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OBJETIVO GENERAL:
Aplicar los conceptos de los cursos de circuitos, mecánica y óptica para la elaboración de un
espectrofotómetro.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
Desde la época de Newton, quien observó por primera vez cómo se dispersaba la luz a través de un
prisma, se iniciaron diferentes estudios y experimentos que dieron como resultado las observaciones
de Fraunhofer, de Kirchhoff entre otros, quienes estudiaron la interacción entre la radiación y la materia
como función de la longitud de onda (λ).
En nuestro caso, nos apoyamos en la interfaz de Arduino, para programar los comandos electrónicos
a un diodo ajustable. Este diodo, cambiaba los colores de luz que emitía haciendo la misma variación
que el espectro de la luz. Cuando el diodo cambiaba sus colores, estos, pasaban a través de un prisma
que se ajustaba con la ayuda de un motor. La luz que pasaba a través del prisma, también atravesaba
la sustancia que deseamos estudiar. Existía cierta longitud de onda que sería absorbida por la
sustancia y el restante transmitida a un fotoresistor que nos daría cuánto había variado la longitud de
onda respecto a dicha sustancia.
¿Qué es la espectrofotometría?
Para referirnos a la espectrofotometría debemos primero hablar de espectroscopia. La espectroscopia
surgió con el estudio de la interacción entre la radiación y la materia como función de la longitud de
onda (λ). En un principio se refería al uso de la luz visible dispersada según su longitud de onda, por
ejemplo por un prisma. Más tarde el concepto se amplió enormemente para comprender cualquier
medida en función de la longitud de onda o de la frecuencia. Por tanto, la espectroscopia puede
referirse a interacciones con partículas de radiación o a una respuesta a un campo alternante o
frecuencia variante (ν). Una extensión adicional del alcance de la definición añadió la energía (E) como
variable, al establecerse la relación E=hν para los fotones. Un gráfico de la respuesta como función
de la longitud de onda (o más comúnmente la frecuencia) se conoce como espectro.
Con base en lo anterior, definimos la espectrofotometría como un método método científico utilizado
para medir cuánta luz absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz cuando un haz
luminoso pasa a través de la solución muestra, basándose en la Ley de Beer-Lambert. Esta medición
también puede usarse para medir la cantidad de un producto químico conocido en una sustancia.
En la espectrofotometría se aprovecha la absorción de radiación electromagnética en la zona del
ultravioleta y visible del espectro. La muestra absorbe parte de la radiación incidente en este espectro
y promueve la transición del analito hacia un estado excitado, transmitiendo un haz de menor energía
radiante. En esta técnica se mide la cantidad de luz absorbida como función de la longitud de onda
utilizada. La absorción de las radiaciones ultravioletas, visibles e infrarrojas depende de la estructura
de las moléculas, y es característica de cada sustancia química.
¿Qué es un espectrofotómetro?
El espectrómetro, espectrofotómetro o espectrógrafo, es un aparato capaz de analizar el espectro de
frecuencias característico de un movimiento ondulatorio. Se aplica a diferentes instrumentos que
operan sobre un amplio campo de longitudes de onda.
Un espectrómetro óptico o espectroscopio, es un instrumento que sirve para medir las propiedades de
la luz en una determinada porción del espectro electromagnético. La variable que se mide
generalmente es la intensidad luminosa, pero se puede medir también, por ejemplo, el estado
de polarización electromagnética. La variable independiente suele ser la longitud de onda de la luz,
generalmente expresada en submúltiplos del metro, aunque algunas veces pueda ser expresada en
cualquier unidad directamente proporcional a la energía del fotón, como la frecuencia o los electrón-
voltios que mantienen una relación inversa con la longitud de onda. Se utilizan espectrómetros
en espectroscopia para producir líneas espectrales y medir sus longitudes de onda e intensidades.
* De absorción. Usa el rango de los espectros electromagnéticos en los cuales una sustancia absorbe.
Incluye la espectrometría de absorción atómica y varias técnicas moleculares, como la espectrometría
infrarroja y la resonancia magnética nuclear (RMN).
* De emisión. Usa el rango de espectros electromagnéticos en los cuales una sustancia irradia (emite).
La sustancia primero debe absorber la energía. Esta energía puede ser de una variedad de fuentes,
que determina el nombre de la emisión subsiguiente, como la luminescencia. Las técnicas de
luminescencia moleculares incluyen la espectrofluorimetría.
