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TRABAJO DE BIOLOGIA CELULAR Y

MOLECULAR-LABORATORIO

INTEGRANTES:

 VANESSA DE LEON ARIAS


 LAURA PATERNINA ROMERO
 VALENTINA VIDES MEDINA
 ADRY MERCADO DE HOYOS

PROFESOR:
 JHONY JOSE PAYARES RAMOS

ENFERMERIA I SEMESTRE
UNIVERSIDAD DEL SINU-ELIAS BECHARA
ZAINUM
INTRODUCCION

La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los

iones salinos son atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su

disolución y posterior extracción de la célula. Se empieza por lisar (romper) las

células mediante un detergente, vaciándose su contenido molecular en una

disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento,, en tampón

contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos,

proteínas y otras sustancias en menor proporción, las proteínas asociadas al ADN,

de gran longitud, se habrán fraccionado en cadenas pequeñas y separadas de el

por acción del detergente. Solo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de

tampón y detergente, para lo cual se utiliza alcohol isoamilico

Diferencias: En las células humanas el material genético está organizado en 23


pares de cromosomas, las bacterias sólo poseen uno. El DNA bacteriano es
circular, el de los humanos lineales. El número de genes contenidos en el DNA
humano es muy grande a diferencia del bacteriano. Las bacterias pueden adquirir
nuevos genes a través de plásmidos, los humanos no. El DNA humano sufre
pocas mutaciones gracias a las enzimas de reparación, el de las bacterias sufre
constantes mutaciones ya que carecen de dichas enzimas.

Semejanzas: Ambos están constituidos por desoxirribonucleótidos (A, T, C, G), las


bases se aparean de la misma forma A-T, C-G. Los aminoácidos están codificados
por el mismo triplete (un triplete es una serie de tres bases que dictan un
aminoácido específico, p. ej. AUG = Metionina).
MARCO TEORICO

El ADN
Hace Más de un siglo en (1869), Friedrich Miescher aisló el núcleo de las
células de pus de una nueva clase de compuesto químico al que denominó
“núcleina“. Estas sustancias llamadas posteriormente ácidos nucleicos,
eran de naturaleza ácida y singularmente ricas en fósforo y contenían
carbono, oxígeno, nitrógeno y hidrógeno. Análisis posteriores revelaron que
existen dos tipos de ácidos nucleicos: ácido desoxirribonucleico o DNA,
presente en el núcleo y el citoplasma P. A. Levente demostró que el DNA
se compone de cuatro bases nitrogenadas dos purinas (Adenina y guanina)
y dos pirimidinas (citosina y tiamina), un azúcar de cinco carbonos,
desoxirribosa y grupos fosfato. Levente demostró que la base purina o
pirimidinas está ligada al azúcar por un enlace glucosidico y el azúcar está
ligado al fosfato por un enlace Ester. La combinación de base-azúcar-
fosfato constituye la unidad básica llamada nucleótido del ácido nucleico.
Hay cuatro clases de nucleótidos que corresponden a las cuatro clases de
bases nitrogenadas: adenina, guanina, citosina, y timina Levente afirmó
incorrectamente que todos los DNA, de cualquier origen se componen de
cantidades iguales de estos cuatro nucleótidos dichas moléculas simples
no podían proporcionar la base para la especificidad biológica del gen.

ADN BACTERIANO El cromosoma bacteriano está formado por una sola


molécula de ADN bicentenario circular, asociada a proteínas no históricas.
No está rodeado por ninguna membrana nuclear, por lo que a la región en
la que se sitúa se le llama nucleído. Suele estar unido a los mesosomas.

El ADN bacteriano tiene como función mantener y conservar la información


genética y dirigir el funcionamiento de todo el metabolismo bacteriano.

