Flavonoides PDF

UNIVERSIDAD CATÓ L I C A L O S Á N G E L E S DE
CHIMBOTE
Ciencias de la salud
Escuela DE FARMACIA Y BIOQUIMICA
TESIS PARA O PT AR EL T ÍTULO PROFESIONAL

DE QUÍMICO FARMACÉUTICO
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE in vitro DE FLAVONOIDES

TOTALES DE HOJAS DE Sambucus peruviana H.B.K. “sauco”
PROVENIENTE DEL CASERIO DE PARRAPOS, SINSICAP-
OTUZCO, 2013
AUTOR: Caja Ruiz Miguel Á ngel

Bachiller en Farmacia y Bioquímica
ASESOR: Mg. Farm: Mayer Luis Ganoza Yupanqui
TRUJILLO – PERU
2013
UNIVERSIDAD CATÒ L I C A L O S Á N G E L E S DE CHIMBOTE FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
Titulo
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE in vitro DE

FLAVONOIDES TOTALES DE HOJAS DE
Sambucus peruviana H.B.K. “sauco”
PROVENIENTE DEL CASERIO DE
PARRAPOS, SINSICAP-OTUZCO, 2013
Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

Introducción
Señores miembros del Jurado Calificador:
Presento ante Ustedes este fruto del esfuerzo intelectual personal plasmado en el
informe de tesis para el título profesional.
En las páginas siguientes planteo la resolución de un problema de investigación

que espero contribuya al cimiento de las Ciencias Farmacéuticas en nuestra
comunidad. Este informe contiene las bases teóricas sobre las cuales se sustentan
los resultados y las conclusiones finales de la investigación cuya implementación se
convertirá en mi objetivo personal durante mi vida profesional.
Espero que el rigor científico metodológico del informe cumpla con los requisitos
exigidos por la Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica, el Reglamento de
Investigación y los documentos técnicos asociados vigentes de la universidad
Católica Los Ángeles de Chimbote.
Solicito de Ustedes la revisión escrupulosa del documento y la exposición del mismo

que me conducirá a la obtención del Título Profesional de Químico Farmacéutico.
Trujillo, enero del 2014
Caja Ruiz Miguel Ángel

Hoja de firma del jurado y asesor.
FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD
ESCUELA FARMACIA Y BIOQUÍMICA
ACTA N°.....-2014 DE SUSTENTACIÓN DEL INFORME DE TESIS
Siendo las……del día …..de abril……, y estando conforme a lo dispuesto en el

Reglamento de Promoción y Difusión de la Investigación Científica- ULADECH
– CATÓLICA, en sus Artículos 48º y 52°, los miembros del Jurado de Sustentación
de la Escuela Profesional de Farmacia y Bioquímica conformado por:
Q.F. Jaime Flores Ballena Presidente
Mg. Q.F. Mayer Ganoza Yupanqui Secretario
Mg. Q.F. Edwin Pomatanta Plasencia Miembro
Se reunieron para evaluar la sustentación del informe de tesis titulado:
CAPACIDAD ANTIOXIDANTE in vitro DE FLAVONOIDES TOTALES DE

HOJAS DE Sambucus peruviana H.B.K. “sauco” PROVENIENTE DEL
CASERIO DE PARRAPOS, SINSICAP-OTUZCO, 2013
Presentado por: Miguel Ángel Caja Ruiz
Código del estudiante (tesista) 1808072013
Asesorado por: Asesor: Mg. Q.F. Mayer Luis Ganoza Yupanqui, Luego de la
presentación del autor y las deliberaciones, el Jurado de Sustentación
acordó:.............................. por ............................................... la tesis, con el
calificativo de.............................. quedando expedito/a el/la bachiller para optar el
Título Profesional de Químico Farmacéutico
Los miembros del Jurado de Sustentación firman a continuación, dando fe de las

conclusiones del Acta:
Grado y Nombre Q.F. Jaime Flores Ballena

PRESIDENTE
Grado y Nombre Mg. Q.F. Mayer Ganoza Yupanqui Grado y Nombre Mg. Q.F. Edwin Pomatanta Plasencia
SECRETARIO MIEMBRO

DEDICATORIA
Al Señor Nuestro Padre:

DIOS
Gracias por toda la dicha de tus bendiciones a lo largo de

nuestra vida.
Gracias por ser nuestro guía y darnos la fortaleza y

perseverancia para seguir adelante y vencer todos los obstáculos
a lo largo de nuestra carrera profesional.
Permite Señor, que el resto de nuestra vida, no lo vivamos en

vano y siempre podamos compartir contigo y con nuestros
semejantes, el triunfo y la alegría de vivir.
Miguel

A mí querida Madre
Ángela
Gracias por darme la vida, por estar siempre conmigo y por creer en
mí. Que con tu amor, dedicación, cuidados y trabajo supiste guiarme
por la vida para lograr mis objetivos, sin tu apoyo no
sería quien soy.
Te admiro por tus enseñanzas, tu fortaleza, inteligencia, dedicación y
ternura, me has enseñado las cosas más importantes en la vida y son
las que ahora rigen mi caminar...
Te quiero mucho mamita.
A mí querido Padre
William
Por tu amor, apoyo, cariño y consejos, por ser un ejemplo en mi vida y
mostrarme que hay hombres íntegros, correctos y con mística de servicio,
es la mejor herencia que un hijo puede recibir, me siento muy orgulloso
de ser tu hijo.
Gracias por todo querido papá, por protegerme y guiarme, y por
creer siempre en mí…
Te quiero mucho papito

A mis queridos hermanos

María, William
Gracias hermanitos por creer siempre en mí. Por su amor, cariño, apoyo
y consejos; se que estamos en un momento difícil, pero sé que unidos siempre
superaremos las adversidades de la vida y con la fe en Dios todo se logra.. Los
quiero mucho hermanitos
Se que siempre podré contar con ustedes, en las buenas y en las malas.
Los quiero mucho con inmenso amor…
Miguel
A mí amada hija
Remy Jocelyn
Agradezco infinitamente a dios de haberme dado la oportunidad de ser padre y de
tener la bendición, de un ser tan maravilloso como tú, Hija mía, tu eres mi motor y
motivo de mi vida, te amo con todo mi corazón.
Mi triunfo es tu yo más que mío…
A ti
Dina Mi estrella divida
Muchas gracias por tu inmenso amor y tu comprensión, también eres participe de

este logro que llega en mi vida y del gran regalo que dios nos dio nuestra hija
También doy gracias a dos Ángeles, que me iluminan desde el cielo, quienes son
mis dos abuelitas
Peregrina, Zoila
Quienes han sido parte del inicio de mi vida, de mi niñez y mi adolescencia, de

quienes aprendí a valorar la vida y el respeto hacia los demás…
También Doy Gracias a Mi abuelito

Gonzalo Ruiz Rojas
De quien, todavía puedo escuchar sus consejos y sus experiencias en la vida...

Un agradecimiento especial a mi asesor:
Mayer Luis Ganoza Yupanqui
Gracias por su paciencia, por sus sabios consejos brindados, por asesorarme y
guiarne, ya que sin su apoyo jamás hubiéramos realizado y concluido esta tesis de
Investigación, que dios lo bendiga con salud y amor en su hogar…
Muchas gracias por todo…
Un Gran Agradecimiento enorme, a un buen amigo y un gran creyente de

nuestro Señor Jesucristo
David Ruidías Romero
Aquí en le agradezco infinitamente por su apoyo en la parte de la espectrometría en

la tesis.
El Gran Agradecimiento a Mis Buenos Amigos
Por estar ahí cuando más los necesite que dios los bendiga siempre…
- Agusto Calderón Guerrero
- Dennis Sobrado Quesada
- Erik Henry Pinillos Alayo
- Freddy Minchola Rodríguez
- Kevin Cosavalente Burgos
- José Olivares Vega
Y también, un agradecimiento a todos los docentes y amigos de la Escuela de

Farmacia y Bioquímica de Universidad Católica los Ángeles de Chimbote Trujillo...
Gracias por todos los profesores.

