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INFORME DE Fecha de vigencia: Marzo 2015
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DE QUIMICA ANALITICA
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INFORME DE LABORATORIO

NOTA Laboratorio. 50%


Informe 50%
TOTAL

Número :7
Título : Espectrofotometría Visible
Fecha : 25/06 /2018
Integrantes / Grupo : Calderón C.; Duche X.; Gallardo F.; Jumbo B.; Silva
P.; Zambrano D.

Resumen

En la presente práctica se determinó la concentración de hierro en una muestra por el


método de la ortofenantrolina a través de espectrofotometría visible. Se preparó una
serie de estándares para la identificación como se muestra en la tabla 1. Partiendo de
una sal de Mohr (1000 ug Fe/ml) se procedió a colocarla en una probeta en diferentes
cantidades dependiendo del estándar a preparar hasta un volumen final de 15 ml,
teniendo en cuenta que las cantidades sean relativamente exactas a las requeridas.
Se determinó los valores de absorbancia y él % de transmitancia a una longitud de
onda de 510 nm para cada estándar. En la presente práctica se conoció y realizó un
adecuado manejo del equipo y se pudo determinar la cantidad de sal de Mohr
necesaria para preparar la solución patrón de 1000mg/L de hierro la cual fue de 0.3511
g; la muestra tuvo una concentración de 5𝑥10−4 𝑢𝑔 𝐹𝑒 Fe/ml.La absortividad molar
promedio corresponde a 9,30 ∗ 107 L/mol*cm y la absortividad específica a 0,128
L/mg.cm, esto para los estándares. El % Fe en agua potable fue de 0,472 %, con una
absortividad molar de 0,28 ml/cm*μg y una absortividad específica de 1666,66 L /
mg cm. El valor del límite de detección fue de 0,01185 ug/ml y de la sensibilidad de
0.0634 ppm-1.

Palabras clave: espectrofotometría visible, absorbancia, transmitancia absortividad y


método de ortofenantrolina.

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Abstract

In the present practice, the concentration of iron in a sample was determined by the
orthophenanthroline method through visible spectrophotometry. A series of standards
for identification was prepared as shown in table 1. Starting with a Mohr salt (1000 ug
Fe / ml), it was placed in a test tube in different quantities depending on the standard to
be prepared up to a final volume of 15 ml, taking into account that the quantities are
relatively exact to those required. The absorbance values and the% transmittance were
determined at a wavelength of 510 nm for each standard. In the present practice, an
adequate management of the equipment was known and performed and the amount of
Mohr salt necessary to prepare the standard solution of 1000mg / L of iron which was
0.3511 g; the sample had a concentration of 5x10 - 4 ug Fe Fe / ml. The average molar
absorptivity corresponds to 9.30 * 107 L / mol * cm and the specific absorptivity to 0.128
L / mg.cm, this for the standards. The% Fe in drinking water was 0.472%, with a molar
absorptivity of 0.28 ml / cm * μg and a specific absorptivity of 1666.66 L / mg cm. The
value of the limit of detection was 0.01185 ug / ml and the sensitivity of 0.0634 ppm-1.

Key words: visible spectrophotometry, absorbance, transmittance, absorptivity and


orthophenanthroline method.

Introducción:

La fotocolorimetría es el conjunto de
métodos de análisis cuantitativos del
fenómeno de transmitancia y absorbancia
que mide la luz de una solución mediante
un aparato que es un fotocolorímetro. El
equipo consta de una fuente de luz Figura 1: Descomposición de la luz solar por
artificial, un mono-cromador que separa medio de un prisma en sus componentes
exclusivamente luz a una longitud de cromáticos.
onda, un recipiente o tubo de vidrio (que Fuente: https://tcolor-gc2011-2.com/
alberga la solución a medir), una célula
fotoeléctrica que transforma la luz Por otra parte, las técnicas colorimétricas
trasmitida en corriente eléctrica y una se basan en la medida de la absorción de
unidad de medida de la corriente eléctrica radiación en la zona visible por sustancias
o galvanómetro (Fuentes, 2010). coloreadas. En algunas ocasiones, la
muestra que se desea determinar no
posee color por sí misma; en tal caso, es
preciso llevar a cabo un desarrollo de
color empleando reactivos que den lugar
a sustancias coloreadas con la muestra