Como particularidad, muchas bacterias presentan plásmidos, unos anillos


pequeños de ADN, que son independientes del cromosoma y que pueden
duplicarse. Destacan los siguientes:

 Plásmido o factor F: permite que la célula tenga la capacidad


de conjugación.
 Plásmidos R: sus genes codifican enzimas que
proporcionan resistencia frente a los antibióticos. Estos genes pasan de
las células madres a las hijas, pero también pueden ser transferidos al
cromosoma bacteriano, a los virus y a otras bacterias. Esta es la causa de
que enfermedades que estaban controladas, como la tuberculosis, pueda
resurgir.
OBJETIVOS

OBJETIVO GENEREAL

 Identificar la estructura del ADN mediante la extracción de una muestra


vegetal

OBJETIVOS ESPECIFICOS

 Aprender a usar una técnica sencilla para extraer ADN de tejidos vegetales

 Confirmar la estructura fibrilar a nivel macroscópico y relacionarla con la


geometría presente a nivel microscópico
MATERIALES

 Bata
 Guantes
 Muestra vegetal(papaya licuada)
 120mL agua destilada
 2 gr de sal de mesa
 1,5 gr bicarbonato de sodio
 5 mL de detergente liquido o champú
 2 mL etanol
 10 cubos de hielo
 1 colador fino
 1 vaso precipitado de 400 mL
 3 tubos de ensayo
 1 gradilla
 1 varilla de vidrio
 1 botella de agua mineral vacía
PROCEDIMIENTO

1. Se preparó el tampón con los siguientes ingredientes y se mantuvo


en la nevera o en un baño de hielo triturado
 120 mL de agua destilada o mineral
 1,5 de bicarbonato sódico
 1,5 sal de mesa
 5 mL de detergente liquido o champú
2. Se cortó la muestra vegetal en cuadritos
3. Se trituro la muestra con un poco de agua destilada en una
licuadora a impulsos de 10 segundos, así se rompieron las células y
las otras quedaron expuestas a la acción de detergente
4. Se mezcló en un recipiente limpio 5 mL del triturado celular con 10
mL del tampón frio y agitar vigorosamente durante al menos 2
minutos, se separó después los restos vegetales más grandes del
caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible,
se centrifugo a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el
sobrenadante
5. Se retiró 5 mL de caldo molecular a un tubo de ensayo y se añadió
con una pipeta 5 mL de alcohol etanol enfriado a 0°C, se dejó
escurrir lentamente el alcohol por la cara interna del recipiente,
teniendo este inclinado. El alcohol quedo flotando sobre el tampón
6. Se observó la separación del ADN con el aspecto de un copo de
algodón mojado
DISCUSIÓN DE RESULTADOS

Luego de haber realizado el tampón mezclamos en un recipiente limpio 5 ml de


triturado de papaya y 10 ml de tampón frío, lo llevamos a la centrífuga por 5 min;
pasado ese tiempo, con una pipeta retiramos 5 ml de caldo molecular y vertimos
en un tubo de ensayo, añadiendo suavemente 10 ml de alcohol etanol, por la cara
interna del tubo de ensayo.

RESULTADOS
Pasado un tiempo, se observó que entre el alcohol etanol y la solución de tampón,
se formaron aglutinaciones, debido a que con la mezcla que se realizó
anteriormente (tampón), se rompieron las membranas celulares del tejido vegetal
gracias al detergente, favoreciendo la destrucción de los fosfolípidos, las cuales
como sabemos constituyen la membrana celular de dicho tejido; además de esto,
el cloruro de sodio ayudó a que las moléculas permanecieran unidas, facilitando la
extracción posterior del ADN; además el Bicarbonato de Sodio, ayudó a mantener
el PH, evitando la desintegración de las moléculas de ADN, con aspecto de un
copo de algodón mojado. Más tarde se le agregó azul de metileno, con el fin de
demostrar la calidad del ADN. En esta práctica no se pudo observar la doble
hélice del ADN, de hecho, sería muy difícil observarlo con un microscopio.
CUESTIONARIO

1. ¿Cuáles son las propiedades del ADN?

