XXI.

-Hortalizas, Verduras,
Frutasyderivados

Métodos oficiales de análisis de

zumos de frutas y otros vegetales
y sus derivados.

El Decreto de la Presidencia del Gobierno nlimero 2463/1967, de 21 de

septiembre (r6oletin Oficial del Estadal de 17 de octubre), que aprueba el
Código Alimentario Español, prevé que pueden ser objeto de Reglamentacio-
nes Especiales las materias en 81 reguladas.

0 El Real Decreto 66711983. de 2 de marzo (rBoletln Oficial del Estador del

31). por el que se aprueba le Reglamentacibn T&znico-Sanitaria para la
elaboración y venta de zumos de frutas y otros vegetales y de sus derivados.
contempla diversos par8metros que han de cumplir los zumos de frutas.
Por todo lo anterior. es necesario establecer unos mkodos oficiales de
análisis que garanticen la cuantificacibn de los par8metros antes mencionados.
En su virtud. a propuesta de los Ministros de Economia y Hacienda: de
Industria y Energla: de Agricultura, Pesca y Alimentación. y de Sanidad y
Consumo. previo informe preceptivo de la Comisión Interministerial para la
Ordenaci6n Alimentaria y oidos los representantes de los sectores afectados.
Este Ministerio de Relaciones con las Cortes y de la Secretaria del Gobierno,
dispone:
Primero.-% aprueban corno oficiales los MBtodos de Análisis para los
Zumos de Frutas y otros vegetales y sus derivados que se citan en el anexo 1.
Segundo.-Cuando no existan mkodos oficiales para determinados an&lisis
y, hasta tanto los mismos no sean propuestos por el Organo competente y
previamente informados por la Comisión Interministerial para la Ordenaci6n
Alimentaria. podrik ser utilizados los aprobados por los Organismos Nacionales
o Internacionales de reconocida Solvencia.

DISPOSICION DEROGATORIA

Quedan derogadas las disposiciones de igual o inferior rango que se

opongan a la presente Orden.
Madrid, 23 de enero de 1966.
ZAPATERO GOMEZ
Excmo5 Sres. Ministros de Economia y Hacienda de Industria y Energfa. de
Agricultura, Pesca y Alimentacibn y de Sanidad y Consumo.
 ANEXO I
MBtodos oficiales de anitlisis de zutnos de frutas y otros
vegetales y sus derivedos

INDICE

1. Preparación de la muestra.

2. Densidad.
3. Extracto Seco.

4. PH.
5. Acidez total.

6. Acido Isocitrico.
7. Grado Brix.

8. Azúcares.
9. Relaci6n azúcares totaleslgrados Brix.

10. Acido Ascórbico.

11. Nitrogeno total.
12. Indice de formol.

13. Cenizas.
14. Fósforo.
15. Potasio.
16. Acido sórbico.
17. Acido benzoico.
18. (a) Anhidrido sulfuroso.

1. PREPARACION DE LA MUESTRA

1 .l Principio.-Las operacions descritas a continuación. tienen. por finali-

dad conseguir una muestra para el análisis lo mas homogbnea posible. Por ello,
toda simplificaci6n o tratamiento insuficiente en este operación. puede condu-
cir a unos resultados que no sean representativos.
1.2 Material y apamm:
1.2.1 Trituradora ektrica del mkdmo grado de finura.

1.2.2 Balanza.
1.2.3 Agitador magnético.

1.3 Procedimiento:
1.3.1 Zumos y néc:tares: Homogeneizar el producto antes de cada tome de
muestre. Continuar como indica fa metodologfa de cada determinacibn.

1.3.2 Cremogenados: Tomar aproximadamente unos 400 gramos de cre-

mogenado y diluir hasta un litro con agua destilada. Mezclar y continuar como
en 1.3.1. Los resultados se referirhn a 100 gramos de producto. teniendo en
cuenta el factor de diluci6n.
1.3.3 Pulpas: Triturar y obtener el cremogenado. Continuar como en 1.3.2.
Los resultados se referiran a 100 gramos del producto teniendo en cuenta el
factor de dilución.
1.3.4 Concentrados y deshidratados: Tomar una cantidad adecuada de
concentrado o deshidratado y diluir a un litro con agua destilada, de tal manera
que la disolución tenga aproximadamente lo” Brix. En ceso de concentrados
de tipo pulposo (albaricoque. melocotón, pera. tomate, etc.) realizar la dilución
a unos 4’ Brix. Los resultados se referir8n a 1 OO gramos de producto, teniendo
en cuenta la dilucibn efectuada.
1.3.5 Congelados: Descongelar la muestra a temperatura ambiente y
continuar segim proceda.
1.3.6 Zumos gasificados: Cuando proceda, eliminar el gas carb6nicp. por
agitacibn a temperatura ambiente y vacio parcial.

2. DENSIDAD

2.1 Principio.-La densidad (ZO’C/Zo”C) del liquido a analizar se determi-

na por medio del picn6metro.
2.2 Material y apalalos
2.21 Estufa.
2.2.2 Desecador.
2.2.3 Baño a 20°C.
2.2.4 Balanza analitica sensible a 0.1 miligramos.
2.2.5 Picn6metro Reischauer de 50 mililitros.
El picn6metro de Reischauer consiste en un matraz de 50 mililitros de
capacidad, cerrado con un capuch6n esmerilado provisto de un cuello de 6
centimetros de longitud y 4 milimetros de dknetro interior.
2.2.6 Erlenmeyer de 500 mililitros.
2.2.7 Embudo de 10 centfmetros de di8metro.
2.2.8 Tubos capilares.
2.3 Reactivos:
2.3.1 Mezcla cr6mica.
2.3.2 Papel de filtro.
2.4 Procedimienfo.-Si el liquido a analizar contiene apreciable cantidad
de gas carbbnico. eliminar completamente este agitando fuertemente en un
Erlenmeyer durante el tiempo necesario.
2.4.1 Determinaci6n del peso del picnbmetro vacio:
Limpiar el picnómetro con mezcla crómica caliente y enjuagar cuidadosa-
mente co” agua destilada. Secar durante tres horas en estufa B 105.108’C.
Enfriar el desecador hasta la temperatura ambiente.
Pesar. con precisibn de cuatro cifras decimales.
2.4.2 Determinación del peso del picnómetro lleno de agua:
Llenar el picnómetro hasta la marca con agua destilada. Tapar y ponerlo en
un baño de agua a 20°C durante 20 minutos. Estando la temperatura equilibra-
da, enrasar el picn6metro (siempre sumergido en el baño de agua) con la
ayuda de un capilar.
Secar la parte vacia del cuello del picn6metro con papel de filtro.
Pesar eI picnómetro lleno de agua con precisión de cuatro cifras decimales.
2.4.3 Determinación del peso del picnomkro lleno de muestra:
Despu& de vaciar el picn6metro. lavar varias veces con la mUeStra Y
proceder como en 2.42. sustituyendo el agua por la “,“eStra.
2.5 Cálculos.-Calcular la densidad 2O”C/2O”C. aplicando la Siguiente
formula;

d=E

Siendo:

a = Peso picnómetro vacio.

 b= Peso picnómetro lleno de agua hasta el enrase.
c= Peso picnbmetro lleno de muestra para analizar hasta el enrase.

La densidad obtenida debe expresarse con una precisión de watm cifras

decimales.

2.6 Referencias.-Federation Internacionale des Producteurs de Jus de

Fruits. MBtodo número 1. 1968.