ÍNDICE
RESUMEN
ABSTRACT
I. INTRODUCCION ................................................................................ 1
II. MATERIAL Y METODO.................................................................... 5
2.1. MATERIAL ............................................................................... 5
2.2. METODO................................................................................... 6
1.3. ANALISIS ESTADISTICO DE DATOS .............................. 26
III. RESULTADOS ................................................................................. 27
DISCUSION ............................................................................................. 30
IV. CONCLUSIONES .......................................................................... 32
V. RECOMENDACIONES ................................................................ 33
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ........................................... 34
ANEXOS ................................................................................................... 40
ANEXO II ................................................................................................. 54

RESUMEN
El objetivo del presente trabajo fue evaluar la capacidad antioxidante in vitro de las
hojas de Sambucus peruviana H.B.K.,” frente al 2, 2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH).
Preparando un extracto fluido con las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. “sauco”,
procediendo a realizar el tamizaje fitoquímico, comprobando la presencia de
flavonoides. Así mismo se purificó y cuantificó los flavonoides totales obtenidos del
extracto fluido mediante el método descrito por Kostennikova Z. adaptado por la
Cátedra de Farmacognosia y Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y
Bioquímica de la UNT a 248 nm, encontrándose un porcentaje de 0.448 %
flavonoides totales expresados como quercetina. Para la capacidad antioxidante se
empleo el método desarrollado por Brand – Williams, obteniendo 11.5%, 64.3%
resultados expresados en porcentaje de captura de DPPH.
Donde se observó que mientras mayor es la concentración de la solución de
flavonoides mayor es este porcentaje de captura.
Palabras claves: Sambucus peruviana H.B.K., antioxidante, DPPH




























ABSTRACT
The aim of this study was to evaluate the in vitro antioxidant capacity of leaves of
Sambucus peruviana HBK, "compared with 2, 2-diphenyl-1-picrylhydrazyl(DPPH •).
Preparing a fluid extract from the leaves of Sambucus peruviana HBK "Elder",
proceeding to perform phytochemical screening, testing for the presence of
flavonoids. Likewise purified and quantified total flavonoid extract fluid obtained by
the method described by Z. Kostennikova adapted by the Department of
Pharmacognosy and pharmacobotany Faculty of Pharmacy and Biochemistry of the
UNT to 248 nm, being a percentage of 0.448% total flavonoids expressed as
quercetin. For the antioxidant capacity was employed the method developed by
Brand-Williams, obtaining 11.5%, 64.3%Results expressed as percentage of DPPH •
capture.
Where it was observed that the higher is the concentration of the solution increased
the percentage of flavonoids is captured.
Keywords: Sambucus peruviana HBK, antioxidant, DPPH •

I. INTRODUCCIÓN
En los últimos años muchos países han desarrollado estudios sobre plantas
medicinales que han logrado tener gran importancia médica. El Perú, considerado un
país muy diverso en su flora silvestre, es considerado entre los 12 países de mayor
diversidad biológica sobre la tierra, conocidos como países mega diversos tanto por
el número de especies y de recursos genéticos como por la variedad de ecosistemas
Cada una de estas especies medicinales presenta uno o varios compuestos a los
cuales se le atribuye la actividad terapéutica, pero se ha visto que la actividad
resultante de la administración de la planta o droga (parte de la planta con actividad
terapéutica) completa es distinta a que si se aplican los componentes o principios
activos por separado. 1, ,2,3,4,5
Entre las innumerables plantas con propiedades terapéuticas de nuestro
país, el Sambucus peruviana H.B.K.“sauco”, es una planta muy rica en flavonoides
con grandes propiedades para la medicina. Este árbol se cultiva en las partes altas de
los Andes (Perú, Bolivia y Norte de Argentina). 6,7
El sauco es un árbol de unos 12 metros de alto, con ramas glabras y flores
blancas perfumadas, ornamental por sus flores y frutos y que crece entre los 40 –
3900 m.s.n.m. prefiere suelos profundos, de textura variable; tolera pedregosidad
baja a media y requiere buen nivel de humedad. 8
El cocimiento de las flores se emplea como, antirreumático, antiséptico,
depurativo, sudorífico y contra la viruela, así como también en las inflamaciones de
Caja Ruiz Miguel Á ngel 1 Farmacognosia y Farmacobotánica

la vejiga y la próstata; mientras que la infusión como antiasmático. El cocimiento de
las hojas se emplea como galactógeno y antiséptico bucal. La infusión de la raíz en
hidropesía, el cocimiento de los frutos como colutorios y en las afecciones de la
boca. 8,9,10
Los frutos son bayas esféricas o globosas, negras, de 5 – 6 mm. De diámetro;
semillas pequeñas, en número de 3 – 6 por fruto. Los frutos son jugosos, de sabor
agradable y sabor agridulce; se consumen al estado fresco; sirviendo también para
hacer mermeladas. Se propaga vegetativamente. 9,10
Estudios fitoquímicos revelan la presencia de flavonoides que tienen
propiedades antiinflamatorias. 8, 9
Los antioxidantes son compuestos que luchan con los radicales libres y ha
sido demostrado que inhiben la oxidación del ADN, lo cual produce algunos
canceres. Los antioxidantes en general son sustancias que pueden inhibir o retardar el
proceso oxidativo, interfiriendo con la iniciación o propagación de las reacciones en
cadena de la auto-oxidación. Por eso investigaciones recientes han puesto de
manifiesto la gran importancia de las sustancias con actividad antioxidante, como los
flavonoides, para coadyuvar el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas; de
naturaleza crónica como, la diabetes, hipertensión, dislipidemias y diversos procesos
patológicos como el cáncer. 11,12

Los flavonoides pertenecen a un grupo de compuestos naturales arreglados
bajo un sistema C6-C3-C6, en el cual dos anillos aromáticos llamados A y B están
unidos por una unidad de tres carbonos que pueden o no formar un tercer anillo, que
en caso de existir es llamado anillo C. Se conoce como 10 clases de flavonoides
(Chalconas, flavonas, flavonoles, flavanonas, flavanonoles, antocianidinas,
catequinas, epicatequinas, auronas, isoflavonoides, pterocarpanos, rotenoides, etc)
los cuales pueden encontrarse como aglicona o bajo la forma de glicósidos con una o
tres unidades de azúcar, generalmente en los carbonos 3 y/o 7, siendo los azucares
más comunes la glucosa, galactosa, ramnosa, xilosa y arabinosa. 11, 12, 13
En su relación con el hombre, los flavonoides actúan como antioxidantes
naturales, es decir, tienen la capacidad de secuestrar y neutralizar los radicales libres,
especies químicas muy reactivas que fácilmente conducen a reacciones
incontroladas, resultando en diversas formas de daños oxidativos sobre las
moléculas, organelas y diversas células y tejidos; causando su degeneración,
envejecimiento, pérdida de su función y otras formas importantes de daño celular. 11,

14, 15
Existen trabajos realizados en la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la
Universidad Nacional de Trujillo sobre la capacidad antioxidante de diversos
extractos de drogas vegetales:Rojas y Rumay. 2009 (Piperaduncum – Cajamarca);
Bartolo y Chávez. 2010 (Zea mays L.- Cajabamba); Díaz y Rodríguez. donde se
comprueba la capacidad antioxidante de los diferentes compuestos fenolicos.
Por todo lo expuesto anteriormente, el presente trabajo no solo pretende
demostrar la actividad antioxidante in vitro de los flavonoides totales obtenidos de la

hoja de Sambucus peruviana H.B.K, sino canalizar la posibilidad de su utilización
en la prevención de enfermedades producidas por radicales libres, contribuyendo de
esta manera a fomentar estudios científicos que demuestran su actividad antioxidante
in vivo.
Objetivo General
 Determinar la capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales extraído
de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. “sauco”. Proveniente del caserío de
parrapos, del distrito sinsicap, provincia otuzco - La Libertad, 2013?
Objetivos Específicos:
 Determinar preliminarmente la fitocomposición de las hojas de Sambucus
peruviana H.B.K. “sauco”. Proveniente del caserío de Parrapos, del Distrito
Sinsicap, Provincia Otuzco - La Libertad, 2013.
 Cuantificar flavonoides totales de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K.
“sauco”. Proveniente del caserío de Parrapos, del Distrito Sinsicap, Provincia
Otuzco - La Libertad, 2013.

