f

cobas*

cobas® CT/NG

Teste qualitative de acidos nucleicos

para utiliza9ao com os cobas ® 6800/ 8800 Systems
Para diagnostico in vitro

cobas * CT/NG P/N: 07460066190

cobas * CT/NG Positive Control Kit P/N: 07460082190

cobas * 6800/8800 Buffer Negative P/N: 07002238190

Control Kit
 cobas® CT/ NG

Utilizagao prevista
O cobas CT / NG para utilizagao com os cobas 6800/8800 Systems e um teste automatizado, qualitativo de
®
®
, diagnostico in
da Chlamydia
vitro , que utiliza reagao de polimerizagao em cadeia ( PCR ) em tempo real, para a detegao direta do ADN
trachomatis (CT) e/ ou do ADN da Neisseria gonorrhoeae ( NG ) em urina de homens e mulheres, amostras de esfregagos
vaginais colhidas pela propria mulher por ordem do medico, amostras de esfregagos vaginais colhidas pelo medico
,
anorretais,
amostras de esfregagos endocervicais, amostras de esfregagos orofaringicos ( garganta ) e amostras de esfregagos
todas colhidas em cobas® PCR Media ( Roche Molecular Systems, Inc.), e amostras cervicais colhidas em Solugao
eo
PreservCyt . Este teste destina-se a ser utilizado como auxiliar no diagnostico de doengas causadas pela clamidia
gonococo em individuos sintomaticos e assintomaticos.

Resumo e explicagao do teste

Fundamentos
, com uma
A infegao por CT e a causa bacterial principal de doengas transmitidas sexualmente no mundo inteiro
ocorrencia anual de aproximadamente 89,1 milhoes de casos.1 A C. trachomatis e a doenga bacteriana sexualme
nte
< 24 anos.3
transmitida ( DST) mais frequentemente referida nos EUA 1 ,2 e a prevalencia e maior em pessoas com idades
de 446,6 casos por
Em 2013, foram reportados ao CDC 1.401.906 casos de C. trachomatis, que corresponde a uma taxa
populagao de 100.000 pessoas.3
ciclo de vida bifasico unico.
1

A CT e uma bacteria gram - negativa, sem mobilidade, obrigatoriamente intracelular , com um

, endometrite e salpingite; se
A CT causa uma variedade de infegoes tais como a uretrite, cervicite, proctite, conjuntivite
doenga inflamatoria
nao for tratada, a infegao pode subir para o utero, as trompas de falopio e os ovarios, causando
, conjuntivite, artrite e lesoes
pelvica, gravidez ectopica e infertilidade por fator tubario. A sindrome de Reiter ( uretrite
permanecem assintomaticos,
mucocutaneas ) tamb £m tern sido associada com a infegao genital por CT. Muitas 4
1 infegoes
e um grande numero de pacientes infetados podera nao procurar assistencia
medica . Os pacientes muitas vezes ficam
nascidas de maes infetadas podem
novamente infetados se os seus parceiros sexuais nao forem tratados. As criangas
em homens e mulheres sao o aumento de
contrair conjuntivite, faringite e pneumonia . Os sintomas predominantes
e disuria; as mulheres tambem podem apresentar hemorragia uterina
irregular .1
secregao
mulheres e feito atraves de testes a amostras da primeira urina
O diagnostico da infegao urogenital por C. trachomatis em
da . O diagnostico da infegao uretral por
matinal ou de amostras de esfrega <;os colhidos do endocervix ou vagina
C. trachomatis em homens pode ser feito testando um esfrega <
;o uretral ou uma amostra de primeira urina matinal.
) sao os testes mais sensiveis para estas amostras e portanto sao
Os testes de amplifica<;ao de acidos nucleicos NAATs 5
(
, A infegao anorretal e orofaringica por C. trachomatis em pessoas
recomendados para detetar a infegao por C. trachomatis
orais, recetivas podem ser diagnosticadas fazendo testes no local anatomico
que se envolvem em relaqoes sexuais, anais ou
da exposiqao.
as mulheres sexualmente ativas com menos de 25 anos, e tambem nas
Recomenda -se o rastreio anual da CT em todas
de um risco acrescentado de infeqao ( por ex., as que tenham um novo parceiro
mulheres mais velhas quando na presenqa
, tenham um parceiro sexual com mais parceiros ou um parceiro sexual que
sexual, tenham mais de um parceiro sexual 6
). Foi demonstrado que programas de rastreio da clamidia fazem diminuir as
tenha uma infeqao transmitida sexualmente
taxas de DIP nas mulheres. Embora seja
7,8 insuficiente a evidencia para suportar o rastreio de rotina da CT em homens
, de eficacia e de estudos economicamente viaveis, o rastreio de homens jovens
jovens, devido a relativa falta de fiabilidade
em cenarios clinicos com uma alta prevalencia de clamidia ( por ex., clinicas
sexualmente ativos devera ser considerado
07997981001 -01 PT
4
Doc Rev. 1.0
 cobas * CT / NG

