Clase 4

Citogenética Médica y
Mutagénesis

Gisel Padula
 ¿Qué es la Citogenética?

Es la rama de la genética que tiene por objeto el

estudio de la estructura y comportamiento
cromosómico, a través de técnicas de microscopía
 ¿Qué son los cromosomas?

“Cuerpos coloreados” (cromo:

color; soma: cuerpo)
Cromosoma: unidad de
organización y funcional,
estructura microscópica
Es un estado permanente
dentro del ciclo celular, pero
su condensación es máxima
en metafase
¿Cuáles son las partes de un
cromosoma?

brazo corto

brazo largo
 ¿Cómo se obtienen los cromosomas?

Los cromosomas se pueden obtener a partir de diferentes

tejidos u órganos
- Diagnóstico prenatal: líquido amniótico y vellosidad
corial
- Diagnóstico postnatal: sangre periférica, médula
ósea, células tumorales, etc
 0,5 a 5 ml de sangre periférica (heparina)

siembra de las células en medio de cultivo +
suero + antibiótico y antimicótico + mitógeno
Incubación a 37 ºC durante 48 a 72 hs


Agregado de un agente antimitótico


Agregado de solución hipotónica


Fijación de las células


Goteo del material en portaobjetos


Coloración


Análisis microscópico 
 Cariotipo
Ordenamiento sistemático de los cromosomas. Se
establece a partir de las tres constantes
cromosómicas (número, morfología y estructura).
Los cromosomas se ordenan de a pares, de mayor
a menor tamaño y de acuerdo a la posición del
centrómero
Según lo establecido por ISCN (Sistema
Internacional de Nomenclatura en Citogenética
Humana), la clasificación básica comprende 7
grupos
Citogenética Clínica

Se trata de la investigación y
diagnóstico de patologías
cromosómicas, a nivel fetal
“Diagnóstico Prenatal” y en
individuos ya nacidos y adultos
“Diagnóstico Postnatal”
 Anomalías Cromosómicas
Se presentan en 1 de cada 150 nacidos vivos
Son la principal causa conocida de retraso mental
y de pérdida de la gestación
Se observan anomalías cromosómicas entre el 50
y el 20 % de los abortos espontáneos del 1er y
2do trimestre
Se clasifican en:
Anomalías del Número (ACN)
Anomalías de la Estructura (ACE)
 Anomalías Numéricas
Euploidía: presencia de uno o más juegos haploides
en las células.
- Monoploidía (x)
- Poliploidía (3n, 4n)
Aneuploidía: se pierden o se ganan algún/os
cromosomas.
- autosómicas
- gonosómicas
 Anomalías del Número de
Cromosomas
Poliploidías

Triploidías (3n = 69)

Tetraploidía (4n = 92)
 Causas de Poliploidías
Dispermia; Diandria; Diginia
 Aneuploidías Autosómicas

Monosomías (2n-1= 45): una única copia de un

cromosoma en una célula (incompatibles con la
gestación a término)

Trisomías (2n+1= 47): tres copias

Ejemplos de trisomías
 Aneuploidías
Causas: No-disyunción; Anafase lag
 Trisomía 21 (47,
XY,+21), Sindrome de
Down: frecuencia
1/750 nv.

Trisomía 18 (47,XX,+18),
Sindrome de Edwards:
1/ 6.000 nv. El grado de
retraso es mayor que en
S. de Down.

Trisomía 13
(47,XX,+13), Sindrome
De Patau: 1/12.000 nv.
 Trisomías y Edad Materna
La mayoría de las trisomías aumenta su prevalencia
a medida que avanza la EM
Ej. S. Down: en < 30 años 1/800; a los 35 años
1/400; a los 40 años 1/100
2 factores:
Por envejecimiento celular y cambios en el medio
hormonal;
Se pierde la capacidad de reconocer concepciones
anormales y eliminarlas
 Aneuploidías Gonosómicas
Las consecuencias son menos graves que las
aneuploidías de los autosomas por la inactivación del X
Ejemplos

Monosomía del X (45, X0), S. de Turner: 1/2700 mujeres

nv
Sindrome de
Klinefelter
(47,XXY): 1/ 1.000
varones nv

(47,XXX): 1 /1.000 mujeres nv

48,XXXX o 49,XXXXX: aumento del retraso mental y físico
47,XYY: 1/1.000 varones nv (trastornos menores de conducta y CI
levemente disminuido)
 Anomalías de la estructura
cromosómica
Equilibradas: la redistribución no causa una
pérdida o ganancia de material cromosómico
Desequilibradas: hay pérdida o ganancia

Las anomalías estructurales, especialmente las

desequilibradas, pueden originar enfermedades
en los individuos o en su descendencia
 Equilibradas
Translocaciones: intercambio de material genético
entre cromosomas no homólogos. Frecuencia
1/500 individuos

Translocaciones Recíprocas: las roturas ocurren

en dos cromosomas diferentes y el material se
intercambia mutuamente.
 Translocaciones Robertsonianas: se pierden los
brazos cortos y se funden los brazos largos de los
cromosomas acrocéntricos. El nro. cromosómico
disminuye en 1.

