Aplicaciones Prácticas de Espectrofotometría de Emisión Molecular

Relación experimental entre la fluorescencia y la concentración

Métodos de análisis Directos: para cuantificar un analito ya fluorescente

Indirectos:
a) por formación de complejos fluorescentes entre el analito y una molécula auxiliar.
b) por reacción química que forma un compuesto fluorescente.
c) por disminución de la fluorescencia (quenching) debido a la presencia del analito.

Los iones de lantánidos y actínidos suelen mostrar fluorescencia. P.ej. Ce, Pr, Nd, U, etc. Ce (III)
λex = 260nm, λem = 350 nm. U(VI) λex = 520nm, λem = 620 nm.
Algunas moléculas de interés biomédico presentan fluorescencia. P. ej. Riboflavina (vitamina B12),
NADH, FAD/FADH2, clorofila, aminoácidos aromáticos, porfina, etc.
Determinación de calcio
• Calceina (λex = 450 nm, λem = 520 nm).
• fura-2, indo-1, fluo-3, fluo-4, Calcium Green-1.
• -Ondas de concentración de Ca2+ en ovocitos, asociados con la meiosis.

La determinación espectrofotométrica de compuestos orgánicos que contienen uno o más de

estos grupos es, por lo tanto, potencialmente factible. También un gran número de especies
químicas inorgánicas absorbe radiación. Hemos mencionado que varios iones de los metales
de transición presentan coloración en disoluciones y, por lo tanto, pueden determinarse
mediante mediciones espectrofotométricas. Además, un gran número de otras especies
químicas muestra bandas de absorción características, incluyendo los iones nitrito, nitrato y
cromato, óxidos de nitrógeno, halógenos y ozono.
Aplicaciones de la fluorimetría en análisis farmacéutico.

Las características de selectividad, sensibilidad y reproductibilidad que posee, la hacen

indispensable en muchos análisis de fármacos o de sus metabolitos derivados. Podemos
agrupar, en tres apartados, los análisis de fármacos por fluorimetría: (a) Compuestos que
muestran fluorescencia nativa previa disolución en un solvente adecuado, por ejemplo, el
sulfato de quinina. (b) Compuestos que desarrollan fluorescencia previo tratamiento
fisicoquímico, así sucede, por ejemplo, con la ampicilina hidrolizada. (c) Compuestos no
fluorescentes que emiten fluorescencia tras la adición de un determinado reactivo o tras
acoplarse a un marcador adecuado; el número de ejemplos de este tipo es prácticamente
ilimitado.
Las anfetaminas se han estudiado fluorimétricamente por condensación con formaldehído en
medio sulfúrico y el pentobarbital en solución alcalina. Los barbitúricos pueden detectarse
por la fluorescencia verdosa que producen cuando se calientan con resorcinol, produciéndose
cambios característicos por la variación del pH del medio.
Morfina, heroína y LSD se diferencian fluorimétricamente con facilidad, lo cual es de
extraordinaria utilidad en estudios toxicológicos.
Las determinaciones fluorimétricas de tiamina y riboflavina constituyen los mejores
ejemplos, ya clásicos, de la aplicación de la fluorimetría al análisis farmacéutico.
En la atmósfera de las ciudades pueden encontrarse numerosos hidrocarburos aromáticos
policíclicos y heterocíclicos, tachados de cancerígenos; son fácilmente analizables, tanto
cualitativamente como cuantitativamente por espectrofluorimetría. Los carbazoles y
acroleínas, a veces presentes en el aire de los núcleos urbanos industrializados, también es
indicado cuantificarlos por fluorimetría.
En la química de medio ambiente, destacar que pesticidas como CoRal, Malvin, Guthion,
Benomyl, ácido tereftálico, Zinophos, etc., se determinan fácilmente por fluorimetría. Está
indicada esta técnica para más de treinta pesticidas organofosforados y clorados.
Por otro lado, especies inorgánicas que son difíciles de detectar y cuantificar por
espectroscopia UV-Visible o por Absorción Atómica se utilizan por fluorescencia.
Adicionalmente a esto los niveles de detección son del orden de partes por billón, cantidades
que por otras técnicas son difíciles de detectar. Estas entre otras son las razones de la
importancia creciente de la fluorescencia molecular.