ABSTRAK

Tacrine adalah obat pertama yang disetujui untuk pengobatan penyakit Alzheimer (AD) pada
tahun 1993, yang ditarik pada tahun 2013 karena hepatotoksisitasnya. Namun, turunan tacrine
non-hepatotoksik baru telah terus-menerus dicari. Dalam konteks ini, sejak 1997, kami telah
menyiapkan sejumlah tacrin yang difungsikan secara beragam dengan mengubah cincin
benzena yang ada di tacrine menjadi inti cincin aro-matic beranggota lima atau enam yang
dapat menghadirkan aktivitas antikolinesterase dan ikatan-tepat farmakologis tambahan.
Senyawa baru ini dirancang sebagai struktur yang disandingkan antara tacrine dan antagonis
Ca2þ yang terkenal, 1,4-dihydropyridine, dengan tujuan mendapatkan ligan multi-target
diarahkan untuk AD. Dalam akun ini, kami menyajikan hasil kami pada keluarga analog
tacrine PyridoTacrine (PyrTac), yang dihasilkan dari penggantian cincin benzena dengan
piridin. Kami menyoroti profil farmakologis mereka dan meninjau analog serupa dalam
literatur. Set pertama PyrTac menunjukkan aktivitas penghambatan kolin-terase (ChE) dan
profil pemblokiran saluran Ca2þ gated-voltage (VGCC). Keluarga kedua dengan peningkatan
inhibitor ChE kehilangan aktivitas blok VGCC. Namun, senyawa timbal dari keluarga ini (5f)
menyajikan profil pengaktifan fosfatase 2A (PP2A) dan menunjukkan hasil yang menarik
dalam eksperimen model in vivo dari AD dan stroke. Kami telah mengidentifikasi PyrTac
ethyl 5-amino-2-methyl-6,7,8,9-tetrahydrobenzo [b] [1,8] naphthyridine-3-carboxylate (5f),
yang menghadirkan sifat farmakologis tambahan selain sekadar perbaikan kolinergik Properti
baru ini memerlukan perhatian 5f dan pengembangan lebih lanjut sebagai agen terapi baru
untuk terapi AD

INTRODUCTION

Penyakit Alzheimer (AD) adalah penyakit neurodegeneratif yang ditandai dengan hilangnya
fungsi memori dan kognitif secara progresif, karena beberapa ciri morfologis dan
fisiopatologis, seperti kematian neuronal, kehilangan signifikan penularan kolinergik, dan
adanya protein menyimpang intraseluler dan ekstraseluler -gregates. Sayangnya, tidak ada
perawatan terapeutik yang tersedia untuk AD pada hari ini [1]. Tacrine (1, Gambar. 1) [2],
inhibitor asetilkolinesterase (AChE) pertama yang disetujui untuk pengobatan AD [3], ditarik
dari penggunaan klinis karena hepatotoksisitasnya [4,5]. AChEI lain, seperti donepezil [6]
atau rivastigmine [7], telah menunjukkan hasil terapi yang sederhana.

