Universidad Industrial de Santander

Facultad de Salud
Escuela de Microbiología
Hematología II
Guía de Laboratorio
Cecilia Salamanca Ojeda
Martha Lucia Sánchez Jaimes
Docentes
Ruth Stella Sánchez Flórez
Nataly Cruz Rodriguez

ANTÍGENOS ERITROCITARIOS

Los anticuerpos frente a los antígenos de las células sanguíneas pueden ser naturales o inmunes,
regulares o irregulares. Los anticuerpos naturales se hallan presentes en los individuos sin mediar una
sensibilización previa y en general, son de clase IgM. Actúan mejor a temperaturas bajas y dado que se
detectan in vitro por aglutinar a los eritrocitos en medio salinos, se denominan completos o aglutinantes.
Los anticuerpos inmunes requieren una estimulación o sensibilización previa. Suelen ser de clase IgG y
actúan mejor a temperaturas superiores a los 30 C, por lo que tienen más interés clínico. Para
detectarlos in vitro son necesarias modificaciones del medio y por eso se denominan incompletos o
sensibilizantes.

Los anticuerpos regulares son los que se detectan en forma constante en los individuos que carecen del
antígeno correspondiente y cuya ausencia constituye una excepción a la normalidad. Siempre son
naturales. El ejemplo más conocido es el sistema ABO, en el que todos los individuos carentes del
antígeno A o B presentan anticuerpos anti-A o anti-B, respectivamente.
Los anticuerpos irregulares son aquellos cuya presencia no es constante, aun en ausencia del antígeno.
Pueden ser naturales o inmunes.

Se identifican anticuerpos contra antígenos, componentes leucocitarios, plaquetarios, eritrocitarios o del

sistema HLA. Entre los anticuerpos antieritrocitos el más nocivo es el que provoca la incompatibilidad por
sistema ABO.

Desde el punto de vista de la medicina transfusional, los anticuerpos contra antígenos sanguíneos se
clasifican como anticuerpos sigue:

 Anticuerpos contra aloantígenos: los que se producen contra antígenos de eritrocitos, leucocitos y
plaquetas.
 Anticuerpos contra los propios antígenos del individuo: autoanticuerpos contra antígenos,
eritrocitos y plaquetas, y los producidos en enfermedades autoinmunes, como las de la colágena.

En este contexto podemos considerar a los anticuerpos autoinmunes como anticuerpos irregulares o
adquiridos, y dividir a los aloanticuerpos de la siguiente forma:

 Regulares naturales: los producidos contra el sistema ABO (anti-A y anti-B).

 Irregulares naturales: anti A1, anti-M, anti-N, anti-P1. anti-E, entre otros
 Irregulares adquiridos o inmunes: antisistema RhHr (anti-D. anti-c, anti-C, y otros), anti-Kell, anti-
Duffy

Los del sistema ABO aparecen una vez que el individuo entra en contacto con el medio ambiente y en el
cual se encuentran microorganismos como algunas bacterias coliformes que contienen sustancias
químicas en su estructura parecidas a las de este sistema. Por anticuerpos regulares debemos identificar
a los que existen en todos los individuos y que éstos tendrán durante toda su vida.
Los anticuerpos irregulares son los que no están en todos los individuos, aunque en el caso de los
naturales no se conoce a ciencia cierta qué o cómo se induce su producción. Los adquiridos se conocen
también como inmunes y son el resultado de la exposición a antígenos desconocidos por el individuo al
momento de la transfusión o en las mujeres por el embarazo; estos anticuerpos son dirigidos contra
antígenos de sistemas diferentes al ABO.

Los anticuerpos naturales regulares fijan de manera tan eficiente el complemento que pueden provocar
lisis intravascular y ocasionar insuficiencia renal o incluso la muerte del paciente.
Los anticuerpos adquiridos o inmunes producen hemólisis extravascular en el bazo o en el hígado
mediante fagocitosis del complejo eritrocito más anticuerpo.

