Biología de los macrófagos

El proceso de inflamación comienza con una herida en la cual han entrado microorganismos. En la inflamación hay
un reloj y se media por los neutrofilos, monocitos y luego linfocitos T. Para salir estas células al tejido afectado, es
necesario que interaccionen con el endotelio, por medio de diferentes receptores. Hay un grupo de macrófagos que
se producen en la medula osea, pasan por la sangre (factores de crecimiento) y luego a los tejidos, donde pasan a ser
células diferentes (osteoclastos, de langerhans, de kupffer…etc) y algunas vuelven al endotelio. Otros macrófagos
salen cuando hay emergencias. (La microglia deriva del cerebro, no de la medula osea).

LY6C es un marcador de monocitos. Las bajas se colocan en el endotelio y vigilan. Si pasa algo, con el marcador bajo
llaman a los neutrofilos y los reclutan. Una vez que ocurre esto, se producen las altas, que iran al tejido afectado. En
la inflamación, al principio llegan los neutrofilos y posteriormente llegan los macrofagos, captan los neutrofilos
muertos, terminan su trabajo, se destruye el tejido y posteriormente tienen que reparar. Se produce una fase
inflamatoria y otra anti-inflamatoria. No van a entrar todos los neutrofilos que queramos. Con los macrofagos ocurre
lo mismo.

Puede ocurrir que se resuelva normalmente, puede producirse una inflamación crónica cuando hay pocos macrofagos
y cuando hay un exceso de reparación puede ser deletéreo. El problema es cuando esto sucede dentro del pulmón,
puede ocurrir una fibrosis pulmonar. Tiene que haber un balance entre destrucción y reparación. Los macrofagos, al
contrario que los linfocitos, pueden cambiar de fenotipo.

La arginina es esencial para el macrofago, la produccion de oxido nitrico depende de este aa, entre otros, que son
importantes en el proceso inflamatorio. El daño se realiza con NO mientras que la arginina se asocia con la reparación
tisular.

Utilizando el complejo RPA (un anticuerpo contra el), se puede ver que en estado normal no hay marcaje de celulas
ni rotura de cadena sencilla, si ponemos interferon gamma vemos roturas. La fosforilacion de p53 es un buen
marcador de la ruptura de DNA. Cuando tratamos los macrofagos con LPS hay mortandad, se produce TNF alfa de
manera autocrina y por otra via que concluye en la apoptosis. El factor p21 es requerido para el efecto anti-apoptotico
mediado por IFN-gamma. El IFN media sobre dicho factor.

DNA polimerasa u

Esta muy expresado en macrofagos y en el timo. La expresión relativa se observa alta en macrofagos y se activa en
una actividad pro-inflamatoria y no por la actividad anti-inflamatoria. Lo que se hizo fue quitar esta DNA polimerasa
reparadora, y se observó que no hay cancer (se pensaba lo contrario). Se observo si el raton expresa los mismos
marcadores. Se trataron celulas normales con etoposido, una molecula artificial que rompe el DNA en cadenas de
doble sentido. Se observa que la aparicion de p53 y en WT desaparece y en Pol u (-/-) se mantiene. Se observo que
los KO de Polu prolifera menos.

Se utilizo un modelo que se trata de una rotura del musculo tratandolo con notexina (veneno de serpiente). SE
observa como al paso de 7 dias se curo pero si eliminamos macrofagos con toxina difterica, no hay recuperación. Se
observo que los macrofagos son los encargados de la reparación. EL hecho de no tener Pol u hace que la inflamación
no se repare correctamente. La Pol u es requerida por los macrofagos para sobrevivir en el foco inflamatorio. Cuando
se infecta con Klebsiella, los de pol u -/- sobreviven más (ver papel del TNF).

Nbs1 (Nijmegen breakage syndrome 1)

Es una molecula incriminada en la reparacion del DNA. Se trabajo con KO parciales. Se observan mas rupturas del
DNA en ratones sin Nbs1. Se añade Dnfb en la oreja a un raton, que es una sustancia irritante. Existen un aumento de
inflamacion en dicha oreja en ratones sin Nbs1. Las roturas de doble hebra, con Nbs1 repara el DNA pero si no hay
esta proteína no hay reparación.

Aicardi-Goutières (interferopatías)

Se asocia a una serie de proteínas relacionadas con la reparación del DNA. Unas proteinas facilitan el progreso del
VIH y otros lo restringen. Las proteinas son inducibles durante la inflamación, funciones en común pero son
diferentes. Los macrófagos (hipotesis) entran en el cerebro, si mueren, no son capaces de reparar el cerebro, se
produce una calcificacion del cerebro, la cual es la base del DNA. Trex1 se induce por productos que tienen que ver
con la inflamación. Se miraron genes que se inducen en exceso cuando falta esta proteina. Muchos de esos genes
servían para reparar el DNA. Trex1 tiene muchas posibilidades de jugar algo en la reparación del DNA. La supervivencia
de celula se encuentra muy disminuida en ausencia de Trex1. Samhd1 se localiza en los mismos sitios que Trex1. Si
falta una, la otra no compensa. Trex1 repara el DNA y Samhd1 se encarga del aporte de nucleotidos. Un fallo en
cualquiera de estas va a desencadenar en la enfermedad. Trex1 es requerido para la fagocitosis correctamente. El
LES, la frecuencia de la mutacion de Trex1 son comunes a todos estos, pudiendo producir dicha enfermedad
autoinmune.

En un test in vivo, podemos diferenciar los macrofagos negativos, que son los que patrullan, mientras que los positivos
son los que entran en acción. Se midieron alrededor de 20 marcadores. Se les inyectan celulas a los ratones y se
observa como los LYC6 altos se convierten en bajos. Una vez inyectadas las celulas, se pueder ver donde van las celulas
marcadas con fluorescencia. Los macrofagos van donde haya NFCB.

Vamos a tratar celulas con citocinas proinflamatorias o antinflamatorias. Con antinflamatorias tardan mas en
repararse, se esta modificando el escenario de la reparación.

Modelo de encefalopatia experimental

A nivel del cerebro, modelo de enfermedad autoinmune. La esclerosis multiple provoca parálisis. El primer
experimento consistio en provocar la enfermedad y posteriormente en los diferentes scores inyectaremos las celulas
y veremos si va a la columna vertebral o no. Las celulas positivas van adentro del cerebro y las negativas no van.

En un modelo de infeccion con klebsiella, se observo que el numero de bacterias baja mucho a nivel de los pulmones.
Si utilizamos klebsiella con PBS mueren menos que si ponemos con Ly6C.

Modelo tumoral

Se inyectaron muchas celulas durante 15 días y no pasaba nada, no morían, tenian una función. Existe una
cicatrización o fibrosis gracias a la inyección de estas células. En otros trabajos se estudió el mecanismo de entrada
de la arginina. Lo hacen por medio de un transportador. Otro experimento tenia que ver con aumentar el numero de
componentes para activar los macrofagos y se observan las células T. La arginina es necesaria para los macrofagos o
para que las celulas tumorales crezcan. La argninina va a parar a los macrofagos y no al tumor, impidiendo su
crecimiento.