La terapia g�nica consiste en la inserci�n de elementos funcionales ausentes en el

genoma de un individuo. Se realiza en las c�lulas y tejidos con el objetivo de

tratar una enfermedad o realizar un marcaje.

La t�cnica todav�a est� en desarrollo, motivo por el cual su aplicaci�n se lleva a

cabo principalmente dentro de ensayos cl�nicos controlados, y para el tratamiento
de enfermedades severas o bien de tipo hereditario o adquirido. Al principio se
plante� s�lo para el tratamiento de enfermedades gen�ticas, pero hoy en d�a se
plantea ya para casi cualquier enfermedad.

Entre los criterios para elegir este tipo de terapia se encuentran:

Enfermedad letal sin tratamiento.

La causa sea un �nico gen que est� ya clonado.
La regulaci�n del gen sea precisa y conocida.

�ndice
1 Aplicaciones
2 Tipos de terapia g�nica
3 Procedimiento
4 Vectores en terapia g�nica
4.1 Virus
4.2 Retrovirus
4.3 Adenovirus
4.4 Virus Adenoasociados (AAV)
4.5 Herpes virus
4.6 Prote�na "pseudotyping" de vectores virales
4.7 M�todos no virales
4.7.1 ADN desnudo
4.7.2 Oligonucle�tidos
4.8 Cromosomas artificiales
4.8.1 Lipoplexes y poliplexes
4.9 M�todos h�bridos
4.10 Dendr�meros
5 C�lulas diana
6 Principales acontecimientos en el desarrollo de la terapia g�nica
6.1 2002 y anteriores
6.2 2003
6.3 2006
6.4 2007
6.5 2008
6.6 2009
6.7 2012
6.8 Porcentajes de ensayos de terapia g�nica en la actualidad
7 Enfermedades y terapia g�nica
7.1 ADA
7.2 C�ncer
7.3 S�ndrome de Wiskott-Aldrich (WAS)
7.4 Beta Talasemia
8 Problemas de la terapia g�nica y de sus aplicaciones
9 Terapia g�nica en otros animales
10 Terapia g�nica en la cultura popular
11 Ver tambi�n
12 Referencias
13 Bibliograf�a
14 Enlaces externos
Aplicaciones
Marcaje g�nico: El marcaje g�nico tiene como objetivo, no la curaci�n del paciente,
sino hacer un seguimiento de las c�lulas, es decir, comprobar si en un determinado
sitio del cuerpo est�n presentes las c�lulas espec�ficas que se han marcado. Un
ejemplo de ello ser�a la puesta a punto de vectores para ensayos cl�nicos,
permitiendo, por ejemplo, que en ocasiones en las que un paciente de c�ncer
(leucemia) y al que se le ha realizado un autotransplante recae se pueda saber de
donde proceden las c�lulas, si son de c�lulas trasplantadas o si son c�lulas que
han sobrevivido al tratamiento.
Terapia de enfermedades monog�nicas hereditarias: Se usa en aquellas enfermedades
en las que no se puede realizar o no es eficiente la administraci�n de la prote�na
deficitaria. Se proporciona el gen defectivo o ausente.
Terapia de enfermedades adquiridas: Entre este tipo de enfermedades la m�s
destacada es el c�ncer. Se usan distintas estrategias, como la inserci�n de
determinados genes suicidas en las c�lulas tumorales o la inserci�n de ant�genos
tumorales para potenciar la respuesta inmune.
Tipos de terapia g�nica
Terapia g�nica som�tica: se realiza sobre las c�lulas som�ticas de un individuo,
por lo que las modificaciones que implique la terapia s�lo tienen lugar en dicho
paciente.
Terapia in vivo: la transformaci�n celular tiene lugar dentro del paciente al que
se le administra la terapia. Consiste en administrarle al paciente un gen a trav�s
de un veh�culo (por ejemplo un virus), el cual debe localizar las c�lulas a
infectar. El problema que presenta esta t�cnica es que es muy dif�cil conseguir que
un vector localice a un �nico tipo de c�lulas diana.
Terapia ex vivo: la transformaci�n celular se lleva a cabo a partir de una biopsia
del tejido del paciente y luego se le trasplantan las c�lulas ya transformadas.
Como ocurre fuera del cuerpo del paciente, este tipo de terapia es mucho m�s f�cil
de llevar a cabo y permite un control mayor de las c�lulas infectadas. Esta t�cnica
est� casi completamente reducida a c�lulas hematopoy�ticas pues son c�lulas
cultivables, constituyendo as� un material trasplantable.
Terapia g�nica germinal: se realizar�a sobre las c�lulas germinales del paciente,
por lo que los cambios generados por los genes terap�uticos ser�an hereditarios. No
obstante, por cuestiones �ticas y jur�dicas, �sta clase de terapia g�nica no se
lleva a cabo hoy en d�a.
Procedimiento
Aunque se han utilizado enfoques muy distintos, en la mayor�a de los estudios de
terapia g�nica, una copia del gen funcional se inserta en el genoma para compensar
el defectivo. Si �sta copia simplemente se introduce en el hu�sped, se trata de
terapia g�nica de adici�n. Si tratamos, por medio de la recombinaci�n hom�loga, de
eliminar la copia defectiva y cambiarla por la funcional, se trata de terapia de
sustituci�n.

Actualmente, el tipo m�s com�n de vectores utilizados son los virus, que pueden ser
gen�ticamente alterados para dejar de ser pat�genos y portar genes de otros
organismos. No obstante, existen otros tipos de vectores de origen no v�rico que
tambi�n han sido utilizados para ello. As� mismo, el ADN puede ser introducido en
el paciente mediante m�todos f�sicos (no biol�gicos) como electroporaci�n,
biobal�stica...