Secara bersamaan, target biologis lainnya, seperti amiloid beta peptida (Ab) [8] dan protein
tau [9], telah memusatkan upaya penelitian dan pendanaan dari organisasi publik dan swasta,
meskipun tidak ada obat berdasarkan target potensial ini telah disetujui hingga tanggal Dalam
skenario ini, kami selalu berpikir bahwa tacrine "terabaikan" masih merupakan molekul
referensi yang layak untuk diteliti ulang mencari turunan tacrine non-hepatotoksik, yang
sudah tersedia. Derivatif ini harus dapat mengembalikan level kunci neurotransmitter
acetylcholine (ACh) [10], neuro-pelindung, permeabel otak, dan mampu berinteraksi dengan
sistem enzimatik lain atau reseptor yang terlibat dalam kemajuan dan perkembangan penyakit
[11]. ] Dengan demikian, pencarian ini akan setuju dengan apa yang disebut sebagai strategi
berbasis target multi ligan (MTDL). Strategi ini didasarkan pada fakta bahwa penyakit
neurodegeneratif memiliki asal multifaktorial. Dengan demikian, obat-obatan yang diarahkan
untuk intervensi pada target tunggal akan kurang efektif daripada kombinasi obat yang
mencapai target yang berbeda, atau obat tunggal yang dapat mempengaruhi beberapa tar-
terlibat dalam penyakit, yang disebut obat multi-target [12]. Untuk mencapai tujuan ini, kami
menyiapkan sejumlah tacrin yang difungsikan secara beragam dengan mengganti cincin fusi
benzena yang ada di tacrine oleh inti cincin aromatik beranggota lima atau enam (Gbr. 1).
Strategi ini membantu kami mengembangkan turunan tacrine yang digabungkan dengan
properti farmakologis baru, blokade saluran Ca2þ gated-voltage (VGCC), karena strukturnya
meniru penjajaran tacrine dan antagonis VGCC terkenal 1,4-dihydropyridines (Gbr. 1).
Aktivitas penghambat potensial VGCC bisa menjadi menarik, mengingat bahwa salah satu
ciri fisiopatologis dari AD dan banyak penyakit neurodegeneratif lainnya adalah deregulasi
dan kelebihan neuron Ca2þ [13]. Dengan demikian, desain obat bisa efektif untuk
menargetkan enzim cholinesterase dan VGCC dapat memberikan agen terapi yang baik untuk
AD, dan akan dianggap sebagai pendekatan MTDL yang inovatif. Dengan mengganti
benzena A (Gambar 1) dengan piridin, turunan tacrine baru menyajikan struktur 1,8-
naphthyridine, oleh karena itu kami menamai keluarga PyridoTacrines (PyrTac) berikut ini
(Gbr. 1), yang akan dibahas dalam ulasan ini . Selain minat utama kami pada desain MTDL
menggunakan tacrine sebagai perancah kimia, kami menganggap penting untuk
memperhatikan asal hepatotoksisitas yang diberikan oleh tacrine. Diketahui bahwa oksidasi
metabolik tacrine yang dikatalisis CIP1A2 menghasilkan hidroksilasi pada karbon C3 (posisi
yang sama dinomori sebagai C2 dalam turunan PyrTac, Gambar 1) untuk membentuk
metabolit tipe quinone-methyde. Metabolit ini sebenarnya bertanggung jawab atas tacrine
hep-atotoxicity (Gambar 2), sebagian besar diamati pada pasien dengan polimorfisme yang
rusak dari enzim glutathione-S-transferase [14]
Seperti yang ditunjukkan pada Gambar. 2, istilah baru akan mencegah pembentukan
metabolit toksik dengan dua cara. Pertama, penggantian cincin yang difusi benzena oleh
piridin adalah strategi khas untuk mencegah metabolisme yang tidak diinginkan [15]. Kedua,
turunan PyrTac ini memiliki kelompok metil yang berperilaku sebagai penghambat
metabolisme, mengarahkan kembali metabolisme oksidatif ke pembentukan spesies yang
jauh lebih sedikit beracun (Gbr. 2) [16]. Singkatnya, desain kimia yang dipilih untuk turunan
tacrine baru yang memiliki kemampuan MTDL potensial sangat sederhana, dan berdasarkan
pada penggantian cincin benzene "A" di tacrine oleh sepeda het-eroc yang beranggotakan
lima atau enam anggota, tetap utuh inti yang mengikat inti "4-aminopyridine" [17,18]. Selain
itu, cincin gabungan sikloheksana dipertahankan atau diganti oleh sikloalkana beranggota 5-,
7- atau 8 (Gbr. 1).

Dua ulasan sebelumnya [19,20] membahas pekerjaan dan hasil pada rasemik tipe A
PyranoTacrines (Gbr. 3), mengidentifikasi turunan tacrine berikut sebagai yang terbaik dari
setiap keluarga: etil 5-amino-6,7,8,9-tetrahydro -4- (4-methoxyphenyl) -2-methyl-4H-pyrano
[2,3-b] quinoline-3-carboxylate [(±) -1] (Gbr. 3) [19] [blocker VGCC yang kuat (memblokir
Entri 45Ca2þ yang diinduksi Kþ sebesar 49,7%), kuat, reversibel, dan AChEI yang tidak
kompetitif (IC50 ¼ 0,87 ± 0,40 mM), menunjukkan juga inhibisi sedang
butyrylcholinesterase (BuChE)

(IC50 ¼ 6,2 ± 0,6 mM)]; 11-amino-7,9,10,12-tetrahydro-12- (3,4,5-

trimethoxyphenyl) -8H- [1] benzopyrano [2,3-b] quinolin-3-ol

[(±) -2] [Electrophorus electricus tidak kompetitif, selektif, kuat

(Ee) AChEI (IC50 ¼ 0,041 ± 0,001 mM), non-hepatotoksik,

neuroprotektan, antioksidan, dan penghalang darah-otak (BBB) permeabel] (Gbr. 3) [20], dan
14- (3,4-dimethoxyphenyl) -9,11,12,14-tetrahydro-10H-naphtho [10, 20: 5,6] pyrano [2,3-b]
quinolin-13-amine [(±) -3] [tipe campuran, selektif manusia (h) AChEI (IC50 ¼ 0,083 ±
0,024 mM), kurang toksik daripada tacrine, neuroprotectant, dan non-neurotoxic] (Gbr. 3),
semuanya diuji dalam bentuk rasemik mereka [20].

