo de bacterias son
decoloradas por el alcohol acetona, perdiendo
el color púrpura propio del cristal violeta.
microbianos.
La coloración más usada para diferenciar
microorganismos es la coloración de Gram.
También presentan una capa delgada de
peptidoglicano, a la cual se superpone una
membrana externa.
Esta coloración es una técnica basada en la
capacidad de las bacterias para retener el
colorante cristal violeta durante la
decoloración con el alcohol acetona.
Para su realización es necesario tomar las
tres cajas Petri dejadas en la sesión anterior
de laboratorio, y en un portador de objetos
añadir una gota de agua destilada y en
seguida agregar una colonia de la caja Petri
correspondiente, disolverla en la gota de agua
y a continuación con cuidado pasarla por la
llama del mechero hasta que su secado
completo (hacer este mismo procedimiento
para cada caja Petri), así se continuara con la
coloración de Gram para las tres muestras.
-Teñir con cristal violeta por un minuto
-Retirar el colorante con agua
-Cubrir con lugol por un minuto
-Lavar con agua
-Decolorar con alcohol cetona treinta
segundos
-Contrastar con safranina por un minuto
-Lavar con agua
-Secar el exceso de agua
Después de esto a cada placa se le añade
aceite para una mejor observación en el
microscopio, entonces ya se llevan los
portaobjetos a la caracterización al
microscopio.
Entonces para realizar la caracterización a
nivel macroscópico, es necesaria la
descripción de las bacterias según su forma,
borde, elevación y superficie. Es decir:
 (Los ingredientes a agregar y su respectiva
cantidad se presentaran en los resultados)

 SESIÓN DE LABORATORIO:
DETERMINACIÓN CINÉTICA
DE CRECIMIENTO Y
CAPACIDAD METABÓLICA DE
MICROORGANISMO

MATERIALES:

-Cajas Petri con medios de cultivo específicos

Mientras que para la caracterización a nivel
microscópico la mejor alternativa es su
análisis mediante la coloración de Gram
mencionada anteriormente, para la
clasificación según la absorción de esta
coloración. Luego se realiza la descripción
correspondiente a su morfología (cocos,
bacilos, espiral).
 SESIÓN DE LABORATORIO:
PREPARACIÓN DE MEDIOS DE
CULTIVO
MATERIALES:
incubados.
-Asa de siembra
-Regla
MÉTODOS:
Se realizó una estría (línea vertical) en cada
una de las tres cajas Petri, tomando como
muestra una colonia respectiva a cada una de
las cajas de la primera sesión de laboratorio.
Así, en los días siguientes se llevara a cabo
un seguimiento para mirar el crecimiento del
microorganismo en nuestro medio de cultivo.

-Erlenmeyer RESULTADOS Y DISCUSIÓN:

-Cajas Petri
-Tubos de ensayo
-Incubadora
-Mechero
-Càmara de flujo laminar
-Autoclave
MÉTODOS:
Para la preparación del medio de cultivo se
preparan todos los ingredientes en 75
mililitros de agua destilada, se ajusta el pH y
se calienta para su completa disolución. Una
vez disueltos se agrega en un Erlenmeyer que
se tapa, se continúa con su esterilización en
autoclave y se deposita en cajas de Petri.
Posterior a la sesión de aislamiento de
microorganismos, se incubaron las cajas petri
a 37°c por 24 horas para su posterior
caracterización macroscópica y microscópica.
La caracterización se hace teniendo en cuenta
el aspecto, coloración y forma de las colonias.
En la caracterización macro se observaron
varias colonias, en la morfología de las
colonias se observan formas filamentosas que
fue la colonia que más invadió una de las
cajas petri, esta forma filamentosa es
característica de hongos, además se
observaron otras colonias puntiformes,
formas irregulares y posiblemente un hongo
naranja muy contaminante en el ambiente;
por lo anterior se observó que las cajas se
contaminaron con otros microorganismos
presentes en el ambiente.

Hongo filamentoso presente en

la caja petri con solucion
madre.

En la caracterización microscópica se realizó

un frotis en el área donde es más probable la
presencia de bacterias y posteriormente el
procedimiento de la coloración de gram.
Podemos clasificar estos microorganismos
según la tinción de gram; el cristal violeta
penetra en todas las células bacterianas a
través de la pared celular, el alcohol cetona
sirve para la decoloración debido a que
disuelve lípidos, por lo que la membrana
lipídica de las gram negativas se disuelve y el
colorante sale del citoplasma; al realizar la
tinción de gram se visualizaron bacterias de
color violeta es decir gram positivas. Además
se observaron cocos con forma casi esférica y
bacilos alargados y esporulados.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

1. Bobadilla C, Rincón S. Aislamiento y

producción de bacterias fosfato
solubilizadoras a partir de compost
obtenido de residuos de plaza.
[Trabajo de pregrado]. [Bogotá
D.C.]: Pontificia Universidad
Javeriana: 2008.

Link: (este no va es solo para que lo miren

):
http://javeriana.edu.co/biblos/tesis/ciencias/te
sis130.pdf