* De dispersión. Mide la cantidad de luz que una sustancia dispersa en ciertas longitudes de onda,
ángulos de incidencia y ángulos de polarización. El proceso de dispersión es mucho más rápido que
el proceso de absorción/emisión. Una de las aplicaciones más útiles es la espectroscopia Raman.
En nuestro caso, utilizaremos el método de absorción de las longitudes de onda del espectro
electromagnético.
El color que vemos en una muestra de solución se debe a la absorción selectiva de ciertas longitudes
de onda de luz visible y transmitancia del resto longitudes de onda. Si una muestra absorbe todas las
longitudes de onda en la región visible del espectro, aparecerá negro; si no absorbe ninguno de ellos,
aparecerá blanco o incoloro. Vemos los distintos colores cuando las longitudes de onda radiante de la
energía golpean nuestros ojos.
Definimos transmitancia como la relación de la cantidad de luz transmitida a la cantidad de luz que
cayó inicialmente en la superficie.
Esto permite que diferentes espectrofotómetros con diferentes fuentes de luz produzcan lecturas de
absorción independientes de la potencia de la fuente de luz.
A continuación, supongamos que hay dos tubos de ensayo, ambos contienen la misma solución en la
misma concentración. La única diferencia es que uno de los tubos de ensayo es más delgado que el
otro, las imágenes se muestran a continuación:
Hacemos pasar luz de la misma intensidad (P0) en ambos contenedores. En el primer caso la luz tiene
que viajar sólo en una corta distancia, mientras que en el segundo caso tiene que pasar a través de
una longitud mucho más larga de la muestra. Podríamos deducir que en el segundo caso más cantidad
de la luz será absorbida, ya que la longitud de la trayectoria es mucho más larga. En otras palabras,
la absorbancia aumenta a medida que la longitud de la trayectoria aumenta.
Las dos observaciones descritas anteriormente (las que se refieren a la relación entre la absorbancia y
la concentración y la absorbancia y la longitud de la trayectoria) constituyen la Ley de Beer-Lambert,
que se muestra a continuación:
A=ε*ι*c
Donde:
A es un número adimensional.
ι la constante de proporcionalidad, se denomina coeficiente de extinción molar o absortividad
molar, tiene unidades de litro/mol*cm.
c tienen las unidades habituales de longitud (cm) y concentración (mol/litro).
El coeficiente de extinción (ε) es una constante para una sustancia dada, siempre que la temperatura
y la longitud de onda son constantes. En la práctica, el coeficiente de extinción medido también
depende de las características del instrumento utilizado. Por esta razón, normalmente no se utilizan
valores predeterminados del coeficiente de extinción para análisis cuantitativo. Para transiciones
electrónicas, la diferencia de energía entre los estados fundamental y excitados, es relativamente
grande. Por tanto, a temperatura ambiente, es muy probable que todas las moléculas estén en estado
electrónico fundamental. La absorción y vuelta al estado fundamental, son procesos rápidos por lo que
el equilibrio se alcanza muy rápidamente.
Es importante notar que ε es una función de la longitud de onda y por lo tanto la Ley de Beer-
Lambert es verdadera sólo para la luz de una sola longitud de onda o luz monocromática.
Descripción experimental
Para la elaboración y ejecución de este experimento, utilizamos los siguientes materiales y equipos:
Materiales
Descripción Cantidad
Protoboard 2
Diodo RGB 1
Fotoresistor 1
Tablas de madera 7
Prisma 1
Conectores macho-macho 12
Conectores macho-hembra 10
Botón interruptor 1
Tubos de ensayo 5
Equipo
Descripción Cantidad
Arduino 1
Motor de pasos 1
Computadora 1
Procedimiento
Parte A. Reconocimiento de los componentes de un Arduino.
De manera general, los componentes principales del Arduino
que utilizamos se muestran en la figura3.
Conectamos los pines digitales hacia el motor y hacia el led
RGB, los cuales fueron programados para su posterior
funcionamiento.
Hemos añadido una sección de anexos que relata de manera
global la descripción de la interfaz de Arduino.
Nota: En la sección de anexos, hemos incluido algunas fotografías del ensamblaje del proyecto y de
su funcionamiento.
Análisis, cálculos y resultados
A continuación, mostramos los diferentes gráficos obtenidos para las muestras analizadas por el
espectrofotómetro:
Todos los gráficos muestras en el eje de las ordenadas la mitad de la longitud de onda y en el eje de
las abscisas el tiempo transcurrido mientras se realizaba la lectura.