3.1 EXTRACTO SECO

(Sólidos solubles)
3.1 Principio.-El contenido en sólidos solubles expresados en g/I se cal-
cula a partir del valor de la densidad obtenida según el método oficial número
2 y utilizando la tabla 1.

TABLA I
Extracto seco total (g/l)

Densidad Tercer decimal de la densidad relativa

relativa con
2 decimales

1.00
1 .Ol
1.02
1.03
1.04
1.05
1.06
1.07
1.06
1 .os
1.10
1.11
1.12
1.13
1.14
1.15
1.16
1.17
1.16
1.19
1.20
1.21
1.22
1.23
1.24
1.25
1.26
1.27
1.26
1.29
1.30
1.31
1.32
1.33
1.34
1.35
 3.2 Material y aparatos.-Como en (2.2.).

TABLA II
Tabla interpolar

w
0.26 0.52 0.78 1.04 1.30 1.56 1.82 2.08 2.34

3.3 Referencia.-MBtodo nljmero 8. Federalion International des Produc-

teurs de Jus de Fruits. Año 1985.

4. pH

4,1F’rincipio.-Medida potenciom&rica a 20°C. previa eliminaci6n del did-

xido de carbono por sgitacibn en filo y con vacfo parcial.
4.2 Meted.4 y spsraslos
4.21. pH-metro.
4.2.2 Electrodols para medida de pH.
4.3 Reactivos:
4.3.1 Soluci6n tamp6n pH = 7: disolver 3,522 g de dihidrogeno fosfato de
potasio (KH,PO,): 14,020~ de monohidr6geno fosfato disbdico dodecahidrsto
(Na,HPO, 12H,O) y llevar e un litro con agua destilada.
4.3.2 Soluci6n tampón pH = 4: disolver 10,211 g de ftalato ácido de
potasio (KHC,H,O,) (secando une hora a 105°C) en un litro de agua destilada
a 20°C.
Procedimiento.-Tomar un volumen de muestra exenta de di6xido de
carbono y determinar el pH.
4.5 Expresidn de los resultados.-Expresar el pH medido a 20°C con uno
o dos decimales. segtin la precisión del aparato.
4.6 Observaciones.
4.6.1 Antes de cada nueva medida. limpiar los electrodos con agua
destilada y secarlos co” papel filtro.
4.6.2 El calibrado se hace coi ayude de las soluciones tamp6n siguiendo
las indicaciones especificas del aparato.
4.6.3 Para el calibrado, pueden utilizarse soluciones tamp6n comerciales
pero. en cualquier caso. la soluci6n debe se, reciente. No usar una soluci6n
tampón que contenga mohos o cualquier clase de sedimentos.
Referencias.-MBtodo número ll. Federadon Infernational des Producteurs
de Jus de Fruits afro 1968.

5. ACIDEZ TOTAL

5.1 PNncipio,-Valoracibn potenciom6trica con una disoluci6n alcalina

hasta pH = 8.1 de la acidez del zumo o derivado. previa eliminaci6n del
di6xido de carbono.
 5.2 f!Aareria/ y aparatos:

52.1 pHmetro.
5.2.2 Electrodols para medida de pH.

5.2.3 Agitador magn6tico.

5.2.4. Material de vidrio de uso normal en laboratorio.

5.3 Reactivos:
5.3.1 Solución de hidr6xido de sodio 0.1 N.

5.4 Procedimiento..-Tomar un volumen de muestra exente de di6xido de

carbono. preparada como en (1.3) en un vaso. Valorar agitando con hidr6xido
de sodio (5.3.1) hasta pH = 8.1.

5.5 Cálculos.-Los resultados se expresan en gramos de kido

cltrico/l OO ml de muestra. teniendo en cuenta el factor de diluci6n:

6.4 x V, x f x N
g de ácido citricoll OO ml c
V,

Siendo:
N = Normalidad del hidróxido de sodio.
V,=Volumen de hidr6xido de sodio (Na0H)O.l N utilizado en la valora-
ci6n.
V,=Volumen de muestra tomada.
f = Factor del hidróxido de sodio.
5.6 Referencias.-MBtodo nlimero 3. Federetion International des Produc-
teurs de Jus de Fruits. AAo 1968.

6. ACIDO ISOCITRICO

6.1 Principio.-El kido isocitrico se separa de los zumos o derivados con

cloruro de bario y se determina enzim&icamente.
En presencia de la enzima isocitrato deshidrogenasa (ICDH) el kido
isocitrico (D-lsocitrato) se descarboxila oxidativamente e cetoglufarato por el
fosfato del dinucle6tido de la nicotinamida-adenina (NADP).

D-isocitrato+NADP+- -cetoglutarato+NADPH+CO,+ H’

La cantidad de NADPH formada en este reecci6n es estequiom&rice con le

cantidad de isocitrato. El incremento de NADPH 88 determine por In varisci6n
de la absorbancia a 340 nm.
6.2 Material y aparatos:
6.2.1 Cubetas de cuarzo de 1 cm de paso luz.

6.2.2 Espectrofotómetro capaz de medir 340 nm en el ultravioleta.

6.3 Reacdvos:
6.3.1 Carb6n activo.
6.3.2 Soluci6n de hidr6xido de sodio 4N.

6.3.3 Acido clorhidrico 4N.

6.3.4 Soluci6n de amoniaco al 25 por 100 p/p. 0.91 glm.

6.3.5 Acetona.
6.3.6 Solución de cloruro de bario: Disolver 30 g de cloruro de bario
dihidratado (EaCL, ZH,O) en agua destilada y enrasar a 100 ml.
 63.7 Soluci6n de sulfato de sodio: Disolver 71 g de sulfato de sodio
(Na,SO,H,O) en agua destilada y enrasar a 1 litro.

6.3.6 Soluci6n de sulfato de manganeso: Disolver 125 mg de sulfato de

manganeso (Mn SO, H,O) en 10 ml de agua destilada. La solución es estable
seis meses a temperatura ambiente.

6.3.10 Solucibn tampón pH = 7.0: Disolver 2.42 g de Tris (hidroximetil)

aminometano y 35 mg de EDTA-Na, ZH, en 80 ml de agua destilada; adificar
hasta pH = 7. con kido clorhidrico (6.3.3) y enrasar con agua hasta 100 ml.
Esta soluci6n es estable por lo menos un año.

6.3.11 Solución NADP: Disolver 50miligramosde 8.niconatimida-adenina-

dinucleotido fosfato dis(rdico (fl-NADP-Na,) en 5 mililitros de agua bidestila-
da. Esta soluci6n es estable por lo menos cuatro semanas a +4”C.

6.3.12 Soluci6n enzima (ICDH): Disolver 10 mg de liofilizado en 1 ml de

solución de glicerina (50 por 100 vlv co” agua destilada). Esta soluci6n es
estable durante cuatro semanas a +4-C.

6.4 Procedimienm:

6.4.1 Preparaci6n de la muestra.

Tratar 10 ml de muestra con 5 ml de hidróxido de sodio (6.3.2) en un tubo

de centrifuga de 1 OO ml y dejar reposar durante 10 minutos a temperatura
ambiente (20°C).

Adicionar 5 ml de acido clorhidrico (6.3.3) diluir la solución hasta 25 ml.