II. MATERIAL Y MÉTODO
2.1. MATERIAL
2.1.1. MATERIAL DE ESTUDIO
50 Kg de hojas de Sambucus peruviana H.B.K “sauco” proveniente
del caserío de parrapos, sinsicap-otuzco, 2013. Departamento de la
Libertad.
2.1.2. MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS
2.1.2.1. Materiales de Laboratorio
De uso común en el laboratorio de Farmacognosia
2.1.2.2. Equipos
Equipo de Lixiviación
Balanza Triple Brazo 700/800 series OHAUS US PAT. Nº 2, 729,439.
Balanza Analítica OHAUS GA 200 (precisión 0.0001 g)
Espectrofotómetro THERMO modelo GENESSIS 10 UV
Estufa Eléctrica Memmert TY U40
Calentador de agua de placa caliente Marca JY
Bomba al vacío Thomas ScientificMod 5KH33DN68
Tamiz Resh

2.1.2.3. Reactivos y solventes
- 2,2-difenil-1-picrilhidrazil (DPPH) marca Sigma
- Acido sulfúrico 98% de pureza. Marca Merck
- Agua destilada.
- Alcohol etílico de 96º GL.
2.2. METODO
2.2.1. Recolección
Se recolectó hojas maduras de Sambucus peruviana H.B.K “sauco”
proveniente del caserío de parrapos, sinsicap - otuzco, 2013.
Departamento de la Libertad. (7.8° sur latitud, 78.07° Oeste longitud y
3072 m.s.n.m.), de una misma población y de la parte aérea de la
planta con el fin de preservar la especie.
2.2.2. Selección
Una vez realizada la recolección de la muestra se procedió a la
selección de la materia vegetal con el objetivo de realizar una
separación de las partes deterioradas y evitar la mezcla con otra especie.
2.2.3. Clasificación Taxonómica
La especie Sambucus peruviana, nativa de nuestro país, de acuerdo al
sistema de clasificación filogenética de Adolph Engler publicada en la
XII Edición del Syllabus DER PFLANZENFAMILIEN del año 1954 –
1964, es de la siguiente manera:

DIVISIÓN……………………..MAGNOLIOPHYTA
CLASE…………………………MAGNOLIOPSIDA
SUBCLASE……………………METACHLAMYDEAE
ORDEN………………………..DIPSACALES
FAMILIA……………………...Caprifoliaceae
GÉNERO………………………Sambucus
ESPECIE………………………Sambucus peruviana
2.2.4. Desecación
Para evitar cualquier tipo de alteración que pudiera afectar a la
composición de la planta, la droga debe ser convenientemente desecada.
Las hojas seleccionadas se colocaron sobre papel kraft en un lugar
fresco y seco durante 24 horas. Luego fueron pasadas a bolsas hechas
de papel kraft y se llevó a estufa a una temperatura de 40 ºC, durante 48
horas.
2.2.5. Molienda y Tamización
Una vez desecado el material vegetal, se procedió a su molienda en
mortero de acero hasta tamaño de partícula adecuado. El material así
pulverizado, se tamizó (tamaño partícula 2 mm), y se almacenó
adecuadamente en frascos ámbar en un lugar sin humedad y luz directa,
hasta su posterior utilización.

2.2.6. Preparación del extracto fluido de sauco
Procedimiento:
Se pesaron 400 g de droga vegetal siendo estos posteriormente
humectados con alcohol de 70° c.s. Se colocó la droga humectada en el
equipo de percolación con cantidad suficiente de alcohol de 70°
dejándose macerar por un periodo de 24h. Pasado el periodo de
maceración se procedió a percolar a velocidad constante de 10-20 gotas
/min el equivalente al 75% del extracto fluido Total (300 mL),
guardándolo y almacenándolo en frasco ámbar, posteriormente se
recogió el exceso de extracto y se concentró en cantidad equivalente al
25% (100 mL) lo cual se unió con la primera porción obteniendo un
extracto madre de 400 mL.
2.2.7. Tamizaje Fitoquímico del extracto fluido: “Prueba de la Gota”17
Procedimiento: Se Evaporaó el solvente del extracto fluido, y el
residuo se redisolvió en los solventes (diclorometano, etanol y agua,)
para la realización de los ensayos, y la determinación cualitativa de los
fitoconstituyentes.

1) Extracto de Diclorometano
a. Ensayo de Sudan:(Permite reconocer la presencia de compuestos
grasos).
En un tubo de ensayo se colocó una alícuota del extracto, se le
añadió 1 mL de una solución diluida en agua del colorante Sudan
III. Se calentó en baño de agua hasta evaporación del solvente.
La presencia de compuestos grasos se consideró positiva si
aparecen gotas o una película coloreada de rojo en el seno del
líquido o en las paredes del tubo de ensayo.
b. Ensayo de Dragendorff: (Permite reconocer alcaloides)
En un tubo de ensayo se colocó una alícuota del extracto está se
mezclo con un solvente orgánico, se evaporó en baño de agua y el
residuo se redisolvió en 1 mL de ácido clorhídrico al 1 % en agua.
Con la solución acuosa ácida se realizó el ensayo, añadiendo III
gotas del reactivo de Dragendorff, si hay opalescencia se considera
(+), turbidez definida (++), precipitado (+++).

c. Ensayo de Mayer:
Se realizó según la forma descrita anteriormente, hasta obtener una
solución acuosa-ácida. Se añadió luego, una pequeña cantidad de
cloruro de sodio en polvo, se agita y filtra. Se agregó III gotas de la
solución reactiva de Mayer, se considero (+) si se observó:
opalescencia (+), turbidez definida (++), precipitado coposo (+++).
d. Ensayo de Wagner:
Se comenzó al igual que en los casos anteriores de la solución
acosa-ácida, se añadirán III gotas del reactivo y los resultados se
clasificaron de la misma forma.
e. Ensayo de Hager:
Se comenzó igual que en los casos anteriores de la solución acuosa-
ácida, se añadieron tres gotas del reactivo y los resultados se
clasificaron de la misma forma.
f. Ensayo de Baljet: (Permitió reconocer compuestos con
agrupamiento lactónico, en particular Coumarinas aunque otros
compuestos lactónicos pueden dar positivo al ensayo)
Se evaporo el solvente en baño de agua y redisolvió en la menor
cantidad de alcohol (1 mL).

En estas condiciones se adicionó 1 mL del reactivo, considerándose
un ensayo positivo la aparición de coloración o precipitado rojo
(++ y +++) respectivamente.
g. Ensayo de Liebermann-Burchard: (Permite reconocer presencia
de triterpenos y/o esteroides, por ambos tipos de productos poseer
un núcleo del androstano, generalmente insaturado en el anillo B y
la posición 5-6.).
Se tomó una la alícuota del extracto de diclorometano y se llevó a
evaporar en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1 mL de
cloroformo.
Se adicionó 1mL de anhídrido acético y se mezcló bien. Por la
pared del tubo de ensayo se dejara resbalar II a III gotas de ácido
sulfúrico concentrado sin agitar. Un ensayo positivo se reconoció
por un cambio rápido de coloración:
-Rosado-azul muy rápido.
-Verde intenso-visible aunque rápido.
-Verde oscuro-negro-final de la reacción.
Muy pocas veces puede observarse el primer cambio. El tercer
cambio generalmente ocurre cuando el material evaluado tiene
cantidades importantes de estos compuestos.