ele \ ada sobre g ^

para adolescentes, institui oes de corre <;ao e clinicas de STD ) ou em populates com
^
( por ex., MSM ).2,6 O objetivo principal dos rastreios da clamidia entre mulheres devera
ser a dete ao
^ homens
da c a
impedimento de complicates e o teste e tratamento dos seus parceiros, enquanto que o rastreio
rastreios nao o
so devera ser considerado quando os recursos o permitam, a prevalencia for elevada e esses g
frequentes e
rastreios da clamidia nas mulheres.9,10 Poderao eventualmente ser recomendados rastreios mais
mulheres ( por ex., adolescentes) ou em alguns homens ( por ex., MSM ).2
oxidase, sem
A N G e o agente etiologico dagonorreia. As NG sao diplococos gram - negativos, positivos para citocromo
novas mfe oes por
mobilidade e que nao formam esporos. Estima-se que nos Estados Unidos ocorram todos os anos 820.000
de mte oes por
^
N . gonorrhoeae.11 A gonorreia e a segunda doen a mais frequentemente referida . 3 As manifesta <;6es clinicas ^
^
NG sao muito numerosas.4 Nos homens, a uretrite aguda apresenta-se apos um periodo de incuba ao de 1 a 10
^
dias, com
de uretrite. ^
secre ao uretral e disuria. Apenas uma pequena percentagem de homens permanece assintomatico, sem sinais
^
A epididimite aguda e a complica ao mais comum, especialmente em homens jovens. Nas mulheres, o principal
local de
^
infe ao e o endocervix. Existe uma alta prevalencia de coalescencia de sintomas com a CT, a Trichomonas vaginalis
ea
^
vaginose; muitas mulheres permanecem assintomaticas e por conseguinte nao procuram assistencia medica . Em mulheres
a
sintomaticas, podera notar-se um aumento de secre ao, disuria e hemorragia intermenstrual. Pode ocorrer doen
13

^
inflamatoria pelvica ( DIP ) em 10% a 20 % das mulheres, combinada com endometrite, salpingite, abcesso tubo - ^
ovarico ,
ectopica.
peritonite pelvica e peri -hepatite.14 A DIP pode originar cicatriza ao tubaria que pode causar infertilidade e gravidez
^
Outros locais de infe ao gonococica em homens e mulheres sao o reto, a faringe, a conjuntiva e, num grau inferior a
, doen a
^
^
apresenta -se como infe ao gonococica disseminada. As crian as de maes infetadas podem contrair conjuntivite.
^ ^
Recomenda -se o rastreio anual de infe ao por N. gonorrhoeae em todas as mulheres sexualmente ativas com menos de
^
25 anos, e tambem nas mulheres mais velhas com um maior risco de infe ao ( por ex., as que tenham um novo parceiro
^
sexual, tenham mais de um parceiro sexual, tenham um parceiro sexual com mais parceiros ou um parceiro sexual que
tenha uma ITS).6 Fatores de risco adicionais incluem o uso inconsistente de preservative entre pessoas com varios
parceiros sexuais, existencia anterior ou coexistencia de infe oes transmitidas sexualmente e troca de sexo por dinheiro ou
^
droga .2 Para alem da utiliza <;ao em rastreio de infetes uretrais, o CDC tambem recomenda a utiliza ao de testes de
^
amplificato de acidos nucleicos ( NAATs) para o rastreio anual de rotina de homens que fazem sexo com outros homens
5
( MSM ) relativamente a infetes anorretais ou orais.

Fundamentos dos testes de CT/ NG

1
, 0 metodo recomendado para o rastreio da CT e da NG sao os NAATs. - Para mulheres, o tipo de amostra recomendado e
o esfregafo vaginal e para os homens e recomendada a primeira urina matinal. Outros tipos alternativos de amostras
aceitaveis para mulheres incluem um esfregafo endocervical quando for indicado um exame pelvico , ou uma amostra da
primeira urina matinal, mas uma amostra de urina podera detetar ate menos 10% de infetes comparativamente aos
esfregafos vaginais e endocervicais. Para homens, alem da amostra de urina, um esfrega o uretral tambem e aceitavel.
^
Adicionalmente, no caso de MSM, o CDC recomenda pelo menos um rastreio anual para a CT, a partir de amostras
uretrais ou anorretais, e para a NG, a partir de amostras uretrais, anorretais ou orais.
2

O cobas* CT/ NG para utiliza ao nos cobas* 6800 /8800 Systems ( doravante designado como cobas* CT / NG neste
^
documento) e um teste qualitative automatizado, de polimerizato em cadeia ( PCR ) em tempo real, concebido para
detetar ADN de CT e de NG em amostras urogenitais, orofaringicas e anorretais de pacientes homens e mulheres,
satisfazendo assim a necessidade medica de um teste rapido de rastreio molecular de alto rendimento para utiliza ao como
auxiliar no diagnostic das doen$as causadas pela clamidia e o gonococo em individuos sintomaticos e assintomaticos ^
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Doc Rev. 1.0 5
 cobas 6 CT / NG

Explica o
^ do testeum
O cobas CT/ NG e teste qualitative que e executado no cobas* 6800 System e no cobas* 8800 System . O cobas* CT/ NG
CT/ NG em amostras endocervicais, vaginais, orofaringicas, anorretais, de urina e cervicais
mulhde
^ ^
ADN
de cientes mu eres infetadas e em amostras orofaringicas, anorretais e de urina de pacientes homens. Sao utilizados
. , ° n as esPeci c°s dos alvos para a dete<;ao, mas nao a descrimina ao entre o plasmideo criptico e o gene
^ ^
. . . .0 11Jciona mente, sao utilizados primers e duas sondas especificos dos alvos para a dete ao, mas naopara
^
a
Se U nc as conservadas na regiao DR-9 da NG . O controlo interno de ADN , utilizado
^ ^
P ^ *^^
monitoriza t o o processo de prepara ao de amostras e amplifica ao por PCR, e introduzido em cada amostra durante o
^ ^
nto da amostra . Adicionalmente, o teste utiliza um controlo positivo de titulo baixo e um controlo negativo.