Añadir 2 ml de solución de amoniaco (6.3.4). 3 ml de cloruro de bario (6.3.6) y
20 ml de acetona (6.3.5). Mezclar perfectamente con una varilla de vidrio.
Centrifugar 5 minutos a 3.000 revoluciones por minuto. Decantar el sobrante
con cuidado y adicionar 20 ml de soluci6n de sulfato de sodio (6.3.7) al
precipitado en el tubo de centrifugar y agitar con varilla de vidrio. Disolver el
precipitado en baito de agua hirviente agitando frecuentemente durante 10
minutos: enfriar y transferir cuantitativamente a un matraz aforado de 50 ml
enrasando con soluci6n tampbn pH = 7 (6.3.9). Transferir el contkido del
matraz a otro conteniendo 1 g de carb6n activo (6.3.1) dejar reposar 5 minutos
y filtrar. El liquido filtrado incoloro y transparente se usa para la determinaci6n
del Bcido isocitrico en la muestra.

6.4.2 Determinación:

La determinación se realiza a una temperatura aproximada de 20°C. La

absorcibn máxima de NADPH es a 340nm.

t3l.WlCO MUlXl~~
Poner en las cubetas -
ml ml

Tampón pH=7,4 (6.3.10) ._......._.._............: 3.00 2.00

Sulfato de manganeso (6.3.8) <. <. 0.10 0.10
Soluci6n NADP (6.3.11). ._. ._. ._. <. 0.10 0.10
Muestra.. <. <. <. <. <. - 1 .oo
Mezclar. esperar 3 minutos y leer las absorbancias
(A,. tanto del blanco como de la muestra frente a
aire. Empezar la reacci6n añadiendo:
Soluci6n enzima ICDH (6.3.12) ._. ._. ._. ._. 0.01 0.01
 Mezclar y esperar a que la reacción se detenga (4-10 minutos); leer las
absorbancias (A,). Continuar leyendo las absorbancias a intervalos de 2
minutos hasta que se incremente de forma constante la lectura de absorbancia.
Tomar como (A,) el primer valor de absorbancia a partir del cual se han
observado incrementos constantes.

AE=(A,-A,) muestra-(AZ-A,) blanco

0 El cálculo de la concentración de Bcido isocltrico en funcidn de E sigue la

ley de Lamben-Beer. Por tanto el contenido en mgll de ácido isocftrico vendrá
dado por la expresi6n:

M x V, x F
C= x AE=489,36xAE
EV, x 6

siendo:
M = Peso molecular del Ácido isocftrico 192.1.
V,=Volumen total introducido en la cubeta en mililitros.
V,=Volumen de muestra utilizada para la determinaci6n en mililitros.

0 F=Factor de diluci6n de le muestra.

8=Coeficiente extinci6n del NADPH a 340 nm BS 6.3 l/m mokm.
6=Paso de la luz de la cubeta en cm espesor.
C=Concentrado en mgll de Ácido isocltrico.
Expresar los resultados en mgll de Bcido isocltrico sin decimales.
6.6 Referencias: MBtodo número 54 Federadon Internationsl des Produc-
teurs de Jus de Fruits. Año 1984.

7. GRADO BRIX

7.1 Principio.-Medida del indice de refracci6n y conversi6n en grados

Brix mediante las tablas adjuntas.
7.2. Maferial y apamos:
7.2.1 Refractómetro provisto del equipo necesario pera mantener la tem-
peratura a 20” c.
7.2.2 Matraces o recipientes de vidrio que cierren herm6ticamente.
7.3 Procedimiento:
Colocar el refractdmetro en un lugar iluminado con luz difusa.
Circular agua a temperatura constante preferiblemente e 20” C a trav6s de
los prismas del refractómetro.
Calibrar el refractómetro con H,O destilada a 20” C, cuyo Indice de refrac-
cibn te6rico a dicha temperatura es 1.3330.
Situar le muestra en un envase herm&icamente cerrado en un baño a 20.” C
y esperar a que alcance dicha temperatura. Medir el fndice de refracci6n.
7.4 Cá/cu/os.-A partir del valor obtenido del lndice de refracción se
determinan los grados Brix mediante la tabla 1.
Expresar los resultados con una cifra decimal.
7.5 Observaciones.-Si se emplea otra temperatura para medir el indice de
refracción. corregir los grados Brix utilizando la tabla ll.
 7.6 Relerencias:
7.6.1 MBtodo número 8. Federation International des Producteurs de jus
de Fruits Año 1962.
7.6.2 Methods Association of Official Analytical Chemists. Referente
Tables. Afro 1984.

TABLA I

Grado Grado
*“oo Erix 2G Brix

1.3331
1.3330 WJO; 1.3377 3,259 1.3425 6,498 1,3473 9,661
1,337a 3.327 1.3426 6,565 1,3474 9,726
1.3332 0,149 1.3379 3.395 1.3427 6,632 1,3475 9,791
1.3333 0.2IS 1.3380 3,463 1.3428 6.696 1.3476 9,856
1.3334 0.288 1.3429 6.165 1.31 7i 9,921
1.3335 0.358 ;,;X!, 3.532
3600 1.3430 6.831 1.3 7í: 9,986
1.3336 0,428 1'338; 3'668 1.3431 6,898 13479 10,051
1.3337 0.498 1:3384 3:736 1.3432 6.964 1:3480 10,116
1.3338 0.567 1,3385 3,804 1.3433 7,031 1.3481 10.181
1;3339 0.637 1.3386 3,872 1.3434 7.097 1,348:! 10.246
1.3387 3,940 1,3435 7.164 1,348:1 10,311
ymI 0.776
0.707 1,338s 4.008 1.3436 7,230 1.3484 10.375
1,3342 0,846 l,3389 4.076 1.3437 7.296 1.348:i 10,440
1.3343 0.915 1.3438 7.362 1,3481; 10,505
1.3344 0.9äS y?l 4,144
4.212 1.3439 7,429 1.348'7 10.570
1,334s 1.054 1:;391 4,279 1.3441
1,344o y; 1,348.3 10,634
1,3346 1,124 1.3393 4.347 1.348,) 10.699
1.3247 1.3442 71627 1.3453 10,763
1.193
l,3348 Is::;: 4% 1.3443 7.693 1.3491 10.828
1.263
1'3396 4:55(: 1.3444 ;.;;; 1.3492 10,892
1.3349 1.332
l:3397 4.618 1.3445 1.3493 10,957
l.33SO 1.401
1,3398 4,686 1.3446 7:89l l,3494 11,021
1.3351 1.470
1.3399 4.753 1.3447 7,957 1.3495 11.036
1.3352 l.S40 1.3496 11,150
1.34Kl 4,821 1.3448 8.023
1.3353 1.609 1.34$7 Il.215
1,340l 4.8EE 1.3449 8,039
l.S.354 1.678 1.3458 ll.279
I ,3.i 5 5 1.3402 4.956 yy y;
1.747 1,34+9 ll.343
1.3556 13403 503:
1.816 1:3452 a:se7 1.35~10 Il.407
1.33j7 113404 5:091
1.885 1.3501 ll;472
1.3405 5.15s 1.3453 8,352
1.3358 1,954 I 3502 ll.536
l.3?59 1.3406 5,221 f$;; ;*g
2.023 1.3107 5.292 1'3503 11.600
l .3.:50 2.092 I .3?08 5.1X 1:3-!56 s:5:0 1:350-1 Il.664
l.;?51 2.161 1,3357 8,615 1.3505 ! 1.728
1.3362 2.230 1,3453 8.681 1.3506 11,792
!..<3i,3 2.299 1.3459 8,746 1.3507 ll.856
1.336-1 2,367 1.3460 8.812 1.3508 11,920
1.3355 2,436 1,346l &.878 1.3509 ll.984
1.3366 2.505 1.3111 5.76: 1.3462 8.943 1.3510 12.048
1.3367 2.574 1.3415 5.831 l,3463 9.008 1,3Sll 12.112
l..33óU 2.642 1.34¡6 S.E9i 1.3464 9.074 1.3512 12.176
1.3369 2.711 1.34 17 5.96' 1.3465 9.139 1.3513 12.240
1.3370 2.779 1.3418 6.031 1.3466 9.205 1,3Sl4 12,304
1 ! :t 7 i 2.846 1.3419 6.091 1,3467 9,270 1.3515 12,368
1.3372 2.917 1.3420 6.161 1.3468 9.335 l,3516 12,431
1.j373 2.935 1,331l 6.231 1.3469 9.400 1.3517 12.435
1.337J 3.053 1.3470 9,466 1.3518 12.559
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 Grado Grado Grado Grado
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1.4469 62,200 .4527 64.691 I ,45X5 67,I-l: .~~~
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I ,4479 62.633 ,4537 65,120 ,.4595 67.563 ,4653 69.962
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 n Grado n Grado
20" Elrix 20" Elrix