2) Extracto Etanólico
a. Ensayo de Catequinas: Se tomó I gota de la solución alcohólica,
con la ayuda de un capilar y se aplicó sobre papel filtro. Sobre la
mancha se aplicó una solución de carbonato de sodio. La aparición
de una mancha verde carmelita a la luz UV, indica un ensayo
positivo.
b. Ensayo de resinas: Para detectar este tipo de compuesto, se añadió
a 2 mL de la solución alcohólica, 10 mL de agua destilada. La
aparición de un precipitado indica un ensayo positivo.
c. Ensayo de Fehling: (Permite reconocer la presencia de azúcares
reductores). Para ello una alícuota del extracto etanólico se
evaporó en baño de agua y el residuo se redisolvió con 2 mL de
agua. Se adicionó 2 mL del reactivo y se calentó en baño de agua 5
min, considerándose un ensayo positivo la aparición de un
precipitado rojo.
d. Ensayo de Baljet: Permitió reconocer en un extracto la presencia
de compuestos con agrupamiento lactónico, en particular
Coumarinas, aunque otros compuestos lactónicos pueden dar
positivo al ensayo.
Para ello se tomó una alícuota del extracto alcohólico y luego se
adicionó 1 mL del reactivo, considerándose un ensayo positivo la

aparición de coloración o precipitado rojo (++ y +++)
respectivamente.
e. Ensayo de Liebermann-Burchard:(Permite reconocer en un
extracto alcohólico la presencia de triterpenos y/o esteroides,
ambos tipos de productos por poseer un núcleo del androstano,
generalmente insaturado en el anillo B y la posición 5-6).
Se tomó una alícuota del extracto etanólico y se llevó a evaporar
en baño de agua y el residuo se redisolvió en 1 mL de cloroformo.
Se adicionó 1 mL de anhídrido acético y se mezcló bien. Por la
pared del tubo de ensayo se dejó resbalar II a III gotas de ácido
sulfúrico concentrado sin agitar. Un ensayo positivo se reconoce
por un cambio rápido de coloración:
1. Rosado-azul muy rápido.
2. Verde intenso-visible aunque rápido.
3. Verde oscuro-negro-final de la reacción.
f. Ensayo de la espuma: Permite reconocer en un extracto
alcohólico la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal
como triterpénica. Se tomó una alícuota y se diluyó con cinco
veces su volumen en agua, posteriormente se agitó, dicha mezcla,
fuertemente durante 5 a 10 min.

El ensayo se considera positivo si aparece espuma en la superficie
del líquido de más de 2 mm de altura y persistente por más de 2
min.
g. Ensayo del cloruro férrico: Permite reconocer la presencia de
compuestos fenólicos y/o taninos en un extracto vegetal. Cuando
el extracto de la planta se realizó con alcohol, el ensayo determinó
tanto fenoles como taninos. A una alícuota del extracto alcohólico
se le añadió III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5%
en solución salina fisiológica, un ensayo positivo da la siguiente
información general:
-Desarrollo de una coloración rojo-vino: compuestos fenólicos en
general.
-Desarrollo de una coloración verde intensa: taninos del tipo
pirocatecólicos.
-Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo
pirogalotánicos.
h. Ensayo de la Ninhidrina: Permite reconocer en los extractos
vegetales la presencia de aminoácidos libres o de aminas en
general. Se tomó una alícuota del extracto en alcohol, se mezcló
con 2 mL de solución al 2 % de ninhidrina en agua. La mezcla se
calentó 5-10 minutos en baño de agua. Este ensayo se considera
positivo cuando se desarrolla un color azul violáceo.

i. Ensayo de Bornträger: Permite reconocer en un extracto
alcohólico la presencia de quinonas. Se agregó 1mL de hidróxido
de sodio. Se agitó, mezclando las fases y se dejó en reposo hasta
su ulterior separación. El ensayo se considera positivo cuando la
fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosado o rojo.
Coloración rosada (++), coloración roja (+++).
j. Ensayo de Shinoda: Permite reconocer la presencia de
flavonoides en extractos alcohólico, se diluyó con 1 mL de ácido
clorhídrico concentrado y un porción de cinta de magnesio
metálico. Después de la reacción se esperó 5 min, se añadió 1 mL
de alcohol amílico, se mezclaron las fases y se dejó reposar hasta
que se separaron.
El ensayo se considera positivo cuando el alcohol amílico se
colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intenso en todos los
casos.
k. Ensayo de Kedde: Permite reconocer en un extracto alcohólico la
presencia de glucósidos cardiotónicos. Una alícuota del extracto
en etanol se mezcló con 1 mL del reactivo y se dejó reposar
durante 5 a 10 min. En un ensayo positivo se desarrolla una
coloración violácea, persistente durante 1 a 2h.

l. Ensayo de Antocianidinas: Permitió reconocer en los extractos
vegetales alcohólicos la presencia de estructuras de secuencia C6-
C3-C6 del grupo de los flavonoides. Se calentó 2 mL del extracto
etanólico 10 min. con 1 mL de HCl q. p. se dejó enfriar y se
añadió 1 mL de agua y 2 mL de alcohol amílico. Se agitó y se
dejó separar las dos fases. La aparición de color rojo a marrón en
la fase amílica indica un ensayo positivo.
m. Ensayo de Dragendorff: Permite reconocer en el extracto
alcohólico la presencia de alcaloides; para ello, se tomó una y se
le añadió I gota de ácido clorhídrico concentrado, (calentamos
suavemente y dejamos enfriar). Con la solución acuosa ácida se
realizó el ensayo, se añadió III gotas del reactivo de Dragendorff,
se considera (+) cuando presenta opalescencia, (++) cuando
presenta turbidez definida, y (+++) cuando presenta precipitado.
n. Ensayo de Mayer: Se realiza según la forma descrita
anteriormente, hasta obtener una solución ácida. Se añade luego,
una pizca de cloruro de sodio en polvo, se agita y filtra. Se añadió
III gotas de la solución reactiva de Mayer, y se observa:
opalescencia (+), turbidez definida (++), precipitado coposo
(+++).

o. Ensayo de Wagner: Se realizó al igual que en los casos
anteriores de la solución ácida, se añadirán III gotas del reactivo y
los resultados se clasificarán de la misma forma.
p. Ensayo de Hager: Se realizó al igual que en los casos anteriores
de la solución ácida, se añade tres gotas del reactivo y los
resultados se clasificaron de la misma forma.
3) Extracto Acuoso
a. Ensayo de Dragendorff: Permite reconocer en el extracto acuoso
la presencia de alcaloides; para ello, se toma una alícuota y se le
añadió I gota de ácido clorhídrico concentrado. Con la solución
acuosa ácida se realizó el ensayo, se añade III gotas del reactivo
de Dragendorff, Se considera (+) cuando presenta opalescencia,
(++) cuando presenta turbidez definida, y (+++) cuando presenta
precipitado.
b. Ensayo de Mayer: Se realizó según la forma descrita
anteriormente, hasta obtener una solución ácida. Se añadió luego,
una pequeña cantidad de cloruro de sodio en polvo, se agita y
filtra. Se añadió III gotas de la solución reactiva de Mayer, y se
observa: opalescencia (+), turbidez definida (++), precipitado
coposo (+++).

c. Ensayo de Wagner: Se comenzó al igual que en los casos
anteriores de la solución ácida, se añadieron III gotas del reactivo
y los resultados se clasificaron de la misma forma.
d. Ensayo de Hager: Se comienza igual que en los casos anteriores
de la solución ácida, se añadirán tres gotas del reactivo y los
resultados se clasificarán de la misma forma.
e. Ensayo del Cloruro Férrico: Permite reconocer la presencia de
taninos en un extracto acuoso. A una alícuota del extracto acuoso
se le añade III gotas de una solución de tricloruro férrico al 5% en
solución salina fisiológica, se considera positivo cuando da la
siguiente información general:
 Desarrollo de una coloración rojo-vino: compuestos fenólicos en
general.
 Desarrollo de una coloración verde intensa: taninos del tipo
pirocatecólicos.
 Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo
pirogalotánicos.