Princfpios do procedimento
CT/ NG baseia -se na prepara ao totalmente automdtica de amostras ( extra < ao e purifica ao dos acidos nucleicos)
am ^ ^ ^
^°
^
ca * e ete9ao P r PCR. Os cobas* 6800/8800 Systems sao constituidos pelo modulo de abastecimento
^ ^ °
d e .amost s, o modulo de transference , o modulo de processamento e o modulo analitico. A gestao automatica de dados e
executada pelo software cobas* 6800/ 8800, que atribui resultados de teste a todos os testes, na forma de positivos,
negativos ou invalidos. Os resultados podem ser examinados diretamente no ecra do sistema ou impressos como um
relatorio.
Acidos nucleicos de amostras de pacientes, controlos externos e moleculas adicionadas de ADN do controlo interno
-
( DNA IC) sao extraidos simultaneamente. Em resumo, sao libertados acidos nucleicos bacterianos ao adicionar proteinase
e reagente de lise a amostra . Os acidos nucleicos libertados ligam -se a superficie de silica das particulas de vidro
magneticas adicionadas. As substancias nao ligadas e impurezas, tais como proteinas desnaturadas, detritos celulares e
potenciais inibidores da PCR, sao removidas com os posteriores passos de lavagem , e os acidos nucleicos purificados sao
eluidos das particulas de vidro magneticas, com tampao de elui ao, a elevada temperatura.
^
A amplifica ao seletiva dos acidos nucleicos alvo da amostra e conseguida atraves da utilizac ao de primers senso e anti -
^ ^
senso especificos para o alvo que sao selecionados de regioes plasmidicas e genomicas altamente conservadas da CT e da
NG. Uma regiao do plasmideo criptico da CT e o do gene ompA ( alvo duplo ) e duas sequencias conservadas da regiao
DR - 9 da NG sao amplificadas pelo cobas* CT/ NG. A amplifica ao seletiva do DNA - IC e conseguida atraves da utilizaqao
^
de primers senso e anti -senso especificos para a sequencia - alvo que sao selecionados para que nao tenham qualquer
homologia com a regiao alvo da CT ou da NG. £ utilizada uma enzima polimerase do ADN termoestavel para a
amplifica ao por PCR. As sequencias do alvo e do DNA -IC sao amplificadas simultaneamente utilizando um perfil
^
universal por amplifica ao por PCR com passos e numero de ciclos de temperatura predefinidos. A mistura principal
^
inclui trifosfato de desoxiuridina (dUTP ) , em vez de trifosfato de desoxitimidina ( dTTP) , que e incorporado no ADN
acabado de sintetizar ( amplicon ). Quaisquer amplicons contaminantes de corridas de PCR anteriores sao eliminados
durante o primeiro ciclo termico pela enzima AmpErase, que e incluida na mistura principal da PCR.16 No entanto , os
amplicons acabados de formar nao sao eliminados, uma vez que a enzima AmpErase fica inativa quando exposta a
temperaturas acima dos 55 °C.

07997981001-01 PT
Doc Rev. 1.0
6
 cobas ^ CT/ NG
A mistura principal do cobas* PT / Mr
/ 1NLr contem duas
de detecao espec 'f sondas de detecao especificas para sequences alvo da CT, duas sondas

^ ^^ ^ ^
Se < ncias aIvo da
reporter fluorescent e uma para o DNA - IC. As sondas estao marcadas com corantes
C S
° a VO > ue
Perrn * tem a detecao simultanea de alvos da CT, alvos da NG e do DNA - IC
em tres canais ciiferentes ^
por um corante d ”^ ^ uando nao ligado a sequencia do alvo, o sinal fluorescente das sondas intactas e suprimido
- Durante passo
° de amplifica ao por PCR , a hibridiza <;ao das sondas com a cadeia simples
de ADN especifica d
^
112 c va em a sonda ^
originando a separa ao do
^
*

^
^
8 pela atividade exonuclease 5' a 3 ' da polimerase do ADN,
COrantes 0 rePorter e o de supressao e a gera <;ao de um sinal fluorescente. Com cada ciclo
da PCR, sao gerada ’
1Aa es crescentes
de sondas clivadas e o sinal cumulativo do corante reporter aumenta
concomitantemente Ad e3
fluorescencia dos cora discriminate em tempo real dos produtos da PCR sao conseguidas medindo a
reporter libertados, para os alvos de
CT e de NG e para o DNA - IC respetivamente.

