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Departamento de Ciencias de la Vida y de la Agricultura, Ingeniería en Biotecnología, Universidad de las
Fuerzas Armadas – ESPE, Sangolquí, Ecuador
Fecha de entrega: agosto 18 del 2017
RESUMEN
El cultivo de suspensiones celulares facilita el intercambio gaseoso, la eliminación de la polaridad celular y la
eliminación de los gradientes en el medio y la superficie de la célula. Esta técnica es altamente empleada en la
producción de metabolitos secundarios, en el caso de Daucus carota, esta es empleada para la producción de
antocianas y proteínas extracelulares. En la práctica se sembraron pequeños agregados de callos friables de Daucus
carota (zanahoria) en medios de cultivo MS enriquecidos con 2.5mg/L de 2,4-D y 40g/L de azúcar (sin agar) para
evaluar el desarrollo celular; tanto a los 7 como 14 días de incubación no se lograron visualizar cambios
morfológicos en los agregados celulares y se descartó por completo la presencia de contaminación en los frascos.
Palabras claves: suspensión celular, Daucus carota, callo.
ABSTRACT
Culture of cell suspensions facilitates gas exchange, elimination of cell polarity and elimination of gradients in the
cell surface and medium. This technique is highly used in the production of secondary metabolites, in the case of
Daucus carota, this is used for the production of anthocyanins and extracellular proteins. In the practice, small
aggregates of friable callus from Daucus carota (carrot) were seeded in MS culture media enriched with 2.5 mg/L
of 2,4-D and 40 g/L of sugar (without agar) to evaluate cell development. After 7 and 14 days of incubation, we
were not able to visualize morphological changes in the cellular aggregates and the contamination in the flasks was
completely ruled out.
Keys Words: cell suspensions, Daucus carota, callus.
III. Resultados
II. Métodos
Muestras
Las muestras empleadas fueron callos de zanahoria, los
cuales fueron proveídos por el Ing. Cristian Peña Msc.
del Laboratorio de Cultivo de Tejidos de la Universidad
de las Fuerzas Armadas ESPE.
Preparación del área de siembra
Se barrió el piso y se desinfectó con Kalipto. Las
cámaras de siembra se limpiaron con alcohol al 70% y
se ingresaron mecheros, bisturí, pinzas, servilletas,
medios de cultivo, lámpara de alcohol, ligas y recipiente
para lavados, previamente roseados con sablón. En la
parte exterior de la cámara se colocó la funda para
desechos y sobre las mesas sablón. Luego se conectaron
y encendieron las cámaras, se encendió la luz UV
durante 20 minutos, luego se procedió a apagar el UV y
a encender el flujo de aire (Peña, 2017). .
Medio de cultivo
El medio de cultivo utilizado para la siembra de cuatro
explantes, uno en cada medio, fue MS líquido (no
contuvo agar), enriquecido con 2.5 g/L de 2,4-D y 40 Figura 1. Resultados globales de las suspensiones celulares de callo
de zanahoria (Daucus Carota).
g/L de azúcar (Peña, 2017).
Siembra del material Las muestras para el establecimiento de
suspensiones celulares fueron tomadas de callo de
zanahoria (Daucus Carota). En el día cero se
colocaron 4 frascos en incubación con luz y otros frascos (Figura 1), estableciendo así que el cultivo
4 frascos en incubación con oscuridad. Se se encontraba aún en fase de retraso o latencia.
evaluaron los resultados transcurridos 7 días tras la Según García (2016) durante el transcurso de esta
siembra donde se pudo observar que ninguno de los fase las células se adaptan a su nuevo entorno y por
frascos observados en la (figura 1) presentaron tanto no se da la división celular. Sin embargo tener
cambios tanto en su tamaño, coloración o número. una evidencia de división celular inmediata da
Por ello, no se realizó un análisis estadístico en el indicios de que el establecimiento de las
programa Excel 2016 al no observarse cambios en suspensiones celulares fue exitoso y las células han
los callos o algún tipo de contaminación o superado la fase de adaptación de células
alteración fisiológica en el callo del que se pueda agrupadas en forma de callo y ahora en células
hacer análisis. libres en forma de suspensión.
IV. Discusión Por otro lado un importante factor para que el
cultivo de suspensiones celulares sea exitoso es el
El cultivo de células vegetales en suspensión es una
medio de cultivo, para el trabajo se utilizó medio
herramienta que permite conocer diversos aspectos
de cultivo MS líquido enriquecido con; 2.5 mg/L
del cultivo, como su comportamiento metabólico,
de 2,4-D y 40 g/L de azúcar y pH ajustado a 5.7-
fisiológico y bioquímico, así como controlar y
5.8. Solis (2013) en su estudio indica que el uso de
optimizar las condiciones de cultivo para la
medio de cultivo con una variación de
producción de biomasa, o bien la producción de
concentraciones de 1.5 a 2.5 mg/L de auxinas, 2,4-
metabolitos secundarios empleando diferentes
D, no muestran diferencias significativas en el
elicitores (Roca, 2011).
proceso de crecimiento o aumento de volumen
Esta estrategia requiere un proceso inicial que celular.
incluye la formación de callo friable y
V. Conclusiones
posteriormente el establecimiento de suspensiones
celulares, es por eso que para este estudio se trabajó Al no identificar cambios significativos en el cultivo de
con callo formado a partir de zanahoria, Pérez suspensión después de siete días de incubación, se
(2010) indica que la cantidad de callo a utilizar puede considerar que el callo de zanahoria no era friable
puede ser desde 1 g a 20 g en 50 ml de medio de o que las células son incapaces de proliferar en el
medio nutritivo.
cultivo, recalcando que mientras mayor cantidad
de inoculo inicial se utilice más será el tiempo de Además del medio de nutritivo y del uso de tejidos
establecimiento. viables en el cultivo de tejidos vegetales, existen otros
factores que afectan a los resultados obtenidos como la
Para las suspensiones celulares de zanahoria se calidad de los reactivos, las sustancias químicas
utilizó frascos de vidrio de 100 ml con necesarias, la combinación apropiada de nutrientes y la
aproximadamente 25 ml de medio de cultivo fresco incubación.
como lo indica Pérez (2005) se debe llenar el 1/5
Todos los frascos sembrados con callo de zanahoria en
de volumen del frasco a utilizar con medio fresco
medio de suspensión no presentaron contaminación, lo
para que el resto de volumen sirva para el cual fue favorecido por el empleo de callos de
intercambio gaseoso de las células. zanahoria cultivados previamente in vitro en medio MS
Manandhar (2007) menciona que el cultivo de enriquecido con 2,4-D con agar.
suspensiones celulares se da en cinco fases, de VI. Agradecimientos
retraso, exponencial, lineal, de desaceleración y
Los autores desean agradecer y reconocer la
estacionaria. Tras 7 días de incubación no se
colaboración del Ing. Cristian Peña M.Sc. encargado de
observó cambios significativos en 100% de los
la asignatura de Cultivo de Tejidos Vegetales en la Roca. (2011). Suspenciones celulares: descripción,
Universidad de las Fuerzas Armadas ESPE, Carrera de manipulación y aplicaciones. Bogotá: UIB.
Ingeniería en Biotecnología, y a su vez agradecer la
Rodríguez, M., Cevallos, A. & Montes, S. (2000).
ayuda brindada por los tesistas de la carrera en el
Proteínas extracelulares marcadas del
enfoque de preservar las normas de bioseguridad,
potencial embriogénico en suspensiones
manejo de equipos y seguimiento del protocolo durante
celulares de coffe spp. Cultivos tropicales, 11-
el proceso de desinfección y establecimiento de
15.
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