f. Ensayo de la gelatina: Permite reconocer la presencia de taninos
en el extracto acuoso. Se tomó 1 ml de muestra y se añadió I gota
de solución de gelatina. Se debe observar la presencia de un
precipitado blanco que indica la presencia de taninos.
g. Ensayo de Shinoda: Permite reconocer la presencia de
flavonoides en el extracto acuoso. Se tomó 1 mL de muestra y se
diluyó con 1mL de ácido clorhídrico concentrado y una porción
de cinta de magnesio metálico. Después de la reacción se esperó
5min, se añadió 1mL de alcohol amílico, se mezclaron las fases y
se dejó reposar hasta que se separaron.
El ensayo se considera positivo cuando el alcohol amílico se
colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intenso en todos los
casos.
h. Ensayo de Fehling: Permite reconocer en el extracto acuoso la
presencia de azúcares reductores. Para ello se tomó una alícuota
del extracto acuoso y se adicionaron 2 mL del reactivo, se
calentó en baño de agua 5 a 10 min. El ensayo se considera
positivo si la solución se coloreo de rojo o aparece precipitado
rojo.

i. Ensayo de la Espuma: Permite reconocer en el extracto acuoso
la presencia de saponinas, tanto del tipo esteroidal como
triterpénica. Se tomó 2 mL del extracto acuoso y se agitó
fuertemente durante 5 a 10 min. El ensayo se considera positivo
si aparece espuma en la superficie del líquido de más de 2 mm
de altura y persistente por más de 2 min.
j. Ensayo de Mucílagos: Permite reconocer en los extractos
acuosos de vegetales la presencia de una estructura tipo
polisacárido, el cual forma un coloide hidrófilo de alto índice de
masa que aumenta la densidad del agua donde se extrae. Para
ello una alícuota del extracto se enfrió agua de 0 a 5 ºC y cuando
la solución toma una consistencia gelatinosa el ensayo se
considera positivo.

2.2.8. Cuantificación de flavonoides totales del extracto fluido de Sambucus
peruviana H.B.K. mediante espectrofotometría UV- visible. 18,19
Procedimiento
2.2.8.1. Preparación de la Solución Patrón
- Pesar 20 mg de quercetina patrón y disolver con c.s.p. 25 mL de
etanol a 96 ° GL; para obtener una concentración de 800 p.p.m.
1000 mL
20 mg quercetina x = 25 mL
800 µg
2.2.8.2. Preparación de soluciones diluidas de la muestra
patrón para la curva de calibración
- Medir volúmenes de 20 µL; 40 µL; 80 µL; 120 µL y 160 µL de la
solución patrón y aforar a 10 mL con alcohol de 96º GL, para
obtener concentraciones de 1.6; 3.2; 6.4; 9.6 y 12.8 ppm
respectivamente.
- Realizar un espectro con la disolución de 6.4 p.p.m. En el
espectrofotómetro para conocer el pico más alto correspondiente a
la λ máx a la que absorbe la quercetina, a la cual se leen todas las
muestras.
- Hacer 3 lecturas de absorbancias de las concentraciones conocidas,
en el espectrofotómetro THERMO modelo GENESYS 10 UV,
para obtener la ecuación de la recta.

2.2.8.3. Preparación de la Solución Blanco
Utilizar etanol a 96 ° GL como solución blanco y tomar una alícuota
de 3 mL aproximadamente para la calibración del espectrofotómetro
THERMO modelo GENESYS 10 UV
2.2.8.4. Preparación de la muestra
2.2.8.4.1. Hidrólisis de Flavonoides
Medir 100 mL del extracto fluido a un balón y llevar a reflujo con 100
mL de ácido sulfúrico cc, durante dos horas.
2.2.8.4.2. Purificación de flavonoides totales
- Llevar el extracto a baño maría hasta disminuir aproximadamente a
50% del volumen, enfriar y llevar a refrigeración durante 1 hora.
- Filtrar el extracto refrigerado al vacío sobre embudo büchner
previamente acondicionado a una temperatura menor a 15 ºC, luego
lavar el residuo con 3 volúmenes sucesivos de 50 mL de agua
destilada helada.
- Llevar el papel filtro que contiene los flavonoides totales, en forma
de cristales, a la estufa a 40 ºC durante 2 horas.
- Solubilizar los cristales obtenidos con 100 mL de etanol de 96 º GL
y 100 mL de agua destilada y llevar a baño maría hasta disminuir a
50% del volumen y repetir los pasos anteriores por 3 veces hasta
obtener los cristales purificados.

2.2.8.4.3. Preparación de la solución problema
- Pesar los cristales purificados equivalentes a 0.5g de droga y aforar
a 100 mL con etanol al 96° GL; de éste aforo tomar dos alícuotas
de 3 mL aproximadamente, y de cada alícuota obtener 3 lecturas en
el espectrofotómetro THERMO modelo GENESYS 10 UV.
2.2.9. Determinación de la capacidad antioxidante in vitro de los
flavonoides totales obtenidos de las hojas de Sambucus peruviana
H.B.K. 20, 21,22,23,24,25
2.2.9.1. Fundamento del método
El fundamento del método descrito por Brand Williams et al, consiste
en que el radical libre estable 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH)
tiene un electrón desapareado y es de color azul-violeta, decolorándose
hacia amarillo pálido por reacción con una sustancia capturadora de
radicales libres; la absorbancia es medida espectrofotométricamente a
518 nm. La diferencia de absorbancias, permite obtener el porcentaje de
captación de radicales libres.
2.2.9.2. Preparación de la solución etanólica de Flavonoides Totales
Pesar los cristales purificados a 0.5g de droga (equivalentes 6.25 mg de
flavonoides ) y aforar a 100 mL con etanol al 96° GL.

2.2.9.3. Preparación del Reactivo: Solución 2,2-difenil-1-picrilhidracilo
(DPPH)
Preparar una solución de DPPH con etanol de 96° GL a una
concentración de DPPH 0.1 nm.
2.2.9.4. Preparación de la recta de calibración para la solución de
radical DPPH
Procedimiento
- De la solución de DPPH 0.1 nm se midió volúmenes de 2; 4; 6; 8 y 10
mL; y se trasvasó a fiolas de 10 mL aforándolas con etanol de 96º GL,
para obtener concentraciones de (7.9µg/ml), (15.8µg/ml), (23.7µg/ml),
(31.5µg/ml) y (39.4µg/ml) respectivamente. (Tabla 1)
Concentración Volumen de etanol

Volumen de solución 96 ° GL
de solución de
de DPPH 0.1 nM
DPPH c.s.p.
(7.9µg/ml) 2 mL 10 mL
(15.8µg/ml) 4 mL 10 mL
(23.7µg/ml) 6 mL 10 mL
(31.5 µg/ml) 8 mL 10 mL
(39.4µg/ml) 10 mL 10 mL

Cuadro N° 1: Concentración de solución de DPPH para obtener la recta de calibración

- Se realizó un barrido espectrofotométrico con la solución DPPH 0.1
nm, para encontrar la longitud de onda de máxima absorbancia, el cual
fue de 518 nm.
- Se realizó tres lecturas de absorbancias en el espectrofotómetro
THERMO modelo GENESYS 10 UV a 518 nm, de las cuales se saca
un promedio, utilizándose un blanco que consiste en etanol de 96º GL.
- Se graficó las concentraciones versus las absorbancias para obtener la
recta de calibración
2.2.9.5 Determinación de los porcentajes de captura del radical DPPH


Procedimiento
- En un set de 7 fiolas (problema), adicionar en cada uno de ellos 10 mL
de la solución de DPPH 0.1 nm.
- Tomar alícuotas de 50 µL, 100 µL ,150 µL, 200 µL, 250 µL, 300 µL y
350 µL de la solución etanólica de flavonoides totales y enfrentar a la
solución de DPPH 0.1 nm.
- Realizar tres lecturas de cada sistema a una absorbancia de 518 nm.
- Preparar un control (que consiste en 10 mL de solución de DPPH 0.1
nm) y leer la absorbancia a 518 nm en el espectrofotómetro.
- Como blanco se utiliza etanol de 96° GL.

