SISTEMA DE AQUISIÇÃO DE PARÂMETROS

ELETROFISIOLÓGICOS EM
EPITÉLIOS ISOLADOS EM CÂMARAS DE USSING
Alex Sandro Gomes dos Santos, Diego de Oliveira Ruduvalho, Madalena Pereira Costa,
Antônio J. Netto, Nelson Ogawa
{alexcomput, diego.ruduvalho, , mada_olhosdelince, ajnetto}@gmail.com
Resumo. A proposta deste trabalho é desenvolver uma ferramenta
computacional para digitalização dos parâmetros eletrofisiológicos
analisados em epitélio isolados em Câmara de Ussing. Na plataforma
experimental, as informações são capturadas e armazenadas de forma manual
não refletindo no tempo a evolução do processo eletrofisiológico. Sendo
assim, a ferramenta desenvolvida digitaliza e armazena, assim como simula
com fidelidade os sinais analógicos obtidos em experimentos utilizando
preparações biológicas em câmaras de Ussing com finalidades para
pesquisas científicas.

Palavras chave: Câmara de Ussing, Epitélios isolados, Aquisição de dados,Web

services.

Introdução
A metodologia da câmara de Ussing, projetada em meados do século XX pelo
fisiologista dinamarquês Hans Ussing, é uma ferramenta científica por meio da qual
possibilita a medição de potenciais elétricos e correntes de curto-circuito em epitélios
transportadores de íons, como os tecidos isolados obtidos de animais (mamíferos e
anfíbios) de experimentação (estômago, pele e bexiga urinária, por exemplo) [Hug
2002].
A abordagem experimental acima permite, além disso, o de incubar o tecido
epitelial com substâncias químicas (drogas tóxicas, hormônios, medicamentos)
adicionadas diretamente e uniformemente no interior de uma das hemi-câmaras ou em
ambas. Sendo assim, esta técnica possibilita uma análise detalhada dos mecanismos
de ação de fármacos junto a seus receptores ou canais iônicos expressos nas membranas
celulares, associados intimamente a variações nos eventos e parâmetros
eletrofisiológicos, tais como os potenciais gerados nos epitélios e correntes elétricas
transportadas pelos íons através de seus canais. Algumas substâncias ativam e outras
inibem os mecanismos e as vias de transporte iônico e podem ser prejudiciais ou
apresentarem um efeito benéfico ao organismo [Boudry 2005].
Nos experimentos in vitro utilizando câmaras de Ussing, no entanto, encontram-
se dificuldades na aquisição de valores precisos, como correntes fornecidas por uma
fonte de alimentação em série com a preparação biológica e mensuradas no
amperímetro e DDP gerada pelo epitélio e monitorado no voltímetro, assim como no
armazenamento desses resultados. Essas informações são observadas e registradas de
forma manual pelo operador no transcorrer do experimento; sendo assim, não refletem a
realidade e a precisão dos eventos na evolução temporal do fenômeno. A relevância na
compreensão dos eventos fisiológicos a nível molecular e celular em testes de
medicamentos, drogas e hormônios, pode ser significativamente afetada e obscurecida
na ausência de um dispositivo que monitore momento a momento e com precisão, as
variações instantâneas e/ou casuais ocorridas nas propriedades funcionais do epitélio e
as suas conseqüências.
A expectativa é de que a ferramenta desenvolvida nesse trabalho possa
digitalizar e armazenar, assim como simular com fidelidade os sinais analógicos obtidos
em experimentos utilizando preparações biológicas em câmaras de Ussing com
finalidades para a pesquisa. Para o ensino, por sua vez, os acadêmicos poderão usufruir
de uma melhor assimilação e compreensão da dinâmica dos fenômenos relacionados à
regulação e transporte de substâncias através de membranas biológicas.
A estruturação deste trabalho, além desta Seção introdutória segue: a Seção 2
expõe o conceito e características da Câmara de Ussing; a Seção 3 apresenta o conceito,
finalidade e a ferramenta utilizada para a Aquisição de Dados; a Seção 4 apresenta o
desenvolvimento do sistema de aquisição de parâmetros eletrofisiológicos com as
ferramentas utilizadas e sua arquitetura; a Seção 5 expõe os resultados obtidos com os
testes realizados para a validação da ferramenta desenvolvida; Por fim, a Seção 6
apresenta a Conclusão deste trabalho.