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1.4765 74.480 1.4323 76.763 1,488l 79.008
I1.4766 74;520 1.4824 76.802 1.4882 79.046
!1.4767 74,560 1.4825 76.841 1.4883 79.084
11.4768 74.599 1.4826 76.880 l,4884 79,123
1.4769 74,639 I,4827 76.9~9 i.48S5 79.161
11.4770 74.678 1.4828 76.958 1.4886 79.199
l1;4771 74;71i 1,-1S29 76.997 1.4887 79,238
I1.4772 74,758 1.4630 77,036 1.4888 79.276
I1,4773 74,797 1.4831 77.075 l,4889 79.314
1134774 14,837 1.4832 77.1:3 1.4890 79.353
11.4775 74,876 1.4833 77.152 1.4891 79.391
I1.4776 74,916 I ,483.I 77.19 I 1.4892 79.429
I1.4777 74,956 1.483 77.230 1.4893 79.468
11.4778 74.995 1.4836 77.269 1,389.I 79.5O'í
11.4779 75.035 1.4n3i 77.30s 1.4895 79.544
I1,478O 75.074 1.48% 77.341 ¡:4896 79.581
11.4781 75,114 1.4839 77.38ó 1.4897 79.62U
11.4782 75.153 1.4840 77,425 1..+S96 79.b59
11.4783 75,193 1.4&lI 77.463 I.489') 79.697
I(4784 75,232 1.4642 77,502 1.4900 79.735
 Grado Grado n Grado Grado
2G Brix 200 Brix 20” Brix 2% Brix

1.4901 79.77: 1.4946 81.48t 1.499i 83.16

1.490’ 79.8 I 1 1.4947 El.511 1.4992 83%
1.4903 79.E5t II4948 8l:ssl 1,4993 83.2-i
1.49n.l 79.88: I .4949 II 1.59: 1.4994 83.27
1.4903 79.92t 1.4Y50 81.631 1.4995 83.3 I
1.4YO6 79,96; 1,4996 83.35
I .4907 80.00; 1.4997 83.3X
I .4908 80.04( i,4998 ~3.42
I .4909 80.07¿ 1.4999 83.46
1.4910 8O.llf 1,tioclo 83.5U
1.431 I 80.15: 1.5001 83.53
1.4912 80.19; 1,5002 83.57’
1.4913 80.231 1.5003 83,61
I ,49 14 80.265 l,5004 83,6Ai
I.4Y I 5 80.3Oi 1,5005 83.6S,
1.4916 80,345 1.5006 63.72.
1.49 I 7 SO.382 I 5cJo7 E3.751
1.491 R 80.42 I l:5008 83:741
I .49 19 80.4% 1.5009 X3.83.
I .4920 80.497 1.5010 83.87(
I .4Y2 I 80.534 1,501 I 63.YV
I .4922 80.572 1.5012 83.Y4‘
1.4923 SO.610 1,5013 83.981
I ;497i 8tl.648 1.5014 84.0¡!
1~4925 80.686 l:sols 84.05:
1.4926 80.724 1;5016 84.39:
1;4927 80;762 1,5017 8l:lZS I .5062 85;781
I .4918 80.800 1.5018 84.l6e I .5063 85,817
I .4929 80,838 I.SOlY 84.203 1.5064 85,854
1.4930 60.876 I .502@ 84.24C 1.5065 85,890
1.4931 80,913 I .‘02 I 84,277 1.5066 85,927
1.4932 80.95 1 l.502l 84 314 1.5067 85,963
1.4Y33 80,989 1.5’923 84’351 I .5068 86.000
1.4934 81,027 I .5íXJ 841388 I .5069 86,036
1.4935 81.065 I .SOZ5 64.424 I .5070 86,072
1.4936 81,103 l.5026 84.46 I 1.5071 86.109
1.4937 81.140 1.5027 84’498 I .5072 86.145
1.4938 81.178 I .jOZS 84,535 1.5073 86,182
1.4939 81.216 1.5029 84,572 1.5074 86,218
1.4940 81.254 I .5030 84.609 1.5075 86.254
1.4941 8I,29I 1.503 I 84,645 1.5076 861291
1.4942 8 1.329 I.5032 84,682 1.5077 86,327
1.4943 81.367 1.5033 84.719 I .X)7X 86,363
I .4944 8 I .405 I .5&34 84,756 1.5079 86,391)
I ,4945 8 I .442 I .jO35 84,792
 TABLA II

l Sumar
o.cs 0.08 3.0x I f-m 0.08
0.15 0.15 0.18’11.16 0.16
0.23 0.3 C.I.4 0.24 0.24
0.31 0.31 0.31 0.32 0.J2
0.39 0.40 0.40 0.40 0.4tl
0.17 0.48 0.48 0.48 0.48
0.5s 0.56 0.56 0.56 03
0.63 0.6-r 0.6-I 0.64 0,64
0.72 0.73 0.73 0.73 0.73
/ 0.80 0.81 0.81 0.81 0.81

8. AZUCARES
8.1 Principio.-Eliminaci6n previa de todas las materias reductoras distin-
tas de los azúcares, por defecaci6n y posterior valoraci6n basada en la acci6n
reductora de tos azúcares sobre una solución cupro-alcalina. Para la determina-
cibn de azúcares no reductores es necesario proceder a una hidr6lisis previa.

8.2 Malerial y apararos.

82.1 Material necesario para volumetrlas.

8.2.2 Baño de agua.

8.2.3 Erlenmeyer de 300 ml con refrigerante de reflujo.

8.3 Reacrivos.

8.3.1 Solución de Bcido sulfúrico del 25 por 100 (6 N).

8.3.2 Solucibn de Ácido clorhidrico del 32 por 100, d = 1 16 g/ml.

8.3.3 Solucibn de hidróxido de potasio del 30 por 100.
8.3.4 Solución de hidrbxido de potasio del 0.5 por 100.
8.3.5 Solución de ioduro de potasio: Disolver 30 g de KI en 100 ml de
agua destilada.
8.3.6 Solucibn de ioduro de potasio: Disolver 30 g de KI en 100 ml de
destilada.
8.3.7 Solucibn de Carrez 1: Disolver 1509 de hexacianoferrato (II) de
potasio trihidratado (K.Fe(CN),.3H,O) en un litro de agua.
8.3.8 Solución de Carrez II: Disolver 300 g de sulfato de cinc heptahidra-
tado (ZnS0,.7H,O) en un litro de agua destilada.
 8.3.9 Solución de Luff-Schoorl: Disolver 50 g de kido cltrico C 0H 80 7H 20
en 500 ml de agua tibia, cuando se haya enfriado, mezclar con cuidado ambas
soIuciones.

