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Diseño Experimental
De acuerdo a trabajos previos (Gettar et al., 2000; Martín et al., 1995) y nuestras posibilidades de variar diversos
parámetros se optó por analizar la influencia de cuatro factores con el fin de encontrar las mejores condiciones para
cuantificar las cuatro especies de arsénico en estudio. Se utilizó un diseño central de superficie de respuesta rotable, que
responde al arreglo de composición central 24 + 4 x 2 + 7 con repetición del punto central, para estimar la influencia
sobre la señal de cada especie de arsénico (Montgomery D. y Runger G., 2000). Las variables se seleccionaron en
función de trabajos previos (Morand et al., 2003), las mismas se analizaron en dos niveles: velocidad de flujo del buffer
Na2HPO4-NaH2PO4 (0,8 – 1,4 ml.min-1), concentración de HCl (1,2 – 3,0 mol.l-1); IK (0,9 – 2,5 % p/v) y NaBH4 (0,8 –
2,0 % p/v). La Tabla 2 muestra los valores codificados de los niveles de los factores seleccionados y sus respectivos
valores experimentales (-α, -1, 0, 1, α), donde α =2.00.
Códigos Parámetros -2 -1 0 1 2
A Flujo de buffer (ml.min-1) 0,5 0,8 1,1 1,4 1,7
B HCl concentración (mol.l-1) 0,3 1,2 2,1 3,0 3,9 donde E(Y) es el valor de la respuesta esperada, β0, βi,
C KI concentration (% p/v) 0,1 0,9 1,7 2,5 3,3 βij parámetros del modelo, Xi y Xj son los códigos de
D NaBH4 concentration (% p/v) 0,2 0,8 1,4 2,0 2,6 los factores estudiados y k es el nº de factores
analizados.
Discusión de Resultados
Integrados los cromatogramas, se usó el programa computacional Statgraphics Plus 5.0 para determinar los coeficientes
de regresión del modelo de segundo orden. La significancia y ajuste del modelo se realizó mediante análisis de la
varianza. Los resultados obtenidos para cada especie fueron diferentes y como el objetivo del trabajo fue encontrar las
mejores condiciones para cuantificarlas a la vez; se utilizó un artilugio matemático de manera de relacionar todas las
especies, el cual fue sumar la relación área x altura de cada una ya que de esta manera se compensan las diferencias de
señal que hay entre una especie y otra.
El análisis de la varianza expresa la variabilidad en la respuesta para cada uno de los efectos por comparación del
cuadrado de la media y el error experimental estimado. Los resultados del ANOVA, mostraron que existen nueve
efectos con p-valor menores a 0,05 lo cual indica que dichas variables y sus interacciones tienen una significativa
influencia sobre la respuesta (95%). El valor de la prueba de falta de ajuste fue mayor a 0,05 confirmando que el ajuste
del modelo es adecuado, para un nivel de confianza del 95%. El cálculo del estadístico Durbin Watson fue superior a
1,40, con lo cual se pudo probar, que no existe autocorrelación o correlación serial significativa. Los resultados del test
ANOVA para la relación área x altura pueden observarse en la Tabla 3. El diagrama de Pareto (Fig. 2) muestra cada
uno de los efectos estimados en orden decreciente de magnitud. Los efectos individuales más significativos fueron HCl
(B) y velocidad de flujo del buffer (A), mientras que las interacciones más importantes fueron las afectadas por la
concentración del reductor AD (velocidad de flujo de buffer y concentración de NaBH4), BD (concentración de HCl y
concentración de NaBH4) y CD (concentración de KI y concentración de NaBH4) como se observa en la Fig. 3.
Resumen: E-051
UNIVERSIDAD NACIONAL DEL NORDEST E
Comunicaciones Científicas y Tecnológicas 2006
Fig. 2: Diagrama de Pareto para la relación Fig. 3: Interacciones de efectos más significativos
áreaxaltura
Las condiciones óptimas para lograr la máxima respuesta, derivadas de la relación entre los efectos de las cuatro
especies de As fueron las siguientes: flujo del buffer 1,2 ml.min-1, HCl 3 mol.l-1, KI 1,7 % (p/v), NaBH4 1,4 % (p/v)
(Tabla 4). Dichas condiciones se representan mediante una superficie de respuesta generada por el DCC (Fig. 4), que
permite visualizar las regiones óptimas y determinar la influencia de los factores sobre la relación área x altura.
Los resultados obtenidos se evaluaron mediante la aplicación de regresión lineal simple, la cual mostró que existe una
relación lineal entre la respuesta analítica y la concentración de las especies dentro del rango estudiado para un nivel de
confianza del 95%.(Tabla 5). En todas las lecturas los coeficientes de variación fueron menores al 5%.
Para evaluar la exactitud del método, se realizaron ensayos de recuperación adicionando un patrón de 0,5 mg.l-1 cada
especie a muestras de aguas termal, potable, y subterránea de baja y alta concentración salina. En todos los casos los
valores obtenidos se encuentran dentro del rango de 90 a 110 % como se establece en APHA, AWWA, WFF, (1992).
a
Definido como 3σ/pendiente (n = 10). bDefinido como 10σ/ pendiente (n = 10).
Conclusiones
De los resultados obtenidos en este estudio preliminar cuyo objetivo fue optimizar, aplicando un Diseño Central
Compuesto 24+* con 7 réplicas del punto central, la cuantificación de As III, As V, DMA y MMA en agua, mediante la
técnica acoplada en línea HPLC-HG-AAS, se puede concluir que:
Debido a que cada especie por separado exhibió diferentes condiciones experimentales para dar la máxima respuesta, se
relacionaron las respuestas de las cuatro especies, que derivaron en las siguientes condiciones óptimas: velocidad de
flujo del buffer 1,2 ml.min-1, HCl 3 mol.l-1, KI 1,7 % (p/v), NaBH4 1,4 % (p/v).
El valor de la prueba de falta de ajuste confirmó con un 95% de confianza que el ajuste del modelo es adecuado. El
cálculo del estadístico Durbin Watson fue superior a 1,40, confirmando con un 95% de confianza que no existe
correlación serial significativa. Los resultados derivados de la validación, mostraron que la metodología propuesta
resultó ser lineal, precisa y exacta dentro del rango en estudio para cada especie, lo que permitiría cuantificar
simultáneamente As III, DMAS, MMAs y As V, en muestras de aguas.
Cabe destacar que esta metodología está en continuo estudio a fin de realizar un análisis más detallado y mejorar los
resultados obtenidos.
Agradecimientos
Los autores agradecen el financiamiento brindado por la A.P.C.yT. (PICT: 13-05328) y la S.G.C.yT. UNNE.
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