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que interesa estudiar. La colorimetría y


fotocolorimetría no son en realidad Metodología:
técnicas distintas y la diferencia estriba en
el tipo de instrumental empleado, de Preparación de estándares
forma que se denomina colorímetro a
A partir de la sal de Mohr se preparó una
aquellos aparatos en los que la longitud
solución que contenga 1000 ug Fe/ml, a
de onda con la que vamos a trabajar se
partir de una solución patrón de 10 ug
selecciona por medio de filtros ópticos; en
Fe/ml. De esta última solución se preparó
los fotocolorímetros o espectrofotómetros
la siguiente serie de estándares como se
la longitud de onda se selecciona
indica en la tabla 1.
mediante dispositivos mono-cromadores
(Camúñez, 2003) Se determinó los valores de % de
Transmitancia y Absorbancia a 510 nm de
Objetivos: cada estándar y la muestra en el
espectrofotómetro y en el colorímetro.
 Examinar y operar el
espectrofotómetro. Preparación de la muestra problema:
 Determinar hierro en una muestra por
Se realizó los cálculos necesarios para
el método de la ortofenantrolina.
tomar un volumen adecuado de muestra y
 Familiarizarse con los diferentes que las mismas presenten una
métodos que existen para el cálculo absorbancia que se encuentre en la mitad
de la concentración por de la curva de calibración. Las muestras
espectrofotometría. Ley de Beer. recibieron el mismo tratamiento que los
estándares, una vez hecho esto se
Materiales
determinó la A y %T en el equipo, tanto
de los estándares como de la muestra.
Materiales:

 Espectrofotómetro
 Balones aforados de 25 ml
 Pipetas de 10 ml y 25 ml
 Cubetas limpias

Reactivos:
 Agua destilada
 Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O (sal de Mohr)
 Buffer de pH 4-5
 Solución de ácido ascórbico 10 % ó
sulfito de sodio 5%.
 Solución de ortofenantrolina 0,25
%.

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Resultados:

Tabla 1. Preparación de los estándares de hierro.

St. ml ml ml ml. ml. Vol.


Soln. Sulfito Buffer Ortofenant H2O Final
Patrón de rolina
sodio
5%
0 0,0 0,5 1,0 1,0 12,5 15,0
1 0,6 0,5 1,0 1,0 11,9 15,0
2 1,3 0,5 1,0 1,0 11,2 15,0
3 2,5 0,5 1,0 1,0 10,0 15,0
4 5,0 0,5 1,0 1,0 7,5 15,0
5 10,0 0,5 1,0 1,0 2,5 15,0
Muestr 10,0 0,5 1,0 1,0 2,5 15,0
a
Elaborado por: Grupo1

Tabla 2. Valores de comparativos de absorbancia y transmitancia.


St. µg Fe/mL Espectrofotómetro
Absorbancia Transmitancia
0 0,000 0,000 100,000
1 0,400 0,034 92,5
2 0,867 0,078 83,6
3 1,600 0,120 75,7
4 3,333 0,287 51,7
5 6,667 0,415 38,5
Muestra1 6,667 0,003 99,3
Muestra2 0,018 95,9
Elaborado por: Grupo1

Solución patrón
Calculo de la cantidad de sal de Mohr necesaria para preparar la solución patrón de
1000 µg/mL de hierro.
Se preparó 50 ml de la solución, entonces:

1000𝑢𝑔𝐹𝑒
∗ 50 𝑚𝑙 = 5𝑥10−4 𝑢𝑔 𝐹𝑒
𝑚𝑙

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Masa de la sal de Mohr:

1𝑥10−6 𝑔 𝐹𝑒 392.13 𝑔 (𝑁𝐻4 )𝐹𝑒(𝑆𝑂4 ). 6𝐻2 𝑂


5𝑥10−4 𝑢𝑔 𝐹𝑒 ∗ ∗ = 0.3511 𝑔𝑑𝑒 𝑠𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑀𝑜ℎ𝑟
1𝑢𝑔 𝐹𝑒 55.845 𝑔 𝐹𝑒

Concentración de hierro
Cálculo de la concentración de hierro en los estándares
Estándar 1

10𝜇𝑔
0,6 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛 ∗ = 6 𝜇𝑔 𝐹𝑒 2+
1 𝑚𝐿 𝑠𝑙𝑛 𝑝𝑎𝑡𝑟𝑜𝑛
6 𝜇𝑔 𝐹𝑒 2+
𝐶= = 0,4 𝜇𝑔 𝐹𝑒 2+ /𝑚𝑙
15 𝑚𝐿

CONCENTRACIÓN VS ABSORBANCIA
0.5
0.45 y = 0.0634x + 0.0197
R² = 0.9663
0.4
0.35
ABSORBANCIA

0.3
0.25
0.2
0.15
0.1
0.05
0
0 1 2 3 4 5 6 7 8
Concentración (µg Fe/ml)

Figura 1. Curva de calibración: Concentración vs Absorbancia.