Ej.: t(14;21) segregación adyacente: S. Down

Translocación Robertsoniana y Origen Humano
Inversión: dos roturas en un cromosoma seguidas de
la reinserción del fragmento en orden invertido.
Puede ser: i. Pericéntrica (incluye el centrómero) o
i.Paracéntrica (no lo incluye). Frecuencia: 1/1.000.
 Desequilibradas
Deleciones: causada por una rotura cromosómica y la
consiguiente pérdida del material genético
Ejs.: S. de cri-du-chat: del (5p); S. De Wolf: del (4p)

Microdeleciones: deleciones identificadas con las técnicas de

bandeo de alta resolución y citomoleculares. Ejs.: S. de Prader-
Willi (15q paterno); S. de Angelman (15q materno).
 Duplicaciones: copias extras de un segmento
cromosómico. Pueden originarse de cruzamientos
desiguales o aparecer en la descendencia de
portadores de una translocación recíproca.
 Citogenética del Cáncer
La combinación de citogenética convencional, FISH y
análisis molecular permite la clasificación de las
neoplasias y la monitorización del efecto del tratamiento
Leucemias
LMC t(9;22) (q34;q11)
LMA t(8;21) (q22;q22)
Tumores sólidos
Linfoma de Burkitt t(8;14) (q24;q32)
Retiniblastoma del (13) (q14)
Tumor de Wilms del (11) (p13)
Mutagénesis

La citogenética se utiliza
también para medir el
efecto de agentes
mutagénicos valorando la
presencia de ACN y ACE
Genotoxicidad
Agentes genotóxicos,
artificiales y naturales,
pueden producir
alteraciones sobre el
genoma, en células
somáticas y germinales.
Estos eventos pueden ser
causa de cáncer y
defectos del desarrollo
 Obtención de Cultivos

Diferentes tejidos (sangre periférica, médula ósea,

células tumorales, líq.amniótico y vellosidad corial)
Los estudios pueden ser:
- In vivo (epidemiológicos o de intervención)
- In vitro (células, líneas celulares o animales de
laboratorio)
 Evaluación de Cito y Genotoxicidad
De Nivel Primario: procariotas
De Nivel Secundario: líneas celulares
De Nivel Terciario: animales de laboratorio
De Nivel Cuaternario: poblaciones expuestas

Análisis de Aberraciones Cromosómicas

Estructurales (ACE)
Ensayo de micronúcleos por bloqueo de la
citosinesis (CBMN)
Ensayo de electroforesis en gel de células
individuales (Cometa)
 Análisis de ACE
TIPO - Brechas intersticiales o gaps (chtg, chrg)
SUBCROMÁTIDA
- Adhesividad cromosómica (tas)

TIPO - Fractura de cromátida (chtb, chrb)

CROMÁTIDA

TIPO - Cromosomas en anillo (r)

CROMOSOMA

- Intercambios Asimétricos o Cromosomas

dicéntricos (dic)

- Fragmentos Cromosómicos (ace)

 0,5 a 5 ml de sangre periférica (heparina)

siembra de las células en medio de cultivo +
suero + antibiótico y antimicótico + mitógeno
Incubación a 37 ºC durante 48 a 72 hs


Agregado de un agente antimitótico


Agregado de solución hipotónica


Fijación de las células


Goteo del material en portaobjetos


Coloración


Análisis microscópico 
 Análisis microscópico

Se analizan 200 metafases por cada punto

experimental, estableciéndose la frecuencia de cada
tipo de alteración cromosómica

Con esta técnica podemos evaluar la citotoxicidad a

través del establecimiento del Índice Mitótico (IM)

IM= metafases/1000 células

 Ensayo CBMN
Los micronúcleos (MN) son pequeñas masas de cromatina
que se ubican próximos a los núcleos en interfase

Se originan durante la división celular por la pérdida de

fragmentos y/o cromosomas enteros

Esta técnica permite también detectar :

- Cromosomas dicéntricos
(Puentes nucleoplásmicos o NPBs)
- Amplificación del ADN
(Brotes nucleares o NBUDs)
 0,5 a 5 ml de sangre periférica (heparina)

siembra de las células en medio de cultivo +
suero + antibiótico y antimicótico + mitógeno
Incubación a 37 ºC durante 72 hs


Agregado de un agente bloquedor de la citosinesis


Agregado de solución hipotónica


Fijación de las células


Goteo del material en portaobjetos


Coloración


Análisis microscópico 
 Análisis microscópico
Se contabilizan los MN, los NPBs y
los Nbuds en 1000 células
binucleadas (BN)
Se contabilizan células apoptóticas
y necróticas en 500 BN
Asimismo, se puede establecer el
Índice de división nuclear (IDN)

IDN= 1 x nro. de células

mononucleadas + 2 x nro. de células
binucleadas + 3 x nro. de células tri y
tetranucleadas/nro. total de células
contadas (500)
 Ensayo Cometa
Consiste en la electroforesis en gel de células únicas

Es una técnica muy sensible que detecta roturas de

cadena sencilla. Se basa en la migración, durante la
electroforesis, de fragmentos rotos de ADN
 50 µl de sangre periférica (heparina)

las células se mezclan con agarosa

siembra de la preparación en portaobjetos
con capa de agarosa

los preparados se sumergen en lisis
(desnaturalización de proteínas)

corrida electroforética
(desnaturalización del ADN)

Coloración
(colorante fluorescente)

Análisis al microscopio
(de fluorescencia) 
 Análisis microscópico
Se analizan 100 imágenes por punto experimental utilizando
un microscopio de fluorescencia.

Análisis cualitativo: se asignan niveles o grados de daño según

la extensión que adquiere la cola del cometa. Las células se
clasifican en 5 categorías, de 0 (cola no visible) a 4 (cabeza de
cometa detectable pero más ADN en la cola).

Análisis cuantitativo: a través de un programa se realizan

mediciones (diámetro de la cabeza, largo y ancho de la cola) y
se calculan diferentes índices (Tail Length, Tail moment, Olive
Tail moment).