De acuerdo con la temperatura óptima de reacción, estos anticuerpos se dividen en anticuerpos fríos y
anticuerpos calientes. Los anticuerpos fríos van dirigidos contra los sistemas MN, Lewis y P1, con óptima
reacción a temperaturas entre 4 y 22 °C; estos anticuerpos son generalmente inmunoglobulinas tipo M y
ocasionalmente tipo G, y debido a esa temperatura de reacción carecen de importancia clínica salvo que
su reacción ocurra también a 37 °C, es decir, que actúen como anticuerpos calientes. Entre estos
anticuerpos sólo los MNS han sido asociados con enfermedad hemolítica del recién nacido, cuya
severidad va de leve a moderada.
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Los llamados anticuerpos calientes tienen una temperatura óptima de reacción a 37 °C, a veces visible,
pero en otras ocasiones sólo evidente hasta agregar antiglobulina humana (suero de Coombs). Estos
anticuerpos tienen una relevante importancia clínica ya que se les asocia con reacciones transfusionales
de intensidad moderada a severa, que pueden ocasionar la muerte; además, son causantes de
enfermedad hemolítica en el recién nacido, quien en ocasiones requiere exsanguinotransfusión2.

Las reacciones antígeno-anticuerpo pueden observarse in vitro por:

 Hemólisis: la unión antígeno-anticuerpo se traduce en lisis de los eritrocitos en presencia del

complemento (siempre que el anticoagulante empleado no capture los iones Ca y Mg necesarios
para la activación del complemento).
 Aglutinación: los anticuerpos que reaccionan en medio salino se conocen como anticuerpos
completos o aglutinantes (comúnmente tipo IgM).

RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (RAI)

Fundamento: se ponen a reaccionar glóbulos rojos conocidos con el plasma del paciente para ver si se
produce aglutinación, si esto sucede deben existir anticuerpos irregulares presentes en el plasma del
paciente.

Los anticuerpos iniciales se forman cuando nuestro cuerpo tiene contacto con glóbulos rojos diferentes
de los propios como en el embarazo o en una transfusión. El rastreo de anticuerpos se realiza a la unidad
de sangre y al receptor de la misma, las unidades de plasma fresco congelado (PFC) y plaquetas (PQ)
con rastreo de anticuerpos positivo son descartadas y a los receptores que se les encuentra estos
anticuerpos, se les debe buscar una unidad de sangre que no posea los antígenos correspondientes.

Materiales:

 Cinco tubos de ensayo largos

 Gradillas
 Pipetas Pasteur
 Solución salina fisiológica
 Serófuga o centrifuga
 Células I
 Células II
 Células III
 Albumina Bovina al 30%
 Baño maría a 37 C
 Suero de Coombs policlonal
 Lámpara
 Células control de Coombs
 Glóbulos rojos lavados

Procedimiento:

Lavar los glóbulos rojos del paciente y diluirlos de 3 al 5%

Reactivos y Analitos Paciente

Muestra Sangre con EDTA Adicionar al tubo 3 a 5 gotas
Solución salina fisiológica 0.9% Adicionar solucionar hasta las ¾ partes del tubo
centrifugar 3.500 rpm durante 2 minutos.
descartar el sobrenadante
Agregar nuevamente solución salina al 0.9% hasta las ¾ partes del tubo – centrifugar – descartar y
repetir el proceso anterior tres veces
En el último lavado descartar el sobrenadante y adicionar nuevamente solución salina al 0.9%
hasta obtener un color salmón (concentración de 3-5%).
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Marcar cuatro tubos de ensayo con Cel I, Cel II, Cel III y AC (autocontrol) y agregar:

FASE SALINA
Reactivos y analitos Tubo Cel I Tubo Cel II Tubo Cel III Tubo AC
Suero del paciente 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas
Células I 1 gota
Células II 1 gota
Células III 1 gota
Glóbulos rojos lavados 1 gota
Mezclar y centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos, para facilitar la reacción antígeno-
anticuerpo.

Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y seguir con la fase albumina

FASE ALBUMINA
Reactivos y analitos Tubo Cel I Tubo Cel II Tubo Cel III Tubo AC
Albumina Bovina al
1 gota 1 gota 1 gota 1 gota
30%
Mezclar e Incubar a 37 C por 30 minutos

Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos, para facilitar la reacción antígeno-anticuerpo.

Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y seguir con la fase de Coombs.

FASE DE COOMBS
Reactivos y
Tubo Cel I Tubo Cel II Tubo Cel III Tubo AC
analitos
Solución salina Hasta ¾ partes del Hasta ¾ partes del Hasta ¾ partes del Hasta ¾ partes
fisiológica tubo tubo tubo del tubo
Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos.
Descartar el sobrenadante.
Hacer el lavado de Coombs (anterior proceso) tres veces más y después de centrifugar por última vez
descartar sobre compresa y agregar:
Suero de Coombs 1 gota 1 gota 1 gota 1 gota

Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos, para facilitar la reacción antígeno-anticuerpo.

Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y si la muestra es negativa realizar
el control de Coombs.

Control de Coombs: agregar 2 gotas de células control de Coombs y Centrifugar la muestra a 2000
rpm durante 2 a 5 minutos
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Interpretación de resultados:

 Aglutinación para alguno de los tubos marcados como células I, II, III: RAI positivo para células I o II o
III.
 Aglutinación para varios tubos marcados como células I, II, III: RAI positivo para células I y II o I, II y
III
 Aglutinación para tubo marcado como AC: presencia de autoanticuerpos.
 No aglutinación para todos los tubos y aglutinación para todos en fase control de Coombs: RAI
negativo
 No aglutinación para todos los tubos y no aglutinación para todos en fase control de Coombs: repetir
la prueba por reactivo de Coombs en mal estado o mal realización de la prueba.

RASTREO DE ANTICUERPOS IRREGULARES (RAI) CON TECNICA EN GEL

Fundamentó:

Se han descrito varios métodos en los que los eritrocitos se filtran a través de una columna que contiene
un medio que separa poblaciones de eritrocitos seleccionadas. Se utilizan unas cámaras en las que los
eritrocitos, al pasar por el medio utilizado, según el tamaño se separan los aglutinados de los que están
sin aglutinar.

Procedimiento:

Tanto el gel como las microesferas de vidrio vienen suministrados por la casa comercial en unas cámaras
especiales.

Los eritrocitos y el suero se colocaran en la parte superior de la cámara de la siguiente forma:

Agregar células I, II, III y suero o

plasma de la muestra (cantidad
según casa comercial)

Incubar y Centrifugar el tiempo que indique la casa comercial y

leer.

IDENTIFICACION DE UN ANTICUERPO IRREGULAR

En la búsqueda de Acs irregulares fuera del sistema ABO, se emplean varias células del grupo
sanguíneo “O” a las que se les ha tipificado los siguientes sistemas de grupos sanguíneos Rh, MN. SS,
P, Duffy, kell, kidd, diego, Lewis, Lutherand. Generalmente se utilizan paneles que contienen 11 frascos
de células.

Materiales:

 Doce tubos de ensayo largos

 Gradillas
 Pipetas Pasteur
 Solución salina fisiológica
 Serófuga o centrifuga
 Panel de 11 células para determinación de anticuerpos irregulares
 Albumina Bovina al 30%
 Baño maría a 37 C
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 Suero de Coombs policlonal

 Lámpara
 Células control de Coombs
 Glóbulos rojos lavados

Procedimiento:

Lavar los glóbulos rojos del paciente y diluirlos del 3% al 5%

Reactivos y Analitos Paciente

Muestra Sangre con EDTA Adicionar al tubo 3 a 5 gotas
Solución salina fisiológica 0.9% Adicionar solucionar hasta las ¾ partes del tubo
centrifugar 3.500 rpm durante 2 minutos.
descartar el sobrenadante
Agregar nuevamente solución salina al 0.9% hasta las ¾ partes del tubo – centrifugar – descartar y
repetir el proceso anterior tres veces
En el último lavado descartar el sobrenadante y adicionar nuevamente solución salina al 0.9%
hasta obtener un color salmón (concentración de 3-5%).