Câmara de Ussing
Criada em 1950, pelo fisiologista dinamarquês Hans Ussing, a Câmara de Ussing é uma
ferramenta científica utilizada para medir corrente de curto-circuito, encontrado em
epitélios isolados, epitélios como tecidos obtidos de anfíbios (estômagos, pele e bexiga
urinária) [Hug 2002].
A câmara de Ussing é uma técnica em que o tecido epitelial é coletado e
montado imediatamente como uma folha lisa entre duas hemicâmaras, estabelecendo
um lado luminal e serosal preenchido com soluções fisiológicas para a manutenção dos
mesmos para o estudo fisiológico.
Uma propriedade especial de muitos epitélios é o
desenvolvimento de uma diferença de potencial elétrico, isto é, uma voltagem, entre o
lado apical (externo) e o lado basolateral (interno). Esta diferença de potencial elétrico
transepitelial (DDP) é causada por assimetrias na propriedade da membrana basolateral
e apical, funcionado como transportadores de íons. Esta DDP é a base da técnica
desenvolvida por Ussing. [Diener 2008]. A figura 1 representa a câmara de Ussing que
contém no laboratório de fisiologia do Centro Universitário Unirg.
 Figura 1 – Câmara de Ussing.

Aquisição de Dados
Adquirir dados é obter informação de algum processo físico que necessite ser
mensurado através da medição de suas grandezas [Braga 2008]. Então, a finalidade de
um sistema de aquisição de dados é converter os dados obtidos de uma ou mais fontes,
de forma analógica em informações digitais, para que essas possam ser utilizadas por
circuitos digitais, como processadores, gravadores, etc. Portanto, ao se fazer a
conversão dos dados de analógicos para digitais, é de extrema importância preservar a
precisão e a integridade das informações [Braga, 2005].

Figura 2 – Placa de Aquisição de Dados Easy Lab IO e AG

Para fazer a aquisição dos dados provenientes da Câmara de Ussing, a placa de

aquisição utilizada neste trabalho foi a Easy Lab IO e AG, como ilustra a figura 2. Esta
placa é fabricada pela DMA ELECTRONICS, que projeta e fabrica sistemas para
aquisição e registro de dados com conexão a um computador do tipo PC (Personal
Computer). O Easy Lab é um módulo USB com entradas/saídas digitais flexíveis, saída
PWM, frequencímetro/contador de pulsos e entradas analógicas (somente versão AG)
com conexão USB a um PC ou notebook [DMA Eletronics 2009].

Ferramentas Computacionais
Para o desenvolvimento deste trabalho foram utilizadas as ferramentas descritas abaixo:
Sistema Gerenciador de Banco de Dados MYSQL – gerencia o acesso e
manutenção dos dados em um banco de dados. Possui todas as características que um
banco de dados de grande porte precisa [Milani 2007].
 Java – Linguagem de programação que tem como objetivo construir programas
que possam ser utilizados em qualquer plataforma ou computador [JSK 2004].
Visual Basic (VB) – linguagem de programação e ambiente de desenvolvimento
criado pela Microsft, fornece uma interface gráfica que permite ao desenvolvedor
arrastar e soltar objetos para o programa, bem como escrever manualmente o código do
programa [Tech 2007].
Flex – estrutura de código aberto para a criação de aplicativos Web expressivos
e altamente interativos, implantados de maneira consistente nos principais navegadores,
desktops e sistemas operacionais [Adobe 2010].
Web Services – interface que precisa ser implementada por uma aplicação
independente de linguagem e de sistema operacional para viabilizar a troca de
informações entre aplicações [Moraes et al 2007].
Arquitetura em Camadas (MVC) – divisão de tarefas, onde existem funções,
objetivos e escopos diferentes para o Model (modelo), View (visão ou layout) e
Controller (controlador), facilitando a programação e garantindo que os softwares,
depois de prontos, sejam mais facilmente manuteníveis [Zemel 2010].

Arquitetura utilizada
Para o desenvolvimento deste trabalho foi utilizada a arquitetura do Sistema de Captura
de Dados (CAD), este foi construído possuindo dois ambientes, o primeiro é o Sistema
CAD Desktop e o segundo Sistema CAD Web, as duas plataformas contêm as mesmas
características, no qual a ênfase do projeto é visualizar as informações, como realizar
simulações da Câmara de Ussing. Na figura 3 é apresentada toda a arquitetura do
projeto, onde descreve o fluxo de dados entre os componentes principais do sistema.