leg

07997981001 -Q1 FT
Doc Rev. 1.0
 cobas * Cl NC

Colheita , transporte e armazenamento de amostras

Nota. Manuseie todas as
agentes
amostras e controlos tendo em conta a possibilidade de transmitirem
infecciosos.
Colheita de amostras
Foramvalidadas para utiliza ao com o cobas*
CT/ NG , amostras de esfregaqos endocervicais colhidas com o cobas* PCR
^
Collection Kit, amostras de esfrega os vaginais, amostras de esfrega os anorretais e amostras de estregas os
orofaringicos colhidas com o cobas* ^ ^ e mulheres colhida com o cobas*
PCR Uni Swab Collection Kit , urina de homens
PCR Urine Collection Kit e
amostras cervicais colhidas em Solu <;ao PreservCyt* (consultar Tabela 9 para uma lista de kits
eita ). Siga as instru oes para
a colheita de todas as amostras de esfregaijos e de urina descritas nos IFU dos
^
respetivos kits de colheita. Siga as
instru ?oes do fabricante para fazer a colheita de amostras cervicais para dentro de
Solu ao PreservCyt*.
^
Transporte de amostras
As amostras de esfrega ;
< os endocervicais colhidas com o cobas* PCR Dual Swab Collection Kit amostras de esfrega < jos
vaginais, amostras de esfrega os anorretais e
amostras de esfregai;os orofaringicos colhidas com o cobas' PCR Uni Swab
^
Collection Kit, urina de homens e mulheres colhida com o cobas* PCR Urine Collection Kit e amostras cervicais colhidas
em Soluipao PreservCyt* podem ser transportadas a temperaturas entre 2 e 30 °C. O transporte de amostras de CT / NG em
cobas PCR Media e Soluipao PreservCyt* deve obedecer as regulamenta oes nacionais, federais, estaduais e locais relativas
ao transporte de agentes etiologicos.12 ^
Armazenamento de amostras
As amostras de esfrega os endocervicais colhidas com o cobas* PCR Dual Swab Collection Kit, amostras de esfrega<;os
^
vaginais, amostras de esfrega os anorretais e amostras de esfrega os orofaringicos colhidas com o cobas* PCR Uni Swab
^ ^
Collection Kit e a urina de homens e mulheres colhida com o cobas* PCR Urine Collection Kit podem ser armazenadas a
temperaturas entre 2 e 30 °C ate 3 meses depois de as amostras terem sido estabilizadas em cobas* PCR Media. As
amostras cervicais colhidas em Solu ao PreservCyt* podem ser armazenadas entre 2 e 30 °C ate 3 meses.
^
Amostras de urina de homens e mulheres
s
• Utilize apenas o Kit de Amostras de Urina cobas* PCR para colher amostras de urina para o cobas* CT / NG .
O cobas* CT/ NG nao foi validado para utiliza ao com outros dispositivos de colheita de urina ou tipos de meios.
^
A utiliza ao do cobas* CT/ NG com outros dispositivos de colheita de urina ou outros tipos de meios podera
^
originar resultados falsos negativos, falsos positivos e/ ou invalidos.
• Para evitar contamina ao cruzada de amostras processadas, devem ser utilizadas outras tampas de cor alternativa
^
(neutra; consultar Materials adicionais necessarios) para tapar as amostras dos tubos de cobas* PCR Media, apos
o processamento.
• O cimo do nlvel de liquido das amostras de urina nao testadas devera ficar entre as duas linhas pretas da janela da
etiqueta do tubo de cobas* PCR Media. Se o nivel de liquido estiver acima ou abaixo destas linhas, a amostra nao
foi colhida adequadamente e nao pode ser utilizada para testes.
• Se forem necessarios testes adicionais, certifique -se de que resta pelo menos 1, 2 ml de amostra no tubo de cobas*
PCR Media.
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Doc Rev. 1.0 15
 >
r/

Amostras endocervicais, vaginais

, anorretais e orofaringicas
p esen <;a de muco em
amostras endocervicais e cervicais podera causar atrasos no processamento devido a
V es - ara um desempenho
ideal do teste, as amostras nao devem apresentar muco. Utilize a zaragatoa
g an e e poliester do
cobas* PCR Dual Swab Collection Kit ou um dispositivo equivalente descartavel para
as secre9des cervicais
#
antes de colher a amostra endocervical ou cervical.
tl 1Ze aPenas a
. , zaragatoa
e apenas a zaragatoa
flexivel do cobas* PCR Dual Swab Collection Kit para colher amostras endocervicais.
grande de poliester do cobas* PCR Uni Swab Collection Kit ou do cobas* PCR Dual
Collection Kit para colher amostras de esfrega os vaginais, anorretais e orofaringicos. O cobas* CT / NG nao
oi validado para uti!iza ^
<;ao com outros dispositivos de colheita ou tipos de meios. A utiliza <;ao do cobas* CT / NG
com outros dispositivos de colheita
ou outros tipos de meios podera originar resultados falsos negativos, falsos
positivos e/ou invalidos.
Para evitar contamina ao cruzada de
^
( neutra, consultar Materiais
amostras processadas, devem ser utilizadas outras tampas de cor alternativa
adicionais necessarios) para tapar as amostras dos tubos de cobas* PCR Media, apos
o processamento.
Todas as amostras contendo apenas uma so zaragatoa no tubo de cobas PCR Media podem ser diretamente
®

processadas nos cobas 6800 / 8800 Systems. Se desejar, a zaragatoa pode ser removida antes do tubo com a
®

amostra ser introduzido no equipamento; no entanto , deve-se ter o maximo cuidado para evitar a contaminaqio
cruzada.
• Uma amostra colhida adequadamente devera ter uma unica zaragatoa com a haste quebrada pela linha a
tracejado. As hastes de zaragatoas que forem quebradas acima da linha a tracejado ficarao mais compridas que o
normal e tambem poderao ser dobradas para caber dentro do tubo de cobas PCR Media. Isto pode criar uma
®

obstru ;< ao no sistema de pipetagem, que podera causar a perda de amostra , de resultados de teste e / ou danos
mecanicos no equipamento. No caso de uma zaragatoa ter uma haste quebrada incorretamente, remova - a antes
do processamento de amostra nos cobas 6800/8800 Systems. Tome cuidado ao eliminar as zaragatoas; para evitar
®

contamina ao, evite derramar ou tocar com as zaragatoas noutras superficies durante a elimina ao.
^
• Amostras em tubos primarios, sem zaragatoa ou com duas zaragatoas, nao foram colhidas de acordo com as ^
instruqoes descritas nas IFU dos respetivos kits e nao deverao ser testadas.
• Ocasionalmente, as amostras de esfrega os content muco excessivo que podera provocar um erro de pipetagem
^
(por ex., um coagulo ou outra obstru ao ) nos cobas 6800 / 8800 Systems. Antes de testar novamente as amostras
®

