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PARA EL ESTUDIO DE
PARÁSITOS
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CARACTERÍSTICAS BIOLÓGICAS COMPARTIDAS
ENTRE LOS PARÁSITOS
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CONCEPTO DE DIAGNÓSTICO
Diagnóstico por Armando Malebranch Eraso D.
El diagnóstico, como lo han explicado hasta la saciedad expertos
de diferentes disciplinas, es el proceso mediante el cual se llega a
descubrir las causas de los problemas que tiene o presenta aquello
que se diagnostica, puede tratarse de cualquier persona, animal, cosa
y el fenómeno, o cualquier sistema, al que generalmente se denomina
“sujeto de diagnóstico”.
Etimológicamente el concepto diagnóstico proviene del griego,
tiene dos raíces, dia- que es a través de, por y gignoskein que es
conocer, así etimológicamente diagnóstico significa conocer a través
de. El concepto de este significado (imagen que representamos en la
mente) es la identificación de la naturaleza o esencia de una situación
ó problema, y de la causa posible o probable del mismo, es el
análisis de la naturaleza de algo.
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CONSIDERACIONES GENERALES
Una prueba diagnóstica es el proceso mediante el cual un individuo o grupo
de individuos es clasificado como poseedor o no de un determinado atributo .
Ejemplos:
Exámenes clínicos (físicos)
Exámenes laboratoriales (Ac, Ag, Aislamiento, etc.)
Imágenes
Procedimientos
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CONSIDERACIONES GENERALES
Debería tener una validez alta lo que significa que los porcentajes de
resultados falsos (positivos o negativos) deberían ser limitados.
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CONSIDERACIONES GENERALES
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SITUACIÓN IDEAL DE LAS PRUEBAS DE
DIAGNÓSTICO
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Frecuencia (x 100)
7
6
5
4
3
2
1
Individuos negativos Individuos positivos
0
2 4 8 16 32 64 128 256
Títulos de Ac
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Parásito Número de infectados
Protozoos
Plasmodium 300.000.000
Ameba 500.000.000
Trypanosoma cruzi 18.000.000
Leishmania 12.000.000
Toxoplasma gondii No determinado
Giardia Varios millones
Helmintos
Ascaris lumbricoides 1.000.000.000
N. americanus y A. duodenale 900.000.000
Schistosoma 200.000.000
Echinococcus granulosus 1.500.000
Taenia solium 1.000.000
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DIAGNÓSTICO
Tratamiento adecuado
TÉCNICAS
Identificación de parásitos
o sus fases en los Identificación indirecta
productos biológicos
Inmunológicas Modernas
Parasitológicas (Biología Molecular)
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Diagnóstico Parasitológico
Coproparasitoscópicos (CPS):
-Diagnostican parasitosis intestinales
-Producto biológico la materia fecal
Los de cavidades:
-Productos biológicos exudados: vaginal,
prostático, raspado perianal, contenido duodenal por
sondeo.
Los tisulares:
-Biopsia, raspado de úlcera, sangre,
secreciones de lesiones, etc.
Tipo y procedencia de producto biológico 10
Exámenes coproparasitoscópicos
Tiempo de su realización:
-Inmediatos (fresco)
-Muestra en solución
conservadora
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FROTIS FECAL DIRECTO
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EXÁMENES COPROPARASITOSCÓPICOS
Tipo de proceso:
-Exámen directo macro o microscópico
-Concentración: flotación, sedimentación y
termotropismo
-Dilución, cultivo, tinción.
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EXÁMENES COPROPARASITOSCÓPICOS
- Cualitativos: flotación en salmuera,
técnica de Faust, técnica de formol/éter,
sedimentación simple en copas (fasciolosis)
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PARA ESTABLECER DIAGNÓSTICOS
INMEDIATOS
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EXAMEN DIRECTO EN FRESCO:
Solución salina isotónica,
para trofozoitos de
protozoos (E. histolítica, larvas
de Strongyloides stercoralis)
Solución yodo-yodurada
(Lugol), identificar cualquier
forma de parásitos
intestinales
Pueden utilizarse para informes
cuantitativos, estandarizando la
cantidad de materia fecal
necesaria. En un cubreobjeto 22
x 22 mm (2 a 3 mg)
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PREPARACIONES COLOREADAS AL FRESCO
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Hematoxilina-férrica: trofozoitos y quistes
de protozoarios intestinales, leucocitos,
macrófagos y epiteliales. E. histolítica, D.
fragilis, E. nana, características nucleares
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HF 100x HF 100x
fresco 40x
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CONCENTRACIÓN DE QUISTES DE
PROTOZOARIOS Y HUEVOS DE HELMINTOS
Flotación (1921) solución saturada NaCl:
-Willis (huevos de helmintos) y cualquier forma parasitaria
menos trofozoitos.
