VI.

RESULTADOS

A) PLAN DE MUESTREO

Tabla 1. Plan de muestreo de K. marxianus NRRL Y-7571 para producción de

enzima inulinasa.
PLAN DE MUESTREO
M.O: K. marxianus NRRL Y- FUENTE DE CARBONO: Extracto
7571 de Yacón
pH: T°: N: 400 Q: 2L/min
4.0 30°c rpm

N° HORA TIEM ABS OD Ph OBSERVACIO

PO (640n NES
m)
01 11/07/2018 0.28 100.9 4.02
09:45
BIOMASA

02 12/07/2018 2.6 4.11

08:45
03 12/07/2018 0.0 4.06
10:46
04 12/07/2018 0.743 2.9 3.92 1:15
15:45 0.939 1:10

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

B) CURVA DE CALIBRADO DE BIOMASA

Tabla 2. Valores obtenidos de concentración de biomasa y absorbancia a 640nm

CURVA DE CALIBRACIÓN DE BIOMASA II UNIDAD

DILUCIONES X (g/L) ABS (640nm)

1:40 0.080 0.096

1:20 0.159 0.191
1:12 0.238 0.286
1:10 0.287 0.345
1:08 0.347 0.417
1:04 0.608 0.732
1:03 0.816 0.982

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

 ABS (640nm)
1.2

1 y = 1.2042x - 0.0005
0.982
R² = 1
0.8
ABSORBANCIA

0.732
0.6

0.4 0.417
0.345
0.286
0.2 0.191
0.096
0
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600 0.700 0.800 0.900
X (g/L)

Grafica 1. Curva de calibrado de biomasa Kluyveromise

Interpretación: Para determinar la curva de calibrado de proteínas se

obtiene a partir de muestras de concentración conocida de una solución
estándar de albúmina suero de bovino (0.5 g/l) y, analizadas según el
procedimiento descrito anteriormente, obteniendo una ecuación con un R 2 de
1.De la ecuación:
y = 1.2042x + 0.0005
ABS= 1.2042(X) + 0.0005
R² = 1
C) DETERMINACION DE BIOMASA
Hallando la concentración, conociendo de biomasa la absorbancia:
𝑨𝑩𝑺 = 𝟎. 𝟐𝟖 = 𝟏. 𝟐𝟎𝟒𝟐[ ] + 𝟎. 𝟎𝟎𝟎𝟓
[ ] = 𝟎. 𝟐𝟑𝟑𝟐𝟗
Tabla 3. DETERMINACION DE BIOMASA

ABS []
0.28 0.23293473
0.939 7.80186016 HA SIDO MULTIPLICADO POR SU
DILUCIÓN

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

 8.75

ABSORVANCIA
6.75

4.75 y = -145.82x + 41.767

R² = 1
2.75

0.75
0.23 0.24 0.25 0.26 0.27 0.28
CONCENTRACION

Grafica 2.CURVA DETERMINACION DE BIOMASA

D) DETERMINACION DE PROTEÍNAS: METODO DE BRADFORD

D.1) CURVA DE CALIBRADO DE PROTEINAS
Tenemos la curva de calibrado de Bradford para la determinación de
Proteínas.
Tabla 4. CURVA DE CALIBRADO DE PROTEINAS

CURVA DE CALIBRADO DE PROTEÍNAS

SOL STD. (µl) TAMPÓN (µl) [] ABS

100 0 0.5 0.174

80 20 0.4 0.14
60 40 0.3 0.106
50 50 0.25 0.084
40 60 0.2 0.069
20 80 0.1 0.035
10 90 0.05 0.015
0 100 0 0

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

CURVA DE CALIBRADO DE PROTEÍNAS

0.2
y = 0.3508x - 0.0011
ABSORBANCIA

0.15 R² = 0.9994

0.1

0.05

0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
CONCENTRACIÓN

[] Linear ([ ])