Las c�lulas diana del paciente se infectan con el vector (en el caso de que se
trate de un virus) o se transforman con el ADN a introducir. Este ADN, una vez
dentro de la c�lula hu�sped, se transcribe y traduce a una prote�na funcional, que
va a realizar su funci�n, y, en teor�a, a corregir el defecto que causaba la
enfermedad.

Vectores en terapia g�nica

Art�culo principal: Vector g�nico
La gran diversidad de situaciones en las que podr�a aplicarse la terapia g�nica
hace imposible la existencia de un solo tipo de vector adecuado. Sin embargo,
pueden definirse las siguientes caracter�sticas para un "vector ideal" y adaptarlas
luego a situaciones concretas:
Que sea reproducible.
Que sea estable.
Que permita la inserci�n de material gen�tico sin l�mite de tama�o.
Que permita la transducci�n tanto en c�lulas en divisi�n como en aquellas que no
est�n proliferando.
Que posibilite la integraci�n del gen terap�utico en un sitio espec�fico del
genoma.
Que se integre una vez por c�lula, para poder controlar la dosis.
Que reconozca y act�e sobre c�lulas espec�ficas.
Que la expresi�n del gen terap�utico pueda ser regulada.
Que carezca de elementos que induzcan una respuesta inmune.
Que pueda ser caracterizado completamente.
Que sea inocuo o que sus posibles efectos secundarios sean m�nimos.
Que sea f�cil de producir y almacenar.
Que todo el proceso de su desarrollo tenga un coste razonable.
Los vectores van a contener los elementos que queramos introducir al paciente, que
no van a ser s�lo los genes funcionales, sino tambi�n elementos necesarios para su
expresi�n y regulaci�n, como pueden ser promotores, potenciadores o secuencias
espec�ficas que permitan su control bajo ciertas condiciones.

Podemos distinguir dos categor�as principales en vectores usados en terapia g�nica:

virales y no virales.

Art�culo principal: Vector viral

Virus
Todos los virus son capaces de introducir su material gen�tico en la c�lula hu�sped
como parte de su ciclo de replicaci�n. Gracias a ello, pueden producir m�s copias
de s� mismos, e infectar a otras c�lulas.

Algunos tipos de virus insertan sus genes f�sicamente en el genoma del hu�sped,
otros pasan por varios org�nulos celulares en su ciclo de infecci�n y otros se
replican directamente en el citoplasma, por lo que en funci�n de la terapia a
realizar nos puede interesar uno u otro.

Algo com�n a la mayor�a de estrategias con virus es la necesidad de usar l�neas

celulares "empaquetadoras" o virus helpers, que porten los genes que les eliminamos
a nuestros vectores y que permiten la infecci�n.

Retrovirus
El genoma de los retrovirus est� constituido por ARN de cadena sencilla, en el cual
se distinguen tres zonas claramente definidas: una intermedia con genes
estructurales, y dos flanqueantes con genes y estructuras reguladoras. Cuando un
retrovirus infecta a una c�lula hu�sped, introduce su ARN junto con algunas enzimas
que se encuentran en la matriz, concretamente una proteasa, una transcriptasa
inversa y una integrasa.

La acci�n de la retrotranscriptasa permite la s�ntesis del ADN gen�mico del virus a

partir del ARN. A continuaci�n, la integrasa introduce este ADN en el genoma del
hu�sped. A partir de este punto, el virus puede permanecer latente o puede activar
la replicaci�n masivamente.

Para usar los retrovirus como vectores v�ricos para terapia g�nica inicialmente se
eliminaron los genes responsables de su replicaci�n y se reemplazaron estas
regiones por el gen a introducir seguido de un gen marcador.

Del genoma v�rico quedaban las secuencias LTR; y los elementos necesarios para
producir los vectores a gran escala y para transformar las c�lulas son aportados
desde otros vectores, bien plasm�dicos o bien en l�neas celulares espec�ficas. En
el caso de usar vectores plasm�dicos, estrategias como cotransformar con varios
pl�smidos distintos que codifiquen para las prote�nas del retrovirus, y que la
transcripci�n de sus secuencias est� sometida a promotores eucariotas puede
contribuir a minimizar el riesgo de que por recombinaci�n se generen virus
recombinantes.1?

Actualmente se buscan estrategias como la anterior para conseguir una mayor

seguridad en el proceso. La adici�n de colas de poliadenina al transg�n para evitar
la transcripci�n de la segunda secuencia LTR es un ejemplo de esto[cita requerida].

Los retrovirus como vector en terapia g�nica presentan un inconveniente

considerable, y es que la enzima integrasa puede insertar el material gen�tico en
cualquier zona del genoma del hu�sped, pudiendo causar efectos delet�reos como la
modificaci�n en el patr�n de la expresi�n (efecto posicional) o la mutag�nesis de
un gen silvestre por inserci�n.

