INTRODUCCIÓN

El ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico, este constituye el material

genético de los organismos, además es el componente químico primario de los
cromosomas y el material del que los genes están formados.

El ADN es la sustancia química donde se almacenan las instrucciones que dirigen el

desarrollo de un huevo hasta formar un organismo adulto, que mantienen su
funcionamiento y que permite la herencia. Es una molécula de longitud gigantesca, que
está formada por agregación de tres tipos desustancias: azúcares, llamados
desoxirribosas, el ácido fosfórico, y bases nitrogenadas de cuatro tipos, la adenina, la
guanina, la timina y la citosina. Los azúcares y los ácidos fosfóricos se unen lineal y
alternativamente, formando dos largas cadenas que se enrollan en hélice. Las bases
nitrogenadas se encuentran en el interior de esta doble hélice y forman una estructura
similar a los peldaños de una escalera. Se unen a las cadenas mediante un enlace con
los azúcares. Cada peldaño está formado por la unión de dos bases, formando los pares
de bases anteriormente mencionados; pero estos emparejamientos sólo pueden darse
entre la adenina y la timina o entre la citosina y la guanina.

Este experimento de laboratorio se lleva a cabo con el objetivo de demostrar varias

interrogantes con respecto al ADN, nuestros objetivos son (1) Utilizar técnicas básicas
para extraer el ADN de un tejido vegetal y animal, para así poder (2) Observar la
estructura fibrilar del ADN y con esto (3) Aprender a extraer ADN de cosas básicas como
lo son las frutas, verduras o carnes.
 Objetivos

 Conocer mediante una simulación de laboratorio, las técnicas orientativas

y confirmativas que se le practican a las muestras de semen.
 Saber los principios de porque se utilizan estas técnicas, y cuál es su
propósito en el ADN.
 Observar los diferentes espermatozoides con la ayuda del microscopio,
en los distintos enfoques.
 Determinar las diferentes características de los espermatozoides .

 Materiales y Reactivos

 Semen
 Porta y cubreobjetos
 Guantes
 Microscopio
 Pipeta Pasteur plástica
 Aceite de inmersión
 Puente para tinción
 Eosina
 Colorantes: - Rojo Rápido Nuclear y - Picro Índigo Carmín
  Elemento / Procedimiento

- Semen Humano

1. Se tuvo abstinencia sexual de 3 a 6 días. (descrito por el profesor)

2. Se recolecto la muestra por masturbación. (compañero)
3. Se depositó en un recipiente estéril.
4. Obtención de la muestra recolectada en el hogar:
5. Se practicó en el laboratorio en un máximo de 1 hora o ½ hora después de
haberla recolectado.
6. Finalmente se mantuvo la muestra lo más cercano a la temperatura corporal.

- Procedimiento

 Con una pipeta se agregó una gota de semen en un porta objetos.

 Se esparció, hasta dejarse secar completamente a temperatura ambiente.
 Se analizó en el microscopio las diferentes características enfocando en
10x y 40x.
 Luego se procedió a emplear la tinción adicionando colorante rápido
cubriendo toda la placa esperando por 10 minutos.
 Seguido se le adiciono índigo carmín por 3 minutos; y se desechó lo que
no se necesitaba.
 Se esperó hasta que se secara.
 Y finalmente se hizo tinción con eosina enfocando con el microscopio en
100x (con aceite de inmersión). Encontrando células en el interior teñido
(muertas) y células solo teñidas en su entorno (vivas).

 Resultados y Análisis

SEMEN HUMANO

Resultados

 Una vez realizado el examen macroscópico se prosiguió a realizar el

microscópico, colocando una gota de semen en un portaobjetos y
enseguida del cubreobjetos (el objetivo de este examen fue obtener la
visibilidad de los espermatozoides)
 Se obtuvo como resultado cada una cada una de las características vistas
de los espermatozoides microscópicas como: Movilidad, vitalidad, Células
 redondas y otras células y macroscópicas como color, viscosidad, y
volumen.
 Se comenzó el conteo tomando como referencia por ejemplo una
aproximación en un campo de 100 espermatozoides y se reportó
mediante porcentajes, con su respectiva característica de movilidad.
 Para reportar la morfología se prosiguió empleando la tinción de árbol de
navidad, adicionando rojo rápido que cubriera toda la placa esperando por
10 minutos, luego se le adiciono índigo carmín por 3 minutos. Y finalmente
se lavó para esperar que se secara, y así poder concluir características
como espermatozoides con la cabeza roja y la cola verde.
 Para realizar la viabilidad en otro portaobjeto, se colocó la gota de semen
esparcida y una gota de Eosina G, se colocó el cubreobjetos y se
esperaron 2 minutos para realizar la observación (los espermatozoides
muertos se observan con la cabeza de un color parecido al naranja). El
conteo se realizó también tomando en cuenta 100 células aproximadas y
se reportó cierto porcentaje.

(Muestra): salinas jara erick (compañero)

Examen Macroscópico

 Aspecto (color): Blanquecino

 Licuefacción: 30 min.
 Viscosidad: Normal
 Volumen: 3.9 ml.