Disol~e: 25 g de sulfato de cobre (II) pentahidrato (Cu S0..5H,O) en 1 OO ml

de agua tibia. Añadir a la solución anterior y enrasar con agua hasta un litro.

8.3.10 Solución de tiosulfato de sodio (Na,S,O,SH,O) 0.1 N (24.8 g/l).

8.3.11 Soluci6n de fenolftaleina: Disolver 0.1 g de fenolftaneina en 1 OO ml

de etanol.

8.4 Procedimiento.

8.4.1 Preparación de la muestra: Tomar una cantidad conveniente de

muestra (2-5 ml). Diluir con agua. Añadir 5 ml de la solucibn Carrez I (8.3.7) y
5 ml de la solución Carrez ll (8.3.8). Mezclar y enrasar hasta 250 ml con agua.
Dejar reposar y filtrar.

8.4.2 Determinaci6n de ankares antes de la inversibn. Azúcares reducto-

res: tomar 25 ml de la muestra filtrada (que no contenga m8s de 50 mg de
azúcares reductores) en un matraz con 25 ml de la solución de Luff-Schoorl
(8.3.9). Añadir unas perlas de vidrio y conectar el refrigerante de reflujo.
Calentar el matraz con potente llama hasta alcanzar en dos minutos la ebulli-
ción y mantener ésta durante diez minutos exactamente. Enfriar con agua y
cuando el matraz es16 frio. añadir con cuidado 10 ml de ioduro de potasio
(8.3.5). 25 ml de ácido sulfirrico (8.3.1) y 2 ml de la solución de almidbn
(8.35). Valorar con dosulfato de sodio (8.3.10) hasta viraje del indicador. Si se
hubieran empleado menos de 5 ml de la valoración. repetir la determinación
utilizando una dilución de la muestra más adecuada.

Realizar paralelamente un ensayo en blanco empleando 25 ml de agua

destilada.

D,.-número de mililitros de tiosulfato de sodio O.lN empleados en la

valoraci6n del blanco.

D,.-número de mililitros de tiosulfato de sodio O.lN empleados en la

valoraci6n de la muestra.

8.4.3 Determinaci6n de los azúcares despu6s de la inversi6n:

Azúcares totales: En un matraz de 100 ml mezclar 50 ml de filtrado obtenido

en (8.4.1) con 5 ml de Ácido clorhldrico (8.3.2) y llevar el matraz de agua a
70” C. donde la muestra adquirirá 67” C en dos o tres minutos. Mantener la
muestra entre 67.70” C. cinco minutos. Enfriar a unos 20” C y neutralizar con
hidr6xido de potasio (8.3.3) y (8.3.4) como indicador. Enrasar a 100 ml con
agua y continuar como en (8.42). Realizar paralelamente un ensayo en blanco.

D,.-mimero de mililitros de dosulfato de sodio O.lN empleados en la

valoraci6n del blanco.

D,.-número de mililitros de dosulfato de sodio 0.1 N empleados en la

valoración de la muestra.

8.5 Cálculos.-Con los valores D, y D, y de la tabla l se obtiene los

contenidos en mg de glucosa (A) y (Et) (interpolar si fuera necesario):

D, = D, - D,: de la tabla 1 se obtiene el valor (A).

D, = D, - D,: de la tabla 1 se obtiene el valor (B).

A
Azúcares reductores en g glucosa/100 ml=”

Azúcares totales en g glucosa/1 OO ml=Z:

 Siendo:
V = Volumen de muestra
8.6 Observaciones.-Determinar el factor de tiosulfato de sodio (6.3.10) y
tenerlo en cuenta al calcular D,. D,. D,, D.
0.7 Relerencias.-Método número 4. Federation International des Produc-
teurs de Jus de Fruits. Ario 1985.

TABLA I
Pare 25 ml de reactivo de Luff-Schoorl

D = ml
mg de glucosa Diferencia
de dosulfato 0.1 N

1 2.4 2.4
2 4.6 2.4
3 7.2 2.5
4 9.7 2.5
5 12.2 2.5
6 14.7 2.6
7 17.2 2.6
6 19.8 2.6
3
10
ll 27.6 2.7
12 30.3 2.7
13 33.0 2.7
14 35.7 2.7
15 36.5 2.6
16 41.3 2.9
17 44.2 2.9
16 47.1 2.9
19 50.0 3.0
20 53.0 3.0
21 56.0 3.0
22 59.1 3.1
23 62.2

3. RELACION AZUCARES TOTALES/GRADOS BRIX

9.1 Principio.-Estimaci6n del contenido de azúcares totales del zumo o

derivado frente a sus grados Brix.
3.2 Material y aparatos:
9.2.1 Como en 7.2 y 6.2
9.3 Procedimienro.-Dividir el contenido de los azúcares totales obtenidos
en 6.5 entre los grados Brix obtenidos en 7.4.
3.4 Ex,wesidn de resulfados.-Expresar los resultados con dos cifras deci-
males.

10. ACIDO ASCORBICO

10.1 Principio.-Separacibn. identificaci6n y cuantificacibn del e?cido

Ascórbico por cromatografia de liquidos de alta eficacia detectándolo en el
ultravioleta a 268 nm.
 10.2 Maferiaial y aparatos.

10.2.1 Equipo de filtración de muestra y disolvente para eliminar paniculas

superiores a 0.5 ,rm.

10.2.2 Cromatbgrafo de liquidos equipado con detector de ultravioleta de

longitud de onda variable y registrador.

10.2.3 Columna NH,-Lichosorb de 250 x 4.6 milimetros de 10 pm o

5irnihr.
10.3 /?eacrivos:

10.3.1 Solución patrbn de ácido ascbrbico en agua destilada de 300

miligramos/litro preparada on el dfa y conservada en matraz color topacio.

10.3.2 Solución A:

Tampbn fosfato, pH 3.5. Disolucidn 0.005 M de dihidrbgeno fosfato de

potasio (KH, PO.):
Filtrar esta solucibn co” 10.2.1.

10.3.3 Solución 6:

Acetonitrilo para HPLC.

10.4 Procedimienro:
10.4.1 Condiciones cromatográficas orientativas:
Fase m6vil:
Tampón fosfatolacetonitrilo: 60:40 (vlv).
Flujo: 1 mililitro/minuto.
10.4.2 Calibrado: Inyectar en el cromatbgrafo entre 10 y 20 ~1 de la
solución patrón 10.3.1 y calcular el factor de r+z.puesta:

Factor de respuesta (F) =;

II

Siendo:
C, =Concentracibn en miligramosllitro de ácido ascbrbico.

A, =Area del pico en el cromatograma de la solución patrbn.

10.4.3 Determinaci6n: Homogeneizar. Filtrar con 10.2.1 e inyectar de 10 a

20 fil en el cromatbgrafo.

10.5 Cálculos.-El contenido de ácido ascbrbico expresado en miligra-

mos/litro (sin decimales), se obtendra mediante la siguiente fbrmula:

Acido ascórbico (miligramo/litro) = F x Ac

Siendo:

F = Factor respuesta.

Ac = Area del pico ac. ascbrbico en la muestra.

10.6 Observaciones:

10.6.1 La determinación de kido ascórbico se realizaré inmediatamente

después de la apertura del envase.