Ensayos de terapia g�nica utilizando vectores retrovirales para tratar la

inmunodeficiencia combinada grave ligada al cromosoma X (X-SCID) representan la
aplicaci�n m�s exitosa de la terapia hasta la fecha. As�, m�s de veinte pacientes
han sido tratado en Francia y Gran Breta�a, con una alta tasa de reconstituci�n del
sistema inmunitario. Sin embargo, ensayos similares fueron restringidos en los
Estados Unidos cuando se inform� de la aparici�n de leucemia en pacientes.[cita
requerida] Hasta hoy se conocen cuatro casos de ni�os franceses y uno brit�nico que
han desarrollado leucemia como resultado de mutag�nesis por inserci�n de los
vectores retrovirales, y todos menos uno de estos ni�os respondieron bien al
tratamiento convencional contra la leucemia. [cita requerida] En la actualidad, la
terapia g�nica para tratar SCID contin�a siendo exitosa en Estados Unidos, Gran
Breta�a, Italia y Jap�n.[cita requerida]

Adenovirus
Los adenovirus presentan un genoma de ADN bicatenario, y no integran su genoma
cuando infectan a la c�lula hu�sped, sino que la mol�cula de ADN permanece libre en
el n�cleo celular y se transcribe de forma independiente. Esto supone que el efecto
posicional o la mutag�nesis por inserci�n no se dan en estos vectores, lo cual no
quiere decir que no tengan otros inconvenientes. Adem�s, debido al hecho de que en
su ciclo natural se introducen en el n�cleo de la c�lula, pueden infectar tanto
c�lulas en divisi�n como c�lulas quiescentes.

A los vectores de primera generaci�n se les elimin� parte del gen E1, b�sica para
la replicaci�n, y a los de 2.�, se les eliminaron otros genes tempranos en el ciclo
del virus. En ambos casos, cuando se realiza una infecci�n con una concentraci�n
elevada de virus, se produce la expresi�n de otros genes que provocan una respuesta
inmune considerable.

Por ello, los �ltimos vectores basados en adenovirus pr�cticamente han sido
desprovistos de la mayor parte de sus genes, con la excepci�n de las regiones ITR
(regiones repetidas de forma invertida), y la zona necesaria para la encapsidaci�n.

Virus Adenoasociados (AAV)

Los AAV son virus peque�os con un genoma de ADN monocatenario. Pueden integrarse
espec�ficamente en el cromosoma 19 con una alta probabilidad. Sin embargo, el VAA
recombinante que se usa como vector y que no contiene ning�n gen viral, solo el gen
terap�utico, no se integra en el genoma. En su lugar, el genoma v�rico recombinante
fusiona sus extremos a trav�s del ITR (repeticiones terminales invertidas),
apareciendo recombinaci�n de la forma circular y episomal que se predice que pueden
ser la causa de la expresi�n g�nica a largo plazo.

Las desventajas de los sistemas basados en AAV radican principalmente en la

limitaci�n del tama�o de DNA recombinante que podemos usar, que es muy poco, dado
el tama�o del virus. Tambi�n el proceso de producci�n e infecci�n resultan bastante
complejos. No obstante, como se trata de un virus no pat�geno en la mayor�a de los
pacientes tratados no aparecen respuestas inmunes para eliminar el virus ni las
c�lulas con las que han sido tratados.

Muchos ensayos con VAA est�n en curso o en preparaci�n, principalmente en el

tratamiento de m�sculos y enfermedades oculares, los dos tejidos donde el virus
parece ser particularmente �til[cita requerida]. Sin embargo, se est�n comenzando a
realizar pruebas cl�nicas, donde vectores basados en el VAA son utilizados para
introducir los genes en el cerebro[cita requerida]. Esto es posible porque VAA
pueden infectar c�lulas que no est�n en estado de divisi�n, tales como las
neuronas.

Herpes virus
Los herpesvirus son virus de ADN capaces de establecer latencia en sus c�lulas
hu�sped. Son complejos gen�ticamente hablando, pero para su uso como vectores
tienen la ventaja de poder incorporar fragmentos de DNA ex�geno de gran tama�o
(hasta unas 30 kb). Adem�s, aunque su ciclo l�tico lo realizan en el lugar de
infecci�n, establecen la latencia en neuronas, las cuales est�n implicadas en
numerosas enfermedades del sistema nervioso, y son por ello dianas de gran inter�s.

Los vectores herpesv�ricos puestos en marcha han usado dos estrategias principales:

- La recombinaci�n hom�loga entre el genoma del virus completo y el contenido en un

pl�smido que llevaba el transg�n en la zona que codifica para genes no esenciales
en lo que se refiere a replicaci�n e infecci�n.

- El uso de vectores con or�genes de replicaci�n del virus as� como las
correspondientes secuencias de empaquetamiento, y su introducci�n en estirpes
celulares bien coinfectadas con virus silvestres o bien portadoras del resto de
genes del mismo implicados en la encapsidaci�n y replicaci�n, para permitir la
formaci�n de part�culas virales recombinantes con las que realizar el tratamiento.

No obstante, el uso de vectores basados en el HSV (virus del herpes simple), s�lo
puede llevarse a cabo en pacientes que no hayan sido infectados previamente por �l,
pues pueden presentar inmunidad.

Prote�na "pseudotyping" de vectores virales

Los vectores virales descritos anteriormente tienen poblaciones naturales de
c�lulas hu�sped que ellos infectan de manera eficiente. Sin embargo, algunos tipos
celulares no son sensibles a la infecci�n por estos virus.

La entrada del virus a la c�lula est� mediada por prote�nas de su superficie

externa (que pueden formar parte de una c�pside o de una membrana). Estas prote�nas
interaccionan con receptores celulares que pueden inducir cambios estructurales en
el virus y contribuir a su entrada en la c�lula por endocitosis.

En cualquier caso, la entrada en las c�lulas hu�sped requiere una interacci�n

favorable entre una prote�na de la superficie del virus, y una prote�na de la
superficie de la c�lula. Seg�n la finalidad de una determinada terapia g�nica, se
podr�a limitar o expandir el rango de c�lulas susceptibles a la infecci�n por un
vector. Por ello, se han desarrollado vectores conocidos como "pseudotyped", en los
cuales la cubierta v�rica de prote�nas silvestre ha sido remplazada por p�ptidos de
otros virus, o por prote�nas quim�ricas, que constan de las partes de la prote�na
v�rica necesarias para su incorporaci�n en el viri�n, as� como las secuencias que
supuestamente a interaccionar con receptores espec�ficos de prote�nas celulares.