Gráfico1. Patrón de la longitud de onda sin ninguna sustancia.
De acuerdo con la escala seleccionada, observamos que la longitud de onda se mantuvo por debajo
de los 600 nm
De acuerdo con la escala seleccionada, observamos que la longitud de onda detectada por el
fotoresistor cuando la luz atravesaba el agua fue de aproximadamente ( 580 – 606 )nm
Grafico3. Vinagre de manzana al 10%
Observamos que la luz detectada por el fotoresistor, es menor que cuando colocamos agua. Razon
por la cual las longitudes de onda oscilan entre los (588 – 590) nm
Cuando tenemos mayor concentración de vinagre se reducen la longitud de onda detectada por el
fotoresistor como se observa en el gráfico4.
Recordemos que las evaluaciones realizadas fueron solamente cualitativas.
Recomendaciones
- Ajustar el led RGB para mayor precisión en el cambio del espectro visible.
- Modificar el tiempo de duración entre cada color, para que el lapso fuese uniforme.
- Calibrar la escala, para que muestre la longitud de onda más precisa que permita observar
los cambios de la transmitancia producto de la concentración.
- Acomodar la programación del fotoresistor para detección más exacta que permita realizar
mediciones cuantitativas.
Conclusiones
- El espectrofotómetro elaborado funcionaba captando las variaciones de la longitud de onda
de la luz que atraviesa una sustancia y provee lecturas con en base en la absorbancia de la
muestra en estudio.
- Para nuestro caso utilizamos el método de la lectura de absorción, para lo cual observamos
que a mayor concentración, mayor absorción de luz por parte de la sustancia; cumpliéndose
la ley enunciada por Beer y Lambert.
- Sabemos que las diferentes especialidades de la Física pueden combinarse de manera
sencilla para crear instrumentos que permitan la medición experimental; en nuestro caso
particular pudimos unificar conceptos del curso de circuitos, mecánica y óptica para el
desarrollo del experimento.
Bibliografía
Alberto García Palacios. (2003). Principios y aplicaciones del espectroscopía. Barcelona. Editorial
Reverté.
Allan Cromer. (1996) Física para las ciencias de la vida. Barcelona. Editorial Reverté.
Anexos
Desarrollo y elaboración del
proyecto
Foto11. Espectrofotómetro en
funcionamiento
¿Qué es Arduino?
Arduino es el nombre de una marca que se
dedica específicamente al desarrollo de hardware
electrónico y software de código abierto. Pensado
para que todo sea flexible y fácil de manejar por el
usuario.
Aplicaciones de la espectrofotometría
Espectroscopia astronómica
La espectroscopia astronómica es la técnica de espectroscopia usada en astronomía. Dado que la
espectroscopia queda bien descrita en su propio artículo, aquí nos centraremos en su uso en
astronomía. El objeto de estudio es el espectro de la radiación electromagnética, incluida la luz visible,
que radia desde estrellas y otros objetos celestes. La espectroscopia se puede usar para averiguar
muchas propiedades de estrellas y galaxias distantes, tales como su composición química y
movimiento, mediante efecto Doppler.
Historia
La espectroscopía astronómica comienza con las observaciones iniciales de la luz del Sol dispersa
por un prisma, realizadas por Isaac Newton. Él observó un arco iris de color y quizás incluso líneas de
absorción oscuras. Las primeras descripciones de los espectros de Sirio y Arturo por William
Herschel (1798), la clasificación de las líneas del espectro del Sol por Joseph von Fraunhofer (1814),
la identificación de elementos químicos en la atmósfera solar por Gustav Kirchhoff y Robert
Bunsen (1861), las primeras placas y clasificaciones de espectros estelares de Lewis Morris
Rutherfurd (1862) y, finalmente, el meticuloso trabajo del jesuita Angelo Secchi durante la década de
los 60 del siglo XIX, culminaron con la primera clasificación de estrellas, según su distribución de líneas
espectrales, en cuatro grupos de acuerdo a los componentes químicos de sus atmósferas (1867). En
1886, Mary Draper, viuda de Henry Draper, pionero en la obtención de fotografías de espectros de
estrellas, decidió, en homenaje a su marido, financiar los trabajos del astrónomo del Observatorio del
Harvard College Edward Charles Pickering para obtener un gran catálogo de espectros estelares. Este
contrató a Williamina Fleming y a otras nueve mujeres para realizar los cálculos y clasificar los
espectros en las placas fotográficas. Pickering, con apoyo de su hermano menor William Henry
Pickering, al igual que Piazzi Smyth en Tenerife, perfeccionó el método de obtención de espectros