Marcar doce tubos de ensayo de 1 a 11 y AC (autocontrol) y agregar:

FASE SALINA
Reactivos y Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo Tubo
analitos 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 AC
Suero del 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2 2
paciente gotas gotas gotas gotas gotas gotas gotas gotas gotas gotas gotas gotas
1
Células 1
gota
1
Células 2
gota
1
Células 3
gota
1
Células 4
gota
1
Células 5
gota
1
Células 6
gota
1
Células 7
gota
1
Células 8
gota
1
Células 9
gota
1
Células 10
gota
1
Células 11
gota
Glóbulos 1
rojos lavados gota
Mezclar y centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos, para facilitar la reacción antígeno-
anticuerpo.

Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y seguir con la fase albumina
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FASE ALBUMINA
Reactivos y analitos Tubos de 1 al 11 Tubo AC
Albumina Bovina al 30% 1 gota 1 gota

Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos, para facilitar la reacción antígeno-anticuerpo.

Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y seguir con la fase de Coombs.

FASE DE COOMBS
Reactivos y analitos Tubos del 1 al 11 Tubo AC
Solución salina fisiológica Hasta ¾ partes del tubo Hasta ¾ partes del tubo
Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos.
Descartar el sobrenadante.
Hacer el lavado de Coombs (anterior proceso) tres veces más y después de centrifugar por última vez
descartar sobre compresa y agregar:
Suero de Coombs 1 gota 1 gota

Centrifugar la muestra a 2000 rpm durante 2 a 5 minutos, para facilitar la reacción antígeno-anticuerpo.

Observar la reacción colocando el tubo sobre la lámpara encendida y si la muestra es negativa realizar
el control de Coombs.

Control de Coombs: agregar 2 gotas de células control de Coombs y Centrifugar la muestra a 2000
rpm durante 2 a 5 minutos

Interpretación de resultados:

 Aglutinación para alguno de los tubos marcados 1 al 11: RAI positivo para los antígenos contenidos
en ese frasco de células, se toma nota de los tubos positivos.
 Aglutinación para tubo marcado como AC: presencia de autoanticuerpos.
 No aglutinación para todos los tubos y aglutinación para todos en fase control de Coombs: RAI
negativo
 No aglutinación para todos los tubos y no aglutinación para todos en fase control de Coombs: repetir
la prueba por reactivo de Coombs en mal estado o mal realización de la prueba.

La interpretación del panel se hace por exclusión o descarte de posibles anticuerpos, basándose en la no
reactividad del anticuerpo con aquellas células del panel que poseen determinados antígenos, es decir si
el suero no reacciona con una determinada célula del panel en todas las fases de la prueba significa que
el anticuerpo presente en el suero no está dirigido contra los antígenos presentes en la célula. En cambio
el anticuerpo tendrá especificidad contra el o los antígenos presentes en las células que resulten
aglutinadas.

Para realizar esta evaluación se tiene en cuenta la tabla que contiene cada panel de células.
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BIBLIOGRAFIA

1. Joan l. Vives Corrons, Josep L. Aguilar Bascompte. MANUAL DE TECNICAS DE LABORATORIO EN

HEMATOLOGIA. Tercera Edición. Editorial ELSEVIER MASSON. Barcelona - España. 2006
2. Jacobo Luna-González. Artículo: Anticuerpos irregulares, su importancia en medicina transfusional.
Revista Médica Instituto de México. Mexico. 2005.
3. Instructivo de rastreo de anticuerpos irregulares. Hemocentro de Santander - Hospital Universitario de
Santander 2015.