Por ejemplo, el vector retrov�rico m�s popular para el uso en pruebas de terapia
g�nica ha sido el virus de la inmunodeficiencia en simios revestido con la cubierta
de prote�nas G del virus de la estomatitis vesicular. Este vector se conoce como
VSV y puede infectar a casi todas las c�lulas, gracias a la prote�na G con la cual
este vector es revestido[cita requerida].

Se ha intentado en numerosas ocasiones limitar el tropismo (capacidad de infectar a

muchas c�lulas) de los vectores virales. Este avance podr�a permitir la
administraci�n sistem�tica de una cantidad relativamente peque�a del vector. La
mayor�a de los intentos han utilizado prote�nas quim�ricas para la envuelta2?, las
cuales inclu�an fragmentos de anticuerpos.

M�todos no virales
Estos m�todos presentan ciertas ventajas sobre los m�todos virales, tales como
facilidades de producci�n a gran escala y baja inmunogenicidad. Anteriormente, los
bajos niveles de transfecci�n y expresi�n del gen manten�an a los m�todos no
virales en una situaci�n menos ventajosa; sin embargo, los recientes avances en la
tecnolog�a de vectores han producido mol�culas y t�cnicas de transfecci�n con
eficiencias similares a las de los virus.

ADN desnudo
�ste es el m�todo m�s simple de la transfecci�n no viral. Consiste en la aplicaci�n
localizada de, por ejemplo, un pl�smido con ADN desnudo. Varios de estos ensayos
dieron resultados exitosos3?. Sin embargo, la expresi�n ha sido muy baja en
comparaci�n con otros m�todos de transformaci�n. Adem�s de los ensayos con
pl�smidos, se han realizado ensayos con productos de PCR, y se ha obtenido un �xito
similar o superior. Este logro, sin embargo, no supera a otros m�todos, lo que ha
llevado a una investigaci�n con m�todos m�s eficientes de transformaci�n, tales
como la electroporaci�n, la sonicaci�n, o el uso de la biobal�stica, que consiste
en disparar part�culas de oro recubiertas de ADN hacia las c�lulas utilizando altas
presiones de gas.

Oligonucle�tidos
El uso de oligonucle�tidos sint�ticos en la terapia g�nica tiene como objetivo la
inactivaci�n de los genes implicados en el proceso de la enfermedad.

Existen varias estrategias para el tratamiento con oligonucle�tidos

Una estrategia, la terapia "antisentido" utiliza oligonucle�tidos con la secuencia

complementaria al RNAm del gen diana, lo que activa un mecanismo de silenciamiento
g�nico. Tambi�n se puede usar para alterar la transcripci�n del gen defectuoso,
modificando por ejemplo su patr�n de edici�n de intrones y exones.

Tambi�n se hace uso de mol�culas peque�as de RNAi para activar un mecanismo de

silenciamiento g�nico similar al de la terapia antisentido

Otra posibilidad es utilizar oligodesoxinucle�tidos como un se�uelo para los

factores que se requieren en la activaci�n de la transcripci�n de los genes diana.
Los factores de transcripci�n se unen a los se�uelos en lugar de al promotor del
gen defectuoso, lo que reduce expresi�n de los genes diana. Adem�s,
oligonucle�tidos de ADN monocatenario han sido utilizados para dirigir el cambio de
una �nica base dentro de la secuencia de un gen mutante.

Al igual que los m�todos de ADN desnudo, requieren de t�cnicas de transformaci�n

para introducirse en la c�lula.

Cromosomas artificiales
La creaci�n de cromosomas humanos artificiales (HACs) estables es una de las
posibilidades que se baraja en la actualidad como una de las formas de introducir
ADN permanentemente en c�lulas som�ticas para el tratamiento de enfermedades
mediante el uso de la terapia g�nica. Presentan una elevada estabilidad, adem�s de
permitir introducir grandes cantidades de informaci�n gen�tica.

Lipoplexes y poliplexes
El vector de ADN puede ser cubierto por l�pidos formando una estructura organizada,
como una micela o un liposoma. Cuando la estructura organizada forma un complejo
con el ADN entonces se denomina lipoplexe.

Hay tres tipos de l�pidos: ani�nicos, neutros, o cati�nicos. Inicialmente, l�pidos

ani�nicos y neutros eran utilizados en la construcci�n de lipoplexes para vectores
sint�ticos. Sin embargo, estos son relativamente t�xicos, incompatibles con fluidos
corporales y presentan la posibilidad de adaptarse a permanecer en un tejido
espec�fico. Adem�s, son complejos y requieren tiempo para producirlos, por lo que
la atenci�n se dirigi� a las versiones cati�nicas. �stos, debido a su carga
positiva, interaccionan con el ADN, que presenta carga negativa, de tal forma que
facilita la encapsulaci�n del ADN en liposomas. M�s tarde, se constat� que el uso
de l�pidos cati�nicos mejoraba la estabilidad de los lipoplexes. Adem�s, como
resultado de su carga, los liposomas cati�nicos interact�an tambi�n con la membrana
celular, y se cree que la endocitosis es la principal v�a por la que las c�lulas
absorben los lipoplexes.

