Criterios de funcionalidad probiótica de la cepa bacteriana T3 proveniente

del laboratorio GRUBIODEQ - Universidad de Córdoba, Colombia

Mauricio Begambre Hernández1
1
Maestria en Biotecnologia, XI cohorte; Universidad de Cordoba – Colombia.
maurobega@gmail.com; 310 626 3663.

Resumen
Los probióticos son microorganismos importantes en el metabolismo humano, pero
el hábitat de acción es extremo (tracto gastrointestinal) por lo se requiere su
viabilidad en medios adverso; con el objetivo de evaluar el potencial probiótico de la
cepa bacteriana T3 proveniente del laboratorio GRUBIODEQ – Universidad de
Córdoba, se le aplicaron cinco criterios de funcionalidad: tolerancia a medios ácidos,
tolerancia a sales biliares, tolerancia al cloruro de sodio, resistencia a altas
temperaturas y potencial fermentativo; se halló una alta resistencia de la cepa T3 a
medios ácidos y buen crecimiento a alta concentración de NaCl. En conclusión,
hubo crecimiento en medios hostiles con un reducido número de unidades
formadoras de colonias (UFC) en medios con alta concentración de sales biliares,
alta temperatura, pero, con un buen potencial en medios con pH ácidos y con alta
concentración de NaCl.
Palabras claves: potencial probiótico, Bacillus, tolerancia a NaCl.
Abstract
Probiotics are important microorganisms in human metabolism, but the habitat of
action is extreme (gastrointestinal tract) so its viability is required in adverse
environments; In order to evaluate the probiotic potential of the bacterial strain T3
from the GRUBIODEQ - University of Córdoba laboratory, five functional criteria
were applied: tolerance to acid media, tolerance to bile salts, tolerance to sodium
chloride, resistance to high temperatures and fermentative potential; A high
resistance of strain T3 to acidic media and good growth at high concentration of NaCl
was found. In conclusion, there was growth in hostile environments with a small
number of colony forming units (CFU) in media with high concentration of bile salts,
high temperature, but with a good potential in media with acidic pH and high
concentration of NaCl.
Key words: probiotic potential, Bacillus, tolerance to NaCl.

Introducción modificando la microbiota del huésped,

Los probióticos hacen parte del
subgrupo de alimentos funcionales que
además de aportar nutrientes tienen
efectos favorables sobre el organismo
hospedero, estos microorganismos
pueden actuar directamente
proporcionando metabolitos generados
durante su proceso fermentativo,
consumiendo compuestos perjudiciales
(lactosa, colesterol) al hospedero, entre
otros (Zans, et al. 2003).

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En los humanos, generalmente los
probióticos corresponden a bacterias
lácticas y bifidobacterias que se
desarrollan en el tracto gastrointestinal,
el cual presenta condiciones físicas y
químicas que imposibilitan el desarrollo
bacteriano, por tanto, las cepas
bacterianas con potencial probiotico
deben demonstrar ciertos criterios para
ser funcionales en el interior del
huésped (Rivas y Gonzales, 2006).
Los principales criterios de
funcionalidad corresponden a:
resistencia frente a ácidos, puesto que
en el estómago el pH es de 1,5 y el
alimento puede durar 90 minutos;
tolerantes a sales y ácidos biliares
presentes en la primera parte del
intestino delgado; mantener la viabilidad
bajo un alto rango de temperatura,
desde la refrigeración, la producción y
mantenimiento en el huésped (Rivas y
Gonzales, 2006).
En vista de los requerimientos que los
microorganismos necesitan para ser
administrados como probióticos se
evaluaron los criterios de funcionalidad
de la cepa T3 del genero Bacillus
presente en el Laboratorio
GRUBIODEQ de la Universidad de
Córdoba.
Metodología
Se inoculó 1 ml de la cepa T3 del genero
Bacillus donada por el laboratorio
GRUBIODEQ de la Universidad de
Córdoba en 5 mL de medio según Man,
Rogosa y Sharpe (MRS) contenido en
tubos de ensayos, al cual, para las
pruebas de tolerancia a Ph, tolerancia a
sales biliares, fermentación de la
glucosa y de temperatura se le adicionó
una capa de aceite mineral (Figura 1)
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Figura 1: Montaje de los tratamientos
El diseño experimental constó de 5
pruebas con dos tratamientos sin
replicas (Tabla 1), en la cual, las
variables a evaluar fueron; la
contabilización de células viables, por
conteo en placas con medio MRS
incubadas a 37°C por 24h: tolerancia a
ácidos, tolerancia a sales biliares,
tolerancia a alta temperatura; la
presencia de gases en la campanilla
producto de la fermentación de la
glucosa y medida de la densidad óptica
(DO) de los cultivos inoculados en los
medios con alta concentración de NaCL.
A diferencia de los tratamientos de
temperatura, los cultivos se incubaron a
37°C.
Además, se determinó la presencia de
organismos probióticos en una pastilla
facilitada por el profesor Cesar
Betancourt PhD (C); se tomó una
pequeña fracción de la pastilla y se
diluyó en un mililitro de agua estéril del
cual se inoculo por agotación 100 µL en
una placa con medio MRS, a los
organismos que crecieron se les aplico
tinción de Gram.
 Tabla 1: Diseño experimental de la prueba de funcionalidad de la cepa bacteriana T3.
Criterios de funcionalidad Tratamientos Medición
Tolerancia a pH pH : 3 y 7 Conteo de células viables
Tolerancia a sales biliares Concentración: 0,05 y 0,3 % Conteo de células viables
Tolerancia a NaCl Concentración: 2 y 7% Densidad Óptica
Fermentación de glucosa Con y sin glucosa adicionada Presencia de gases
Temperatura 30 °C y 43 °C Conteo de células viables