105.2 Con este mkodo no se determina ácido dehidroascórbico.

10.6.3 En algunos casos es necesaria la centrifugación previa de la mues-

tra.
 ll. NITROGENO TOTAL

ll .l Principio-Oigestibn del producto co” 6cido sulfirrico concentrado,

en presencia de catalizador, en la cual se transforma el nitrbgeno org6nico en
iones amonio que, en medio fuenemente b&ico, es desplazado en forma de
amoniaco y recogido sobre .kido bórico. La posterior valoraci0n con 6cido
clorhfdrico permite el cálculo de la cantidad inicialmente presente de nitrbgeno
orgánico y amoniacal en la muestra.

11.2.1 Aparato Kjedahl o similar.

ll .3 Reacrivos:

0 ll .3.1 Acido sulfiuico concentrado 96 por 100. d = 1.84 gramos/mililitro.

0 ll .3.2 Mezcla catalizadora: 100 gramos K,SO,; 10 gramos Cu,SO.. 5H,O
de verde de bromocresol y disolver 100 mililitros con etanol.

ll .3.3 Soluci6n de hidrbxido sódico al 40 por 1 OO p/v.

ll .3.4 Solucibn de Bcido bbrico al 4 por 100 p/v.
11.3.5 Solucidn de 8cido clorhldrico 0.05 N.
ll .3.6 Indicador. Pesar 105 miligramos de rojo de metilo y 150 miligramos
de verde de bromocresol y disolver a 100 mililitros con etanol.

ll .4 Procedimiento:
Poner en un matraz Kjedahl una cantidad adecuada de muestra (5-10
mililitros) e introducir sucesivamente 20 mililitros de H,SO, concentrado
(ll .3.1) y 6 gramos de catalizador (ll .3.2). Mezclar suavemente por rotación
y colocar el matraz en batería calefactora poniendo un embudo adecuado en la
boca. Calentar suavemente al principio y cuando el conjunto comienza e
decolorarse. aumentar la intensidad de la calefacción. Mantener Bsta hasta
decoloraci6n completa. prolongándola durante unos minutos.
Dejar enfriar hasta temperatura ambiente y ahadir agua. disolviendo par
rotacibn suave el sulfato potásico cristalizado.
En un erlenmeyer de 100 mililitros. poner 10 mililitros de Ácido bbrico al 4
por 100 (ll .3.4) y unas gotas de indicador (ll .3.6). Introducir hasta el fondo
en el erlenmeyer la alargadera del aparato de destilaci6n.

Agregar en el matraz de destilaci6n unos 30 milimelros de NaOH 40 por 100

(113.3) y agua destilada. Calentar hasta ebullición y recoger el destilado hasta
arrestre completo del amoniaco de la muestre.
Retirar el erlenmeyer. lavar la alargadera y el interior del refrigerante reco-
giendo las aguas de lavado sobre el destilado. Valorar con HCI 0.05 N (ll .3.5)
hasta viraje del indicador. Efectuar simultáneamente una prueba en blanco.

ll.5 C~Ucu/o.-El resultado se expresara en miligramos de nitr6genoIlOO

milili1ros.

14Ol.(V,-V,) N.f
Mi!igramos de nitrógeno/1 OO ml=
V

Siendo:
V,=Volumen. en mililitros. de HCI gastado en la valoraci6n.
V,=Volumen. en mililitros. de HCI gastado en el ensayo en blanco

f= Factor de HCI.
N = Normalidad del HCI.

V=Volumen de la muestra, en miligramos.

 ll .6 Referencias:
ll Li.1 Norma ISO. R 937.
ll.62 Metodo nlimero 29. Federatión Internationel des Producteurs de
Jus de Fruits. Ano 1965.

12. INDICE DE FORMOL

12.1 P,incipio.-Valorsci6n de la acidez de los compuestoe formados por

le reacción del formaldehfdo con los z-eminokidos.
12.2 Materia/ y aparealos:

12.2.1 pH-metro.
12.2.2 Electrodo/s de medida de pH.
12.2.3 Material de uso normal en laboratorio.
12.3 Reactivos:
12.3.1 Soluci6n de hidr6xido de sodio 0.1 N.
12.3.2 Agua oxigenada al 30 por 100.
12.3.3 Salucibn del formaldehldo. Llevar el formeldehido. del 35 por 100.
como minimo, e pH 9.1. medisnre la solucibn de hidrbxido de sodio (12.3.1).
utilizando el pH-metro. Comprobar ceda hora.
12.4 Procedimiento.-Poner 25 mililitro8 de muestre en un vaso, neutrali-
za, con hidróxido de sodio (123.1) heste pH 9.1. utilizando el pH-metro.
Afiadir 10 mililitros de le soluci6n de formaldehldo (12.3.3) y mezclar. Al cabo
de un minuto. efectuar la valoraci6n potenciomkrica de le soluci6n problema
con la soluci6n de hidr6xido de sodio (12.3.1) hasta pH 9.1.

Si se hubieran utilizado m6s de 20 mililitros de le soluci6n de hidr6xido de

sodio. deberá realizarse de nuevo le veloreci6n empleando 16 milllitros de
solución de formaldehido. en lugar de 10 mililitroe.
Si la muestra contiene dióxido de azufre. srkdlr elgunas gotas de agua
oxigenada (12.3.2) antes de la neutralizeoi6n.
12.5 Cd/culos.-El fndice de formol de le mueetre anelizada es igual e le
cantidad de solución alcalina utilizada en la valoraci6n expresada en mililkros
de hidr6xido de sodio 0.1 N (con une cifra decimal) y que corresponden e 100
mililitros de muestra:

V.f.100
I.F.=-
”

Siendo:
V=Volumen de hidr6xido de sodio 0.1 N empleado en le determinacibn.

f = Factor del hidrbxido de sodio empleado.

V’=Volumen de muestra empleando en le determinaci6n.
t 2.9 Observaciones.-En zumo de lim6n diluir 1 /l con H,O destilada entes
de efectuar la valoración.
12.7 Referencias.-MBtodo número 30. Federation International des Pro-
ducteurs de Jus de Fruits. Año 1994.
 13. CENIZAS

13.1 Principio.-Se denominan cenizas de un zumo o derivado, el conjun-

lo de los productos de incineraci6n del residuo obtenido tras la evaporación de
la muestra. de manera que se puedan obtener todos los cationes (excepto
amonio) en forma de carbonatos y otras sales minerales anhidras.
13.2 Malerial y epelillos:
13.21 Chpsula de platino, cuarzo o similar de unos 80 milímetros de
di$metro. con fondo plano.
132.2 Baño de agua y baño de arena.
13.2.3 Horno o mufla el6ctrica.
13.24 Balanza analitica con sensibilidad 0.1 miligramo.
13.3 Procedimienro.-Poner un volumen adecuado de muestre (25 mili-
litros) bien homogeneizado en cápsula tarada. Evaporar con precaucibn en el
baño de agua. Añadir al residuo seco “nee gotas de aceite de oliva. calentar
lentamente en el baño de arena hasta que la mayor parte de la suslancia
orgdnica este carbonizada. Introducir la capsula en el horno o mufla e 525 “C
(aproximadamente de seis a ocho horas).
En ceso de que la carbonización no fuese completa, humedecer les cenizas
con agua destilada, evaporar de nuevo y calcinar. Repetir este operación tantas
veces como sea preciso hasta la obtenci6n de cenizas blancas.
Enfriar le c&psulas en un desecador (unos treinta minutos) y secar.
13.4 CB/cu/os.-El contenido en cenizas expresado en gramos1100 mili-
litros vendra dado por la siguiente fórmula:

(P.-P,) 100
Cenizas (000 ml muestra)= V

Siendo:
P, = Peso en gramos de la c8psula vac.I..
P,=Peso en gramos de las cenizas mas le cápsula.
V =Volumen de la muestre en mililitros.
13.5 Observaciones.-En algún ceso les cenizas pueden presentar una
ligera coloraci6n. que es aceptada y no requiere un posterior tratamiento.
13.6 Referencias.-Método número 9. Federation International des Pro-
ducteurs de Jus de Fruits. Año 1962.