^
que apresentavam coagulos durante o processamento inicial, remova e elimine a zaragatoa, e coloque a tampa e
agite fortemente estas amostras durante 30 segundos para dispersar o muco em excesso.
• As amostras com zaragatoas podem ser testadas duas vezes nos cobas 6800 / 8800 Systems enquanto a zaragatoa se
®

encontrar no tubo de colheita. Se forem necessarios testes adicionais, ou se o primeiro teste falhar devido a erro de
pipetagem de amostra (por ex., um coagulo ou outra obstru <;ao) , a zaragatoa devera ser removida e o liquido
restante devera ter um volume minimo de 1,0 ml.
 cobas* CT / NG

Amostras cervicais colhidas em Solu ao PreservCyt *

• ® ^
O cobas CT/ NG foi validado para ser utilizado com amostras cervicais colhidas em Solu ao PreservC) t
^
O cobas® CT / NG nao foi validado para ser utilizado com amostras cervicais obtidas em outros tipos de meios.
A utiliza ao do cobas CT/ NG com outros tipos de meios podera originar resultados falsos negativos, falsos
®

^
positivos e/ ou invalidos.
• Ao colocar aliquotas de amostras cervicais de tubos primarios em tubos secundarios de cobas PCR Media de
13 ml de base redonda com codigos de barras, para processamento nos cobas® 6800 / 8800 Systems, utilize pipetas
com pontas com barreira para aerossois ou de deslocamento positivo para manusear amostras. Para evitar
contaminacpao cruzada, devem ser utilizadas outras tampas de cor alternativa ( neutra; consultar Materials
adicionais necessarios ) para tapar esses tubos dessas amostras, apos o processamento.
• Proceda com cuidado quando transferir amostras de tubos primarios para tubos secundarios de 13 ml de base
redonda com cobas PCR Media. Antes da transference misture com agita <jao forte as amostras dos tubos
®

primarios. Troque as pontas de pipetagem apos cada amostra.

• As aliquotas das amostras primarias devem conter um volume minimo de 1,0 ml.
 cobas* CT/ NG

Embora raras, as muta9oes dentro das regioes altamente conservadas do ADN plasmideo criptico ou genomico da
omatis ou do ADN genomico da N . gonorrhoeae cobertas pelos primers e/ ou sondas do cobas* CT/ NG
reSUhar na n§ dete
AMT ° ° da presen?a da bact'ria
^
eisseria gonorrhoeae podera ocasionalmente trocar
'

material genetico com bacterias comensais frequentemente

ontradas na microflora normal da boca e garganta . £ possivel que esta troca possa incluir sequencias isoladas
que poderao, em raras ocasioes, produzir um sinal positivo com este ensaio.21
Devido a diferenqas basicas entre tecnologias, recomenda - se que , antes de mudar de uma tecnologia para outra , os
utilizadores realizem estudos de correla<;ao de metodos nos seus laboratories, para qualificar as diferen as
^
tecnologicas. Os utilizadores deverao seguir os seus proprios procedimentos especificos e politicas especificas .
O cobas CT/ NG nao se destina a substituir outros exames ou testes de diagnostico de infe ao urogenital. Os
^
pacientes podem ter cervicite , uretrite, infeqoes do trato urinario ou infe oes vaginais devido a outras causas ou
infeqoes simultaneas com outros agentes . ^
O cobas ® CT/ NG nao e recomendado para avalia ao de suspeita de abuso sexual e para outras evidencias medico -
legais. ^
O cobas CT/ NG nao devera ser utilizado para determinar o sucesso terapeutico, uma vez que poderao estar
®

presentes acidos nucleicos apos terapia antimicrobiana.

matinal
Recomenda - se que, para testes de urina, o cobas CT / NG seja efetuado em amostras da primeira urina
®

variaveis, tais
( definida como os primeiros 10 a 50 ml do jato urinario ). Nao foram avaliados os efeitos de outras
como primeira urina versus jato medio, pos - irriga ao, etc.
^
Nao foram avaliados os efeitos de outras potenciais variaveis, tais como corrimento vaginal
, uso de tampoes,

irriga ao, etc. e variaveis relativamente a colheita de amostras.

^
O cobas ® CT/ NG nao foi avaliado com pacientes que estao atualmente
a ser tratados com agentes antimicrobianos
historico de histerectomia .
ativos contra a CT ou a NG, assim como pacientes com um
devido a inibi<;ao da polimerase. O Controlo Interno de
Podem registar-se resultados falsos negativos ou invalidos
a identificar as amostras que contem substancias passiveis de
CT/ NG esta inclufdo no cobas CT/ NG para ajudar
®

ao por PCR.
interferir com o isolamento do acido nucleico e a amplifica ^
master mix do cobas* CT / NG permite a amplifica ao seletiva do ADN
^
A adi ao de enzima AmpErase ao reagente
^
alvo; no entanto, para evitar a contamina
ao dos reagentes, e necessario observar boas praticas de laboratorio e
^
especificados neste folheto informativo.
cumprir cuidadosamente os procedimentos
em pacientes com menos de 14 anos.
O cobas CT/ NG nao foi avaliado
®

,
que utilizaram os produtos de venda livre Replens Vaginal Moisturizer
®

As amostras urogenitais de doentes

Odor Eliminating Vaginal Gel e RepHresh Clean Balance ou utilizaram Metronidazole Vaginal Gel
RepHresh de interferencias
poderao dar resultados invalidos ou falsos negativos. Para mais detalhes, consulte os resultados
'
Tabela 18).
 cobas® CT/ NG