Resultados y discusión contrastando con el trabajo de Jurado-

En la tabla 2 se observa la disminución de
unidades formadoras de colonias en
ambientes de mayor estrés: pH en 3, sales
biliares al 3% y temperatura a 43°; menos para
la medida realizada con el espectrofotómetro,
en la cual a mayor concentración de NaCl
existe una mayor concentración de bacterias,
datos que se oponen a los datos de Sharma
et al. 2013, en donde, la concentración de
cloruro de sodio es inversamente proporcional
a la densidad óptica de los medios de cuatro
Lactobacillus, advirtiendo una posible
tolerancia de la cepa T3 a ambientes con alta
concentración de NaCl.
Gámez, et al. (2014) en el que el pH no
afectaba el crecimiento de los Lactobacillus,
principal obstáculo para la supervivencia del
probiótico en el tracto intestinal.
En la prueba de la fermentación de glucosa, el
medio viró a amarillo indicando que la cepa T3
consume hidratos de carbono y acidifica el
medio, además, la presencia de gas en la
campanilla indica la producción de CO2 y que
la bacteria es fermentadora (Figura 2).

Tabla 2: Contabilización de UFC y DO de los

tratamientos
Criterios de
Tratamiento UFC/mL
funcionalidad
pH 3 4x107
Tolerancia a pH
pH 7 2,1x108
Tolerancia a sales 0,05% 2,9x108
biliares 3% 1,3x107
30 °C 2,2x108 Figura 2: Detección de la fermentación de la
Temperatura
43 °C 2x107 glucosa por la cepa T3.
Concentración de NaCl 2% 1,996
(Densidad óptica) 7% 2,32
Luego de 24h de incubación de la pastilla con
probióticos se observaron colonias pequeñas
de bordes lisos, similares a lo reportado por
Dentro de los criterios de funcionalidad, la
Llamccaya (2016) en el aislamiento e
cepa T3 presenta una buena tolerancia a pH
identificación de Lactobacillus de Yogurt
acidos (Tabla 2), puesto que, comparado con
comercial; además, bajo tinción de Gram se
las demás condiciones de estrés, para este
observaron bacilos de color azul violeta
tratamiento se contabilizó un mayor número
indicando tinción Gram positivo (Figura 3).
de Unidades formadoras de colonias,

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 A B
Figura 3. Crecimiento de bacterias a partir de la pastilla con probioticos. A: en placa con
medio MRS; B: con tincion de Gram aumento 100X
Conclusión
La cepa bacteriana T3 presenta buenas
características funcionales en condiciones de
alta concentración de NaCl y tolerante a pH
ácidos; y hubo crecimiento en medios hostiles
con sales biliares y alta temperatura.
Conforme a la verificación de presencia de
probióticos en la pastilla facilitada por el
profesor Cesar Betancurt PhD (C), esta
contenía bacilos Gram positivo con estructura
en placa similares a colonias de Lactobacillus.
Recomendaciones
Se debe evaluar la tolerancia a sales biliares
y altas temperaturas de la cepa T3 para
reconfirmar el potencial probiotico.
Agradecimiento
Este trabajo fue realizado en el laboratorio
GRUBIODEQ – de la Universidad de
Córdoba, quien brindó la cepa bacteriana T3,
además facilitó los materiales, reactivos y
personal especializado para desarrollarlo.
Agradecer al profesor Cesar Betancurt PhD
(C) por la pastilla con probióticos.
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