- Posteriormente, utilizar los valores de absorbancia de los tubos
problema y la absorbancia del tubo control, para calcular el porcentaje
de radicales DPPH que serán capturados.
- Calcular el porcentaje de radicales DPPH capturados, con la siguiente
fórmula:
2.3. ANÁLISIS ESTADÍSTICO DE DATOS
Los datos fueron procesados en el programa Microsoft Office Excel 2007.
Caracterizados mediante parámetros estadísticos descriptivos: Media
Aritmética ( X ). 26,27

III. RESULTADOS
Tabla N° 1: Tamizaje fitoquímico del extracto fluido de Sambucus peruviana H.B.K.

“sauco”. Proveniente del caserío de parrapos, del distrito sinsicap, provincia otuzco -
2013 mediante espectrofotometría UV- visible.
Extracto Cloruro de Metileno Etanolico Acuoso
Dragendorf Alcaloides - + +
Sudan Grasas + NA NA
Mayer Alcaloides - + +
Wagner Alcaloides - + +
Hager Alcaloides - + +
Ninhidrina Aminoácidos NA + NA
Baljet Lactonas + + NA
Bornträger Quinonas - + NA
Liebermann- Triterpenos/esteroles + + NA
Burchard
Rosenhein Antocianidinas NA + +
Shinoda Flavonoides NA + +
Kedde Glicósidos NA + NA
cardiotónico
Espuma Saponinas + + +
Cloruro férrico Polifenoles + + +
Gelatina Taninos NA NA -
Leyenda:
+: Positivo
-: Negativo
NA: No se realizo

Tabla N° 2: Porcentaje de flavonoides totales expresados como

quercetina obtenidas a partir de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K.
“sauco”. Proveniente del caserío de parrapos, del distrito sinsicap, provincia
otuzco -2013;
mediante espectrofotometría UV-
visible.
N° ABSORBANCIA PROMEDIO µg/mL µg mg/100 g de

droga
1 0.641
2 0.641
3 0.640 0.641 9.0 2.239 0.448
4 0.641
5 0.641
6 0.641
28
Tabla N°3: Porcentajes de captura del radical DPPH de soluciones

etanólicas de Flavonoides a diferentes concentraciones.
%
Nº Muestra Abs Promedio Captura CC (µg/ml)
1.125
P PATRÓN 1.123 1.123 0.0 0.2
1.120
1.002
50 µL Flavonoides 0.993 0.994 11.5 4.7
1
totales
0.986
0.907
100 µL Flavonoides 0.896 0.897 20.1 8.1
2
totales
0.887
0.792
150 µL Flavonoides 0.778 0.780 30.5 12.1
3
totales 0.770
0.686
200 µL Flavonoides 0.674 0.674 40.0 15.8
4
totales 0.662
0.624
250 µL Flavonoides 0.613 0.613 45.4 17.9
5 0.601
totales
0.469
0.460 0.460 59.0 23.2
300 µL Flavonoides
6 0.452
totales
0.410
0.401 0.401 64.3 25.2
350 µL Flavonoides
7 0.392
totales
29
DISCUSIÓN
Al realizar tamizaje fitoquímico, se determinó cualitativamente los principales
grupos de fitoconstituyentes químicos de la planta, a partir del cual, puede orientarse
las extracciones y/o el fraccionamiento de los extractos, eligiendo los grupos de
mayor interés para el investigador. 30
El tamizaje fitoquímico realizado al extracto fluido (Tabla N°1) evidenció la
presencia de flavonoides, mediante la reacción de shinoda, dato que sirvió como base
para continuar con la valoración de los flavonoides totales. Otros fitoconstituyentes
encontrados en los diferentes extractos fueron; Extracto Acuoso, Alcaloides,
Antocianidinas, Flavonoides, Saponinas, Polifenoles. Etanolico, Alcaloides,
Aminoácidos, Lactonas, Quinonas, Triterpenos/esteroles, Antocianidinas,
Flavonoides, Glicósidos cardiotónico, Saponinas, Polifenoles, Cloruro de Metileno,
Grasas, Lactonas, Triterpenos/esteroles, Saponinas, Polifenoles.
En la Tabla N°2. Se observa que 100 g de droga contienen 0.448 g de flavonoides
totales, lo cual constituye un rendimiento del 0.448 %, este dato es de gran utilidad
para la futura realización de preparados galénicos que incluyan extractos de
Sambucus peruviana H.B.K. Que pueden ser usados como terapia alternativa para el
tratamiento de diferentes patologías de naturaleza crónica que sustentan sus procesos
patológicos en el estrés oxidativo.
Inicialmente es necesario investigar in vitro las propiedades antioxidantes de
cualquier fármaco o sustancia natural antes de considerarlo un antioxidante. Si bien
es cierto existen diferentes métodos para evaluar la actividad antioxidante, ya sea in
vitro o in vivo, el método del DPPH in vitro permite tener una idea aproximada de lo
30
que ocurre en situaciones complejas in vivo. Este método presenta una excelente
estabilidad en ciertas condiciones por poseer un radical libre que puede obtenerse
directamente sin una preparación previa, mientras que otros tienen que ser generados
tras una reacción que puede ser química, enzimática o electroquímica.
En el Tabla N° 3. Se observa que a mayor volumen de solución de flavonoides
totales, con una concentración 0.0625 mg/ml; tiene una capacidad de mayor en
porcentajes de captura del radical libre DPPH. Encontrándose el valor máximo en el
volumen de 350 µL con un valor de 64.3 % que equivale a una concentración de
25.20 µg/mL de DPPH capturado (Tabla N° 3).
Lo mencionado anteriormente corrobora otros trabajos realizados sobre capacidad
antioxidante, Lopez.(2010) et al, demostraron que la capacidad antioxidante de los
Flavonoides totales de Sambucus Peruviana H.B.K “sauco” proveniente de
Huamachuco, aumenta a medida que aumenta la concentración de flavonoides,
obteniendo un valor máximo de porcentaje de inhibición de DPPH de 59.37 %,
correspondiente a un tiempo de 45 minutos. Por otra parte Jimenez Garay J. et al..
realizaron un estudio detallado sobre la capacidad antioxidante de los Flavonoides
totales obtenidos de las hojas de Sambucus Peruviana H.B.K “sauco” provenientes
de Otuzco, obteniendo 15.08% de captura de radical DPPH para 20 µL de una
solución de 0.5 µg/ml de Flavonoides totales.
La actividad antioxidante de los flavonoides se asocia con sus características
estructurales. Las estructuras que poseen grupos hidroxilos en las posiciones 3' y 4'
del anillo B y OH en C–3 e insaturación del anillo C, permiten estructuras
mesoméricas estables con capacidad eficiente de captura de radicales libres, requisito
para una máxima capacidad antioxidante. 29,30,31
31
IV. CONCLUSIONES
1. Se demostró con el análisis fitoquímico preliminar la presencia de Alcaloides,
Antocianidinas, Flavonoides, Saponinas, Polifenoles, Aminoácidos, Lactonas,
Quinonas, Triterpenos/esteroles, Glicósidos cardiotónico y sustancias Grasas
en el extracto fluido de las hojas de Sambucus peruviana H.B.K. “sauco”.
Proveniente del caserío de parrapos, del distrito sinsicap, provincia otuzco -
La Libertad, 2013.
2. En el extracto fluido de la especie estudiada se encuentran flavonoides
expresados como quercetina en un porcentaje de 0.448 %.
3. Se determinó que a mayor volumen de solución de flavonoides totales con
una concentración 0.0625 mg/ml. Mucho mayor es el porcentajes de captura
del radical libre DPPH