Avalia
^ o do desempenho
Caracterfsticas principals de desempenho
Limite de detecao (LoD)
A pretensao de sensibilidade anali'tica da
Chlamydia trachomatis para o ensaio e de 40 EB ( Elementary Bodies) por ml para
todos os serotipos ( A, B, Ba, C, D, E, F, G, H, I, , K, LI, , 3) assim como para a variante sueca nvCT, em todos os tipos
I L2 L
de amostra referidos. No entanto, as
dilutes de alguns serotipos abaixo de 40 EB/ ml deram resultado positivo utilizando
o cobas* CT/ NG para utiliza <;ao com os cobas* 6800 /8800 Systems.
A pretensao de sensibilidade anali'tica da N. gonorrhoeae para o ensaio e de 1.0 CFU (Colony Forming Units) por ml
( 45 estripes da gonorreia testadas ) em todos os tipos de amostra referidos. No entanto, as dilui<;6es de estripes da
gonorreia abaixo de 1,0 CFU/ ml deram resultado positivo utilizando o cobas’ CT / NG para utiliza <;ao com os cobas
6800/8800 Systems.

Precisao
A precisao interna foi examinada utilizando um painel composto por culturas de CT e NG diluidas numa pool de matriz
de amostra de esfrega o endocervical negativa colhida em cobas* PCR Media , uma pool de matriz de urina negativa com
^
cobas* PCR Media e uma pool de matriz de amostra cervical negativa colhida em Solu <;ao PreservCyt*. Os esfregac;os
endocervicais destinavam -se a representar todas as amostras de esfrega <;os colhidas em cobas* PCR Media (endocervicais,
vaginais, orofarfngicas e anorretais ). Foram testados quatro niveis utilizando o serotipo D da CT e a estripe 2948 da NG
como os organismos alvo.
O painel de precisao foi concebido para incluir membros com concentrates muito baixas, baixas e medias de CT e NG
(< 0,7 EB/ ml e < 0,07 CFU / ml, < 4 EB/ ml e < 0,4 CFU / ml e < 12 EB / ml e < 1,2 CFU / ml ) de cada matriz do painel. Foram
executados testes com tres lotes de reagentes do cobas* CT/ NG e dois equipamentos, para um total de 24 corridas.
A Tabela 14 apresenta uma describe dos paineis de precisao e a taxa de positividade do desempenho do estudo. Todos os
membros do painel negativo tiveram resultados negativos durante o estudo todo. A analise do desvio padrao e a
percentagem do coeficiente de variato dos valores de Ct dos testes validos efetuados nos membros do painel positivo
( ver Tabela 15 e Tabela 16) produziram intervalos globais de CV ( %) entre 1,62% e 4,05% para a CT e entre 1,17% e 3,55%
para a NG.
 cobasK CT /NG

Tabela 16 Media geral, desvios padroes e coeficientes de

varia<;ao (% ) para o ciclo limiar, membros do painel 2, 3 e 4 da NG

Taxa de Dentro da Entre Entre

Ct Total
positividade corrida corridas Entre dias equipamentos Entre lotes
M dio
DP CV°/o DP CV% DP CV°/o DP CV°/o DP CVo/o DP CV%
Esfregago endocervical em cobas® PCR
Media
44% 39,1 0, 00 0,00 0,57 1 , 46 1 , 28 3,28
0,31 0,79 0,84 2,14 0,72 1 ,85
940/o 38,1 0,00 0,00 0 ,00 0, 00 0,00 1 ,27 3,34
0 ,00 0 ,00 1 , 27 3,34 0 ,00
100% 36,5 0,00 0,00 0,24 0, 67 0 ,00 0 ,00 0,15 0, 40 0,74 2 ,04
0 ,69 1 ,89
Amostras cervicais colhidas em Solugao PreservCyt®
65% 39,0 0,34 0,87 0, 00 0 ,00 1 ,11 2 ,85 0,08 0 , 20 0, 45 1 ,16 1 ,25 3, 21

96% 38, 0 0, 00 0,00 0 , 00 0, 00 1 ,25 3, 28 0,00 0 , 00 0 ,00 0,00 1.25 3,28

100% 35,8 0,00 0,00 0 , 28 0 ,78 0 ,76 2 ,13 0,00 0 ,00 0,00 0 ,00 0 ,81 2,27

cobas ^ PCR Media com Urina

78% 39,1 0, 00 0,00 0 , 26 0 , 66 1 ,35 3, 46 0,00 0,00 0,18 0 , 45 1 ,39 3,55

100% 36,7 0,14 0,38 0 ,16 0, 42 0 ,71 1 ,92 0,00 0 ,00 0,00 0,00 0,74 2 ,00

100% 34,9 0 ,00 0,00 0 ,16 0, 47 0 ,37 1 ,06 0 , 06 0 ,18 0 ,00 0,00 0, 41 1.17

Especificidade anah'tica /reatividade cruzada

Para avaliar a especificidade analitica, o cobas CT/ NG foi utilizado para testar um painel de 151 bacterias, fungos e virus,
®

incluindo os normalmente encontrados no trato urogenital de homens e mulheres, 17 representantes de estripes Neisseria
nao gonorrhoeae e outros organismos filogeneticamente nao relacionados. Os organismos indicados na Tabela 17 foram
adicionados em concentrates de aproximadamente 1 x 106 unidades*/ ml para bacterias e de aproximadamente
1 x 105 unidades*/ ml para virus a pools de amostras de esfregaijos negativas em cobas PCR
* Media (endocervicais,
Solui;ao PreservCyt* . Foram
orofaringicas e anorretais) , urina estabilizada em cobas PCR Media e amostras cervicais em
®