Elaborado por: Grupo1

Cálculo de la absorbancia corregida.

y = 0,0634x + 0,0197
𝐴 = 0,0634C + 0,0197
𝐴 = 0,0634(0,400) + 0,0197 = 0,04506

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Tabla 3. Corrección de los valores de absorbancia

Estándar µg Fe/mL Absorbancia(Shimadzu)

Experimental Corregido
0 0,000 0,000 0,0197
1 0,400 0,034 0,0451
2 0,867 0,078 0,0747
3 1,600 0,120 0,1211
4 3,333 0,287 0,2310
5 6,667 0,415 0,4424
Elaborado por: Grupo1

Calculo del coeficiente de absortividad molar y absortividad especifica.

Absortividad molar
𝑨= 𝜺∗𝒃∗𝑪

𝑨
𝜺=
𝒎𝒐𝒍
𝒃(𝒄𝒎) ∗ 𝑪( 𝑳 )

0,034 L
𝜀= = 9,30 ∗ 107
1𝑐𝑚 mol ∗ cm
510𝑛𝑚 ∗ ∗ 0,000007162 𝑚𝑜𝑙/𝐿
1 ∗ 107 𝑛𝑚

Absortividad especifica
𝑨= 𝜺∗𝒃∗𝑪

𝑨
𝜺= 𝒎𝒈
𝒃(𝒄𝒎) ∗ 𝑪( 𝑳 )

0,034
𝜀= = 1666,66 L / mg cm
1𝑐𝑚
510𝑛𝑚 ∗ ∗ 0,4 𝑚𝑔/𝐿
1 ∗ 107 𝑛𝑚

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Tabla 4. Cálculos de los valores de Absortividad específica

St g Molaridad Espectrofotómetro
Fe/ml(mg/L) Fe α (L / mg  (L / mol
cm) cm)
1 0,400 0,000007162 1666,67 9,30 ∗ 107
2 0,867 0,000015525 3823,53 2,14*108
3 1,600 0,000028651 5882,35 3,29108
4 3,333 0,000059684 14068,63 7,86∗ 108
5 6,667 0,000119384 20343,14 1,14∗ 109
_____ _____ 9156,864 5,122108
Elaborado por: Grupo1

Cálculo de la cantidad de hierro en la muestra por los siguientes métodos


 Muestra 1
Interpolación gráfica
𝐴 − 0,0197
𝐶=
0,0634
0,003 − 0,0197
𝐶=
0,0634
𝐶 = 0,2634 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒

Interpolación analítica

A = A0 + KsC
𝐴 + 𝐴0
𝐶=
𝐾𝑠
0,003 + 0,0
𝐶=
0,0634

𝐶 = 0,0473 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒
 Muestra 2

Interpolación gráfica
𝐴 − 0,0197
𝐶=
0,0634

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0,018 − 0,0197
𝐶=
0,0634
𝐶 = 0.0268 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒

Interpolación analítica

A = A0 + KsC
𝐴 + 𝐴0
𝐶=
𝐾𝑠
0,018 + 0,0
𝐶=
0,0634

𝐶 = 0,2839 𝑝𝑝𝑚 𝐹𝑒

Cálculo de las concentraciones de la muestra 2 utilizando  y α comparando con


el estándar más cercano

Con el coeficiente de absortividad específica


𝐴 =𝜖∗𝑏∗𝐶

𝐴 0,018
𝐶= =
𝑙 ∗ 𝜖 510𝑛𝑚 ∗ 1𝑐𝑚 𝐿
7 ∗ 1666,67 𝑚𝑔 ∗ 𝑐𝑚
1 ∗ 10 𝑛𝑚

𝑚𝑔
𝐶 = 0,2118 𝐹𝑒 (𝑝𝑝𝑚)
𝐿
Con el coeficiente de absortividad molar

𝐴 0,018
𝐶= =
𝑙 ∗ 𝜖 510𝑛𝑚 ∗ 1𝑐𝑚 𝐿
∗ 9,30 ∗ 107
1 ∗ 107 𝑛𝑚 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚

𝑚𝑜𝑙
𝐶 = 3,795 ∗ 10−6 𝐹𝑒
𝐿

𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 55,845𝑔 𝐹𝑒 1000𝑚𝑔 𝐹𝑒 𝑚𝑔


3,795 ∗ 10−6 ∗ ∗ = 0,2119 𝐹𝑒
𝐿 1𝑚𝑜𝑙 𝐹𝑒 1𝑔 𝐹𝑒 𝐿

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Cálculo de la sensibilidad y límite de detección para el método


Tabla.5: Cálculo de la concentración de los estándares en % de Fe

% Fe
0
0,00004
0,0000867
0,00016667
0,00033333
0,00066667
0,00021556
 N 1 0,00025046

sensibilidad = 𝟎, 𝟎𝟔𝟑𝟒
3𝜎
𝐿𝐷 =
𝑚
3(0,00025046)
𝐿𝐷 = = 0,01185%𝐹𝑒
0,0634

Tabla.6: Cálculo estadístico de la muestra

Método % Fe   Ks LD
(agua potable)
Espectrofotómetro 0,00000268±0,0005009 𝐿 𝐿 0,0634 0,01185%𝐹𝑒
1666,67 9,30 ∗ 107
𝑚𝑔 ∗ 𝑐𝑚 𝑚𝑜𝑙 ∗ 𝑐𝑚

Discusiones: compuesto en solución. Se basa en que


las moléculas absorben las radiaciones
Para la determinación de la electromagnéticas y a su vez que la
concentración de hierro se utiliza cantidad de luz absorbida depende de
soluciones patrón de ortofenantrolina forma lineal de la concentración. Para
0,25% debido a que se forma un hacer este tipo de medidas se emplea
complejo con tres moléculas ligadas al un espectrofotómetro, en el que se
hierro, este complejo tiene una puede seleccionar la longitud de onda
coloración anaranjada cuya de la luz que pasa por una solución y
absorbancia se mide a 510nm; al medir la cantidad de luz absorbida por la
agregar sulfito de sodio al 5%, los iones misma.
Fe3+ se reducen a Fe2+, se agrega
solución reguladora de pH permitiendo El fundamento de la espectroscopia se
la formación del complejo. debe a la capacidad de las moléculas
para absorber radiaciones, entre ellas
La espectrofotometría UV-visible es una las radiaciones dentro del espectro UV
técnica analítica que permitió visible. Las longitudes de onda de las
determinar la concentración de un radiaciones que una molécula puede

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absorber y la eficiencia con la que se onda, un recipiente o tubo de vidrio (que


absorben dependen de la estructura alberga la solución patrón), una célula
atómica y de las condiciones del medio fotoeléctrica que transforma la luz
(pH, temperatura, fuerza iónica, trasmitida en corriente eléctrica y una
constante dieléctrica). unidad de medida de la corriente
eléctrica
La “Ley de Beer” establece que la
absorbancia de una solución es El conocer el adecuado funcionamiento
directamente proporcional a su del espectrofotómetro permitió obtener
concentración, es decir a mayor número en resultados analíticos coherentes en
de moléculas mayor interacción de la luz las mediciones que son emitidas por el
con ellas; también depende de la equipo.
distancia que recorre la luz por la
solución a igual concentración cuanto El resultado de las mediciones de las
mayor distancia recorre la luz por la soluciones estándares de hierro en el
muestra más moléculas se encontrará; y espectrofotómetro están tabuladas en la
por último, depende de ε, una constante tabla y como resultado si obedece la Ley
de proporcionalidad, que es específica de Beer, a mayor concentración mayor
de cada cromóforo. absorbancia A= εbC, es decir relación
directamente proporcional.
En la “Ley de Beer”, el coeficiente de
extinción (ε) es característico de una La concentración de hierro en una
sustancia en condiciones definidas de muestra de agua potable fue de
longitud de onda, disolvente y 0,00000268 %.
temperatura. En la práctica, el
coeficiente de extinción medido también Se pueden calcular concentraciones
depende de las características del desconocidas aplicando la ley de Beer,
instrumento utilizado. Por esta razón, con la ayuda de la absorbancia y
normalmente no se utilizan valores transmitancia medida con el
predeterminados del coeficiente de espectrofotómetro y con un valor
extinción para análisis cuantitativo. En tabulado como es la absortividad
su lugar, se construye una curva de molar ε.
calibración o curva de trabajo para la
sustancia a analizar, utilizando una o
dos disoluciones patrón con
concentraciones conocidas del analito.