estelares colocando un prisma en el objetivo del telescopio y siguió mejorando las técnicas
espectroscópicas a lo largo de toda la década de los 80. Williamina Fleming identificó y clasificó los
espectros de más de 10.000 estrellas. Amplió la clasificación de los cuatro grupos de Secchi e introdujo
un nuevo esquema basado en 16 tipos tomando como referencia las líneas de absorción
del Hidrógeno, identificándolos alfabéticamente desde la A a la N (saltando la J), más las letras O para
estrellas con líneas brillantes de emisión, P para nebulosas planetarias y Q para las estrellas que no
encajaban en los grupos anteriores. Esta primera entrega del Catálogo Henry Draper, en
compensación por la financiación recibida, la publicó Edward Pickering en 1890 sin figurar Fleming
como autora (aunque sí está citada en el interior y, posteriormente, no dudó en hacer reconocimiento
público de su autoría) y es la base de la clasificación espectral hoy en uso (clasificación estelar de
Harvard). La llegada de espectros cada vez de mayor resolución y la creación del Observatorio
y Telescopio de Arequipa (Perú) en el Hemisferio Sur, permitió al equipo dirigido por Fleming y
Pickering evolucionar en la clasificación, sobre todo con las decisivas aportaciones de otras dos
miembros de su equipo, Antonia Caetana Maury y Annie Jump Cannon, quienes reordenaron los
grupos espectrales y aumentaron el número de estrellas clasificadas. En la publicación de las
extensiones del Catálogo Draper lideradas por Maury (1897) y Cannon (1901 y varias otras hasta su
muerte en 1941) ya figuran ellas como las autoras del trabajo. En total, las clasificaciones de estrellas
llevadas a cabo por estas mujeres fueron más de 400.000.1
Estrellas
Las bandas oscuras que aparecen en el espectro solar las describió por primera vez en detalle Joseph
von Fraunhofer. La mayoría de espectros estelares comparten estas dos características dominantes
del espectro solar: emisión en todas las longitudes de onda del espectro óptico (el continuum) y
varias líneas de absorción discretas superpuestas.
Fraunhofer y Angelo Secchi estuvieron entre los pioneros de la espectroscopia del Sol y otras estrellas.
Se recuerda especialmente a Secchi por clasificar las estrellas en tipos espectrales basándose en el
número y fuerza de las líneas de absorción de su espectro. Más adelante se descubrió que el origen
de los tipos espectrales estaba relacionado con la temperatura superficial de la estrella y sólo se podía
observar determinadas líneas de absorción dentro de un cierto rango de temperaturas, porque sólo en
ese rango se llenaban los niveles energéticos atómicos relacionados.
Las líneas de absorción en los espectros estelares se pueden utilizar para determinar la composición
química de una estrella. Cada elemento es responsable de un conjunto diferente de líneas de
absorción en el espectro a longitudes de onda que se pueden medir de forma extremadamente fiable
mediante experimentos en laboratorio. Por lo tanto, una línea de absorción en una longitud de onda
concreta en un espectro estelar muestra que ese elemento debe estar presente. Las líneas de
absorción del hidrógeno (que se encuentra en la atmósfera de casi cualquier estrella) son
particularmente importantes. Las líneas del hidrógeno que se encuentran dentro del espectro visible
se denominan líneas de Balmer.
En 1868, Sir Norman Lockyer observó fuertes líneas amarillas en el espectro solar que no había visto
nunca en experimentos en el laboratorio. Dedujo que debía tratarse de un elemento desconocido, al
que llamó helio, del griego helios (sol). El helio no se detectó de forma concluyente en la Tierra hasta
25 años después.
En la misma década se detectaron líneas de emisión (una verde, en particular) en el
espectro coronal durante los eclipses solares que no se correspondían a ninguna línea espectral
conocida. De nuevo se propuso que esto se debía a un elemento desconocido,
denominado coronio de forma provisional. No fue hasta la década de 1930 que se descubrió que estas
líneas provenían de hierro y níquel muy ionizados, debiéndose esta ionización a las temperaturas
extremas de la corona solar.
En conjunto con la física atómica y los modelos de evolución estelar, la espectroscopía estelar se usa
actualmente para determinar una multitud de propiedades estelares: su distancia, edad, luminosidad
y tasa de pérdida de masa se pueden estimar mediante estudios espectrales, y los estudios
sobre efecto Doppler pueden descubrir la presencia de compañeros ocultos tales como agujeros
negros y exoplanetas.
