INFORME DE LABORATORIO

AISLAMIENTO DE ADN GENÓMICO BACTERIANO

1 Botello Salón Omar - 1611242; 2 Márquez Cetina Gabriela - 1611239; 3Marroquín

Erazo Mishell Tatiana - 1611250

Universidad Francisco de Paula Santander, Ingeniería Biotecnológica. Cúcuta,

Colombia.
(Junio 6 de 2018).
1
omarbs@ufps.edu.co; 2gabrielamc@ufps.edu.co; 3erazomishelltatianam@ufps.edu.co

Resumen

Toda la información genética esencial para la vida de la bacteria está contenida en una
única molécula de ácido desoxirribonucleico (ADN) de doble cadena y circular, cerrado
por enlace covalente. Dicha molécula se constituye un cromosoma bacteriano. Muchas
bacterias poseen además ADN extracromosómico, también circular y cerrado,
denominado ADN plasmídico por estar contenido en los plásmidos. Los plásmidos
determinan ciertos rasgos, que no son vitales para la célula, pero que de alguna manera
determinan la capacidad del organismo para adaptarse. Estas moléculas de ADN portan
solo unos pocos genes que en cierto modo están ligados al cromosoma bacteriano, de
forma que se replican en números fijos, junto con los cromosomas. Para el proceso de
cuantificación de ADN se utilizan diversas técnicas, entre ellas se destaca la
electroforesis, la cual es una de las técnicas analíticas utilizadas en la caracterización de
ácidos nucleicos en base a la forma y tamaño de las moléculas.

Palabras claves: ADN, cromosoma bacteriano, plásmidos, célula, electroforesis.

1. Introducción

Toda la información genética esencial resistencia y valor agregado a las

para la vida de la bacteria está contenida
en una única molécula de ácido
desoxirribonucleico (ADN) de doble
cadena y circular, cerrado por enlace
covalente. Dicha molécula se constituye
un cromosoma bacteriano. Muchas
bacterias poseen además ADN
extracromosómico, también circular y
cerrado, denominado ADN plasmídico
por estar contenido en los plásmidos.
Éstos, portan información génica para
muchas funciones que no son esenciales
para la célula en condiciones normales
de crecimiento, sin embargo los
plásmidos les dan características de
bacterias que los portan.
Las moléculas de ADN plasmídico,
adoptan una conformación tipo doble
hélice al igual que el ADN de los
cromosomas, aunque, por definición, se
encuentran fuera de los mismos. Se han
encontrado plásmidos en casi todas las
bacterias.
Hay algunos plásmidos integrativos, es
decir, que tienen la capacidad de
insertarse en el cromosoma bacteriano.
Estos rompen momentáneamente el
cromosoma y se sitúan en su interior, con
lo cual, automáticamente la maquinaria
celular también reproduce el plásmido.
Cuando ese plásmido se ha insertado se
les da el nombre de episoma.
Los plásmidos a menudo contienen
genes o paquetes de genes que le
confieren una ventaja selectiva lo cual
les da la habilidad de hacer a la bacteria,
resistente a los antibióticos. Cada
plásmido contiene al menos una
secuencia de ADN que sirve como un
origen de replicación u ORI (un punto
inicial para la replicación del ADN), lo
cual habilita al ADN para ser duplicado
independientemente del ADN
cromosomal. Los plásmidos de la
mayoría de las bacterias son circulares,
pero también se conocen algunos
lineales, los cuales reensamblan
superficialmente los cromosomas de la
mayoría de eucariotas.
En términos bioquímicos la composición
y estructura de los ácidos nucleicos
bacterianos es la misma que para
cualquier célula. En ellas como en la
mayoría de los seres vivos los ácidos
nucleicos son macromoléculas que se
componen de nucleótidos unidos de
forma covalente, por medio de enlaces
fosfodiester entre los carbonos de las
posiciones 3’ y 5’ de dos residuos de
azúcares adyacentes. Esta estructura
compone un esqueleto de azúcares y
fosfatos constante en toda la
macromolécula los cuales forman una
estructura de doble hélice de ADN. En
esta estructura de doble hélice de ADN se
pueden distinguir pares de nucleótidos o
pares de bases (pb). Estas pb pueden
usarse como unidad de tamaño o
longitud para las moléculas de ADN, por
ejemplo el ADN cromosómico de
Escherichia coli tiene un tamaño de 4,2
millones de pb o lo que es lo mismo de
4.200 kilobases (Kb).
Para el proceso de cuantificación de
ADN se utilizan diversas técnicas entre
ellas se destaca la electroforesis, la cual
es una de las técnicas analíticas
utilizadas en la caracterización de ácidos
nucleicos en base a la forma y tamaño de
las moléculas. La carga neta negativa,
producto de los grupos fosfatos en el
ADN, permite en una migración de las
moléculas hacia el ánodo cuando se
aplica un campo eléctrico; sin embargo,
la matriz, formada por la agarosa (un
polisacárido ramificado de unidades de
D-galactosa y 3,6-anhidrogalactosa
altamente hidrofóbico) en la sal del
tampón, presenta una resistencia al
movimiento. Las moléculas de mayor
tamaño tendrán dificultad para pasar por
los poros de la matriz, quedándose en la
región superior del gel, mientras que los
fragmentos de menor tamaño se
movilizarán con facilidad, alcanzando la
parte inferior del gel. Estos geles se
colocan en la cubeta de electroforesis,
sumergidos en un tampón de pH entre 8
y 9. De esta forma, las moléculas de ADN
o ARN sometidas a electroforesis se
desplazarán al polo positivo esto debido
a que en pH superiores a 5 poseen carga
negativa.
2. Materiales y Reactivos
Materiales y equipos Reactivos
Cultivo bacteriano Buffer TE
(Escherichia coli)
Microcentrífuga SDS 10% (Sodio
Dodecil Sulfato)
Vortex Fenol-Cloroformo
Micropipetas Etanol 100%
Microtubos Buffer carga
Cámara de Buffer de corrida
electroforesis
Transiluminador
3. Procedimiento
Luego de estar conservada la muestra, se
procede a la cuantificación. El gel de agarosa
ya está preparado, agregar la muestra en los
pocos del gel.
4. Resultados