Tujuan dari tinjauan ini adalah untuk meringkas hasil pada keluarga PyrTacs (IA) (Gambar 1)
yang diperoleh oleh kelompok penelitian kami dan dilaporkan oleh orang lain. Ulasan ini
akan fokus terutama pada dua senyawa timbal yang ditemukan dalam keluarga ini, 4b dan 5f
(Gbr. 4).

2. Pyridotacrines

Sebelumnya untuk pekerjaan kami, hanya ada satu PyrTac, yang dilaporkan dalam literatur
oleh Chaki et al. dalam keluarga turunan tacrine yang bertujuan meningkatkan penyerapan
kolin dalam sinaptosom hippocampal, yang mencapai aktivitas sedang (Skema 1). Turunan
ini, N-

butyryl-1-aza-tacrine, disiapkan oleh Friedlander € -type condation menggunakan ZnCl2

sebagai asam Lewis, yang membutuhkan dekompresi lebih lanjut dengan amonia untuk
memotong adisi NH2 $ ZnCl 2. Kemudian, di tengah-tengah dengan butyric anhydride
menghasilkan campuran turunan tacrine mono-acylated dan diacylated, yang selanjutnya
diperlakukan dengan amonia untuk menghasilkan produk yang diinginkan [21].

2.1. 5-Amino-4-aryl-2-methyl- [1,8] -naphthyridines (IAa)

PyrTacs pertama yang disintesis oleh kelompok penelitian kami adalah keluarga IAa (Gbr. 4).
Untuk menyiapkan senyawa ini, sebelumnya ke

Reaksi tipe Friedlander € yang mengarah ke inti 5-aminoasilridin, 4H-pyrans yang

mengandung substruktur 2-amino-3-nitril diperlakukan dengan amonium asetat dalam asam
asetat untuk menghasilkan 2-amino-3-cyanopyridine (Skema yang merespons korosif). 2)
dengan hasil sedang.

Kemudian, menggunakan AlCl3 sebagai asam Lewis dalam jumlah stoikiometrik dan Refluks
1,2-dikloroetana, kondensasi Friedlander € 22 dilakukan di hadapan siklobbonon terpilih
dengan hasil yang baik, untuk mendapatkan PyrTac IAa yang diinginkan (Skema 2) [23].
Kemampuan turunan tacrine ini untuk menghambat enzim cholinesterase dinilai dan
dilaporkan dalam makalah pertama dari seri, diterbitkan pada tahun 2001 (Tabel 1) [23].

Dalam karya ini, enam PyrTac 4a-f (Tabel 1) pertama dibedakan dengan ada atau tidak
adanya gugus metoksi pada cincin fenil yang tertunda di C4 (sesuai dengan gaya penomoran
yang ditunjukkan pada Gambar. 1), dan oleh memiliki cyclopentane, cyclohexane

IC50 (mM) values for the inhibition of AChE/BuChE of PyrTacs 4a-f, tacrine and reference compounds 1 and 2 (na ¼ not active; nd ¼ not determined) [23].
atau sikloheptana sebagai cincin menyatu. Seperti ditunjukkan pada Tabel 1, penggantian
sikloheksana dengan siklopentana atau sikloheptana sebagai cincin yang menyatu dengan
sikloalkana menyebabkan hilangnya aktivitas penghambatan AChE. Kelompok metoksi tidak
meningkatkan penghambatan AChE. Oleh karena itu, tacrine de-rivative 4b (Tabel 1, dicetak
tebal) yang tidak disubstitusi dipilih sebagai senyawa utama dari keluarga turunan PyrTac
IAa lainnya dengan tujuan mengoptimalkan sifat farmakologisnya yang berfokus pada
potensi terapeutik untuk AD. Dengan demikian, desain obat yang berorientasi pada
keragaman berfokus pada penyelidikan efek pada aktivitas farmakologis dari sub-stituen pada
cincin fenil yang tertunda dan ukuran cincin menyatu sikloalkana. Selain itu, aktivitas
blokade VGCC juga diuji. Neuronal Ca2þ yang berlebihan adalah kejadian umum pada
kebanyakan penyakit neurodegeneratif [24], dan beberapa blocker VGCC telah dipelajari
dalam uji klinis untuk kemungkinan penggunaannya untuk pa-thologies [25]. Oleh karena itu,
untuk mempelajari MTDL untuk penyakit neurodegeneratif, senyawa ini dianalisis lebih
lanjut sebagai penghambat VGCC. Dengan anteseden ini dalam pikiran, kami menganalisis
efek PyrTacs 4b-u pada peningkatan Ca2þ intraseluler yang disebabkan oleh rangsangan
depolarisasi, yaitu solusi ekstraseluler dari Kþ 70 mM, dalam model neuronal in vitro, yaitu
sel kromafin sapi. Tabel 2 menunjukkan blokade entri Ca2þ melalui VGCC karena
keberadaan PyrTac IAa yang dipreinkubasi pada 3 mM [26]. Terbaik PyrTacs memblokir
VGCC diuji lebih lanjut dalam percobaan organ terisolasi dengan penggunaan