, com cada organismo misturado

executados testes com cada organismo potencialmente interferente sozinho e tambem
indicaram que nenhum desses organismos
com culturas de CT e NG a < 12 EB/ ml e < 1,2 CFU / ml. Os resultados
falso positivos nas matrizes negativas para CT/ NG.
interferiu com a deteqao da CT e da NG ou produziu resultados
(Colony Forming Units - unidades formadoras de colonias) ,
Todas as bacterias foram quantificadas utilizando CFU
•xceto a Chlamydophila pneumoniae e a
Chlamydophila psittaci em que foi utilizado IFU ( Inclusion Forming Units -
virus foram quantificados utilizando unidades/ ml conforme determinado
inidades formadoras de inclusoes). Todos os
,eio TCIDso Endpoint Dilution Assay. O Trichomonas vaginalis e o HPV16 foram quantificados em celulas/ ml
.

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Doc Rev. 1.0
 cobas ® CT/ NG

Tabela 17 rganismos testados

relativamente a especificidade analitica/ reatividade cruzada
Achromobacter xerosis
Haemophilus ducreyi Neisseria polysaccharea
Acinetobacter ca/coaceticus
Haemophilus influenzae Neisseria sicca
Acinetobacter Iwoffi
Helicobacter pylori Neisseria subflava
Actinomyces israelii
HPV 16 Neisseria weaverii
Actinomyces pyogenes
HSV -1 Paracoccus denitrificans
Aerococcus viridans HSV-2 Peptostreptococcus anaerobius
Aeromonas hydrophila
Adenovfrus humano 40 Peptostreptococcus asaccharolyticus
A /caligenes faecalis
Enterovfrus humano 71 Peptostreptococcus magnus
Bacillus subti/is
Rotavirus humano Plesiomonas shigelloides
Bacteriodes fragilis Kingella denitrificans Propionibactenum acnes
Bacteroides caccae Kingella kingae Proteus mirabilis
Bacteroides ureo /yticus Klebsiella oxytoca Proteus penneri
Bifidobacterium adolescentis Klebsiella pneumoniae Proteus vulgaris
Bifidobacterium breve Lactobacillus acidophilus Providencia rettgeri
Bifidobacterium longum Lactobacillus brevis Providencia stuartii
Blautia producta Lactobacillus crispatus Pseudomonas aeruginosa
Branhame /la catarrhalis Lactobacillus delbrueckii subsp. lactis Pseudomonas fluorescens
Brevibacterium linens Lactobacillus jensenii Pseudomonas putida
Campylobacter coli Lactobacillus lactis Rahnella aquatilis
Campylobacter jejuni Lactobacillus ons Rhizobium radiobacter
Candida albicans Lactobacillus parabuchneri Rhodospirillum rubrum
Candida glabrata Lactobacillus reuteri Saccharomyces cerevisiae
Candida parapsilosis Lactobacillus vaginalis Salmonella choleraesuis
Candida tropicalis Lactococcus lactis cremoris Salmonella minnesota
Chlamydia psittac / Legionella pneumophila Salmonella typhimurium
Leuconostoc paramensenteroides aka. Serratia denitrificans
Chlamydophila pneumoniae Weissella
Listeria monocytogenes Serratia marcescens
Chromobacter vio /aceum
Micrococcus luteus Shigella dysenteriae
Citrobacter freundii
Moraxella lacunata Staphylococcus aureus
Clostridium difficile [Serogrupo B)
Moraxella os /oensis Staphylococcus epidermidis
&$ Clostridium perfrmgens
Morganella morgana Staphylococcus saprophyticus
Corynebacterium genitalmm
Mycobacterium smegmatis Streptococcus agalactiae
Corynebacterium xerosis
Mycoplasma genitalium Streptococcus anginosus
Cryptococcus neoformans
Mycoplasma hommis Streptococcus bovis
Citomegalovirus
Neisseria cmerea Streptococcus dysgalactiae
Deinococcus radiodurans
Neisseria denitrificans Streptococcus equinis
Derx / a gummosa
Neisseria e /ongata subsp. elongata Streptococcus mitis
Eikene /la corrodens
Neisseria elongata subsp. mroreducans Streptococcus mutans
Enterobacter aerogenes
Neisseria flava Streptococcus pneumoniae
Enterobacter cloacae
Neisseria flavescens Streptococcus pyogenes
Enterococcus avium
Neisseria kochii Streptococcus salivarius
Enterococcus casseliflavus
Neisseria lactamica Streptococcus sanguis
Enterococcus faecalis

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cobas * C

E/tierococcus teeaum Neasetta macacae Streptomyces griseus

Erwem fmtscoJe Nensena mentngrtida Serogrupo A Trichomonas vaginalis
[ ryypetothru rhuvopeVeae Nensena menngtudts Serogrupo B Ureaplasma urealyticum
t u h+fn hta col Nensena menmgitidts Serogrupo C Vei /lonella parvula
Newer memngitida Serogrupo D Vibrio cho /erae
( schenchm fergtJune
*
Uknvbectwnum merangotepOcum Nr , liens mermg/ tnJa Serogrupo WI 35 Vibrio parahaemolyticus
Nenserm metmgnxUs Serogropo Y Yersinia enterocolitica
fusotmctenum rsKhetum
r Nansens mucosa
MUP HprwSS ^
^
IkrrmMi NeanKitfsena Nemena perflays
 w w» w m/ i u i f u V i l l / l f UlffX
Neisseria mucosa
Gemelln haemolysans Neisseria per Ilava

