CATEDRA: MICROBIOLOGÍA

INFORME SOBRE ESTAFILOS

OBJETIVOS
 Identificar macroscópica y microscópicamente a las diferentes clases de estafilococos
 Conocer las pruebas de identificación y sus reacciones
 Determinar la clase de estafilococo sembrado en la práctica

MATERIALES
 Baja lenguas
 hisopos estériles  Agar sangre- Mack conkey
 Porta objetos  Manitol salado
 Mechero  Muller Hilton
 Asas  Peróxido de oxigeno
 Tubos de ensayo  Tripticasa
 Microscopio  Plasma
 Aceite  Cristal violeta
 Suero fisiológico  Lugol
 Alcohol cetona
  fucsina

INTRODUCCIÓN

Morfológicamente los estafilococos son cocos grampositivos. Los estafilococos crecen fácilmente sobre casi
todos los medios bacteriológicos, en cultivos su crecimiento es mejor en el medio sal manitol y agar sangre,
es un coco anaerobio facultativo, esto significa que puede crecer tanto en condiciones con aire como
carente de este. Su mayor velocidad de crecimiento es a 5 - 25 °C; pero también se puede ver en activa
fisión binaria entre 30 y 27 °C. Además, producen catalasa, lo que los diferencia de los estreptococos. Tiene
importancia médica principalmente el S. aureus, y en humanos además de éste, el S. saprophiticus y el S.
epidermidis.

DESARROLLO
TOMA DE MUESTRAS
FARINGEA
La muestra se debe obtener con hisopos con la ayuda de un depresor se inmoviliza la
lengua, y se realiza la toma del área amigdalar y faringe posterior, así como de cualquier
zona inflamada o ulcerada. Es fundamental evitar rozar la torunda con la úvula, la mucosa
bucal, los labios o con la lengua, tanto antes como después de la toma. La torunda se
introducirá en un tubo con medio de transporte tipo amies-stuart o realizar
inmediatamente el inoculo en la caja.

NASAL
Se debe de obtener mediante la utilización de hisopos se los introduce hacia el fondo de
las fosas nasales se realiza movimientos, para que la muestra se pueda adherir se saca e
inmediatamente se procede a hacer el inoculo en la caja o se coloca en
un medio de transporte.
CULTIVO
Se lo debe realizar en agar sangre y mack conkey, se debe realizar un
inoculo en un borde de la caja con el hisopo luego procedemos a
esterilizar el asa.
Vamos a realizar las estriaciones con asa de platino plana, tratando de que la muestra se
esparza y por cada estriación esterilizar el asa.

CARACTERÍSTICAS DE CULTIVO

Las colonias son visibles fácilmente, con forma redonda y aplanada, bordes netos, superficie lisa y brillante,
consistencia variable, sin olor y en algunas ocasiones, hemolíticas.

ESTAFILOCOCOS CAR.MACROSCOPICAS C.MICROSCOPICAS

S.AUREUS - Colonias redondas -
- C: Blanco, amarillo, dorado
- Pequeñas , brillantes
- Bordes uniformes
- Presentan hemolisis
S.EPIDERMIDIS - Colonias redondas -Mide de 1-1.5 u
-C: gris o blanco -Cocos grampositivos
- Pequeñas uniformes -Se agrupan en racimos en forma
- No hay hemolisis de uvas.
S. SAPROFITICUS - Colonias redondas -Cocos grampositivos
-C: gris amarillo o blanco -Se agrupan en racimos en forma
- Pequeñas uniformes de uvas.
 - No hay hemolisis
S.LUGDINENSIS - Colonias redondas -Cocos grampositivos
-C: amarillo -Se agrupan en racimos
- Bordes regulares
- Presentan hemolisis
MICROCOCUS - Colonias de bordes redondos -Cocos grampositivos
- C: anaranjado - Cocos de 2u
- Según su color su nombre -Se agrupan en pares
- Mide de 1-2 mm
- No hay hemolisis

FROTIS
Aquí empleamos la técnica del palillo es decir solo formamos una pequeña línea sobre el porta, adherimos la
muestra flameando la placa, dejamos enfriar y procedemos a hacer la tinción de Gram
Las bacterias pertenecientes a esta especie son cocos, con forma casi esférica. Forman masas arracimadas,
viéndose como bacterias Gram positivas. En los cultivos viejos los estafilococos pueden aparecer como
bacterias Gram negativas.

PRUEBA DE CATALASA
Bacterias que viven en ambientes
aerobios requieren de catalasa para convertir el peróxido de
hidrogeno en agua y oxigeno molecular. Es positiva la prueba cuando se ponen en contacto una bacteria con
actividad catalasa con H2O2 3% y se producen burbujas de oxigeno. Y es
negativa cuando no hay reacción.