35 mM Kþ-pra-kontrak strip aorta tikus. Dalam percobaan ini, kami mempresentasikan

bahwa kami menyajikan perilaku negatif ketika diberikan pada konsentrasi submikromolar,
karena meningkatkan kontraksi tergantung-K dari persiapan jaringan. Ketika dosisnya
ditambah secara kumulatif, tikus aorta mengendur pada 3 mM [27]. Kami berhipotesis bahwa
4b dapat bertindak sebagai agonis parsial VGCC (Gambar 5). Untuk Menunjukkan esta, tes
fluoresensi sel tunggal Apakah dilakukan, mengukur osilasi Ca2þ Dengan pewarna
fluorescent Fura-2 di hadapan Konsentrasi rendah 4b, di mana Mereka Kami telah
mendeteksi perilaku agonis. Kami com-pound Diamati Itu 4b dirangsang sitosol Ca2þ sapi
kromafin sel di ketinggian di Konsentrasi serendah 10 nM dalam kondisi istirahat ([KTH] ex
¼ 5,9 mM), yaitu tanpa menyebabkan sel dengan konsentrasi K-ekstra seluler yang tinggi
[28]. Menariknya, efek agonis dari 4b adalah pencegah oleh kehadiran L-jenis Ca2þ
antagonis nifedipine, tapi tidak dengan Ne atau P / Q-jenis VGCC blocker u-conotoxin GVIA
dan u-agatoxin IVA, masing-masing, menunjukkan Itu 4b senyawa akan menjadi agonis
parsial VGCC tipe-L selektif (Gbr. 5) [28]. Sifat ini, bersama dengan aktivitas penghambatan
AChE yang layak, menjadikan 4b senyawa timbal yang menarik untuk memperdalam sifat-
sifat makarologisnya, yang berpusat pada penggambaran profil pelindung sarafnya. Hal ini
dikenal juga Itu Meningkatkan kecil dari sitosol Ca2þ con-centrations, tidak cukup untuk
mengaktifkan protease Ca2þ-dependent, Neuron Bisa bersiap-siap untuk menghadapi
rangsangan beracun yang terkait dengan neuro-degenerasi. Percobaan lebih lanjut
mengungkapkan Itu senyawa 4b dilindungi sapi kromafin sel terhadap kematian sel exacer-
tertahan oleh thapsigargin (sebuah retikulum penargetan Ca2þ Ionofor endoplasma),
veratridine (Nath saluran agonis Itu menginduksi depolarisasi sel), H2O2 (model stres
oksidatif) atau Ab [28] (Gbr. 5). Efek neuroprotektif terhadap veratridine, di mana kelebihan
Ca2þ memainkan peran kunci, dilawan oleh penghambat Bcl-2 HA-14-1. Ini menunjukkan
sebuah antiapoptotic Itu 4B profil diberikan melalui antiapoptotic Ca2þ tergantung protein
Bcl-2 telah dikonfirmasi oleh imunohistokimia Yang dan barat-blot ana lyses- (Gbr. 5).

Selain blokade VGCC, Tabel 2 merangkum aktivitas penghambatan pada enzim

cholinesterase dari keluarga baru PyrTac 4g-u, dibandingkan dengan 4b [26]. Untuk menguji
aktivitas penghambatan AChE senyawa, kami selalu menggunakan elektron yang diekstraksi
dari Electrophorus electricus (belut listrik, EeAChE), karena secara struktural mirip dengan
AChE manusia, sangat diekspresikan dalam persimpangan neuromuskuler, murah, dan
mudah kompatibel dengan tinggi Tes skrining-throughput. Mirip dengan apa yang diamati
pada batch pertama dari senyawa IAa yang digambarkan pada Tabel 1, ekspansi cincin
diinduksi untuk menurunkan aktivitas penghambatan AChE. Oleh karena itu, sikloheksana

tetap menjadi bagian terbaik untuk penghambatan AChE. Selain itu, substituen yang menarik
elektron pada cincin fenil menghasilkan data IC50 yang baik, mirip dengan timah 4b, yang
terbaik adalah turunan terfluorinasi 4j (Tabel 2). Senyawa terbaik dari keluarga diuji sebagai
inhibitor BuChE, mencapai penghambatan 10 kali lebih buruk daripada yang menggunakan
AChE (Tabel 2). Dengan demikian, rangkaian senyawa ini dapat dianggap sebagai AChEI
selektif.