14. FOSFORO

14.1 PrN>cipio.-Transformaci6n de los compuestos fosforados en ortofos-

falos y posterior valoración espectrofotom&rica como fosfomolibdo vanadato.
14.2 Meferial y apararos:
14.2.1 Espectrofotómetro o colorimetro capaz de efectuar lecturas a 400
“In.
14.2.2 Baño de arene.
14.3 Reacfivos:
14.3.1 Acido clorhidrico 36% d=l.lS glml.
14.3.2 Acido nftrico 70% d= 1.42 glml.
14.3.3 Solución de molibdato amónico: Disolver 20 gramos de molibdafo
ambnico tetrahidratado (NH,),Mo,0,.4H,O en 200 mililitros de agua caliente.
 14.3.4 Solución de metavanadato ambnico: Disolver 1 gramo de meta-
davanato ambnico (NH,)VO, en 300 mililitros de Ácido nkrico. (14.3.2).

14.3.5 Solucibn de metamolibdenovansdato: Verter lentamente Y agi-

tando la solución de molidbato amónico (14.3.3) sobre la solucibn de mata-
vanadato am6nico (14.3.4) y enrasar con agua destilada. a 1 litro.

14.3.6 Acido sulfúrico concentrado 36 % d ’ 1.94 glml.

14.3.7 Solucibn patr6n de fosfato: Disolver 4.3885 gramos de dihidr6geno

fosfato de potasio KH,PO, (previamente desecado dos horas a 105” C) en sgua
destilada. añadir 2 mililitros de kido sulfúrico (14.36) y diluir e 1 litro (1
mililitro contiene un miligramo de P.)

14.4 Procedimiento:
14.4.1 Preparación de la muestra:

Disolver las cenizas obtenidas en el mbtodo número 13 en 5 mililitros de

HCI (14.3.1) y 2 mililitros de HNO, (14.3.2). Hervir suavemente durante quince
minutos en bario de arena. Llevar a un metrez de 50 mililitros y enrasa con
agua destilada.

Realizar paralelamente un ensayo en blanco.

14.4.2 Desarrollo del color: Tomar 5 mililitros de Ie$ soluciones obtenidas
en (14.4.1) en un matraz aforado de 50 mililitros. Llevar hasta 10 mililitros con
agua destilada. Añadir 10 mililitros con agua destilada. Añadir 10 mililitros del
reactivo (14.3.5) y enrasa a 50 mililitros con sgua destilada. Despu6s de
treinta minutos. leer las absorbancias e 400 nm.

14.4.3 Curva Patrón: Diluir 10 mililitros de le soluci6n patrón (14.3.7) en

250 mililitros de agua destilada. (1 mililitro de este solución de 40 pg de P).
Tomar 0. 2. 3. 4, 5 y 10 mililitros de la soluci6n de 40 I<g/mililitro (con un
contenido de 0, 80. 120. 160. 200 y 400 pg). Continuar como en (14.4.2) Y
trazar la curve de calibrado.
14.5 Cálculos.-El contenido en P total expresado en miligramos de
Pt100 mililitros de muestra. se obtiene comparando les sbsorbsncias de la
muestra con la curva patrtm, teniendo en cuenta el blanco y el factor de
dilucibn.

mg de PI100 ml=;

Siendo:
A=l,g P leidos en la curva patrbn.
V=Volumen de la muestre en mililitros.
14.6 Referencias.-Método número 50. Federation International des Pro-
ducteurs de Jus de Fruits. Año 1983.

15. POTASIO

15.1 Principio.-El potasiosedetermina porespectrofotometrfsdeebsorci6n

atbmica o fotometria de llama, previa adicibn de cloruro de litio, para eviwtr le
ionizaci6n parcial de los metales en la llama.
15.2 Material y aparatos.
15.2.1 Espectrofómetro de absorción atómica o fotómetro de llame.

15.2.2 Material de uso normal en laboratorio.

15.3 Reactivos:
15.3.1 Solución de potasio de 1.000 miligramos/litro: Disolver 1.907
gramos de cloruro de potasio (KCI). en un litro de agua destilada.
 15.3.2 Solucibn de cloruro de litio: Disolver 37.3 gramos de cloruro de
litio (LiCI) en 1 OO mililitros de agua destilada.

15.3.3 Soluciones de potasio de 0. 1, 2. 3, 5. 7 miligramos/litro. prepara-

das a partir de (15.3.1). previa adicibn de la cantidad necesaria de cloruro de
litio. para que el litio se encuentre en una proporci6n de aproximadamente
2.000 miligramos/litros.
15.3.4 Procedimiento.-Centrifugar un volumen adecuado de muestra.
Tomar 1 ml del sobrenadante y efectuar la dilucibn conveniente con agua
destilada (previa adición de la cantidad necesaria de cloruro de litio para que el
litio se encuentre en una proporcibn de aproximadamente 2.000 miligramo/li-
tro). Leer en absorción atómica o fotometria de llama a 766.770 milimetros
frente a las soluciones de referencia.
15.5 C¿i/cu/os.-El contenido de potasio se calcula a partir del valor
obtenido. por comparacibn con la curva patrbn. teniendo en cuenta la dilucibn
efectuada. Los resultados se expresan en miligramos de potasio/100 mililitros
de muestra.

15.6.1 Puede utilizarse una soluci6n de 40 gramosllitro de cloruro de

cesio en lugar de cloruro de litio. siendo en este caso la concentracibn
adecuada de cloruro de cesio en las disoluciones de las muestras y patrones
entre 0.1-0.4 por 100.

15.7 Referencias:
15.7.1 Federadon International des Producteurs de Jus de Fruits. Metodo
número 33. Atio 1984.
15.7.2 MBthods Association of Official Analytical Chemists. Ed. 1984.

16. ACIDO SORBICO

16.1 P,inEipio.-Separación. identificaci6n y cuantificación del kido s6rbi-

co por cromatografia de liquidos de alta eficacia detectkadolo en el ultravioleta
a 230 nm.
16.2 Material y aparatos:

16.2.1 Equipos de filtracibn de muestra y disolventes. para eliminar ~art-

CUIâS superiores a 0.5 flm.
16.2.2 Crom&ografo de lfquidos equipado con detector de ultraviolela de
longitud de onda variable y registrador.
16.2.3 Columna C-18 de 250 x 4.6 mm de 10 ,rm o similar.

16.2.4 Baim de ultrasonido.

16.3 Reactivos:
16.3.1 Solución patrón de Ácido sórbico en metano1 de 50 miligramos/li-
tro.
16.32 Solución tampbn de fosfatos de pH = 6.6. Disolver 2.5 gramos de
hidrbgeno fosfato de potasio trihidrato (K,H P0,.3H,Q) y 2.5 gramos de
hidrógeno fosfato de potasio (KH, PO.). en un litro de agua destilada. Filtrar
esta soluci6n con (16.2.1).
16.3.3 Metano1 para HPLC.
16.4. Procedimiento:
16.4.1 Condiciones cromatográficas orientativas:

Fase m6vil: Metanol-tampbn fosfato 10:s (VN).