Examen Microscópico

 Motilidad (100 células)

 Progresiva lineal rápida: 78%
 Progresiva lineal lenta: 11%
 No progresiva: 8%
 Inmóviles: 3%

 Viabilidad (% vivos): 90%

Morfología

 Normal: 85%
 Piriformes: 10%
 Bicéfalos: 0%
 Amorfos: 0%
 Redondos: 2%
 Corta: 0%
 Sin cola: 0%
 Doble: 0%

1. 10X

2. 40X

3. 100x

Tinción Árbol de navidad

 - Rojo rápido
- Índigo carmín

100x

Tinción Eosina

100x

 Conclusiones
 La identificación del semen es de vital importancia en la investigación del
genoma humano y ADN en la herencia genética .
 El líquido espermático se puede presentar al investigador en cuatro
formas distintas: como mancha; impregnado en un tejido; como fluido,
mezclado con otros fluidos corporales; como la secreción vaginal, y por
último; como semen o líquido espermático.
 De las características que tiene el semen podemos hablar el esperma total
(recién emitido) es un líquido cremoso, de color opalino, que tiende a
amarillo verdoso cuando pasa el tiempo.
 Consta de dos elementos diferentes: las células o espermatozoides
procedentes de los tubos seminíferos del testículo, y el plasma seminal,
que procede del epidídimo, próstata, vesículas seminales y glándulas de
Cowper.
 Este laboratorio se realizó con la finalidad de detectar anormalidades en
el semen, ubicando una posible malformación en los espermatozoides,
así como determinando una serie de procesos los cuales evalúan el
semen macroscópicamente (aspecto, viscosidad, volumen,) y
microscópicamente analizando las células que lo componen (esperma)
evaluando su movilidad, morfología, etc.
 La coloración de Eosina solo tiñe la cabeza del espermatozoide por su
contenido nuclear.
 La tinción de árbol de navidad:
- Permite contrastar la tinción de los espermatozoides
- Permite determinar una escasa cantidad de espermatozoides
- Permite distinguir los espermatozoides por su color y no por su tonalidad.
 La coloración resultante de la tinción con eosina es rosada-anaranjada
para citoplasmas, y rojo intenso en el caso de los eritrocitos.

Que movilidad tiene el espermatozoide?

 El 55% es plasma, que es la parte líquida, compuesta por agua, sales minerales y
proteínas. El 45% restante se compone de glóbulos rojos, glóbulos blancos y
plaquetas

Que tipo de celula tiene el espermatozoide?

Los espermatozoides contienen los gametos masculinos de células heteromorfas,

diferenciadas y ordenadas en capas superpuestas, formando tejidos diversos.

Como consecuencia de lo anterior, es fácil suponer que exista gran diversidad de este tipo de
células germinales (gametos masculinos); sus formas y estructuras varían considerablemente
según los grupos taxonómicos que se examinen, aunque todos ellos siguen un plan común: se
trata de una célula animada, con forma de huso o filamento, provista de una cabeza y una cola.

La composición de la sangre?

El 55% es plasma, que es la parte líquida, compuesta por agua, sales minerales y
proteínas. El 45% restante se compone de glóbulos rojos, glóbulos blancos y
plaquetas

Que es ADN ?

Es un ácido nucleico que contiene las instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y

funcionamiento de todos los organismos vivos y algunos virus, y es responsable de su
transmisión hereditaria. La función principal de la molécula de ADN es el
almacenamiento a largo plazo de información para construir otros componentes de las
células, como las proteínas y las moléculas de ARN

Que métodos de extracción de ADN existen?

Método de calentamiento: la pata fue homogeneizada de forma manual en

nitrógeno líquido y 50 µL de agua destilada. Se incubó a 93 °C durante 15 min.
Se realizó una centrifugación a 8 000 g por 10 min y el sobrenadante se conservó
a - 20 °C.

Método fenol-cloroformo:3 la pata fue homogeneizada de forma manual en

nitrógeno líquido y 1 mL de tampón de lisis (tris-HCl 50mM pH 8,25; EDTA 50
mM; NaCl 50 mM; SDS 1 %).
Método del acetato de potasio:8,9 la pata fue homogeneizada de forma manual en
100 µL de tampón de lisis (NaCl 0,1 M; sacarosa 0,2 M; EDTA 50 mM; tris-HCl
100 mM pH 8,25; SDS 0,05 %)

Método del acetato de potasio modificado : La suspensión se incubó con 100

µg/mL de proteinasa K (Boehringer Mannheim) durante 1 h a 56 °C. Los ácidos
nucleicos se extrajeron adicionando 100 µL de acetato de potasio 3 M incubándose
en hielo durante 1 h, seguido de una centrifugación a 8 000 g durante 10 min a
4 ºC donde se colectó la fase acuosa.

Método de bromuro de cetil-trimetil amonio .

En que se diferencia el ADN y el ARN ?

El ARN se compone de cadenas más cortas de nucleótidos. La columna vertebral

del ADN consiste en azúcar desoxirribosa, mientras que la del ARN contiene el
azúcar ribosa. En el ADN, la complementaria a la adenina (A) es timina (T); mientras
que en el ARN es el uracilo .

Que papel cumple la proteína en el ADN?

Las proteínas son macromoléculas que cumplen funciones variadas. Hay proteínas
estructurales, otras son enzimas, otras transportan oxígeno como la hemoglobina,
hay proteínas involucradas en la defensa inmunitaria, como los anticuerpos, otras
cumplen funciones de hormonas como la insulina, etc.

Por qué el sodio neutraliza la carga negativa de los grupos fosfatos?

El ADN es soluble en alcohol, pero se torna insoluble en presencia de sal (NaCl)

porque el sodio neutraliza la carga negativa de los grupos fosfatos. El etanol
formará una capa en la superficie por ser menos denso que la solución acuosa.

Los grupos fosfato son la parte hidrofílica del ADN y tienen carga negativa. A
partir de los ... disminuyen la extracción a unas cuantas horas porque reducen
el número de ..... sodio o amonio que se unen a los grupos fosfato, esta
mezcla reduce las fuerzas ... Tris-HCl 10 mM a pH 8.5 para neutralizar la
carga de las perlas.