Flotación y centrifugación (concentración):
-Faust de alta densidad (quistes) (1938)
Sedimentación por centrifugación (huevos de
helmintos) (formol/eter)
Sedimentación por gravedad (huevos de helmintos y S.
mansoni)
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Técnica de concentración fecal: formol/éter
Sedimentación por centrifugación
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Métodos de concentración
Cuantitativo por dilución (Stoll) (1923),
Ancylostoma duodenale y Necator americanus.
Suspensión de materia fecal 1:15 NaOH
(huevos/ml/heces).
Kato-Katz
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Técnica de Kato-Katz
Plantillas (50, 41.7 y 20 mg heces)
Rejilla de acero inóxidable
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Investigación de larvas de helmintos
Método de Rugai y col: se basa en los tropismos
positivos: hidrotropismo y termotropismo.
Agua 40-45 ºC
Recoger larvas
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DIAGNÓSTICO INMUNOLÓGICO
Es un examen del líquido seroso de la sangre (suero, el líquido
transparente que se separa cuando la sangre se coagula) que se
utiliza para detectar la presencia de anticuerpos contra un
microorganismo.
En otras palabras, la serología se refiere al estudio del contenido de
anticuerpos en el suero. Ciertos microorganismos estimulan al cuerpo
para producir estos anticuerpos durante una infección activa. En el
laboratorio, los anticuerpos reaccionan con los antígenos de formas
específicas, de tal manera que se pueden utilizar para confirmar la
identidad del microorganismo en particular.
http://www.monografias.com/trabajos31/pruebas-alergicas/pruebas-alergicas.shtml
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CRITERIOS PARA UNA PRUEBA SEROLÓGICA
Existen numerosos criterios que determinan cual es la mejor prueba
de diagnóstico para una situación dada e incluyen: COSTO,
SENSIBILIDAD, ESPECIFICIDAD, RAPIDEZ y DISPONIBILIDAD. Para el
diagnóstico clínico, muchas veces es muy importante clarificar la meta
precisa de la prueba.
a) Sensibilidad: Es la habilidad de una prueba para detectar a
TODOS los verdaderos positivos.
b) Especificidad: Es la habilidad de una prueba para detectar SOLO
a los verdaderos positivos.
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RESPUESTA
INMUNE
HUMANA
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ESTRUCTURA DE UN ANTICUERPO IGG
Ag
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Sub-clases de inmunoglobulinas humanas
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Diagnóstico inmunológico
Intradermoreacciones: (Montenegro o
Leishmanina) Leismaniasis cutánea
(hipersensibilidad tardía a antígenos).
Serológicas:
-Fijación de complemento
-Inmunodifusión
-Inmunoelectroforesis
-ELISA (requiere Ag parasitarios)
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CLASIFICACIÓN DE LOS ANTÍGENOS
PARASITARIOS
Según la composición química:
Proteínas
Glicoproteínas
Glucolípidos
Polisacáridos
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CLASIFICACIÓN DE LOS
ANTÍGENOS PARASITARIOS
Según la fuente de donde se obtienen:
Antígenos solubles excretados o secretados
Antígenos solubles extraídos del parásito
Antígenos sintéticos
Antígenos recombinantes
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ANTÍGENOS ESPECÍFICOS
Esquema de la producción
de un antígeno recombinante
(BIOLOGÍA MOLECULAR)
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Utilidad médica diagnóstica de los
antígenos parasitarios
Establecer el diagnóstico de infección reciente o
antigua.
Identificar los antígenos que inducen protección y
por tanto, pueden ser útiles en la vacunación.
Conocer los mecanismos de patogenia.
Estudiar los factores de virulencia de los parásitos.
Diseñar y mejorar las técnicas diagnósticas
existentes.
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TÉCNICAS DE PRECIPITACIÓN
Se requiere que tanto el Ac y el Ag
se encuentren en un medio fluido en
el que sea posible la precipitación
del complejo Ag-Ac.
Las principales son:
1. Técnica de precipitación
propiamente dicha
2. Técnica de difusión radial de
Ouchterlony
3. Técnica de inmunoelectroforesis
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TÉCNICA DE DIFUSIÓN RADIAL DE OUCHTERLONY
Zona de equivalencia
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TÉCNICA DE INMUNOELECTROFORESIS
Separación de mezcla de Ag
por electroforesis
Reacción con Ac
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Técnicas de Aglutinación
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TÉCNICA DE INMUNOFLUORESCENCIA (IFI)
Fluorescencia (propiedad
de ciertas moléculas) que al
ser irradiadas con una
longitud de onda adecuada,
emiten radiación de longitud
de onda característica y
esto permite su
cuantificación.
