BACTERIA FITOPATÓGENAS

1. RESUMEN

La pudrición blanda bacteriana, causada por Pectobacterium carotovorum, ocurre en

una amplia variedad de cultivos y es una de las más severas enfermedades poscosecha
de la papa (Solanum tuberosum L.) en el mundo entero. El objetivo del presente
informe fue reconocer los síntomas de pudrición blanda y observar las bacterias
Fitopatógenas (Pectobacterium carotovorum C.) en papa. Para ellos se obtuvieron
papas enfermas con esta bacteria, se trataron las partes infectadas en láminas porta
objetos con un procedimiento lo cual se verá en este informe y 2 tinciones con rojo
Congo y azul de metileno luego se observara en el microscopio electrónico. Dando
como resultado la identificación de Pectobacterium carotovorum en ambas tinciones.
 2. INTRODUCCIÓN

2.1 BREVE HISTORIA DE LA FITOBACTERIOLOGÍA

Las bacterias fueron observadas por primera vez a fines del siglo XVII, por el
microscopista Antoni van Leeuwenhoek que coloco debajo de la lente de un
microscopio una suspensión de material blanco obtenido de sus propios dientes (placa
dental). Sin embargo, fue durante los siglos XVIII y XIX cuando Louis Pasteur (1822-
1895) y Robert Koch (1843-1910) entre otros, realizaron los mayores descubrimientos
sobre bacterias como organismos vivos y su acción, incluido el conocimiento de que
fueran agentes causales de enfermedades. Los primeros estudios que se realizaron con
el propósito de demostrar que las bacterias producían enfermedades en las plantas se
iniciaron alrededor de 1880.

Jan Hendrik Wakker (1859-1927) fue de los primeros en comprobar mediante los
postulados de koch que las bacterias causaban enfermedades en las plantas.

Heinrich Anton de Bary (1831- 1888) y los estudiantes del botánico Hugo de Vries
(1848-1935)estudiaron y describieron en 1883 la enfermedad conocida como
enfermedad amarilla del Jacinto y su agente causal que lo llamaron Bacterium
hyacinthi (actualmente Xanthomonas hyacinthi)

Thomas J. Burril (1839-1916) ofreció las primeras evidencias mediante observaciones

en microscopio y otros estudios que el agente causal de la enfermedad "fuego
bacteriano" que afectaba al manzano y al peral podía ser una bacteria.

Erwin Smith (1854 - 1927) es conocido como el fundador de la Fitobacteriología como

ciencia.

Describió muchas enfermedades producidas por bacterias en plantas, incluyendo su

patología, aislamiento de bacterias en cultivos puros y desarrollo de métodos de
inoculación. Hasta la primera mitad del siglo pasado la Fitobacteriología fue una
ciencia prácticamente descriptiva. Desde la segunda mitad, con el progreso de otras
disciplinas tales como bioquímica, fisiología y principalmente biología molecular, las
investigaciones tendieron cada vez más a explicar la interacción entre las plantas y los
patógenos. A modo de ejemplo, conocer cuáles son las sustancias que produce el
hospedero para defenderse de las bacterias o cuales son las señales que intervienen
en el reconocimiento de los hospederos por el perfeccionamiento y el desarrollo de las
técnicas moleculares. En el año 2000 divulgaron el secuenciamiento completo del
genoma de una bacteria Fitopatógena.

2.2 VISTA MUNDIAL DEL CULTIVO DE PAPA

La papa (Solanum tuberosumL.) ocupa el cuarto lugar entre los diez cultivos de mayor
importancia en el mundo, superada únicamente por el trigo, el arroz y el maíz. Su
producción anual asciende a más de doscientos millones de toneladas que repercuten
en la alimentación de gran parte de la población mundial [Estévez et al., 2001]. En la
producción de papa el cultivo puede afectarse por una serie de factores bióticos y
abióticos que disminuyen el rendimiento y calidad de las cosechas, en especial por la
presencia de daños en los tubérculos. Los factores bióticos de mayor importancia son
la presencia de plagas y enfermedades que generan elevados costos de manejo y
control [Gregory y Andrade, 1996].Las condiciones tropicales y húmedas resultan poco
favorables para el cultivo de la papa debido a que es propenso a infectarse con
numerosos microorganismos patógenos fúngicos y bacterianos, además de las
dificultades que se presentan para conservar los tubérculos. Las enfermedades
bacterianas de la papa provocan generalmente pudriciones húmedas y pueden ser
origina-das por microorganismos pertenecientes a variados géneros [MINAGRI, 2000].
En Cuba la pudrición blanda, causada por Pectobacterium carotovorum, Dickeya
chrysanthemi y Pectobacterium atrosepticum, es una de las enfermedades bacterianas
que se presenta con mayor incidencia en el campo, y las pérdidas durante el
almacenamiento delos tubérculos son considerables [Galán, 2004].
 3. OBJETIVOS
 Reconocer los síntomas de Pudrición blanda
 Observar bacterias Fitopatógenas (Pectobacterium carotovorum C.)