Imagen 1. Electroforegrama grupal

(cultivo bacteriano)

Imagen 2. Electroforegrama del grupo
La presencia de una banda fluorescente
en el carril del gel refleja el crecimiento
bacteriano, es decir la presencia de
material genético en la muestra del
cultivo bacteriano, demostrando que
hubo una extracción del ADN correcta y
un crecimiento optimo del
microorganismo.
El fundamento teórico de la
electroforesis y su adecuado
procedimiento son claves para
desarrollar de manera correcta la técnica
de separación molecular de ácidos
nucleicos (Electroforesis en gel de
Agarosa), ya que un mal manejo de los
insumos o de los equipos puede generar
un error que afecte el resultado final.
Todas las moléculas de ADN tienen la
misma cantidad de carga por masa.
Debido a esto, la electroforesis en gel
separa los fragmentos de ADN
únicamente por su tamaño. La
electroforesis nos permite ver cuántos
fragmentos diferentes de ADN están
presentes en una muestra y cuán grandes
son unos con respecto a otros. También
podemos determinar el tamaño absoluto
de un fragmento de ADN examinándolo
junto a una "escala" estándar de
fragmentos de tamaño conocido.
5. Discusiones
 Al comparar una banda en una
muestra con el marcador de peso
molecular, podemos determinar
su tamaño aproximado en pares
de bases (pb).
 Las bandas obtenidas en el
proceso de electroforesis
determine que se tomó una buena
muestra y se realizó un correcto
procedimiento para determinar
su crecimiento.
 En la última muestra se puede
detallar una pequeña fisura
ocasionada en la muestra en el
momento en que se depositó la
muestra en los pozos.
 En la banda número 3 se puede
observar una banda fluorescente
de bastante espectro
determinándose una corrida
amplia por la cantidad de ADN
obtenido para estudio.
6. Conclusiones
 Una vez terminado el proceso de
extracción de ADN bacteriano, para
su cuantificación se realizó la técnica
de electroforesis usando como
intercalante Gel red. Tras realizar la
observación en el transiluminador se
pudo evidenciar bandas extendidas en
la gran mayoría de las muestras, lo
cual puede indicar una contaminación
por proteínas en el ADN extraído, a su
vez en las 4 primeras bandas se
observó una iluminación excesiva en
el ADN corrido, esto pudo suceder por
una posible presencia de ARN en el
ADN extraído.
 En el proceso de extracción de ADN
bacteriano se utilizó SDS, el cual
 ayuda en la lisis de las células durante en las proteínas, desnaturalizando las
la extracción además actúa mismas, y haciendo que las
desnaturalizando las proteínas. Este moléculas que pierden su forma
compuesto funciona mediante la nativa.
interrupción de enlaces no covalentes

7. Bibliografía

Carmona A; Dodecil Sulfato de Sodio: Revista SCRIBD; Septiembre de 2014

Mosquera, R. V. (2005). Marcadores moleculares y la extracción de ADN. INGRESAR

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Valdezate S, Bou G: Métodos de identificación bacteriana en el laboratorio de

microbiología: ScienceDirect Octubre 2011

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