Los endosomas se forman como resultado de la endocitosis. Sin embargo, si los genes
no pueden liberarse al citoplasma por rotura de la membrana del endosoma, los
liposomas y el ADN contenido ser�n destruidos. La eficiencia de ese "escape
endosomal" en el caso de liposomas constituidos solo por l�pidos cati�nicos es
baja. Sin embargo, cuando �l�pidos de ayuda� (normalmente l�pidos electroneutrales,
tales como DOPE) son a�adidos, la eficacia es bastante mayor. Adem�s, ciertos
l�pidos (l�pidos fusog�nicos) tienen la capacidad de desestabilizar la membrana del
endosoma. El uso de ciertos compuestos qu�micos, como la cloroquina, permite al ADN
ex�geno escapar del lisosoma, si bien deben usarse con precauci�n, ya que es t�xico
y debe usarse en dosis peque�as para no afectar a la c�lula diana de transfecci�n.

No obstante, los l�pidos cati�nicos presentan efectos t�xicos dependientes de

dosis, lo que limita la cantidad que de ellos se puede usar y por tanto la terapia
en s�.

El uso m�s com�n de los lipoplexes es la transferencia de genes en c�lulas

cancerosas, donde los genes suministrados activan genes supresores del tumor en la
c�lula y disminuyen la actividad de los oncogenes.

Estudios recientes han mostrado que lipoplexes son �tiles en las c�lulas
epiteliales del sistema respiratorio 4?, por lo que pueden ser utilizados para el
tratamiento gen�tico de las enfermedades respiratorias como la fibrosis qu�stica.

Los complejos de pol�meros de ADN se denominan poliplexes y la mayor�a consisten en

pol�meros cati�nicos, regulados por interacciones i�nicas.

Una gran diferencia entre los m�todos de acci�n de poliplexes y lipoplexes es que
algunos poliplexes no pueden liberar su ADN cargado al citoplasma, por lo que
requieren de la contransfecci�n con agentes que contribuyan a la liss del endosoma.
Existen otros elementos formadores de poliplexes, como el quitosano o la
polietilamina, que si son capaces de liberarse del endosoma.

M�todos h�bridos
Debido a las deficiencias de muchos de los sistemas de transferencia g�nica se han
desarrollado algunos m�todos h�bridos que combinan dos o m�s t�cnicas. Los
virosomas son un ejemplo, y combinan liposomas con el virus inactivado VIH o el
virus de la gripe.

Dendr�meros
Un dendr�mero es una macromol�cula muy ramificada con forma esf�rica o variable. Su
superficie puede ser funcional de muchas formas y de �sta derivan muchas de sus
propiedades. Adem�s, su tama�o, en la escala nano-, permite su uso en biomedicina.

En particular, es posible construir un dendr�mero cati�nico, es decir, con carga

superficial positiva. De esta forma, interacciona con el �cido nucleico, cargado
negativamente, y forma un complejo que puede entrar por endocitosis en la c�lula.
Esto es �til en terapia g�nica, para introducir genes ex�genos.

Los costes de producci�n son elevados, pero se est�n desarrollando t�cnicas que
permiten abaratarlo, puesto que se trata de una t�cnica con una toxicidad muy baja,
y su principal desventaja es a nivel productivo.

C�lulas diana
Las c�lulas diana se seleccionan en funci�n del tipo de tejido en el que deba
expresarse el gen introducido, y deben ser adem�s c�lulas con una vida media larga,
puesto que no tiene sentido transformar c�lulas que vayan a morir a los pocos d�as.
Igualmente, se debe tener en cuenta si la diana celular es una c�lula en divisi�n o
quiescente, porque determinados vectores virales, como los retrovirus, s�lo
infectan a c�lulas en divisi�n.

En funci�n de estas consideraciones, las c�lulas diana ideales ser�an las c�lulas
madre, puesto que la inserci�n de un gen en ellas producir�a un efecto a largo
plazo. Debido a la experiencia en trasplante de m�dula �sea, una de las dianas
celulares m�s trabajadas son las c�lulas madre hematopoy�ticas. La terapia g�nica
en estas c�lulas es t�cnicamente posible y es un tejido muy adecuado para la
transferencia ex vivo. Otras dianas celulares con las que se ha trabajado son:

Linfocitos: son c�lulas de larga vida media y f�cil acceso (se encuentran en la
sangre perif�rica). Constituyen un blanco para terapias ex vivo de melanomas e
inmunodeficiencias.
Epitelio respiratorio: son c�lulas de divisi�n muy lenta y en ellas no es posible
la transferencia ex vivo, pero s� su transformaci�n mediante adenovirus y
lipoplexes.
Hepatocitos: su transformaci�n en posible tanto ex vivo (es factible cultivar las
c�lulas y trasplantarlas por la circulaci�n portal) como in vivo (se est�n
desarrollando receptores proteicos espec�ficos de hepatocitos).
Fibroblastos d�rmicos: son c�lulas de f�cil acceso y cultivo, y pueden
transformarse tanto ex vivo como in vivo, pero suelen tener efectos transitorios.
C�lulas musculares: pueden transformarse mediante inyecci�n in vivo de ADN y
tambi�n mediante adenovirus, pero con un �xito muy limitado en este �ltimo caso.
Principales acontecimientos en el desarrollo de la terapia g�nica
2002 y anteriores
La terapia g�nica apareci� a partir de la d�cada de 1970 para intentar tratar y
paliar enfermedades de car�cter gen�tico y se dieron las primeras pruebas con
virus, las cuales fracasaron. A�os m�s tarde, en la d�cada de 1980, se intent�
tratar la talasemia usando betaglobina. En este caso fue un �xito en modelos
animales aunque no se pudo usar en humanos.