4. MATERIALES Y METODOS

MATERIALES TINCIONES MUESTRAS

Baqueta de vidrio Azul de metileno Tubérculos de papa

Mechero Rojo de Congo

Bisturí

Espátula

Lamina portaobjetos

Alcohol normal/acificado

Agua destilada algodón aceite de inmersión

Microscopio electrónico
MÉTODOS

TINCIÓN: rojo congo

 Limpiar la lámina portaobjetos con detergente o algún desinfectante.

 Colocar 1 gota de colorante de rojo de congo en el extremo de la lámina.
 Tomar una porción del tejido infectado y colocarlo en la gota del colorante
 Con la bagueta de vidrio triturar hasta homogenizar y arrastrar con la bagueta
desde el extremo de la lámina hasta el otro ligeramente eliminando el excedente
 Dejar secar y pasar levemente por el mecho hasta que quedé completamente
seco (fijación)
 Agregar 1 o 2 gotas de alcohol acificado y distribuir por la toda la lamina
 Dejar secar
 Echar una gota de aceite de inmersión
 Observar en el microscopio electrónico a 100X

TINCIÓN: azul de metilo

 Limpiar la lámina portaobjetos con detergente o algún desinfectante.

 Colocar una gota de agua destilada en la lamina
 Tomar una porción del tejido infectado y colocarlo en la gota de agua destilada
 Con la bagueta de vidrio triturar hasta homogenizar y arrastrar con la bagueta
desde el extremo de la lámina hasta el otro ligeramente eliminando el excedente
 Dejar secar
 Colocar 1 o 2 gotas de azul de metilo
 Dejar secar y pasar levemente por el mecho hasta que quedé completamente
seco (fijación)
 Lavar el exceso con agua
 Dejar secar
 Echar una gota de aceite de inmersión
 Observar en el microscopio electrónico a 100X
5. RESULTADOS
6. CONCLUSIONES
 Los síntomas de la pudrición blanda son lesiones acuosas y dañan el tejido
tornándolo color café y se vuelve suave y blando, acompañado de un mal olor
 P. carotovorum es una bacteria gramnegativo, móvil, no esporulante y
facultativamente anaeróbica que pertenece al orden de Enterobacterales dentro
de la clase de Gammaproteobacteria.
Tienen forma de bastoncitos en la tinción de azul de metilo se observar con
mayor claridad se tiñen de azul en un fondo blanco en cambio en la de rojo congo
el fondo es azul las bacterias son blancas
 7. BIBLIOGRAFÍA

Estévez, A.; M. González; M. Hernández; J. Castillo; O. Moré; M. Cordero: «Estrategia

para el desarrollo del mejoramiento de la papa”, Granma Ciencia5:21-30, 2001.

Galán, I.: «Bacillus spp., antagonistas de las bacterias de podredumbre blanda de la

papa». Tesis de Diploma, Facultad de Biología, Universidad de La Habana, 2004.

Ministerio de la Agricultura: «Guía técnica para la producción de papa en Cuba» Instituto

de Investigación Hortícolas Liliana Dimitrova, 2000, pp. 1-37.
 8. ANEXOS

Tubérculos de papa (reconocimiento de síntomas de pudrición blanda)

Imagen 1 papa infectada Imagen 2 parte acuosa y blanda de la zona infectada

Imagen 3 zona blanda infectada Imagen 4 parte central infectada color café
 TINCION: azul de metilo

Imagen 5 trituracion en una gota de agua destilada Imagen 6 colocando la tinción azul de metilo

Imagen 7 fijación con el mechero Imagen 1gota de inmersión para vista en microscopio
TINCION: rojo congo