Grafica 3. CURVA DE CALIBRADO DE PROTEÍNAS

 ECUACION: 𝒚 = 𝟎. 𝟑𝟓𝟎𝟖𝑿 − 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟏

E) DETERMINACION DE PROTEÍNAS
Hallando la concentración de proteínas, conociendo la absorbancia:
𝑨𝑩𝑺 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟑 = 𝟎. 𝟑𝟓𝟎𝟖[ ] − 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟏
[ ] = 𝟎. 𝟎𝟏𝟏𝟔𝟖

Tabla 5. DETERMINACION DE PROTEINAS

GRUPO D
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS

N° ABS (595nm) []

1 0.003 0.01168757
7 0.020 0.06014823

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

[]
0.070
y = 4.6213x + 0.0061
0.060
R² = 1
ABSORBANCIA

0.050

0.040

0.030

0.020

0.010

0.000
0 0.002 0.004 0.006 0.008 0.01 0.012 0.014
CONCENTRACION

Grafica 4.DETERMINACION DE PROTEÍNAS

F) DETERMINACION DE PROTEINAS POR TRIPLICADO

Hallando la concentración de proteínas, conociendo la absorbancia:
𝑨𝑩𝑺 = −𝟎. 𝟎𝟏𝟒 = 𝟎. 𝟑𝟓𝟎𝟖[ ] − 𝟎. 𝟎𝟎𝟏𝟏
[ ] = 𝟎. 𝟎𝟏𝟏𝟔𝟖
Tabla 6. DETERMINACION DE PROTEINAS POR TRIPLICADO

DETERMINACION DE PROTEINAS POR TRIPLICADO

N° ABS (595nm) []

1 -0.014 -0.036773
2 -0.010 -0.025371
1’ -0.007 -0.016819
2’ -0.007 -0.016819
1’’ -0.012 -0.031072
2’’ -0.008 -0.019669

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

1y2
0.000
-0.04 -0.035 -0.03 -0.025 -0.02 -0.015 -0.01 -0.005 0
-0.005

y = 0.6749x - 0.0006
-0.010
ABSORBANCIA

R² = 1

-0.015

-0.020

-0.025

-0.030
CONCENTRACION

Grafica 5.DETERMINACIÓN DE PROTEINAS 1 y 2

 1' y 2'
0
-0.018 -0.016 -0.014 -0.012 -0.01 -0.008 -0.006 -0.004 -0.002 0
-0.002
-0.004
-0.006
ABSORBANCIA
y=x
R² = 1 -0.008
-0.01
-0.012
-0.014
-0.016
-0.018
CONCENTRACION

Grafica 6. DETERMINACION DE PROTEINAS 1’ y 2’

1" y 2"
0
-0.035 -0.03 -0.025 -0.02 -0.015 -0.01 -0.005 0

-0.005
y = 0.6119x - 0.0007
ABSORBANCIA

R² = 1
-0.01

-0.015

-0.02

-0.025
CONCENTRACION

Grafica 7.DETERMINACION DE PROTEINAS 1" y 2"

G) CURVA DE CALIBRADO DE AZUCARES REDUCTORES
GRUPO A METODO DNS
ECUACION
Abs=0.5485-0.0408

A= 0.5485
B= 0.0408

H) RANGO DE LINEALIDAD Y ACTIVIDAD ENZIMATICA

 GRUPO A-1
 Extracto Crudo 1:1
Tabla 7.Rango de linealidad del Extracto crudo 1:1

SUB GRUPO A1 17/07/2018

EXTRACTO CRUDO 1:1 (DILUSION 1:10)
TIEMPO(MIN) 1/DILUCION ABS(540nm) Conc. g/L Conc.*DILU g/L Conc. Corregida
0 10 0.007 0.08714676 0.67347311 0
5 10 0.064 0.19106655 1.71267092 1.03919781
10 10 0.124 0.30045579 2.80656335 2.13309025
15 10 0.198 0.43536919 4.15569736 3.48222425
20 10 0.269 0.56481313 5.45013674 4.77666363
BE 10 0.003 0.07985415