PRUEBA DE MANITOL SALADO

Medio selectivo y diferencial para el aislamiento e identificación de S. aureus. NaCl 7,5% le proporciona lo
selectivo ya que solo estos microorganismos osmotolerantes pueden multiplicarse en el. Manitol es el único
azúcar fermentado por las cepas patógenas de este género bacteriano.
La producción de ácidos proveniente de la fermentación del manitol es detectada por el viraje del indicador
de pH presente en el medio (rojo fenol) a amarillo. Staphylococcus epidermidis no fermenta el manitol, da
lugar a colonias pequeñas rodeadas de un halo purpura.
PRUEBA DE COAGULASA EN TUBO
Permite diferenciar Staphylococcus aureus (coagulasa positivo) del resto de especies de Staphylococcus
(coagulasas negativos). La técnica en tubo detecta coagulasa libre y ligada.
Mecanismo de acción de la coagulasa libre: procoagulasa (enzima extracelular bacteriana) reacciona con un
factor activador presente en el plasma sanguíneo similar a la protrombina, dando lugar a un complejo
análogo a la trombina (coagulasa propiamente dicha) que reacciona con fibrinógeno formando un coágulo
de fibrina en ausencia de Ca2+. La coagulasa ligada o factor de agregación actúa directamente sobre el
fibrinógeno y lo convierte en fibrina. No requiere la presencia de activadores plasmáticos.

PRUEBA DE COAGULASA EN PLACA

Permite hacer una prueba rápida de la que se utiliza en el tubo, se coloca una gota de suero fisiológico, una
o dos colonias, y una gota de plasma, realizamos unos leves movimientos para que se mezclen los
elementos y observamos a la luz del microscopio, si hay aglutinaciones es positivo, y si no pasa nada es
negativo.

PRUEBA DE OF DE GLUCOSA
Esta prueba sirve para estudiar simultáneamente la reacción de oxidación o fermentación de glucosa y la
reducción de nitratos a nitritos, por bacilos Gram negativos de fácil desarrollo. Esta prueba es útil para
diferenciar especies bacterianas.

PRUEBAS DE SUCEPTIBILIDAD
Para realizar esta prueba utilizamos el medio de tripticasa en el cual colocamos colonias y dejamos incubar
por 24 horas, con este medio introducimos un hisopo y recogemos un poco de la muestra.
En el agar de muller Hilton realizamos estriaciones con el hisopo que tiene la muestra en tres direcciones en
toda la caja y luego colocamos discos que nos van a mostrar la susceptibilidad de la muestra.
Los discos que utilizamos fueron, Nb (Noboviosina) y B.

ANTIBIOGRAMA
Igualmente que en la otra prueba vamos a utiliza muller-Hilton, hacemos las estriaciones en 3 direcciones
en toda la caja con el hisopo introducido en la preparación de tripticasa, y procedemos a colocar los discos
de la siguiente manera: (Si se sospecha que es un s. aureus)
En la colocación de los discos hay que tener siempre en cuenta que la eritro y la clinda siempre tienen que
estar juntas.
S.AUREUS
SENCIBLE RESISTENTE
FOX= 22 E= 6
OX=24 CC=6
CIP=24 CN=6
SXT=20 P= 6
VA=20

RESULTADOS

1. CULTIVO
En el agar sangre se pudo observar colonias redondas con bordes uniformes de color blanco.
También se observo la presencia de hemolisis

2. FROTIS
Al observar al microscopio se encontró cocos en racimos y en cadenas, es decir se pudo observar
estreptos y estafilococos:
3. CATALAZA
Aquí hubo la presencia de burbujas por ende se concluye que es positiva.

4. MANITOL SALADO
La caja se la dividió, en un lado se coloco micrococus y en el otro la muestra de nuestra caja, en
este caso se obtuvo manitol positivo, ya que su pigmento cambio a amarillo.

5. COAGULASA EN PLACA
Al terminar de mover para que se mesclen las colonias se pudo observar a la luz del microscopio
que existió aglutinaciones, es decir fue positivo.
6. COAGULASA EN TUBO
Después del periodo de incubación el resultado fue coagulasa positiva por la formación del coagulo.

7. PRUEBA DE OF DE GLUCOSA
Esta prueba sirve para estudiar simultáneamente la reacción de oxidación o fermentación de
glucosa y la reducción de nitratos a nitritos, por bacilos Gram negativos de fácil desarrollo. Esta
prueba es útil para diferenciar especies bacterianas.

8. P.SUCEPTIBILIDAD
B=6, resistente
Nb= 23, sensible
 9. ANTIBIOGRAMA

CONCLUSIONES
Se puede que con la confirmación de todas
las pruebas se concluye que se encontró la presencia
de un estafilococo aureus.

BIBLIOGRAFIA
ATLAS VIRTUAL DE MEDICINA
http://www.telmeds.org/AVIM/Abacterio/cocos%2520gram%2520positivos/images/CatalaseResults1.
http://www.ferato.com/wiki/index.php/Estafilococo
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/staphylococcalinfections.html