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INFORME DE LABORATORIO DE BIOQUIMICA #8

(PRODUCCIÓN DE PIRUVATO DURANTE LA FERMENTACIÓN)

UNIVERSIDAD DE CORDOBA
FACULTAD CIENCIAS AGRICOLAS Y DESARROLLO RURAL
PROGRAMA DE INGENIERIA AGRNOMICA
INTRODUCCIÓN

La glucolisis es el proceso mediante el cual la glucosa se degrada al etanol y CO2 y ácido


láctico dependiente del organismo que lo efectúa, como siendo en el primer caso las levaduras
las responsables.

Ambas rutas de fermentación son similares hasta la formación del piruvato, manteniendo
idénticas las etapas de conservación de energía que conduce a la formación de ATP. La
producción de piruvato durante la fermentación se realiza por una serie de reacción
enzimática que involucran algunos intermediarios. Este proceso se conoce como
fermentación.

TEORIA RELACIONADA

La producción de piruvato durante la fermentación se realiza por una serie de reacciones


enzimáticas que involucran algunos intermediarios. Este proceso se conoce como
fermentación o glucolisis. La reacción total podría considerarse como la transferencia de dos
átomos de hidrogeno de la glucosa al NAD+. Los metabolitos de piruvato y acetaldehído se
encuentran normalmente en bajas concentraciones, por lo tanto para comprobar su existencia
es necesario impedir su transformación.

La piruvato descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de manera que


el piruvato se acumula y su presencia se demuestra con la 2,4-dinitrofenilhidracina.1

El piruvato es el anión del ácido pirúvico. Es una pequeña molécula, de tan solo 3 carbonos,
que resulta ser el eje central del metabolismo celular de todos los seres vivos. Químicamente
hablando el ácido pirúvico se denomina ácido oxopropanoico o ácido alfa- cetopropanoico.
Consta de 4 hidrógenos, 3 oxígenos y 3 carbonos. Su fórmula química es H3C-CO-COOH.
Cuando se libera un catión hidrógeno del ácido pirúvico se produce el piruvato H3C-CO-
COO-.

El piruvato es el producto final de la degradación de la glucosa en la glucolisis y es el


sustrato del ciclo de Krebs, principal ruta de la formación de energía bioquímica de las
células, tanto en forma de ATP como de poder reductor NADH. Puedes leer más sobre la
glucolisis, una vía universal a todos los seres vivos y que produce 2 piruvatos, y sobre el
ciclo de Krebs. Además el piruvato puede ser sustrato para enzimas que cataolizan la
formación de aminoácidos de alanina.

Existen varios enzimas que interaccionan con el piruvato. Entre ellos las enzimas
piruvato deshidrogenasas que deshacen el piruvato con liberación de energía. La piruvato
deshidrogenasa dependiente de NAD+ propia de las mitocondrias de eucariotas cataboliza la
descarboxilación oxidativa del ácido pirúvico. En esta reacción se pierde de uno de sus tres
carbonos, concretamente el COOH. El CO2 será eliminado como gas y el hidrogeno se unirá
al NAD+ almacenándose así poder reductor. La molécula resultante H3C-CO- es un grupo
acetilo y se unirá a la coenzima A, cofactor importante que enlaza el metabolismo de los
glúcidos y el ciclo de Krebs.
A partir del piruvato también se puede formar oxalacetato. Mediante la adición de un carbono
por la piruvato carboxilasa, proveniente de una molécula de dióxido de carbono. El
oxalacetato sustrato del ciclo de Krebs (conjuntamente con el acetil-CoA). Además de ser
un sustrato para la formación de glucógeno (gluconeogénesis), el ciclo de la urea, la
degradación y la formación de proteínas.
En la actualidad existen medios para sintetizar ácido pirúvico en el laboratorio. Si se calienta
una disolución de ácido tartárico y bisulfato de potasio puede obtenerse el ácido. Entre sus
características organolépticas destacar que es incoloro y desprende el mismo olor que el ácido
acético, puesto que la conversión entre uno y otro es muy sencilla, por la pérdida de un
dióxido de carbono. Es soluble tanto en agua como en alcohol. Para conseguir la conversión
de este ácido monoprótico para conseguir el piruvato basta con virar el pH del medio.

OBJETIVOS

 Determinar la presencia de piruvato mediante la fermentación de levadura.


 Observar la producción de piruvato, mediante cambios de color.

MATERIALES Y REACTIVOS

 Tubos de ensayo (4)


 Tubos de centrífuga (2)
 Beaker de 400mL
 Pipetas de 5mL (3)
 Balanza
 Calentador
 Pinzas para tubo de ensayo (2)
 Termómetro
 Espátula
 Solución de glucosa 10%
 Fosfato de sodio di básico 0,5 M
 Fosfato de potasio monobásico 0,5 M
 Ácido tricloroacetico 10%
 2,4-dinitrofenilhidracina saturado en HCl 2M
 NaOH 10%
 Levadura

PROCEDIMIENTO Y RESULTADOS.