Se usa en la detección de
auto-Ac y Ac contra Ag de
superficie de células y
tejidos.
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IFI DE GLOBULOS ROJOS PARASITADOS CON MALARIA
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ANTÍGENOS ESPECÍFICOS
Prueba de ELISA
(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)
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TIPOS DE ELISAS
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ELISA
La técnica inmunoenzimática ELISA forma parte
de aquellas reacciones serológicas que utilizan
conjugados para poder visualizar la reacción
ANTIGENO-ANTICUERPO.
Se basa en el uso de anticuerpos marcados con
una enzima (generalmente la peroxidasa), de
forma que los conjugados resultantes tengan
actividad inmunológica como enzimática.
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ELISA
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DETERMINACIÓN DE ANTÍGENOS
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Fases de la técnica Elisa Sandwich. (1) Un anticuerpo monoclonal o
policlonal anti antígeno suele estar ya unido a la placa. (2) se incuba
con la muestra problema. (3) se añade el conjugado. (4) por último el
sustrato. Todos los pasos van precedidos de incubaciones y lavados.
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DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS
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ELISA INDIRECTO
Es el método más utilizado para la
determinación de anticuerpos. Básicamente,
consiste en la inmovilización a la placa de ELISA
del antígeno (en los Kits ya viene fijado) del que
queremos conocer si en el suero problema existen
anticuerpos específicos. Se pueden utilizar como
antígenos, proteínas virales o bacterianas e incluso
virus completos.
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Fase de la técnica Elisa indirecto. (1) El antígeno se pega a la placa
(2) Se añade el suero problema. (3) posteriormente, el conjugado. (4)
y por último, el sustrato.
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ANTIGENICIDAD DE EVANSAÍNA POR
ELISA INDIRECTO
Reconocimiento de EvaR entre los
días 14-50 P.I, con mayor reactividad
en el día 24 P.I., con Abs. 0,4-0,75.
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ESQUEMA DE LA TÉCNICA
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INMUNOELECTROTRANSFERENCIA O
WESTERNBLOT
Es una técnica muy sensible, de fácil manejo,
ejecución e interpretación. No necesita de equipos
especiales para su realización.
Esta técnica está fundamentalmente indicada en el
estudio de un número no muy elevado de sueros. Al
no necesitar ningún tipo de equipo especial, es de
fácil realización incluso con pocas condiciones de
laboratorio. En la actualidad existen algunos Kits
disponibles, pero la oferta irá progresivamente en
aumento.
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ANTIGENICIDAD DE EVANSAÍNA:
INMUNOTINCIÓN CON SUEROS DE EQUINOS.
Panel A: EvaR Panel B: Stev
STD 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 C 1 3 5 6 7 8 9 10 11
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Diagnostics Methods in Ocular Infections−From Microorganism Culture to Molecular Methods
Victor Manuel Bautista-de Lucio1, Mariana Ortiz-Casas1, Luis Antonio Bautista-Hernández1, Nadia Luz López-Espinosa1,
Carolina Gaona-Juárez1, Ángel Gustavo Salas-Lais1, 2, Dulce Aurora Frausto-del Río1 and Herlinda Mejía-López1
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REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)
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Replicación del DNA del ADN
DNA polimerasas. Catalizan la polimerización del ADN.
Dirección 5’ → 3’. Requieren un cebador
dNTP
Mg+2
cebador
DNA molde
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REQUERIMIENTOS DE PCR
Se requiere pequeña cantidad de ADN (10 ng)
Se requiere equipos especiales y áreas
absolutamente especiales para el aislamiento y
preparación de las muestras, para evitar la
contaminación y así los falsos positivos.
Los productos de amplificación se observan en
geles de agarosa o poliacrilamida.
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ALGUNAS APLICACIONES Y VARIANTES
DE LA PCR
Diagnóstico de agentes infecciosos patógenos
Multiplex PCR
Clonación de genes
“Colony” PCR
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GENOTIPIFICACIÓN DE VPH POR PCR
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Detección de Babesia sp. en Bovinos de campo
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!PARA CURAR, HAY QUE DIAGNOSTICAR!
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TAREA 3
o Diseñar un juego didáctico tipo tablero de mesa para niños (6-12
años), con el siguiente contenido:
1. Basado en la biología de helmintos ó bacterias, sintomatología de
la enfermedad asociada y recomendaciones para la prevención,
ó
2. Diagnóstico de la enfermedad.
o Utilizar gráficos, imágenes, mapas.
o Presentación impresión digital (PDF), hoja carta y/o oficio, subir a la
carpeta de trabajos en Aula virtual.
o Equipos de 4-5 integrantes, entrega acorde al calendario de aula
virtual.
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