32


V. RECOMENDACIONES
1. En este trabajo se cuantificó flavonoides totales en las hojas de Sambucus
peruviana H.B.K. “sauco”, Para mejorar su estudio recomienda, realizar una
separación por cromatografía, e indicar los flavonoides presentes y su
concentración, esto nos permite sugerir que se debería realizar
investigaciones de aplicación desde el punto de vista fitoquímico.
2. Los flavonoides totales presentes en las hojas de Sambucus peruviana
H.B.K. “sauco”. Proveniente del caserío de parrapos, del distrito sinsicap,
provincia otuzco - La Libertad, 2013, tienen una notable capacidad
antioxidante, por lo que se recomienda seguir con estudios que demuestren su
capacidad antioxidante in vivo.
33
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1. Rudolf M. El Perú un país megadiverso. [monografía en Internet]. Perú,
Congreso de la República.2004 [18/ 04/ 04]. Tomado desde:
http://www.sernanp.gob.pe/sernanp/archivos/imagenes/vida/Marco_Teorico%20
congreso.pdf
2. Cotos C. Plantas medicinales usadas en odontología. Oral. Rev. 2006; 1: 80.
Tomado desde:
http://www.usmp.edu.pe/odonto/servicio/2006rv2/Kiru7.pdf
3. Lovera L.Análisis comparativo de las propiedades físicas y químicas del fruto
de saúco Sambucus peruviana H.B.K. (sauco), evaluadas en dos rangos
altitudinales en la parte alta de la cuenca del río Llaucano - Cajamarca. [tesis
para optar el título de ingeniero forestal]. Lima (Perú). Universidad nacional
agraria la molina. Tomado desde:
http://repositorio.lamolina.edu.pe/xmlui/bitstream/handle/123456789/108/Q04-
L6-T-indice.pdf?sequence=2
4. Pereyra E, . Ruiz G, Venegas E, Ruidías D. El futuro de los productos andinos
en la región alta y los valles centrales de los andes/plantas medicinales. Perú..
Rev. 2006; 58: 64. Tomado desde:
http://www.unido.org/fileadmin/import/69934_Peru_Informe_final_plantas_medi
cinales_2vf.pdf
34
5. Nicolas Dostert, José Roque, Grischa Brokamp, Asunción Cano, María I. La
Torre y Maximilian Weigend. Evolución de las Exportaciones de Tara. Lima
2009. Tomado el 27 de Marzo del 2012. Tomado desde:
http://health.cat/open.php?url=http://www.botconsult.de/downloads/Tara_factshe
et_final.pdf
6. Dostert N. Datos botánicos de Sauco. Edición 1º. Lima – Perú, Setiembre del
2009. Tomado el 27 noviembre del 2013. Tomado desde:
http://www.biocomercioperu.org/admin/recursos/contenidos/Sauco_factsheet_fi
nal.pdf
7. Li Pereyra E. El Futuro de los Productos Andinos en la Región Alta y los Valles
Centrales de los Andes/Plantas Medicinales [monografía en Internet]. Ministerio
de Producción. 2004. Tomado el 25 de junio del 2011. Tomado desde:
http://www.unido.org/fileadmin/import/69934_PERU_Informe_final_plantas_me
dicinales_2vf.pdf
8. Mostacero J. Taxonomía de las fanerógamas útiles del Perú. 1 ear. Edc.
Concytec.( Perú): Edit.2002.852 – 854.
9. Ponessa G. Caracterización anátomo foliar y aspectos etnobotánicos de
SambucusnigraL.subsp peruviana. Rev. 2011; 173: 179. Tomado desde.
http://www.latamjpharm.org/trabajos/20/3/LAJOP_20_3_1_2_JG4ZJPRNN5.pdf
35
10. Ortiz H. Industrialización de la hoja de Sambucus peruviana H.B.K. (sauco)
preparación de formas medicamentosas: bolsitas filtrantes y cápsulas. Rev. 2006.
42: 68. Tomado el 25 de junio del 2011. Tomado desde:
http://es.scribd.com/doc/46895725/Re-Vista-Sci-en-Do
11. Miranda M. Manual de prácticas de laboratorio. Universidad de la Habana. Cuba.
2002. Pp. 70-110.
12. Kuklinski C. Farmacognosia. Ed. Omega, S.A. Barcelona, España. 2000. Pp.
120-130.
13. De Pascuale A. Phramcognosy. The oldest modern science. Journal
of ethnopharmacology; 1984. Vol. 11: 1-16.
14. Martinez A. Flavonoides. Curso de farmacognosia y fitoquímica. Universidad de
Antioquia. Medellin, Setiembre 2006. Pp. 7 – 49.
15. García M. Cuantificación de fenoles y flavonoides totales en extractos naturales.
Universidad Autónoma de Querétaro. Tomado el 25 de junio del 2011.
Tomado desde:
http://www.uaq.mx/investigacion/difusion/veranos/memorias.2007/56_1UAQGa
r ciaNava.pdf
16. Miranda M. Manual de prácticas de laboratorio. Universidad de la Habana. Cuba.
2002. Pp.70-110.
36
17. Lock O. Investigación Fitoquímica. Pontifica Universidad católica del Perú.

Rev.
1994. Pp. 1-9, 114-121.Tomado desde:
http://eros.pucp.edu.pe/pucp/vtaitnet/vtwtiend/vtwtiend;jsessionid=0000qlTEsp
m w_-wjMSAA3SlxhvF:188se5lk4
18. Chávez M., Eustaquio C. Identificación preliminar de los
metabolitos secundarios de los extractos acuosos y etanólicos del fruto
y hojas de MorindacitrifoliaL.(noni) - cuantificación espectrofotométrica de los
flavonoides totales. [tesis para optar al grado de Bachiller]. Universidad
Nacional de Trujillo, Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2010.
19. Acevedo E. Cuantificación de flavonoides totales y taninos presentes en
el decocto e infuso de hojas de Theasinensis L. te verde y negro. [tesis para
optar el título profesional]. Trujillo (Perú): Universidad Nacional de Trujillo,
Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2011.
20. Murillo E., Tique M., Ospina L., Lombo O. Evaluacion preliminar de la
actividad hipoglicemiante en ratones diabéticos por aloxano y capacidad
antioxidante invitro de extractos de BauhiniakalbreyeriHarms. Colombia: Rev.
Cienc. Quim. Farm. Tomado el 20 de junio del 2011. Vol. 35 (1), 2006. Pp. 69
Tomado desde:
http://www.ciencias.unal.edu.co/publicaciones/art/122/35-N1/V35N1-04.pdf
21. Rivero A, Betancort J. Evaluación de la Actividad Antioxidante de Polifenoles
de Algas Marinas. España. Rev. 2006.Pp. 3. Tomado el 13 Octubre 2009.
Tomado desde:
http://old.iupac.org/publications/cd/medicinal_chemistry/Practica-VI-3.pdf
37
22. Murillo E. Actividad Antioxidante de Bebidas de Frutas y de Té
Comercializadas en Costa Rica. Panamá: Universidad de Panamá. Instituto de
Alimentación y Nutrición. Rev. 2002. Pp. 8, 9. Tomado 14 de Octubre del 2009.
Tomado desde:
http://www.florida.co.cr/productos_es/estudio_antioxidantes.pdf
23. Diaz H., Rodriguez I. Capacidad Antioxidante in vitro de las Isoflavonas
Totales Obtenidas de Semillas de Glycinemax L. (Soya) Provenientes de la
Provincia de Jaén-Cajamarca. [tesis para optar el título profesional].
Trujillo (Perú): Universidad Nacional de Trujillo, Facultad de Farmacia y
Bioquímica; 2010
24. Rojas M., Rumay A. Determinación de la actividad antioxidante in vitro
del extracto hidroalcoholico de las hojas de Piperaduncum procendente de la
provincia de San Marcos. Departamento de Cajamarca. [tesis para optar el título
profesional]. Trujillo (Perú): Universidad Nacional de Trujillo, Facultad
de Farmacia y Bioquímica; 2009
25. Bartolo R, Chávez C. Determinación de la capacidad antioxidante in vitro
del decocto de la coronta de Zea mays L.(variedad morado) del
Distrito de Cajabamba, departamento de Cajamarca[tesis para optar el título
profesional]. Trujillo (Perú): Universidad Nacional de Trujillo, Facultad de
Farmacia y Bioquímica; 2010
26. Domenech J. Bioestadística. Métodos Estadísticos Para Investigadores. España:
1º ed. Edit. Herder S.A. Rev.1980. 315-320, 617. Tomado desde:

http://mcgraw-hill.com.mx/mexw/catalogo/pdf/mexb.pdf
38
27. Glantz S. Bioestadística. 6º ed. México: Ed. Mc. Graw-Hill/Interamericana Edit.
S.A de C.V. Rev. 2005. 73-81.
28. Ganoza M. Fundamentación química de las reacciones de coloración
y precipitación en la identificación de metabolitos secundarios de plantas
medicinales [tesis para optar el titulo profesional]. Trujillo (Perú): Universidad
Nacional de Trujillo, Facultad de Farmacia y Bioquímica; 2001.
29. Yánez R. Flavonoides y actividad antioxidante de Calia secundiflora. Rev.
34(3): 151-157 tomado el Setiembre 30 del 2014. Tomado desde:
http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0187-
73802011000300005&lng=es.
30. Horna L. Capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales extraídos del
extracto fluído de hojas de Sambucus peruviana H.B.K.(sauco). Frente al 2,2-
difenil-1-picrilhidrazil (DPPH). [tesis II optar al grado de Bachiller]. Trujillo:
Universidad Nacional de Trujillo;2011
31. Jimenez J. Capacidad antioxidante in vitro de los flavonoides totales
extraídos del extracto fluído de hojas de Sambucus peruviana
H.B.K.(sauco). Frente al
2,2-difenil-1-picrilhidrazil (dpph). [tesis para optar el grado de magíster].
Trujillo: Universidad Nacional de Trujillo;2013
39
ANEXOS
40
ANEXO 1: PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
Figura 1: Caserio Parrapos -Distrito De Sinsicap -Otuzco