Flujo: 1 mililitrolminulo.
 16.4.2 Calibrado: Inyectar en el cromat6grafo entre 10 y 20 111 de la
solucibn patr6n (16.3.1). y calcular el factor respuesta.

Factor de respuesta (F) =;

Siendo:
Co= Concentracibn. en miligramos/litros, de 6cido sórbico.

Ap=Area del pico en el cromatograma de la soluci6n patrbn.

16.4.3 Determinacibn: Tomar 10 mililitros de zumo en un matraz de 50
mililitros y enrasar con metanol. Filtrar e inyectar de 10 a 20 ~1 en el cromató-
graf0.
16.5 cA/co/os:

16.5.1 El contenido en 6cido sórbico expresado en miligramos/litros (sin

decimales). se obtendra mediante la siguiente fbrmula:
Acido sórbico (mg/l) = F x A, x f

Siendo:
F= Factor de respuesta.
A,=Area del pico del ácido sbrbico en la muestra.

f = Factor de dilucibn de la muestra.

16.6 Observaciones.-La sensibilidad puede aumentarse efectuando lec-
turas a 250 nm.
16.7 Referencias.-T. Stijve and Hischenhuber. Deutsche Lebensmittel-
Rundschaul80, JahrglHeft 311984.

17. ACIDO BENZOICO

17.1 Principio.-Separacibn. identificacibn y cuantificación del kido

benzoico por cromatografta de liquidos de alta eficacia, detectandolo en el
ultravioleta a 230 nm.

17.2 Material y ~para,os:

17.2.1 Equipos de filtraci6n de muestra y disolventes. para eliminar parti-
culas superiores a 0.5 PIll.
17.2.2 Cromatógrafo de liquidos equipado con detector de ultravioleta de
longitud de onda variable y registrador.

17.2.3 Columna C 18 de 250 x 4.6 milimetros de 10 pm o similar.

17.2.4 Baño de ultrasonido.
17.3 Reactivos:

17.3.1 Soluci6n patr6n de 6cido benzoico en metanol de 50 miligramos/-

litro

17.3.2 Soluci6n tampbn de fosfato de pH = 6.6. Disolver 2.5 gramos de

hidrógeno fosfato de potasio trihidrato (K,HP0,.3H,O) y 2.5 g de hidrbgeno
fosfato de potasio (KH,PO.) en un litro de agua. Filtrar esta solucibn con
17.2.1.
17.3.3 Metano1 para HPLC.
17.4 Procedimiento:
17.4.1 Condiciones cromatogr$ficss orientativas:

Fase móvil: Metanol-tamp6n fosfato lo:90 (VW).

Flujo: 1 mililitrolminuto.
 17.4.2 Calibrado: Inyectar en el cromatógrafo entre 10 y 20 fil de la
solución patrbn 17.3.1 y calcular el factor de respuesta.

Factor de respuesta (F) =g

Siendo:
Co=Concentraci6n. en miligramosflim. de kido benzoico.
Ap=Area del pico en el crometograma de la solución patrón.
17.4.3 Determinación: Tomar 10 mililitros de zumo en un matraz de 50
mililitros y enrasar con metanol. Filtrar e inyectar de 10 a 20 1’1 en el cromat6.
grafo.
17.5 Cálculos:

17.5.1 El contenido en Ácido benzoico expresado en miligramos/litro (sin

decimales) se obtendrá mediante la siguiente formula:

Acido benzoico (miligramos/litro) = F x A, x f

Siendo:
F = Factor de respuesta.

4 = Area del pico del kido benzoico en la muestre.

f = Factor de dilución de la muestre.
17.6 Observac;ones.-Lasensibilidadpuedeaumentarseefectuandolecturas
a 217 nm.
17,7Referenc;as.-T. Stijve and C. Hischenhuber. Deutsche Lebensmittel-
RudschaulgO. Jahrg/Heft 311994.

18.(a). ANHIDRIDO SULFUROSO

(MBtodo Paul)

lS(a).l PNncipio.-Liberaci6n del sulfuroso libre y combinado por acidifi-

caci6n y posterior calentamienfo y oxidaci6n por borboteo en agua oxigenada
y valoraci6n con sosa del ácido sulfúrico formado.
1 E.(a).2 Material y apamos:
l&(a)2.1 Aparafo de Lieb-Zacherl como se indica en la figura 18 (a).
lg.(a).2.2 Mechero de alcohol o similar.
l&(a).2.3 Tubo borboteador provisto de bola hueca en un extremo co”
unos 20 orificios de 0.2 milimetros de diámetro alrededor del circulo m8ximo
horizontal.
18.(a).2.4 Frasco con agua y tapbn atravesado por el tubo que comunica
con el borboteador para hacer vacio. y otro tubo sumergido en el agua para
acusar le intensidad del vacio por la depresi6n de la columna de agua en el
interior del tubo. depresión que debe mantenerse entre 25-35 centlmetros.

la.(a).3 Reactivos:

lf%(a).3.1 Acido fosfbrico al 25 por 100 WV).

18 (a).3.2 Agua oxigenada de 0.3 por 100.

18 (a).3.3 Indicador: 0.1 gramos de rojo de metilo y 0.05 gramos de azul
de metileno en 100 mililitros de alcohol al 50 por 100.

18 (a).3.4 Solución de hidr6xido de sodio 0.01 N.

 Se toman 1 OO mililitros de muestra en el matraz del aparato Lieb-Zacherl. Se
añaden 20 mililitros de ácido fosfórico (18(a).Xl) con el matraz ya unido al
aparato. En el matraz receptor se ponen 2 6 3 mililitros de agua oxigenada
(18(a).3.2). Se neutraliza exactamente con hidróxido de sodio (18(a).3.4)
después de haber añadido dos gotas de la mezcla de indicador y se conecta al
aparato.

Se aspira el aire a través del aparato con ebullición suave de la muestra

durante 15 minutos. El SO, liberado se recoge en el matraz receptor transfor-
mándose en SO,H, por la acción del agua oxigenada.

Este ácido sulfúrico se valora con solución de hidróxido de sodio (18

(a).3.4).

18 (a).5 Cálculos:

320 V,
Miligramos SOJlitro = -
V2

Siendo.

V,= Volumen, en mililitros, de NaOH N/lOO.

V,= Volumen, en mililitros, de muestra utilizada.

18 (a) .6 Observaciones:
a) El calentamiento de la solución de la muestra se hace mediante un
mechero de alcohol con llama de 4-5 centímetros de altura, situada de forma
que el matraz sblo sea tocado por el extremo de la llama.
b) El vacío producido por el regulador de presión deberá estar comprendi-
do entre 25 y 35 centímetros.
c)El condensador de reflujo deberá estar provisto de suficiente agua fría.
d) La disolución de hidróxido de sodio utilizada en la valoración debe
preparase diariamente.

Fig. 18(a).-Las dimensiones están indicadas en mm. Los diámetros interiores de los
cuatro tubos concéntricos que constituyen el refrigerante son 45, 34, 27 y 10 mm.
 e) Este méiodo es aplicable para contenidos, en anhídrido sulfuroso a
partir de 10 miligramos/litro.
18(a).7 Referencias.-Método número 7. Federation International des
Producteurs de Jus de Fruits. Año 1968.

ORDEN de 29 de enero de 1988 del Ministerio de Relaciones con las Cortes y de la

Secretaría del Gobierno por la que se aprueban los métodos oficiales de análisis de
zumos de frutas y otros vegetales y sus derivados. («BOE» núm. 31. de 5 de febrero de
1988.)

0 CORRECION DE ERRORES («BOE») núm. 95, de 20 de abril de 1988).