BS 10 0.024 0.11814038
Σ BE+BS 0.19799453

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

EXTRACTO CRUDO 1:1 (DILUSION

1:10)

6 y = 0.2399x - 0.113
5 R² = 0.9968
4 EXTRACTO CRUDO 1:1
(DILUSION 1:10)
P(g/L)

3
2
1 Linear (EXTRACTO
CRUDO 1:1 (DILUSION
0
1:10) )
-1 0 5 10 15 20 25
TIEMPO (MIN)

Grafica 8.Curva de Rango de linealidad del Extracto crudo 1:1

 DETERMINACION DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (ESPECÍFICA Y
VOLUMÉTRICA) DE LA ENZIMA EN EL CALDO CRUDO 1:1 :
𝑼𝑰
 ACTIVIDAD VOLUMÉTRICA = 𝒗𝒐𝒍.𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂

Ecuación de la recta : y = 0.2399x - 0.113

R² = 0.9968

Pendiente (RL): 0.2399

Actividad Enzimática Volumétrica

𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍
𝒂𝒗 = 𝒑𝒆𝒏𝒅𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆(𝑹𝑳)𝒙 ( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎 𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍

𝒂𝒗 = 𝟎. 𝟐𝟑𝟗𝟗𝒙 ×( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝑼𝑰
𝒂𝒗 = 𝟑𝟗. 𝟗𝟖
𝒎𝒍

 GRUPO A-2
 Extracto ENZIMA CONCENTRADA 1:1
Tabla 8. Rango de linealidad Enzima Concentrada 1:1

SUB GRUPO A2 17/07/2018

ENZIMA CONCENTRADA 1:1 (DILUSION 1:15)
TIEMPO(MIN) 1/DILUCION ABS(540nm) P(g/L) P(g/L)*DILU P(g/L)
0 1:15 0 0.07438469 0.8721969 0
5 15 0.071 0.20382862 2.81385597 1.94165907
10 15 0.199 0.43719234 6.31431176 5.44211486
15 15 0.329 0.67420237 9.86946217 8.99726527
20 15 0.423 0.84557885 12.4401094 11.5679125
BE 15 0.017 0.1053783
BS 15 0.035 0.13819508
BE+BS 0.24357338
ACTIVIDAD (U/ml) 100.63333
3

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

 ENZIMA CONCENTRADA 1:1
y = 0.6038x - 0.4485
(DILUSION 1:15) R² = 0.9916
14
12
10
ENZIMA
8 CONCENTRADA 1:1
P(g/L)

6 (DILUSION 1:15)
4 Linear (ENZIMA
2 CONCENTRADA 1:1
(DILUSION 1:15) )
0
-2 0 5 10 15 20 25
TIEMPO (MIN)

Grafica 9. Curva de Rango de linealidad de Enzima Concentrada1:1

 DETERMINACION DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (ESPECÍFICA Y

VOLUMÉTRICA) DE LA ENZIMA EN EL CALDO CRUDO 1:1 :
𝑼𝑰
 ACTIVIDAD VOLUMÉTRICA = 𝒗𝒐𝒍.𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂

Ecuación de la recta : y = 0.6038x - 0.4485

R² = 0.9916

Pendiente (RL): 0.6038

Actividad Enzimática Volumétrica
𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍
𝒂𝒗 = 𝒑𝒆𝒏𝒅𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆(𝑹𝑳)𝒙 ( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎 𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍

𝒂𝒗 = 𝟎. 𝟔𝟎𝟑𝟖𝒙 ×( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝑼𝑰
𝒂𝒗 = 𝟏𝟎𝟎. 𝟔𝟑𝟑𝟑
𝒎𝒍
  GRUPO A-3
 ENZIMA CONCENTRADA 1:2
Tabla 9. Rango de linealidad Enzima Concentrada 1:2