2. ¿Qué diferencias y semejanzas existen entre el material genético


bacteriano y el de una célula humana?

3. ¿Qué proceso de extracción es el más simple?

4. ¿Cuál es la fuente de ADN en la sangre?

5. Cuál es la función de los siguiente compuestos en el proceso de extracción:


cloruro de sodio y etanol

6. ¿Puede observar la doble hélice del ADN extraído? ¿Por qué?


RESPUESTAS

1. PROPIEDADES DEL ADN


 En las células eucariotas, el DNA está presente en el núcleo,
mitocondria y cloroplasto
 En procariotas, el DNA se encuentra en el citoplasma celular.
 La molécula de DNA es el material soporte de los caracteres
hereditarios de una especie, se trasmite a la progente.
 resistencia a la alteración de las bases, duplicación del
material genético y transcripción de la información genética.
 Insoluble en soluciones diluidas de NaCl
 Soluble en soluciones concentradas de NaCl
 Insoluble en alcoholes
 Puede ser disociado de la proteína por tratamiento con un
detergente o un fenol.

2. SEMEJANZAS: El ADN bacteriano posee una composición similar a la del


humano, desde el punto de vista que contiene también un ADN formado por
desoxirribosa y nucleótidos, distribuidos secuencialmente, y formando una
doble cadena que contiene la información necesaria para su estructura y
funcionamiento. Cabe destacar que el mecanismo de replicación del ADN
bacteriano es semiconservativo.

DIFERENCIAS: Encontramos que mientras la célula humana contiene su


ADN dentro del núcleo, las bacterias carecen de éste, y su ADN circula
libremente en su citoplasma; el ser humano posee 23 pares de
cromosomas, mientras que por lo general las bacterias poseen 1 sólo
cromosoma, en forma circular; el ADN humano posee cerca de 3000 mega
bases, mientras que el bacteriano posee entre 5 a 7 mega bases.

3. METODO MAS SENCILLO DE EXTRACCION DE ADN

La extracción líquido-líquido simple, que es el procedimiento de extracción


más utilizado en el laboratorio químico, se suele utilizar siempre que el
reparto del compuesto a extraer en el disolvente de extracción es
suficientemente favorable.
Pero existen muchos métodos de extracción de ADN, como el método de
salting out, que es una técnica de tipo orgánica que utiliza reactivos poco
tóxicos.

4. FUENTES DE ADN EN LA SANGRE

La sangre es una fuente excelente de ADN. Éste está presente en los glóbulos
blancos (o leucocitos), pero no en los glóbulos rojos humanos (eritrocitos o
hematíes), pues éstos carecen de núcleo. Una mancha de sangre del tamaño de
una moneda pequeña, correspondiente a unos 50 micro litros, tiene suficiente
ADN para un análisis típico de VNTR.

También se puede encontrar ADN en espermatozoides, la saliva, en el folículo


capilar, cualquier tejido del cuerpo, en los huesos, etc.

5. El clorudo de sodio ayuda a que las moléculas permanezcan unidas,


facilitando la extracción del ADN.
El etanol permite la formación de aglutinaciones para favorecer la
destrucción de fosfolípidos.

6. Si se pudo observar, gracias a los ingredientes el tampón que permitieron


que se diera la extracción casera.
CONCLUSION

Al realizar correctamente la extracción cacera del ADN pudimos observarlo con


apariencia de un copo de algodón húmedo, gracias a cada ingrediente del
(tampón) que tiene su propia función. Como el detergente que romper la
membrana plasmática y nuclear, la sal de mesa ayuda a que los iones salinos
sean atraídos hacia las cargas negativas del ADN permitiendo su disolución, el
bicarbonato mantiene el pH evitando la desintegración de las moléculas de ADN y
el alcohol etílico sirve para precipitar el ADN facilitando su extracción.
BIBLIOGRAFIA

 https://brainly.lat/tarea/2773104