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INGENIERÍA BIOQUÍMICA
INFORME 1
TEMA:
“AISLAMIENTO DE ENZIMAS”
1. OBJETIVOS:
General:
Específicos:
2. CÁLCULOS Y RESULTADOS
Tabla N°1 “Datos obtenidos de todos los grupos –Medición de Abs – Cuantificación de la actividad
enzimática”
N°Grupo 1 2 3
Tiempos(min) Abs (nm) Abs(nm) Abs(nm)
1' 0,178 0,191 0,195
2' 0,339 0,372 0,315
3' 0,489 0,501 0,499
4' 0,576 0,708 0,579
5' 0,611 0,768 0,729
1.200
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
0 0.5 1 1.5 2
[Glucosa] (mg/ml)
Donde:
y= Absorbancia
x= [Glucosa]
𝐴𝑏𝑠 + 0,0146
[𝐺𝑙𝑐] =
0,5671
.
0,178 + 0,0146
[𝐺𝑙𝑐] =
0,5671
[Glc]=0,339 mg/ml //
1.600
1.000
0.800
0.600
0.400
0.200
0.000
0 1 2 3 4 5 6
Tiempos(min)
1.200
y = 0.2349x + 0.1382 Grupo 1
1.000 R² = 0.9899
Grupo 2
0.800
y = 0.1945x + 0.2157 Grupo 3
0.600
R² = 0.9433 Linear (Grupo 1)
0.400
Linear (Grupo 2)
0.200
Linear (Grupo 3)
0.000
0 1 2 3 4 5 6
Tiempo (min)
Donde:
y=[Glucosa]
x= Tiempo
m=AE(Actividad Enzimática) = 0,2627mg/ml (min)
[𝐺𝑙𝑐] = 𝑚[𝑡𝑖𝑒𝑚𝑝𝑜] + 𝑏
𝑢𝑚𝑜𝑙 𝑠𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎
𝑨𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 = 14,5944
𝑚𝑙(𝑚𝑖𝑛)
𝑢𝑚𝑜𝑙 𝑠𝑎𝑐𝑎𝑟𝑜𝑠𝑎 𝑼𝑰
𝑨𝒄𝒕𝒊𝒗𝒊𝒅𝒂𝒅 = 14,594 = 𝟏𝟒, 𝟓𝟗𝟒𝟒
𝑚𝑙(𝑚𝑖𝑛) 𝒎𝒍
𝑈𝐼 27,6𝑚𝑙
𝑹𝒆𝒏𝒅𝒊𝒎𝒊𝒆𝒏𝒕𝒐 = 14,5944 ∗
𝑚𝑙 𝑒𝑛𝑧𝑖𝑚𝑎 14𝑔
𝑼𝑰
𝑹𝒆𝒏𝒅𝒊𝒎𝒊𝒆𝒏𝒕𝒐 = 𝟐𝟖, 𝟕𝟕𝟏𝟖
𝒈 𝒍𝒆𝒗𝒂𝒅𝒖𝒓𝒂
Tabla N° 4 “Datos de actividad enzimática de la invertasa de todos los grupos, volumen del
sobrenadante y rendimiento obtenido de la invertasa”
CÁLCULO DEMOSTRATIVO
Conc-Std
Estándar Pepsina Absorbancia
P. total (g)
Pepsina (g) (nm)
mg/(mL)
0 0 0 0
0,0508 0,253 3,51 0,111
0,0957 0,2485 6,74 0,215
0,1497 0,2509 10,44 0,333
0,2001 0,2518 13,91 0,434
0,24 0,2496 16,83 0,514
0.6
0.5
y = 0,0307x + 0,0043
R² = 0,9992
Absorbancia (nm)
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 2 4 6 8 10 12 14 16 18
[Pepsina] (mg/ml)
Figura N°4. “Gráfica Abs. Vs [Pepsina] estándar”
Donde:
Y: Absorbancia
X: Concentración de proteína
𝑦 − 0,0043
𝒙=
0,0307
0,58 − 0,0043
𝒙=
0,0307
𝑚𝑔
𝒙 = 18,7524 𝑚𝑙
𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 //
Actividad específica
𝒎𝒈
N° de Grupo Concentración ( 𝒎𝒍 ) del extracto
(𝑼𝑰⁄𝒎𝒈)
Grupo 1 𝟏𝟖, 𝟕𝟓𝟐𝟒 𝟎, 𝟓𝟕𝟔𝟕
Grupo 2 18,166 0,798
Grupo 3 17,938 0,7275
3. DISCUSIÓN
4. CONCLUSIONES
Se aisló la enzima invertasa mediante un método simple como el de agitación el cual rompió la pared
celular y la invertasa pudo ser liberada a su vez se pudo comparar su actividad en los diferentes grupos.
La cual vario significativamente entre algunos grupos.
Se realizo la prueba de Biuret para detectar la presencia de la proteína en S. cerevisiae obteniendo una
concentración de 0,8827 UI/mg. A pesar de que se cumplió con el objetivo el valor obtenido fue el
más bajo entre todos los grupos esto pudo ocasionarse por errores humanos al momento de realizar el
proceso para el aislamiento de la enzima o a factores de almacenamiento y manejo de los extractos en
el transcurso de la semana de práctica.
5. RECOMENDACIONES
Se recomienda tomar muy en cuenta los datos obtenidos de la absorbancia ya que si estos fueran
datos bajos se debería someter a mayor cantidad de muestra de incubación y al ser un valor muy alto
se debe diluir el extracto enzimático convenientemente.
Se recomienda utilizar material totalmente limpio, y en caso de medir la actividad enzimática tener
en cuenta los tiempos y tratar de manejarlos en forma exacta para evitar posibles errores a futuro.
6. BIBLIOGRAFÍA
Franco.L (2007) “ENZIMAS: QUÉ SON Y PARA QUE SIRVEN”. Rev.R.Acad.Cienc.Exact.Fís.Nat. (Esp). Vol.
101, Nº. 2, pp 399-417, 2007. VIII Programa de Promoción de la Cultura Científica y Tecnológica.
Creative Commons Attribution-Share. “ENZIMAS” Obtenido en:
https://www.uaz.edu.mx/histo/Biologia/Wiki/Enzima.pdf el 14/10/2018
Bradford MM (1976) A rapid and sensitive method for the quantitation of protein utilizing the principle
of protein-dye binding. Analytical Biochemistry 72: 248- 254.