SUB GRUPO A3 17/07/2018

ENZIMA CONCENTRADA 1:2 (DILUSION 1:10)
TIEMPO(MIN) 1/DILUCION ABS(540nm) P(g/L) P(g/L)*DILU P(g/L)
0 10 0.025 0.11996354 0.97247037 0
5 10 0.179 0.40072926 3.78012762 2.80765725
10 10 0.45 0.89480401 8.72087511 7.74840474
15 10 0.62 1.2047402 11.820237 10.8477666
20 10 0.652 1.26308113 12.4036463 11.4311759
BE 10 0.018 0.10720146
BS 10 0.025 0.11996354
BE+BS 0.227165
ACTIVIDAD (U/ml) 206

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

ENZIMA CONCENTRADA 1:2

(DILUSION 1:10)
y = 0.618x + 0.3865
14
R² = 0.9489
12
10
ENZIMA
P(g/L)

8 CONCENTRADA 1:2
6 (DILUSION 1:10)
4 Linear (ENZIMA
2 CONCENTRADA 1:2
0 (DILUSION 1:10) )
0 5 10 15 20 25
TIEMPO (MIN)

Grafica 10. Curva de Rango de linealidad de Enzima Concentrada1:2

 DETERMINACION DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (ESPECÍFICA Y

VOLUMÉTRICA) DE LA ENZIMA EN EL CALDO CRUDO 1:1 :
𝑼𝑰
 ACTIVIDAD VOLUMÉTRICA = 𝒗𝒐𝒍.𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂

Ecuación de la recta : y = 0.618x + 0.3865

R² = 0.9489

Pendiente (RL): 0.618

Actividad Enzimática Volumétrica
𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍
𝒂𝒗 = 𝒑𝒆𝒏𝒅𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆(𝑹𝑳)𝒙 ( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎 𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍

𝒂𝒗 = 𝟎. 𝟔𝟏𝟖𝒙 × 𝟐𝒙( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝑼𝑰
𝒂𝒗 = 𝟐𝟎𝟔
𝒎𝒍

Tabla 10. Rango de linealidad de la enzima concentrada Inulinasa a diferentes

diluciones del Grupo A

z E(Extracto crudo Enzima concentrada Enzima concentrada

1:1) 1:1 1:2
Dilución P (g/L) Dilución P (g/L) Dilución P (g/L)
0 01:10 0.67347311 1:15 0.8721969 01:10 0.97247037
5 01:10 1.71267092 1:15 2.81385597 01:10 3.78012762
10 01:10 2.80656335 1:15 6.31431176 01:10 8.72087511
15 01:10 4.15569736 1:15 9.86946217 01:10 11.820237
20 01:10 5.45013674 1:15 12.4401094 01:10 12.4036463

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

Rango de linealidad de la enzima

concentrada Inulinasa a diferentes
diluciones del grupo A
14
12
10
EXTRACTO CRUDO 1:1
8
P(g/L)

(DILUSION 1:10)
6 ENZIMA CONCENTRADA 1:1
4 (DILUSION 1:15)
ENZIMA CONCENTRADA 1:2
2
(DILUSION 1:10)
0
0 5 10 15 20 25
TIEMPO (MIN)

Grafica 11. Rango de linealidad de la enzima concentrada Inulinasa a diferentes

diluciones del Grupo A
Tabla 11. ACTIVIDAD VOLUMETRICA PARA CADA ENZIMA

[ ] de av
Enzima (UI/mL)
E 1:1 39.9833333

E 1:1 100.633333
E 1:2 206

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

  GRUPO B
 RANGO DE LINEALIDAD

Para la obtención de las concentración para el rango de linealidad se

utilizó la curva de calibrado de azucares reductores

Ecuación: METODO DNS

Tabla 12.DATOS PARA DETERMINACION DNS

S abs
2 0.985
1.6 0.802
1.2 0.591
0.8 0.385
0.4 0.171
0.2 0.074

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

 CURVA DETERMINACION DNS

abs
1.2
1 y = 0.5045x - 0.0171
0.8 R² = 0.9991
Axis Title

0.6
abs
0.4
Linear (abs)
0.2
0
-0.2 0 0.5 1 1.5 2 2.5
Axis Title

Grafica 12.Curva determinación de DNS

ECUACION DE DNS

Abs=0.5045 – 0.0171
A 0.5045
B 0.0171

Para el grupo “B, C Y D”