Departamento De Lalibertad
Figura 2: Recolección de la muestra
41
Figura 3: Reconocimiento de las mejores hojas para la muestra
Figura 4: Selección de la muestra
42
Figura 5: Secado a temperatura ambiente
Figura 6: Secado en la estufa a una temperatura de 40 ºC
43
Figura 7: Molienda y tamizado de la droga
Figura 8: Implementación del equipo de lixiviación.
44
Figura 9: Percolación
Figura 10: Concentración del extracto fluido
45
Figura 10: Estudio Fitoquímico Preliminar del extracto fluido de las hojas de
Sambucus peruviana H.B.K
-Extracto etanólico
-Reacción de Shinoda
-Reacción de Tricloruro férrico
-Reacción de Baljet
-Reacción de Kedde
-Reaccion de Mayer
-Reaccion de Wagner
-Reaccion de Hager
-Reaccion Dragerdorff. etc...
46
Figura 10.1: Ensayo de Catequinas
La aparición de una mancha verde carmelita a la luz UV, indica un ensayo positivo.
47
Figura 11: Filtrado de los cristales de flavonoides totales
48
Figura 11.1 : Cristales de flavonoides totales de las hojas de Sambucus

peruviana H.B.K
Flavonoides totales
49
Figura 12: Etapa de la espectrometría
Preparación del extracto alcolico mas flavonoides totales
50
6.1. Preparación de la curva de calibración para la solución de radical

DPPH







Solución DPPH* 0.1 mM
2 ml 4 ml 10 ml
6 ml
8 ml
Aforar a 10 ml con alcohol96 °GL
Realizar 3 lecturas en el espectrofotómetro a 518nm
51
6.2. Determinación de los porcentajes de captura del radical DPPH



Solución DPPH* 0.1 mM
10 ml
1 2 3 4 5 6 7
Enfrentar con la muestra problema según la tabla:
Muestra Volumen de la solución etanólica de

flavonoides totales (uL)
58ug/ml
1 50
2 100
3 150
4 200
5 250
6 300
7 350
52
AH
A
(Agente Antioxidante)
DPPH  DPPH 
VIOLETA AMARILLO
Figura N°1: Método del 2,2-difenil-1-picrilhidrazilo (DPPH)
53
ANEXO II
Curvas de calibración
54






ANEXOS III
REACCIONES
QUIMICAS

Reacciones Químicas
1. REACCION DE IDENTIFICACION DE TRITERPENOIDES
a) Reacción de Lieberman- Burchard
(verde azulado o naranja)
2. REACCIONES DE IDENTIFICACION DE FLAVONOIDES:
a) Reacción de Shinoda
Flavona
(rojo)

flavanona
(crimson a magenta)
b) Reacción de Rosenheim
Catequina

(marron)
3. PARA IDENTIFICAR ALCALOIDES
a) Reacción de Dragendorff
(Ppdo. rojo a naranja)

b). Reacción de Hager
Alcaloides de (sauco)
(Ppdo. cristales amarillos)

d). Reacción de Mayer
(Ppdo. Blanco)
e). reacción de Wagner
(pardo oscuro)

i). Reacción de Keller
(alcaloide)
(azul intenso en interfase)

4. PARA IDENTIFICAR LACTONAS - INSATURADAS
a) Reacción de Baljet
(rojo claro)

5. PARA IDENTIFICAR QUINONAS
a). Reacción de Bomtrager
(rojo)
(rojo)

6. PARA IDENTIFICAR COMPUESTOS FENOLICOS
a). Reacción con Tricloruro Férrico
naftoquinona
(rojo)

(verde)

Flavonoides PDF

Transféré par

Informations du document

Titre original

Copyright

Formats disponibles

Partager ce document

Partager ou intégrer le document

Options de partage

Avez-vous trouvé ce document utile ?

Ce contenu est-il inapproprié ?

Droits d'auteur :

Formats disponibles

Flavonoides PDF

Transféré par

Droits d'auteur :

Formats disponibles

UNIVERSIDAD CATÓ L I C A L O S Á N G E L E S DE

TESIS PARA O PT AR EL T ÍTULO PROFESIONAL

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE in vitro DE FLAVONOIDES

AUTOR: Caja Ruiz Miguel Á ngel

ASESOR: Mg. Farm: Mayer Luis Ganoza Yupanqui

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE in vitro DE

Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

Señores miembros del Jurado Calificador:

En las páginas siguientes planteo la resolución de un problema de investigación

Solicito de Ustedes la revisión escrupulosa del documento y la exposición del mismo

Trujillo, enero del 2014

Caja Ruiz Miguel Ángel

Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

Hoja de firma del jurado y asesor.

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ACTA N°.....-2014 DE SUSTENTACIÓN DEL INFORME DE TESIS

Siendo las……del día …..de abril……, y estando conforme a lo dispuesto en el

Q.F. Jaime Flores Ballena Presidente

Mg. Q.F. Mayer Ganoza Yupanqui Secretario

Mg. Q.F. Edwin Pomatanta Plasencia Miembro

Se reunieron para evaluar la sustentación del informe de tesis titulado:

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE in vitro DE FLAVONOIDES TOTALES DE

Código del estudiante (tesista) 1808072013

Los miembros del Jurado de Sustentación firman a continuación, dando fe de las

Grado y Nombre Q.F. Jaime Flores Ballena

Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

Al Señor Nuestro Padre:

Gracias por toda la dicha de tus bendiciones a lo largo de

Gracias por ser nuestro guía y darnos la fortaleza y

Permite Señor, que el resto de nuestra vida, no lo vivamos en

Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

Te quiero mucho mamita.

Te quiero mucho papito

Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

A mis queridos hermanos

Mi triunfo es tu yo más que mío…

Muchas gracias por tu inmenso amor y tu comprensión, también eres participe de

Quienes han sido parte del inicio de mi vida, de mi niñez y mi adolescencia, de

También Doy Gracias a Mi abuelito

De quien, todavía puedo escuchar sus consejos y sus experiencias en la vida...

Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

Un agradecimiento especial a mi asesor:

Mayer Luis Ganoza Yupanqui

Un Gran Agradecimiento enorme, a un buen amigo y un gran creyente de

David Ruidías Romero

Aquí en le agradezco infinitamente por su apoyo en la parte de la espectrometría en

El Gran Agradecimiento a Mis Buenos Amigos

- Agusto Calderón Guerrero

- Dennis Sobrado Quesada

- Erik Henry Pinillos Alayo

- Freddy Minchola Rodríguez

- Kevin Cosavalente Burgos

- José Olivares Vega

Y también, un agradecimiento a todos los docentes y amigos de la Escuela de

Gracias por todos los profesores.

Caja Ruiz Miguel Á ngel Farmacognosia y Farmacobotánica

II. MATERIAL Y METODO.................................................................... 5

2.1. MATERIAL ............................................................................... 5

1.3. ANALISIS ESTADISTICO DE DATOS .............................. 26

III. RESULTADOS ................................................................................. 27

IV. CONCLUSIONES .......................................................................... 32

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ........................................... 34