Figura 3 - Arquitetura proposta

 Tanto no ambiente desktop como no ambiente web, o usuário poderá visualizar
as informações que foram salvas nos bancos de dados MYSQL local e web, através dos
métodos contidos em uma fachada codificada na linguagem de programação Java, as
fachadas são as portas de comunicação com os bancos de dados. Importante ressaltar
que todo o projeto em questão foi desenvolvido seguindo o padrão de projeto MVC.
Quando iniciar uma experiência, o sistema desenvolvido em Java comunica com
o sistema da placa de aquisição de dados, feito em Visual Basic (VB). Após estabelecer
a conexão, o programa da placa de aquisição se conecta no módulo Easy Lab IO e AG
que faz a captura de corrente e tensão gerados por epitélios contidos em câmara de
Ussing. Realizado isso, as informações obtidas pela placa, o software em VB
armazenam os resultados em um banco de dados local.
Caso o computador hospedeiro do sistema possua conexão com a internet, o
sistema CAD desktop contém um envio de dados em tempo real para o sistema CAD
web, após ativo o ‘envio web’ enviará as informações para Web Services (serviço web)
em tempo real de captura que as salvaram em um banco de dados no servidor.
Após as informações estarem nos bancos de dados, os resultados poderão ser
acessados através de suas fachadas, onde facilitaram aos usuários analisarem com
clareza os valores em tabela ou em gráficos nos sistemas. Além disto, as plataformas
contêm um sistema de visualização em tempo real, no qual os dados são processados e
visualizados em forma de gráficos e em tempo real gerando o desvio padrão e a media
tanto de corrente como de tensão, sendo assim, possibilitaram vários usuários
simultaneamente acompanharem os resultados da pesquisa. A figura 4 é a tela de
pesquisa do sistema CAD desktop.

Figura 4 – Interface Visualização da Pesquisa (Desktop)

Contando que os dados foram salvos com sucesso no banco de dados web, os
mesmos serão acessados através de um back-end (fachada em Java- web), onde as
mesmas estarão disponíveis para análise no front-end (Sistema CAD Web em adobe
Flex Builder 3), a figura 5 ilustra a interface de visualização da pesquisa via WEB.
 Figura 5 – Interface Visualização da Pesquisa (WEB)

Portanto, é importante ressaltar que esses valores podem ser visualizados em tempo real
tanto no Sistema CAD desktop como no Sistema CAD web.

Resultados Obtidos

Validação da ferramenta
Com a necessidade de se validar a ferramenta desenvolvida, foram realizados testes no
laboratório de Biofísica do Centro Universitário Unirg. Foram necessários para a
validação do sistema os seguintes materiais.
 Uma fonte de voltagem de variação de 0v à 24v;

 Um resistor de 563Ω;

 Dois multímetros;

 Placa de aquisição Easy Lab;

 Solução Ringer;

 Epitélio abdominal de um Sapo;

Na figura 6, imagem dos equipamentos utilizados.
 Figura 6 – Equipamentos Utilizados

Foram divididas em 5 etapas para a validação do software, são elas:

Validação da placa de aquisição – validar a placa de aquisição, ou seja,
verificar se a placa está realmente coletando os valores gerados pela fonte de voltagem.
Foram comprovados que realmente os valores correspondiam, e que os valores gerados
na fonte eram os mesmo que estavam sendo salvos no banco de dados. Então foi
montado um circuito elétrico descrito na figura 7, com o intuito de pegar o valor da
tensão e adquirir a corrente elétrica através de resistor R1.