Conclusiones:

Se examinó y se operó el
espectrofotómetro de acuerdo a la base
teórica expuesta en la guía impartida por
el instructor, observándose que el
equipo consta de una fuente de luz
artificial, un mono-cromador que separa
exclusivamente luz a una longitud de

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Cuestionario: Espectrofotómetro de un solo haz


En este instrumento el haz de luz sigue
Diseño y funcionamiento de un una única trayectoria entre la fuente y el
espectrofotómetro de un solo haz y detector. La banda de luz atraviesa la
de doble haz muestra que se halla contenida en una
Espectrofotómetro celda, la luz transmitida por la muestra
Instrumento utilizado para el estudio de pasa al detector originándose una
la absorción o emisión de la radiación corriente eléctrica que por medio de
electromagnética como función de la diferentes circuitos permite observar
longitud de onda. Mide una señal, ya sea el movimiento de una
fundamentalmente la distribución aguja o señal digital o un registro
espectral de energía radiante en gráfico. Estos equipos requieren de
las regiones espectrales: UV, VIS e IR componentes estables y de alta calidad
Estos instrumentos utilizan un complejo en la fuente, detector y amplificador. Los
sistema óptico de selección de longitud parámetros de ajuste iniciales (cero y
de onda (monocromadores). Pueden 100% de transmitancia o cero al infinito
seleccionar longitud de onda en forma de absorbancia), deben permanecer
continua y en algunos casos con estables durante periodos más o menos
precisión de decimas de nm por lo tanto, largos y hacer reajustes de estos
es posible obtener en forma continua el parámetros periódicamente, si el
espectro de absorción de una molécula. instrumento se va a utilizar más de 30
Deben ser capaces de medir la minutos. Este tipo de
absorbancia entre 200 y 700 nm lo que espectrofotómetros es más barato que
permite: los de doble haz, y se pueden utilizar
 Dar información sobre la ampliamente si los resultados que se
naturaleza de la muestra. desean obtener no requieren de muy
 Indicar indirectamente la alta precisión (Olsen, 2000).
cantidad de la sustancia que
está presente en la muestra. Espectrofotómetro de doble haz
Los componentes esenciales de un En este instrumento la luz proveniente
espectrofotómetro son: de la fuente es dividida en dos
1. Fuente de radiación haces después de salir del
2. Monocromador o sistema óptico monocromador mediante un sistema de
3. Recipiente de muestra espejos divisores. Esta división produce
4. Detector o transductor dos haces de luz, uno de ellos se dirige
5. Amplificador a la celda de referencia, que contiene el
6. Registrador o sistema de lectura blanco, y el otro haz se dirige hacia
(Harris, 2007) la celda de muestra. Los dos haces de
luz después de atravesar la celda de
referencia y la de muestra llegan a
detectores separados para obtener la
señal correspondiente. Los sistemas de
doble haz tienen la ventaja de que
cualquier variación en la intensidad de la
Figura 2: Partes básicas de un espectro fuente, la eficiencia de la red, la
fotómetro de absorción
Fuente: http://repositorio.innovacionumh.es/
reflectividad de los espejos, la
fotosensibilidad del detector, etc., afecta

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simultáneamente a los dos haces. En Olsen, E. (2000). Métodos ópticos de


consecuencia, la relación de energía de análisis. Barcelona: Reveté,
los dos haces permanece siempre S.a.
constante (Olsen, 2000).

Anexos
Anexo 1: Espectrofotómetro con
muestra para el análisis de aguas

Figura 3: Diseño de espectrofotómetro de haz


sencillo (A) y doble haz (B).
Fuente: http://repositorio.innovacionumh.es/

Bibliografía: Anexo 2: Estándares de Fe2+ para


análisis espectrofotométrico
Becerro, C. C. (2015).
docs.google.com. Recuperado
el 22 de 10 de 2016, de
https://docs.google.com/docume
nt/d/1PuRXk8QQp73bGDlIjL79o
PpyeaR5T29vD49YdnPKcWE/e
dit
Camúñez, J. (2003). Técnicas
colorimétricas en los análisis
clínicos. Barcelona: Miguel
Servet.
Fuentes , A. (2010). Bioquímica clínica
y patología molecular, Volumen Anexo 3: muestra de agua potable
1. En LEY DE LAMBERT Y para análisis espectrofotométrico
BEER (págs. 300-302). México:
Reverté.
Harris, D. (2007). Analisis químico
cuantitativo: Espectrofotometro.
Barcelona: Reverté, S.A.
Mantes, S. (2013). Uv Quimica.
Recuperado el 21 de Octubre
de 2015, de
http://www.uv.es/gammmm/Sub
sitio%20Operaciones/5%20Volu
metrias.htm

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