Laboratorio N°1:

“Aprendiendo a usar el microscopio y

micropipetas”

Integrantes: Valentina Sepúlveda

Javiera Valenzuela
Roberto Valdés

Curso: BIO141C-1 – Biología de la

Célula

Sección: 1

Grupo: 2D

Fecha de entrega: 02/04/19

1. Introducción:

El gran desarrollo tecnológico y científico logrado en el último siglo ha permitido encontrar respuesta
a diferentes fenómenos que ocurren a cada instante, tanto alrededor como en el interior del ser
humano. En este contexto, el lugar de trabajo dónde se han llevado a cabo la mayoría de los
experimentos científicos es el laboratorio, lugar que se ha ido desarrollando a la par con las
necesidades del hombre.

En este práctico se trabajó con conceptos básicos del funcionamiento del microscopio de luz y
micropipetas. También se abordaron nociones fundamentales de Espectrofotometría, tales como
Longitud de onda (Distancia entre dos máximos o mínimos consecutivos de una onda
electromagnética) y Absorbancia (Fenómeno de atenuación de los fotones a medida que atraviesan
una muestra).1

2. Objetivos:

El objetivo del presente trabajo es reconocer e identificar, a través de actividades experimentales,

las principales características y funciones de algunos instrumentos usados en el laboratorio,
aprendiendo así el correcto uso de los mismos. Estos son el microscopio de luz, la micropipeta y el
espectrofotómetro. Además, se espera comprender el fenómeno de absorbancia y encontrar valores
experimentales asociados al mismo.

3. Metodología:

3.1- En primer lugar se procedió a observar, en un microscopio óptico, una pequeña letra que estaba
en un portaobjetos. Este proceso se llevó a cabo usando un 10x de aumento, para posteriormente
utilizar el 20x y 40x. Luego se obtuvo un frotis de mucosa bucal y se depositó en un portaobjetos,
para posteriormente observarlo en el microscopio, cambiando los objetivos para obtener una imagen
más detallada de la muestra. En una segunda instancia, se procede a añadir azul de metileno a la
muestra y se vuelve a observar por el microscopio variando los niveles de aumento.

3.2- En segundo lugar, se procedió a preparar 6 diluciones de agua destilada con rojo fenol en tubos
eppendorf. Para esto se utilizaron 2 micropipetas, una p1000 y una p200. Posteriormente, cada
muestra se trasvasijó a una cubeta para enseguida medir la absorbancia de cada muestra en un
espectrofotómetro, el cual poseía una longitud de onda de 560 nm. Para medir las muestras, primero
se procedió a medir el blanco, que en este caso era agua destilada. Finalmente, se procedió a medir
la absorbancia del resto de las muestras, una por una.

Ilustración 1: Número 7, objetivo 10x.

Ilustración 2: Frotis bucal con tinción azul de metileno, objetivo 20x.

Ilustración 3: Espectrofotómetro usado.

4. Desarrollo experimental:

4.1- Para observar la letra se comenzó ubicando la platina en el nivel más bajo y con un objetivo de
10x. Posteriormente se subió la platina lo suficiente para observar completamente la letra, luego se
procedió a ajustar la resolución con el milimétrico y se logró obtener una imagen clara de la muestra.
Luego, al cambiar a los objetivos de 20x y 40x se logró observar partículas de tinta que componían
la letra. Al observar el frotis de mucosa bucal, sin teñir, se logró ver células, sin embargo, el contraste
entre la célula y su medio era leve. Por consiguiente, se procedió a teñir la muestra con azul de
metileno, tinción la cual se tiñe a las células y aumenta el contraste entre estas y su medio. La tinción
fue exitosa y permitió ver con claridad las células que estaban en el frotis bucal.
4.2 Usando H2Od como blanco y una longitud de onda de 560nm, los resultados de absorbancia
medidos en el espectrofotómetro fueron:

Solución 1 2 3 4 5 6

Rojo Fenol 0 µL 100 µL 300 j9 µL 500 µL 750 µL 1000 µL

H2Od 1000 µL 900 µL 700 µL 500 µL 250 µL 0 µL

Abs1orbancia 0 0,047 0,184 0,252 0,393 0,509

 Tabla N°1: Diluciones de H2Od con Rojo
fenol.

5. Discusión:

5.1- En la primera actividad, al ver la letra en el microscopio, se logra apreciar que las líneas que
aparentemente estaban bien definidas no lo eran. Esto se cree que es debido a que esos niveles de
medida son imperceptibles para la vista humana, sin embargo, gracias a un microscopio se hacen
posible verlos. Luego, al visualizar el frotis bucal, se logró ver ciertas estructuras, parecidas a bolsas
translucidas poco definidas, las que se creen eran células. Luego, al aplicar una tinción con azul de
metileno se logró realizar un contraste mayor entre las estructuras celulares y su medio externo, esto
se deduce ya que fue posible observar el núcleo al interior de estas bolsas.

5.2- En la segunda actividad, los resultados de absorbancia obtenidos en el espectrofotómetro luego

de realizar las disoluciones, depositadas con micropipetas p1000 y p200 en los tubos eppendorf, son
crecientes en medida de que la concentración de rojo fenol es mayor. Esto es debido a que la
absorbancia indica la cantidad de luz que absorbió la muestra, medida la cual es directamente
proporcional a los niveles de concentración de cierta sustancia en una disolución.

6. Conclusiones:

Tras realizar las actividades experimentales se logró conocer las principales características y
funciones del microscopio de luz, las micropipetas y el espectrofotómetro. Además, comprendiendo
que en cada caso se deben tener presente diferentes conceptos y parámetros, como: la distancia
focal y la resolución en un microscopio, la absorbancia y la longitud de onda a utilizar en el
espectrofotómetro y en el uso de la micropipeta, que ésta esté calibrada y además sea la que
corresponde según rangos de capacidad a medir.