Oleh karena itu, PyrTac-IAa 4b dapat bertindak sebagai neuroprotektan terarah multi-target
baru dengan minat potensial terhadap DA, karena menghambat AChE dan memodulasi level
Ca2þ neuronal, sehingga mengerahkan aktivitas pelindung-saraf [28]. Singkatnya, kami telah
memperoleh turunan tacrine yang menyajikan penghambatan AChE moderat, sementara
menggabungkan sifat-sifat baru yang menarik di luar hipotesis kolinergik, seperti regulasi
halus dari ketidakseimbangan Ca2þ neuronal (Gbr. 5).
Tren untuk mengoptimalkan senyawa timbal 4b juga berfokus pada penggantian cincin fenil
yang tertunda dengan cincin piridin (Tabel 3). Jalur reaksi serupa dengan sintesis PyrTac IAa
tersubstitusi-fenil yang ditunjukkan dalam Skema 2 [26]. Namun,

Kondensasi Friedlander € dipengaruhi oleh adanya cincin piridin yang tertunda, karena hanya
turunan yang mengandung substituen 40-piridil yang dapat disintesis. Derivatif 4v-x, yang
berbeda dalam cycloalkane yang menyatu (4v, cyclopentane; 4w, cyclohexane dan; 4x,
cycloheptane) menampilkan aktivitas penghambatan yang serupa pada enzim cholinesterase
dibandingkan dengan analog 4a-u (Tabel 3). Dengan demikian, fusi dengan sikloheksana
memberikan AChEI terbaik. Properti pemblokiran VGCC mirip dengan turunan IAa
sebelumnya [29].

Secara keseluruhan, 4b adalah IAT PyrTac terbaik dari keluarga. Untuk alasan ini, kompleks
4b dengan AChE dipelajari oleh dinamika molekuler untuk mengkarakterisasi aksi
penghambatannya pada AChE, mengamati suatu masif

tolakan antara cincin fenil yang tertunda dan asam amino yang membentuk situs katalitik
AChE [26]. Ini mendorong kami untuk merancang dan mengkarakterisasi PyrTac dengan
ekstrusi gugus fenil yang demikian, dengan tujuan meningkatkan penghambatan AChE,
meskipun mereka dapat kehilangan gugus 1,4-dihydropyridine-like (family IAb, Fig. 1) .

2.2. 5-Amino-2-methyl-1,8-naphthyridines (IAb)

Keluarga kedua PyrTac (IAb) ditandai dengan kurangnya

substitusi di C4 mereka (Gambar 1 dan 4). Sebelumnya untuk pekerjaan kami di IAb,
beberapa PyrTac, juga kurang substitusi ini, disintesis dan diuji untuk AD. Hu et al.
menggambarkan sintesis dan evaluasi penghambatan AChE / BuChE dari seri turunan bis-
tacrine, mengambil keuntungan dari hasil in vivo yang luar biasa yang telah ditunjukkan oleh
bis-7-tacrine [30]. Di antara beberapa turunan yang ditandai oleh ekspansi / kontraksi
sikloalkana dan substitusi halogen, tiga aza-bis-tacrin yang tidak tersubstitusi, dihubungkan
secara berbeda oleh rantai hidrokarbon linier beranggota 6, 7 atau 8 yang disintesis melalui
kondensasi tipe Niementowski (Skema 3) dan dievaluasi, menunjukkan aktivitas
penghambatan AChE di sekitar rentang nanomolar, yang kurang kuat dari analog-benzo
mereka [31].
Sayangnya, beberapa contoh PyrTac yang ditemukan di litter-ture adalah bagian dari
rancangan obat turunan tacrine yang berorientasi keanekaragaman yang lebih luas, di mana
PyrTac mewakili kelompok kecil. Dua turunan pyrazolo-PyrTac dirancang, disintesis, dan
dievaluasi oleh Barreiro et al., Pada tahun 2003 sebagai AChEIs [32], menunjukkan aktivitas
penghambatan moderat (Skema 3). Baru-baru ini, Li et al. telah menggambarkan MTDL
berdasarkan pada menghubungkan alkylpiperazines, vila-zodone, dan analog tacrine, menilai
aktivitas penghambatan AChE dan agonis 5HT1A mereka [33]. Di antara 30 ligan yang
dilaporkan, hanya dua PyrTac yang dilaporkan (Skema 3), yang menunjukkan aktivitas
reguler, dibandingkan dengan turunan lainnya.