Nebulosas
En los primeros tiempos de la astronomía telescópica, la palabra nebulosa se usaba para describir
cualquier mancha borrosa que no pareciese una estrella. Muchas de éstas, como la Nebulosa de
Andrómeda, tenían espectros que se parecían mucho a los estelares, y acabaron resultando galaxias.
Otras, como la Nebulosa Ojo de gato, tenía espectros muy diferentes. Cuando William
Huggins observó la Ojo de Gato, no encontró un espectro continuo como el del Sol, sino sólo unas
pocas líneas de emisión fuertes. Estas líneas no se correspondían con ningún elemento terrestre
conocido, e igual que sucedió con el helio que se había identificado en el sol, los astrónomos sugirieron
que las líneas se debían a un nuevo elemento, nebulio (llamado ocasionalmente nebulo o nefelio). En
realidad, en la década de 1920 se describió que las líneas se debían al oxígeno, un elemento muy
familiar. Pero las nebulosas están normalmente muy rarificadas; son mucho menos densas que el
mejor vacío conseguido en la Tierra. En estas condiciones, los átomos se comportan de una manera
muy diferente y se pueden formar líneas que se suprimen a densidades normales. Estas líneas se
conocen como líneas prohibidas y son las más potentes en la mayoría de espectros nebulares.
Galaxias
El espectro de las galaxias se parece al estelar, ya que consiste en la luz de millones de estrellas
combinadas. La espectroscopia galáctica ha conducido a muchos descubrimientos
fundamentales. Edwin Hubble descubrió en la década de 1920 que, aparte de las más cercanas
(aquellas en lo que se conoce como el Grupo Local), todas las galaxias se alejan de la Tierra. Cuanto
más lejos esté una galaxia, más rápido se está alejando (ver la Ley de Hubble). Ésta fue la primera
indicación de que el Universo se creó en un único punto, en un Big Bang.
Los estudios de Fritz Zwicky sobre agrupaciones galácticas mediante efecto Doppler encontraron que
la mayoría de las galaxias se están moviendo más rápido de lo que parecía posible, por lo que se
conocía de la masa de estas agrupaciones. La hipótesis de Zwicky es que debe existir una gran
cantidad de materia no luminosa en las agrupaciones galácticas: lo que acabó conociéndose
como materia oscura.
Cuásares
En la década de 1950 se encontraron algunas potentes fuentes de radio asociadas a objetos muy
tenues que parecían ser muy azules. Se les llamó Fuentes de radio cuasi-estelares, o cuásares.
Cuando se obtuvo el primer espectro de uno de estos objetos, se encontró algo misterioso, con líneas
de absorción en longitudes de onda donde no se esperaban. Pronto se entendió que lo que se estaba
viendo era un espectro galáctico normal, pero muy corrido al rojo. De acuerdo con la Ley de Hubble,
esto implicaba que el cuásar debía ser muy distante, y por tanto muy luminoso. Actualmente se piensa
que los cuásares son galaxias en formación, con su gran emisión energética alimentada por agujeros
negros supermasivos.
Planetas y asteroides
Los planetas y asteroides brillan sólo reflejando la luz del Sol. La luz reflejada contiene bandas de
absorción debido a los minerales presentes en las rocas de los cuerpos rocosos, o a elementos y
moléculas presentes en las atmósferas de los gigantes gaseosos. Los asteroides se pueden clasificar
en tres tipos principales, de acuerdo a su espectro: los tipo C están compuestos por materiales
carbonáceos; los tipo S consisten principalmente de silicatos; y los tipo M son 'metálicos'. Los
asteroides de tipos C y S son los más comunes.
Cometas
El espectro de los cometas consiste en un espectro solar reflejado en las nubes de polvo que le
rodean, así como en líneas de emisión formadas cuando el viento solar choca con los gases que
rodean al cometa. El análisis de la composición de los cometas ha mostrado que están hechos de
materiales vírgenes provenientes de los tiempos de formación del sistema solar. Se sabe que existen
muchos compuestos orgánicos en los cometas, y se ha sugerido que los impactos cometarios pueden
haber proporcionado a la Tierra mucha del agua de sus océanos y los compuestos necesarios para la
formación de la vida. Se ha sugerido que la vida puede haber sido traída a la Tierra por cometas desde
el espacio interestelar (la teoría de la Panspermia).