En 1990, W. French Anderson propone el uso de c�lulas de m�dula �sea tratadas con
un vector retroviral que porta una copia correcta del gen que codifica para la
enzima adenosina desaminasa,5? la cual se encuentra mutada. Es una enfermedad que
forma parte del grupo de las inmunodeficiencias severas combinadas (SCID). Realiz�
la transformaci�n ex-vivo con los linfocitos T del paciente, que luego se volvieron
a introducir en su cuerpo. Cinco a�os m�s tarde, publicaron los resultados de la
terapia,6? que contribuy� a que la comunidad cient�fica y la sociedad consideraran
las posibilidades de esta t�cnica.

No obstante, el apoyo a la terapia fue cuestionado cuando algunos ni�os tratados

para SCID desarrollaron leucemia.7? Las pruebas cl�nicas se interrumpieron
temporalmente en el 2002, a causa del impacto que suposo el caso de Jesse
Gelsinger, la primera persona reconocida p�blicamente como fallecida a causa de la
terapia g�nica. Su muerte se debi� al uso del vector adenoviral para la
transducci�n del gen necesario para tratar su enfermedad, lo cual caus� una
excesiva respuesta inmune, con un fallo multiorg�nico y muerte cerebral. Existe una
bibliograf�a numerosa sobre el tema, y es destacable el informe que la FDA emiti�
se�alando el conflicto de intereses de algunos de los m�dicos implicados en el caso
as� como los fallos en el procedimiento. En el a�o 2002, cuatro ensayos en marcha
de terapia g�nica se paralizaron al desarrollarse en un ni�o tratado una enfermedad
similar a la leucemia.8? Posteriormente, tras una revisi�n de los procedimientos,
se reanudaron los proyectos en marcha.

2003
Un equipo de investigadores de la Universidad de California, en Los �ngeles,
insert� genes en un cerebro utilizando liposomas recubiertos de un pol�mero llamado
polietilenglicol (PEG).9? La transferencia de genes en este �rgano es un logro
significativo porque los vectores virales son demasiado grandes para cruzar la
barrera hematoencef�lica. Este m�todo tiene el potencial para el tratamiento de la
enfermedad del Parkinson.

Tambi�n en ese a�o se plante� la interferencia por ARN para tratar la enfermedad de
Huntington.10?

2006
Cient�ficos del NIH tratan exitosamente un melanoma metast�sico en dos pacientes,
utilizando c�lulas T para atacar a las c�lulas cancerosas. Este estudio constituye
la primera demostraci�n de que la terapia g�nica puede ser efectivamente un
tratamiento contra el c�ncer.11?

En marzo de 2006, un grupo internacional de cient�ficos anunci� el uso exitoso de

la terapia g�nica para el tratamiento de dos pacientes adultos contagiados por una
enfermedad que afecta a las c�lulas mieloides. El estudio,12? publicado en Nature
Medicine, es pionero en mostrar que la terapia g�nica puede curar enfermedades del
sistema mieloide.

En mayo de 2006, un equipo de cient�ficos dirigidos por el Dr. Luigi Naldini y el

Dr. Brian Brown del Instituto de San Raffaele Telethon para la Terapia G�nica (HSR-
TIGET) en Mil�n, informaron del desarrollo de una forma de prevenir que el sistema
inmune pueda rechazar la entrada de genes.13? Los investigadores del Dr. Naldini
observaron que se pod�a utilizar la funci�n natural de los microRNA para desactivar
selectivamente los genes terap�uticos en las c�lulas del sistema inmunol�gico. Este
trabajo tiene implicaciones importantes para el tratamiento de la hemofilia y otras
enfermedades gen�ticas.

En noviembre del mismo a�o, Preston Nix de la Universidad de Pensilvania inform�

sobre VRX496,14? una inmunoterapia para el tratamiento del HIV que utiliza un
vector lentiviral para transportar un DNA antisentido contra la envuelta del HIV.
Fue la primera terapia con un vector lentiviral aprobada por la FDA para ensayos
cl�nicos. Los datos de la fase I/II ya est�n disponibles.15?

2007
El 1 de mayo de 2007, el hospital Moorfields Eye y la universidad College London�s
Institute of Ophthalmology, un a�o despu�s el Hospital de Ni�os de Filadelfia
anunciaron el primer ensayo de terapia g�nica para la enfermedad hereditaria de
retina. La primera operaci�n (en Inglaterra) se llev� a cabo en un var�n brit�nico
de 23 a�os de edad, Robert Johnson, a principios de este a�o.16? Mientras que en
Filadelfia Corey Haas fue el primer ni�o en obtener este tipo de terap�utica. La
Amaurosis cong�nita de Leber es una enfermedad hereditaria que causa la ceguera por
mutaciones en el gen RPE65. Los resultados de la Moorfields/UCL se publicaron en
New England Journal of Medicine. Se investig� la transfecci�n subretiniana por el
virus recombinante adeno-asociado llevando el gen RPE65, y se encontraron
resultados positivos. Los pacientes mostraron incremento de la visi�n, y no se
presentaron efectos secundarios aparentes.17? Los ensayos cl�nicos de esta terapia
se encuentran en fase II.18? Una de las etapas a realizar es la determinaci�n del
tipo molecular que ati�e cada enfermedad (o
http://es.wikipedia.org/wiki/Distrofias_de_la_retina). A nivel retiniano se realiza
en Am�rica Latina por la corporaci�n Virtual Eye Care MD, conocida y de renombre
por su calidad a realizar este trabajo de relaci�n entre fenotipo y genotipo.
www.virtualeyecaremd.com

2008
Investigadores de la Universidad de M�chigan en Ann Arbor (Estados Unidos)
desarrollaron una terapia gen�tica que ralentiza y recupera las enc�as ante el
avance de la enfermedad periodontal, la principal causa de p�rdida de dientes en
adultos.19? Los investigadores descubrieron una forma de ayudar a ciertas c�lulas
utilizando un virus inactivado para producir m�s cantidad de una prote�na
denominada receptor TNF. Este factor se encuentra en bajas cantidades en los
pacientes con periodontitis. La prote�na administrada permite disminuir los niveles
excesivos de TNF, un compuesto que empeora la destrucci�n �sea inflamatoria en
pacientes que sufren de artritis, deterioro articular y periodontitis. Los
resultados del trabajo mostraron que entre el 60 y el 80 por ciento de los tejidos
periodontales se libraban de la destrucci�n al utilizar la terapia g�nica[cita
requerida].