Singkatnya, kegiatan PyrTac sebelumnya yang ditemukan dalam literatur tidak lebih baik
daripada benzoderivat analognya, dan mereka tidak menjadi subjek fokus khusus. Dengan
demikian, kita dapat berasumsi bahwa PyrTac belum menarik minat khusus pada obat R & D
untuk AD. Namun demikian, fakta ini tidak menghalangi kami untuk secara khusus
mengembangkan turunan PyrTac IAb. Keluarga baru ini menghadirkan sebuah

perubahan penting dalam struktur kimia, sedemikian rupa sehingga persiapan prekursor yang
mengandung gugus 2-amino-3-nitril memerlukan rute sintetik alternatif (Skema 2), mulai dari
2-piridon yang tersubstitusi dengan mudah, disiapkan dengan perlakuan alkil asetat asetat
dengan dialkylacetals dimethylformamide, yang kemudian terpapar dengan POCl3 untuk
menghasilkan turunan 2-chloropyridine yang sesuai. Kemudian, substitusi nukleofilik dengan
benzylamine dan penghapusan berikutnya dari kelompok benzyl diberikan

kami bahan awal yang diinginkan memenuhi syarat untuk kondensasi tipe Friedlander €,
yang mengarah pada sintesis senyawa IAb (Skema 4) dengan hasil yang baik [34,35].

Seperti yang kami harapkan, efek penghambatan keseluruhan PyrTac IAb pada aktivitas
EeAChE ditingkatkan (Tabel 4), dibandingkan dengan keluarga IAA, dibenarkan oleh
penghapusan cincin fenil yang tersisa yang menghambat interaksi dengan situs katalitik
AChE. Studi docking mengungkapkan afinitas penting ke situs ini dari AChEI terbaik dari
keluarga IAb (5f) (Tabel 4, dicetak tebal) [34]. Selektivitas terhadap EeAChE versus BuChE
juga ditemukan. Mempertimbangkan penghambatan yang baik dari aktivitas senyawa 5a-h
pada EaAChE, kami memutuskan untuk mengevaluasi bagaimana senyawa ini menghambat
AChE manusia (hAChE). Tabel 4 menunjukkan bahwa senyawa 5a-h adalah inhibitor
moderat hAChE. Kembali ke penghambatan EeAChE, kami memiliki kesempatan untuk
menguji efek substituen alkil ester pada penghambatan cholinesterase, menemukan bahwa
perubahan ini tidak merugikan untuk mendapatkan penghambatan yang baik (Tabel 4).
Dalam kasus apa pun, turunan cincin yang bersatu sikloheksana tetap merupakan inhibitor
terbaik, mis. compound 5f (Tabel 4, dicetak tebal). Namun, seperti yang diharapkan, keluarga
IAb kehilangan properti pemblokiran VGCC [35]. Jadi, sepertinya kami kehilangan profil
MTDL mereka. Namun demikian, kami menganggap bahwa keluarga PyrTac, IAb, layak
untuk dianalisis dalam beberapa model kematian saraf yang terkait dengan DA. Kami
menemukan bahwa keluarga PyrTac IAb mengurangi kematian sel dalam sel SH-SY5Y yang
mengalami koktail neurotoksik yang terdiri dari rotenone dan oli-gomycin A (R / O). Koktail
ini menghambat kompleks I dan V dari rantai transpor elektron mitokondria, masing-masing,
sehingga mengubah skenario stres oksidatif dengan asal dalam gangguan respirasi
mitokondria [36]. Model in vitro lain terkait kematian neuronal yang digunakan di
laboratorium kami adalah yang ditimbulkan oleh paparan racun laut asam okadaat (OA).
Polieter ini secara selektif menghambat fosfoprotein fosfatase 2A (PP2A), enzim tau-
dephosforilasi utama. Penghambatan PP2A menghasilkan tau hiper-fosforilasi dan
pembentukan akibat kusut neurofibrillary di dalam neuron, salah satu ciri utama dari
perkembangan AD. Dalam situasi khusus ini, hanya senyawa 5f yang mampu mengurangi
hilangnya viabilitas sel dalam sel SH-SY5Y yang terpapar OA [35]. Terkejut dengan temuan
ini, kami memperdalam mekanisme kerja yang bertanggung jawab dari profil pelindung saraf
semacam itu. Analisis pemodelan molekul mengungkapkan bahwa 5f menyajikan kesamaan
struktural dan elektrostatik dengan fragmen OA yang tidak secara langsung tersirat dalam
penghambatan PP2A [35]. Oleh karena itu, pertanyaan yang muncul adalah apakah 5f dapat
mengikat PP2A, dan apakah interaksi ini mampu memusuhi tindakan penghambatan OA pada
khususnya, atau inhibitor PP2A endog-enous pada umumnya. Hipotesis ini didukung oleh
eksperimen docking molekuler, yang menunjukkan bahwa 5f berinteraksi dalam kantung
ikatan subunit katalitik PP2A (PP2A-C) jauh dari situs hidrolisis ester fosfat, tetapi mampu
bersaing dengan inhibitor PP2A besar, seperti OA [35] Mengkonfirmasikan