En dos tubos de ensayo A y B se añadió respectivamente 2.5 ml de solución de glucosa al


10% al tubo A se le agrego 2.5 ml de suspensión de levadura al 10% en solución de fosfato
de sodio di básico 0,5m; al tubo B se le agrego 2.5 ml de suspensión de levadura al 10% P/V
en solución de fosfato de potasio monobásico 0,5m.
Se colocaron los dos tubos de ensayo en baño de maría durante 45 minutos, luego se agregó
a cada tubo 2ml de A.T.A al 10% P/V, se mezcló vigorosamente y se llevó a centrifugar
durante 15 minutos a 2500rpm.

Después del centrifugado se formó un sobrenadante, a 1 ml sobrenadante se agregó 0.5m de


solución saturada de 2,4 dinifenilhidracina en HCl 2M, mezclamos fuertemente luego se
tomó 0.5 ml de esta mezcla y se agregó 1ml de NaOH al 10% y 0.5ml de agua, se formó una
coloración rojiza (rojo ladrillo), lo cual nos permitió observar la presencia de ácido pirúvico.

Al cambiar el sobrenadante y al realizar esta prueba con glucosa el tubo se tornó de color
transparente, no hubo reacción.
Al comparar estas dos reacciones podemos decir que en la levadura hay presencia de ácido
pirúvico en cambio con la glucosa no se puede observar la presencia de esta.

Análisis de resultados.
El proceso que se llevó a cabo en esta práctica se llama fermentación, este se efectúa
partiendo del glucolisis que consiste en una serie de reacciones en la que se involucran varios
intermediarios. La reacción en la que se involucran varios intermedios. La reaccion completa
de la molécula de glucosa produce dos moléculas de pirúvico, dos moléculas de ATP y dos
moléculas de NADH.

La glucolisis proporciona una cantidad de pirúvico que puede tomar dos proporciona una
cantidad de pirúvico que puede tomar dos notas metabólicas anaerobias, eso depende del tipo
de células que intervengan.

Las observaciones anteriores se deben a que los intermedios metabólicos como el pirúvico
se encuentran presentes en bajas concentraciones por lo tanto podemos demostrar su
existencia como intermediadoras en el proceso metabólico es necesario que impida que sean
transformados en otros compuestos. El procedimiento se realiza por medio del bloque de la
enzima que cataliza la conversión del compuesto por medio de inhibidores como el pH.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. ¿Cuál es la función del ácido tricloracetico?

R/ El ácido tricloracetico es utilizado en bioquímica por su propiedad de precipitar


macromoléculas, como proteínas, acido desoxirribonucleico (ADN) y ácido ribonucleico
(ARN), además la sal de sodio del ATC es utilizada como un herbicida.

2. ¿Qué conclusiones se podrían sacar de los resultados de las muestras de A y B?

R/ Se puede concluir que se pueda observar la presencia de piruvato en la solución


sobrenadante resultante de la centrifugación de las dos mezclas, al compáralo con la fase de
glucosa, no se observan presencia de este acido, ya que no se torna color rojo la mezcla.

3. ¿Cuál es la reacción de la 2,4-dinitrofenilhidracina con el piruvato?

R/. Los metabolitos de piruvato y acetaldehído se encuentran presentes normalmente en muy


bajas concentraciones, por lo tanto para demostrar su existencia como intermediario en el
camino metabólico, es necesario impedir que sean transformados en otros compuestos. Este
proceso se usa mucho cuando se investigan caminos metabólicos y se hace bloqueando la
enzima que cataliza la conversión del compuesto, que se está investigando mediante
inhibidores. La pirúvico-descarboxilasa no es activa en soluciones ligeramente alcalinas, de
manera que el piruvato se acumula y su presencia puede demostrarse por la reacción con nitro
prusiato de sodio o 2,4-dinitrofenilhidrocina.

4. ¿Qué función cumple el NAD+ en la producción del piruvato?

R/ La enzima glicerol-3-fosfato deshidrogenasa (NAD+) cataliza la reacción de oxidación


del glicerol-3-fosfato a dihidroxiacetona fosfato utilizando NAD+ como aceptor de
electrones.

Esta enzima también cataliza las reacción de oxidación y reducción del propano-1,2-diol y
del sulfato de glicerona respectivamente, pero con mucho menos afinidad. Durante la
glucolisis se genera NAD+ en el citosol en la oxidación del gliceraldehido-3-fosfato y se
debe general mas NAD+ para que la glucolisi continúe.

5. ¿Consulte la vía de la glicolisis y determine los pasos irreversibles de la vía?


R/ La glucolisis es la vía metabólica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y así obtener
energía para la célula. Consiste en la ruta en 10 reacción enzimática que convierte la glucosa
en dos moléculas de piruvato, el cual es capaz de seguir otras vías metabólicas y así continuar
entrando energía. Los pasos irreversibles en esta vía son

3r paso: fosfofructoquimasa
10 pasos: piruvato quinasa

CONCLUSIÓN

La glucolisis es la vía citosolica de todas las células de mamíferos para el metabolismo de


la glucosa o del (glucógeno) el piruvato o lacteado, puede funcionar de manera anaeróbica
al regenerar NAD+ oxida que se requiere en la reacción del gliceraldehido 3 fosfatos
deshidrogenosa al reducir piruvato hacia lactado. La glucolisis está regulada por tres
enzimas que catalizan reacciones no en equilibrio (irreversibles)