Figura 7 – Circuito-elétrico

Comunicação entre a placa e o sistema CAD - Foi injetado através da fonte

citada acima, o valor de 1v (Volt) em todo o experimento.
Como Pode ser visto na figura 4, o gráfico com nome de tensão foi gerado em
tempo real, com o valor de 1v, o que mostra que realmente, a tensão foi adquirida com
sucesso, pois refletiu valores verdadeiros, foi também validada a corrente gerada em
tempo real. Com a mesma tensão e utilizando a Lei de Ohm, , onde i é o valor
da corrente a ser encontrado, Va é o valor da tensão antes do resistor, Vb é o valor da
tensão após resistor, R é propriamente o valor do resistor, foi possível encontrar a
corrente. Foi utilizado um resistor de 563Ω. O sistema CAD, programador para realizar
esse cálculo, fez a aquisição da corrente de forma correta, levando em consideração de
tensão antes e depois do resistor do resistor e valor do mesmo. Os valores tanto no
gráfico de corrente do Sistema CAD, tanto no multímetro em modo de amperagem,
eram aproximadamente os mesmo, o que validaria a corrente.
Câmara de Ussing com o Sistema CAD - Por seguinte, no terceiro teste foi
adicionado nas hemicâmaras, 5 ml de solução Ringer em cada uma composta por
glicose, cloreto de sódio, cloreto de cálcio e bicarbonato de sódio, e um epitélio da parte
abdominal de um sapo entre elas. Foram acoplado no experimento, a placa de aquisição
de dados e um multímetro em modo de voltagem. Inicialmente pelo sistema. Como essa
voltagem por volta de -28 mv, sendo estes capturados pelo sistema. Como essa
voltagem é gerada a nível epitelial, ela não consegue gerar uma tensão estabilizada, ou
seja, existe uma grande variação dos valores, o que facilmente pode ser acompanhado
na figura 8. Foi então inserida uma droga inibidora de parâmetro eletrofisiológicos
chamada Amilóide, que funciona como bloqueador do canal de sódio. A queda no
gráfico foi referente à inserção desta droga, o que originou uma queda de valores no
gráfico. Ao se retirar toda a droga inserida, foi visto que o epitélio começou novamente
a reagir, consequentemente o gráfico também haveria de subir, justamente o que
demonstra os gráficos apresentados na figura 8.

Figura 8 – Interface Visualização da Pesquisa (Desktop)

 Validação do simulador - A validação do simulador, que consistiu nos
seguintes passos: através da fórmula

, eram considerados os

valores de entrada, funcionando com parâmetros na fórmula. Então eram feito os

cálculos manuais com os mesmo valores inseridos no simulador e comparados com os
resultados gerados pela fórmula. Foi visto que os valores eram os mesmo, e que à
medida que os valores de entrada eram alterados o gráfico também se alterava, sempre
comparando o valor da fórmula com o valor gerado na tela. Desta forma que o
simulador foi testado e validado. Na figura 9 é ilustrada a tela do simulador após os
testes.

Figura 9 – interface do simulador (Desktop)

Validação do sistema web- A figura 10 apresenta a tela de consultar pesquisa,
que possui como campos, o código da pesquisa e o nome de quem à realizou. Na grid é
relatado o código, nome do usuário, descrição do medicamento, descrição do epitélio,
data de realização e o símbolo #, que abre o gráfico referente a aquele experimento, de
todos os já cadastrados no sistema. Ao ser selecionado e clicado duas vezes, são
carregadas todas as informações referentes à pesquisa selecionada, preenchendo com
esses valores, a janela de Pesquisa.
 Figura 10 - Interface do consultar pesquisa (WEB)

A figura 11 apresenta a tela de consultar pesquisa, que possui como campos, o

código e a data da pesquisa, o código e o nome do usuário, o código e o nome do
medicamento e o código e a descrição do epitélio. Todos esses são preenchidos com os
valores da última pesquisa realizada, ao ser clicado no botão INICIAR PESQUISA. O
botão FULL SCREAM maximiza toda a tela, facilitando assim ao usuário, ter uma
melhor visão proporcionando-o um melhor acompanhamento no gráfico. O botão
PARAR fecha a janela em questão. Portanto, os valores foram testados e comparados
com o sistema Desktop, e todos foram validados, sendo assim, validando a ferramenta
web, tanto em tempo real como os de consultas.

Figura 11 - Interface da pesquisa (WEB)

1. Conclusão
Conclui-se que todas as expectativas referentes ao sistema CAD foram alcançadas com
sucesso, pois os objetivos impostos foram realizados. Aquisição em tempo real,
simulador (desktop e web) e o uso de web services também foram acrescentados para
melhoria do sistema. A ferramenta desenvolvida estará auxiliando tanto professores
quanto alunos de forma dinâmica, fácil e concreta em seus estudos, através de gráficos
ou de simulações, o que antes era realizado de forma manual e sem precisão. Existe
também a possibilidade de ter acesso a um experimento já realizado ou de acompanhar
tudo de casa, com o uso de internet em tempo real de execução do experimento. Com a
utilização do simulador na aplicação resultará diminuição de gastos para a instituição,
tanto para compras de reagentes químicos, quanto para a compra de animais para
experiências. Portanto, sistema CAD propiciou uma melhora significativa na aquisição
dos valores dos parâmetros eletrofisiológicos em Câmara de Ussing.

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