hipotesis ini, ketika kami mengukur aktivitas PP2A dalam sel SH-SY5Y dengan uji
imunopresipitasi, kami mengamati bahwa senyawa 5f pada 10 mM mencegah penurunan
aktivitas fosfatase yang diinduksi oleh OA 30 nM. Dengan demikian, kami telah menemukan
properti farmakologis baru dalam keluarga turunan tacrine, yaitu profil pengaktifan PP2A
(Gbr. 6). Perilaku seperti itu akan menyebabkan konsekuensi penting dalam skenario
patologis, karena PP2A adalah regulator utama dalam proses fosforilasi, yang secara luas
terlibat dalam kontrol proliferasi sel. Untuk alasan ini, obat pengaktif PP2A telah dipelajari
untuk kemoterapi. Mengenai AD, PP2A tidak hanya mengurangi tingkat fosforilasi tau, tetapi
juga menurunkan aktivitas tau kinase, di antara kegiatan lainnya. Misalnya, ketika PP2A
mende-fosforilasi N-metil-D-aspartat (NMDA) - reseptor glutamat yang sensitif, yang terlalu
aktif menginduksi kelebihan sel Ca2þ dan eksotoksisitas dalam skenario neurodegenerasi,
saluran Ca2 coupl yang digabungkan menjadi desensitized, mengurangi tingkat penyerapan
Ca2þ. oleh neuron. Menariknya, pelindung saraf yang diberikan oleh 5f pada irisan
hippocampus tikus menjadi 1 mM glutamat dinetralkan oleh 10 nM OA, mendukung gagasan
bahwa 5f dapat dilindungi terhadap eksitotoksisitas yang diinduksi glutamat dengan
mengaktifkan PP2A (Gbr. 6) [37].

Secara keseluruhan, PyrTac-IAb 5f adalah MTDL untuk AD, karena menyajikan aktivitas
makarologis terhadap dua target terapi yang terlibat dalam neurodegeneration, yaitu Enzim
cholinesterase dan PP2A. Potensi neuroprotektif multipotennya semakin dikonfirmasi, karena
melindungi sel-sel SH-SY5Y terhadap toksisitas yang diperburuk oleh Ab dan irisan
hippocampal yang mengalami kekurangan oksigen dan glukosa (OGD) diikuti oleh
reoksigenasi (Gbr. 6) [35]. Analisis efek 5f pada kelangsungan hidup neuron diselesaikan
dengan mengeksplorasi mekanisme molekuler yang mendasari aktivitas neuroprotektifnya,
melalui analisis ekspresi ekspresi gen pada pemberian 5f pada sel SH-SY5Y (Gbr. 6) [38].
Jalur transduksi sinyal yang dihasilkan oleh QUIAGEN menunjukkan bahwa beberapa enzim
antioksidan seperti HO-1, GSR, SQSTM1, dan TRXR1 diatur ke atas. Selain itu, enzim yang
terlibat dalam respon kelangsungan hidup, terutama P21, BclXL dan Wnt6, juga diinduksi.
Temuan ini mengkonfirmasi bahwa PyrTac IAb 5f adalah obat yang memenuhi syarat untuk
pengobatan penyakit neurodegeneratif (Gambar 6).

Untuk semua alasan ini, senyawa 5f, bernama CR80-ITH12246, dipilih untuk menguji
potensi terapeutiknya dalam percobaan in vivo, tetapi tidak sebelum menguatkan bahwa itu
dipenuhi salah satu tujuan utama desain kami, yang sebelumnya disorot dalam ulasan ini,
yaitu. pengurangan hepatotoksisitas. Dengan demikian, garis sel HepG2 yang diturunkan dari
hati terpapar dengan senyawa 5f pada konsentrasi tinggi, mengevaluasi toksisitas per 5f
sebagai hilangnya viabilitas sel yang diukur dengan metode reduksi MTT. PyrTac-IAb 5f
hanya menghasilkan viabilitas kehilangan sel yang signifikan dari 0,1 mM, yang jauh lebih
tinggi dari 5f dengan konsentrasi yang diperlukan untuk mengerahkan efek neuroprotektif. Itu
juga jauh lebih toksik untuk sel HepG2 daripada tacrine [37].
Setelah mengkonfirmasi pengurangan hepatotoksisitasnya, senyawa 5f diperiksa dalam dua
model eksperimental in vivo AD dan stroke [37]. Pertama, untuk menguji potensi terapeutik
untuk AD, 5f diberikan pada tikus yang mengalami skopolamin muskarinik muskarinik [40],
yang ingatannya terganggu, yang menyerupai apa yang terjadi pada AD. Kemampuan PyrTac
5f untuk mengurangi hilangnya memori yang diinduksi skopolamin pada tikus dinilai dengan
tes penempatan objek [39],