2009
En septiembre de 2009, se public� en Nature que unos investigadores de la
Universidad de Washington y la Universidad de Florida fueron capaces de
proporcionar visi�n tricrom�tica a monos ardilla usando terapia g�nica.20?

En noviembre de ese mismo a�o, la revista Science public� resultados alentadores

sobre el uso de terapia g�nica en una enfermedad muy grave del cerebro, la
adrenoleucodistrofia, usando un vector retroviral para el tratamiento.21?

2012
El 2 de noviembre la Comisi�n Europea autorizo a Glybera, una empresa
alemana(Amsterdam), a lanzar un tratamiento para un extra�o desorden gen�tico - la
deficiencia de lipoproteinlipasa(LPL).

Porcentajes de ensayos de terapia g�nica en la actualidad

Porenfermedades.jpg
Porpaises.jpg
Vectorutilizado.jpg
Enfermedades y terapia g�nica
Son numerosas las enfermedades objeto de la terapia g�nica, siendo las m�s
caracter�sticas las tratadas a continuaci�n:

ADA
El primer protocolo cl�nico aprobado por la FDA para el uso de la terapia g�nica
fue el utilizado en el tratamiento de la deficiencia en adenos�n deaminasa (ADA)
que provoca un trastorno de la inmunidad, en 1990. En estos pacientes no se ha
podido retirar el tratamiento enzim�tico ex�geno necesario para su supervivencia,
sino s�lo disminuirlo a la mitad y se ha detectado la persistencia en la expresi�n
del gen aun despu�s de cuatro a�os de iniciado el protocolo. Aunque no se haya
logrado la completa curaci�n de los pacientes (que consistir�a en retirar todo el
aporte enzim�tico ex�geno) este constituye un hecho in�dito en la historia
terap�utica. En 2009 se hace un nuevo experimento en el que extraen c�lulas
hematopoy�ticas de la m�dula �sea para la introducci�n del gen ADA ex vivo mediante
un retrovirus modificado (GIADA). Las c�lulas modificadas se vuelven a introducir
en el paciente. Los resultados de este experimento fueron exitosos porque ninguno
de los pacientes desarrollo leucemia (como si hab�a ocurrido con el empleo de
retrovirus). Adem�s, todos los pacientes desarrollaron una expresi�n correcta del
gen ADA durante los a�os de seguimiento que se les hizo y consiguieron un aumento
de c�lulas sangu�neas. De esta manera 8 de los nueve pacientes no necesita
tratamiento enzim�tico ex�geno para complementar la terapia g�nica.

C�ncer
El tratamiento del c�ncer hasta el momento ha implicado la destrucci�n de las
c�lulas cancerosas con agentes quimioterap�uticos, radiaci�n o cirug�a. Sin
embargo, la terapia g�nica es otra estrategia que en algunos casos ha logrado que
el tama�o de tumores s�lidos disminuya en un porcentaje significativo. Los
principales m�todos que utiliza la terapia g�nica en el c�ncer son:

Aumento de la respuesta inmune celular antitumoral (terapia inmunog�nica). Est�

basada en la habilidad del sistema inmune para atacar contra el c�ncer. Para ello,
se introducen ant�genos en c�lulas tumorales permitiendo que las c�lulas inmunes
puedan reconocer a las c�lulas tumorales. As�, se puede transformar las c�lulas
tumorales con la prote�na CD80, glicoprote�na de membrana de c�lulas presentadoras
de ant�genos que se une a linfocitos T potenciando la respuesta inmune.
Introducci�n de genes activadores de drogas dentro de las c�lulas tumorales o
terapia de genes suicidas. Consiste en la introducci�n selectiva de genes en
c�lulas tumorales y no en las dem�s, que codifican para la susceptibilidad a drogas
que de otra manera no ser�an t�xicas. Esto lleva a la inserci�n de enzimas; como
por ejemplo HSV-tk [Herpex simplex virus timidina kinasa]) y citosina desaminasa,
que son enzimas inofensivas para las c�lulas de mam�feros y convierten prodrogas
(vg ganciclovir y 5-fluorocitosina) en metabolitos citot�xicos que destruyen a las
c�lulas tumorales en proliferaci�n.
Normalizaci�n del ciclo celular. Consiste en la inactivaci�n de oncogenes mutados,
como el ras, o en la reexpresi�n de antioncogenes o genes supresores de tumor
inactivos como el p53. Se han llevado a cabo ensayos cl�nicos en los que se inyecta
en c�lulas tumorales retrovirus que expresan p53. El problema es que se necesitan
grandes cantidades de virus para tratar los tumores muy extendidos y los retrovirus
presentan una baja eficiencia de trasfecci�n.
Manipulaci�n de las c�lulas de la m�dula �sea. Es utilizada principalmente en la
terapia g�nica de des�rdenes hematol�gicos, y consiste en transferir a las c�lulas
progenitoras hematopoy�ticas genes de quimioprotecci�n o de quimiosensibilizaci�n,
entre otros. Este es el caso del gen MDR1 estudiado en el c�ncer de mama que,
trasplantado en c�lulas precursora de linfocitos T y NKs ( c�lulas CD34 positivas),
hace que las c�lulas transfectadas sean m�s resistentes a altas dosis de
quimioterapia.
Uso de ribozimas y tecnolog�a antisentido o "antisense". Las ribozimas son ARN con
actividad catal�tica que actuar�an incrementando la degradaci�n del ARN reci�n
traducido, disminuyendo prote�nas espec�ficas no deseadas, factor que a veces se
asocia a alteraciones tumorales. La tecnolog�a antisentido se refiere a
oligonucle�tidos de ARN que no tienen actividad catal�tica, sino que son
complementarios a una secuencia g�nica y que pueden actuar bloqueando el
procesamiento del RNA, impidiendo el transporte del mRNA o bloqueando el inicio de
la traducci�n.
S�ndrome de Wiskott-Aldrich (WAS)
El s�ndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) es una enfermedad recesiva ligada al cromosoma
X caracterizada por eczema, trombocitopenia, infecciones recurrentes,
inmunodeficiencia as� como una gran tendencia a los linfomas y a las enfermedades
autoinmunes. Tambi�n hay una versi�n m�s suave de esta enfermedad conocida como
trombocitopenia ligada al cromosoma X o XLT caracterizada por microtrombocitopenia
cong�nita con plaquetas de peque�o tama�o. Ambas enfermedades est�n producidas por
mutaciones en el gen WAS que codifica para una prote�na multidominio que s�lo se
expresa en c�lulas hematopoy�ticas, WASP. Por lo tanto, la mayor�a de los que
padecen este s�ndrome sufren una muerte prematura debido a una infecci�n,
hemorragia, c�ncer o anemia grave autoinmune. Actualmente, se han realizado
tratamientos eficaces en pacientes con el s�ndrome de Wiskott-Aldrich por medio de
trasplantes de m�dula �sea o sangre del cord�n umbilical de un donante HLA id�ntico
o compatible. En 2010 se publica un estudio que muestra importante mejoras en dos
ni�os diagnosticados con la enfermedad. La terapia consisti� en extraer las c�lulas
madre hematopoy�ticas y volv�rselas a trasferir tras integrarles el gen WAS en el
genoma. Tras la terapia g�nica, detectaron niveles significativos de la prote�na
WASP en las diferentes c�lulas del sistema inmune de los pacientes. El resultado
fue que los pacientes tuvieron varias mejoras significativas: uno de ellos se
recuper� por completo de la anemia autoinmune y el otro paciente redujo el eczema
que sufr�a.

Beta Talasemia
La �-talasemia constituye un desorden gen�tico con mutaciones en el gen de la �-
globulina que reduce o bloquea la producci�n de esta prote�na. Los pacientes con
esta enfermedad padecen anemia severa y requieren trasfusiones de sangre a lo largo
de toda su vida. La terapia g�nica tiene como objetivo sanar las c�lulas madre de
la m�dula �sea mediante la transferencia de la �-globina normal o gen de �-globina
en c�lulas madre hematopoy�ticas (CMH) para producir de forma permanente los
gl�bulos rojos normales. Para llevarlo a cabo se pretende emplear lentivirus porque
varios estudios muestran la correcci�n de la �-talasemia en modelos animales. Los
objetivos de la terapia g�nica con esta enfermedad son: optimizar la transferencia
de genes, la introducci�n de una gran cantidad de CMH modificadas gen�ticamente y
reducir al m�nimo las consecuencias negativas que pueden derivarse de la
integraci�n al azar de los vectores en el genoma.

Problemas de la terapia g�nica y de sus aplicaciones

Un concepto muy importante del que radican algunos aspectos de la seguridad de la
terapia g�nica es el de la barrera Weismann. Se refiere al hecho de que la
informaci�n hereditaria s�lo va de c�lulas germinales a c�lulas som�ticas, y no al
rev�s.

La terapia g�nica en c�lulas germinales es mucho m�s controvertida que en c�lulas

som�ticas, pero aun as�, si la barrera Weismann fuera permeable a alg�n intercambio
de informaci�n, como algunos autores se�alan,22? incluso la terapia en c�lulas
som�ticas podr�a tener problemas �ticos y de seguridad que antes no habr�an sido
considerados.

La naturaleza de la propia terapia g�nica y sus vectores, implica que en muchas

ocasiones los pacientes deben repetir la terapia cada cierto tiempo porque �sta no
es estable y su expresi�n es temporal.

La respuesta inmune del organismo ante un agente extra�o como un virus o una
secuencia de ADN ex�gena. Adem�s, esta respuesta se refuerza en las sucesivas
aplicaciones de un mismo agente.

Problemas relacionados los vectores virales. Podr�an contaminarse tanto por

sustancias qu�micas como por virus con capacidad de generar la enfermedad. Implican
tambi�n riesgos de respuesta inmune

Trastornos multig�nicos: representan un reto muy grande para este tipo de terapia,
ya que se trata de enfermedades cuyo origen reside en mutaciones en varios genes, y
aplicar el tratamiento se encontrar�a con las dificultades cl�sicas de la terapia
multiplicadas por el n�mero de genes a tratar.

Posibilidad de inducir un tumor por mutag�nesis. Esto puede ocurrir si el ADN se

integra por ejemplo en un gen supresor tumoral. Se ha dado este caso en los ensayos
cl�nicos para SCID ligada al cromosoma X, en los cuales 3 de 20 pacientes
desarrollaron leucemia.23?