Interferencia
Foram avaliados os efeitos de produtos femininos, de venda livre ou sob prcscn o , q w > Jtr
iirsUI
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^^ »
aIn « »\ ira* 010' * * “ *‘ **
v

urogenitais ( Tabela 18), de produtos de higiene oral de venda livre que podem e ^ cmanorrcUi » ( l l i *

( Tabela 19) e de produtos de higiene e sob prescrigao que podem estar prestntts e
testes foram efetuados utilizando amostras clinicas em pools ( foram utiliza os es r g ^ ^
amostras du
. ntc jntcrfCrentes a nivci* p , r
vaginais .
PreservCyt* para representar amostras urogenitais) com adigao de substancias p ^ qUAl
Hqs de amostras negatives

V de uma utilizagao normal do paciente. As substancias interferentes foram test ^ ^

CT/ NG, assim como em pools de amostras com CT/ NG a 120 EB / ml e -
Foram utilizados neste estudos os serotipos D e I da CT e as estripes 29 18 c 8 ^^
consoante o tipo de an » osira t « vl^ ^

o Replens
Metronidazole ,

Dos produtos femininos de venda livre ou sob prescrigao testados em amt st

RepHresh Odor Eliminating Vaginal Gel e o RepHresh Clean Balance pro
falsos negativos ou
de l
fesultados
'
11
l £ie
Qfaringicos ou dos produtos
Nenhum dos produtos de higiene oral de venda livre testados em esfregagos
interferencia no teste qua . i

anorretal de venda livre e sob prescrigao testados em esfregagos anorretais p ^ uziram ^

examinados em concentragoes previstas de uma utilizagao tipica o pr

Tabela 1 8 Lista de substancias testadas em relagao a interferencia em a

Nome do Produto

Creme vaginal Clindamycin Phosphate

Isupositdrios Norforms
CVS Tioconazole 1 (Equate tioconazole 1) Premarin *
duragSo Replens
Creme anti - prurido Equate Vagicaine Hidratante vaginal de longa • .
Summer s Eve
y Estrace
Spray desodorizante feminino
V U - Vaginal
VCF Vdyu a
-
..
Contraceptive
-- .
\ /onina|J)
Vagi
Foam
"

-
Gel K Y Ultra (substitui o K-Y Silk E) (Espuma Contraceptiva

Yeast Gard Advanced

Gel vaginal Metronidazole*
)
Creme antifungico vaginal em embalagem de Azo Standard * (apenas urina
combinag§o Monistat 3
de Odores RepHresh
Gel Vaginal de Eliminagao
Creme anti - prurido de tratamento completo Monistat
RepHresh Clean Balance
Gyne-Lotrimin 7
que potencialmente podem
* O Metronidazole, o Replens e o RepHresh
apresentaram interferencia a niveis
presentes em amostras clinicas.
zaragatoas simuladas
* Os produtos RepHresh foram testados utilizando
28
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 u u oioitma vac \J /U .V /

inferior e 3,6% para o intervalo superior [ 0%: 3,6% ].

Contamina9ao cruzada utUizar o

ao cruzada nos co 6800 /8800 Systems ao taxa e
Foram efetuados estudos para avaliar a potencial contamina de desempenho , a
cobas* CT / NG. A contamina <;ao cruzada pode causar resultados falsos posit
^ estudo
serem^
como sendo 0,5% (2 / 432) , ao
contamina ao cruzada de amostra para amostra do cobas CT / NG foi determin
corridas. Nao foi observadacom
*
^
testadas alternadamente amostras altamente positivas e negativas no decorrer preparadas
utilizand 0 amostras
contamina ao cruzada de corrida para corrida (0/ 282). Os testes foram e eUn prepara a
^ este estudo foram
cobas* PCR Media , urina estabilizada em cobas* PCR Media e com Solu < . sinal obtido ^
'

de amostras de pac ^
amostras altamente positivas para gerar um valor de Ct que excede 95 /o o
numa utiliza ao de rotma
infetados na popula ao de utiliza ao prevista. A probabilidade de encontra ^ amostras
conseguinte, a taxa de
^
^ ^
cobas* CT / NG e proporcional a prevalencia de CT e NG na popula <; ao a ^
que seja inferio
^ CT / NG e provavel
contamina ao cruzada de amostra para amostra na utiliza <;ao de rotina contam n
^ ma de 100%, a taxa ' ^
0,5% x 5% x prevalencia de CT na popula ao em teste. Mesmo
^
a preva j
^ ^
cruzada seria 0 ,5% x 5% x 100% = 0,025%. .

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 cobas ® CT /NG

Informagoes adicionais
Caracteristicas principals do ensaio
Media
Tipos de amostras • Esfregago endocervical colhido em cobas " PCR
®
Esfregago vaginal colhido em cobas PCR Media
•
cobas " PCR Media
• Esfregago vaginal colhido pela prdpria mulher em
Esfregago orofaringico colhido em cobas " PCR
Media
•
• Esfregago anorretal colhido em cobasa PCR Media
®
PCR Media
• Urina de homens e mulheres estabilizada em cobas
®

• Amostra cervical colhida em Solugao PreservCyt

Quantidade de amostra • 400 pi para todas as amostras de esfregagos
®
necessaria 400 para a$ amostras de PreservCyt
#

•
^
850 pi para as amostras de urina

Duragao do teste • < 3,5 horas para o primeiro resultado

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