yang merupakan metode mudah untuk menilai memori spasial. Pengurangan memori tikus
yang ditantang dengan 0,63 mg / kg skopolamin terutama dikurangi dengan senyawa 5f yang
disuntikkan pada dosis 10 mg / kg, mirip dengan efek obat antibiotik gal-antamin [37].
Kedua, berkaitan dengan stroke, protokol yang dipilih untuk menguji efek 5f pada kerusakan
otak adalah oklusi pembuluh kecil oleh fotothrombosis pada tikus [41], yang menghasilkan
infark kortikal fokus. Photothrombosis dicapai dengan pengobatan Rose Bengal dan
penerangan berikutnya dari korteks serebral, sehingga secara besar-besaran membentuk
spesies oksigen reaktif yang bertanggung jawab atas iskemia fokus otak. Pemberian 5f pada
2,5 mg / kg 20 menit sebelum fotothrombosis, dan dua kali per hari selama 2 hari,
mengurangi volume infark sebesar 59% dibandingkan dengan individu yang hanya diobati
dengan saline [37]. Singkatnya, tes in vivo ini telah mendorong kami untuk terus
memperdalam karakterisasi praklinis PyrTac ini untuk pengobatan penyakit neurodegeneratif,
seperti stroke dan AD.

3. Kesimpulan

Dalam akun ini, kami telah meninjau hasil kelompok kami dan laboratorium lain pada desain,
sintesis, dan evaluasi farmakologis dari serangkaian analog tacrine baru, PyridoTacrines
(PyrTac). PyrTac dirancang untuk meningkatkan profil farmakologis dari tacrine obat
standar, yang menyangkut sifat kolinergik dan toksisitasnya, serta untuk menemukan
aktivitas pada target biologis yang terlibat dalam asal dan perkembangan AD. Tujuan
pertama kami adalah mengembangkan MTDL yang dapat berinteraksi dengan keduanya

Enzim cholinesterase dan VGCC, dengan menyandingkan turunan 1,4-dihidropiridin dan

tacrine. Jadi, kami mendapatkan Pyr-TacIAa baru. Mencoba untuk meningkatkan
penghambatan enzim cholinesterase, kami memperoleh senyawa baru PyrTac IAb, yang
kehilangan sifat penghambat VGCC, tetapi kami menemukan bahwa PyrTac IAb etil 5-
amino-2-metil-6,7,8,9-tetrahydrobenzo [b] [ 1,8] naphthyridine-3-carboxylate (5f), juga
dinamai CR80-ITH12246 (Gbr. 5) mampu memulihkan aktivitas fosfatase PP2A. Senyawa 5f
dapat dianggap sebagai molekul kecil, berbasis MTDL, dan tersedia yang memiliki profil
farmakologis yang sangat menarik karena penggunaannya yang potensial dalam terapi AD.
Faktanya, turunan tacrine 5f adalah AChEI yang kuat dan selektif dibandingkan dengan
BuChE. Selain itu, PyrTac 5f bertindak sebagai agen pelindung saraf yang kuat terhadap
berbagai penghinaan beracun, seperti R / O, OA, Ab, dan paparan berlebih glutamat, dan
mampu menginduksi ekspresi gen bertahan hidup. Potensi terapeutiknya telah dikonfirmasi
secara in vivo pada model hewan dari dua penyakit otak yang saat ini kurang memiliki terapi
yang efisien, yaitu. AD dan stroke. PyrTac 5f mengurangi kerusakan kognitif yang dipicu
oleh skopolamin, dan volume infark yang dipicu oleh fotothrombosis; keduanya adalah hasil
yang sangat menjanjikan yang mendukung potensi terapi dari molekul ini. Selain itu, hasil ini
mendukung peran tacrine sebagai perancah kimia yang cocok untuk desain obat baru untuk
penyakit neurodegeneratif.

Ucapan Terima Kasih

Para penulis berterima kasih kepada semua rekan kerja atas upaya, komitmen dan kontribusi
mereka untuk sintesis dan evaluasi biologis dari turunan tacrine yang diperlihatkan dalam
akun ini.

Daftar singkatan

Ab amyloid b peptide

ACh acetylcholine

AChE acetylcholinesterase

AChEI acetylcholinesterase inhibitor

Penyakit Alzheimer AD

Sawar darah-otak BBB

BuChEbutyrylcholinesterase
Saluran Ca2þ berpagar tegangan VGCC

MTDL multi-target ligan terarah

NMDA N-metil-D-aspartat

Asam okadaat OA

OGD kekurangan oksigen dan glukosa

PP2A phosphoprotein phosphatase 2A

R / O rotenone plus oligomisin A