𝐴𝐵𝑆 = 0.5045𝐶 − 0.0171

 (𝐴𝐵𝑆 + 0.0171)
=𝐶
0.5045

RANGO DE LINEALIDAD DEL GRUPO B1

Tabla 13. Rango de linealidad Extracto Crudo 1:1

SUB GRUPO B1 18/07/2018

EXTRACTO CRUDO 1:1 (DILUSION 1:10)

TIEMPO(MIN) 1/DILUCION ABS(540nm) P(g/L) P(g/L)*DILU P(g/L)

0 10 0.008 0.04981169 0.24388503 0
5 10 0.108 0.24802775 2.22604559 1.98216056
10 10 0.178 0.38677899 3.61355798 3.36967294
15 10 0.248 0.52553023 5.00107037 4.75718533
20 10 0.308 0.64445986 6.1903667 5.94648167
BE 10 0.041 0.11522299
BS 10 0.053 0.13900892
BE+BS 0.254231913

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

EXTRACTO CRUDO 1:1 (DILUSION 1:10)

y = 0.2934x + 0.2775
7
R² = 0.9906
6

4
P(g/L)

0
0 5 10 15 20 25
TIEMPO (MIN)

EXTRACTO CRUDO 1:1 (DILUSION 1:10) Linear (EXTRACTO CRUDO 1:1 (DILUSION 1:10) )

Grafica 13. Curva de Rango de linealidad de Extracto Crudo 1:1

 DETERMINACION DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (ESPECÍFICA Y
VOLUMÉTRICA) DE LA ENZIMA EN EL CALDO CRUDO 1:1 :
𝑼𝑰
 ACTIVIDAD VOLUMÉTRICA = 𝒗𝒐𝒍.𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂

Ecuación de la recta : y = 0.2934x + 0.2775

R² = 0.9906

Pendiente (RL): 0.2934

Actividad Enzimática Volumétrica
𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍
𝒂𝒗 = 𝒑𝒆𝒏𝒅𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆(𝑹𝑳)𝒙 ( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎 𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍

𝒂𝒗 = 𝟎. 𝟐𝟗𝟑𝟒 𝒙 ×( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝑼𝑰
𝒂𝒗 = 𝟒𝟖. 𝟗
𝒎𝒍

RANGO DE LINEALIDAD DEL GRUPO B2

Tabla 14 Rango de linealidad Enzima Concentrada 1:3

.SUB GRUPO B2 18/07/2018

ENZIMA CONCENTRADA 1:3 (DILUSION 1:10)

TIEMPO(MIN) 1/DILUCION ABS(540nm) P(g/L) P(g/L)*DILU P(g/L)

0 10 0.008 0.04981169 0.38461843 0

5 10 0.038 0.10927651 0.9792666 0.59464817

10 10 0.099 0.23018831 2.18838454 1.80376611

15 10 0.165 0.3610109 3.49661051 3.11199207

20 10 0.237 0.50372646 4.92376611 4.53914767

BE 10 0.004 0.04188305

BS 10 0.019 0.07161546

BE+BS 0.113498513
 FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

y = 0.2311x - 0.2735
ENZIMA CONCENTRADA 1:3 (DILUSION 1:10) R² = 0.9326
6

3
P(g/L)

0
0 5 10 15 20 25
-1
TIEMPO (MIN)

ENZIMA CONCENTRADA 1:3 (DILUSION 1:10)

Linear (ENZIMA CONCENTRADA 1:3 (DILUSION 1:10) )

Grafica 14. Curva de Rango de Linealidad de Enzima Concentrada 1:3

 DETERMINACION DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (ESPECÍFICA Y

VOLUMÉTRICA) DE LA ENZIMA EN LA Enzima Concentrada 1:3:
𝑼𝑰
 ACTIVIDAD VOLUMÉTRICA = 𝒗𝒐𝒍.𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂

Ecuación de la recta : y = 0.2311x - 0.2735

R² = 0.9326

Pendiente (RL): 0.2311

Actividad Enzimática Volumétrica
𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍
𝒂𝒗 = 𝒑𝒆𝒏𝒅𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆(𝑹𝑳)𝒙 𝒙𝟑𝒙( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎 𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍

𝒂𝒗 = 𝟎. 𝟐𝟑𝟏𝟏 𝒙 × 𝟑𝒙( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝑼𝑰
𝒂𝒗 = 𝟏𝟏𝟓. 𝟗𝟓
𝒎𝒍
 RANGO DE LINEALIDAD DEL GRUPO B3

Tabla 15. Rango de linealidad Enzima Concentrada 1:2

SUB GRUPO B3 18/07/2018

ENZIMA CONCENTRADA 1:2 (DILUSION 1:10)

TIEMPO(MIN) 1/DILUCION ABS(540nm) P(g/L) P(g/L)*DILU P(g/L)

0 10 0.025 0.08350842 0.66013875 0

5 10 0.102 0.23613479 2.18640238 1.52626363

10 10 0.181 0.39272547 3.75230922 3.09217047

15 10 0.298 0.62463826 6.07143707 5.41129832

20 10 0.352 0.73167493 7.14180377 6.48166501

BE 10 0.011 0.05575818

BS 10 0.043 0.11918731

BE+BS 0.174945491

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

ENZIMA CONCENTRADA 1:2

(DILUSION 1:10)
y = 0.337x - 0.0674
8 R² = 0.9905
6

4
P(g/L)

0
0 5 10 15 20 25
-2
TIEMPO (MIN)

ENZIMA CONCENTRADA 1:2 (DILUSION 1:10)

Linear (ENZIMA CONCENTRADA 1:2 (DILUSION 1:10) )

Grafica 15. Curva de Rango de Linealidad de Enzima Concentrada 1:3

 DETERMINACION DE ACTIVIDAD ENZIMÁTICA (ESPECÍFICA Y
VOLUMÉTRICA) DE LA ENZIMA EN LA Enzima Concentrada 1:2:
𝑼𝑰
 ACTIVIDAD VOLUMÉTRICA = 𝒗𝒐𝒍.𝒆𝒏𝒛𝒊𝒎𝒂

Ecuación de la recta : y = 0.337x - 0.0674

R² = 0.9905

Pendiente (RL): 0.337

Actividad Enzimática Volumétrica
𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍
𝒂𝒗 = 𝒑𝒆𝒏𝒅𝒊𝒆𝒏𝒕𝒆(𝑹𝑳)𝒙 𝒙𝟐𝒙( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎 𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝟑 𝒈 𝑳 𝟏 𝒎𝒐𝒍 𝟏𝟎𝟔 𝒖 𝒎𝒐𝒍

𝒂𝒗 = 𝟎. 𝟑𝟑𝟕 𝒙 𝒙𝟐 × ( )( )( )( )
𝟎.𝟏 𝑳 𝐦𝐢𝐧 𝟏𝟎𝟎𝟎 𝒎𝒍 𝟏𝟖𝟎𝒈 𝟏 𝒎𝒐𝒍

𝑼𝑰
𝒂𝒗 = 𝟏𝟏𝟐. 𝟑𝟑
𝒎𝒍

Tabla 16. Rango de linealidad de la enzima concentrada Inulinasa a diferentes diluciones

del Grupo A

z E(Extracto crudo Enzima concentrada Enzima concentrada

1:1) 1:1 1:2
Dilución P (g/L) Dilución P (g/L) Dilución P (g/L)
0 01:10 0.67347311 1:15 0.8721969 01:10 0.97247037
5 01:10 1.71267092 1:15 2.81385597 01:10 3.78012762
10 01:10 2.80656335 1:15 6.31431176 01:10 8.72087511
15 01:10 4.15569736 1:15 9.86946217 01:10 11.820237
20 01:10 5.45013674 1:15 12.4401094 01:10 12.4036463

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos

 RANGO DE LINEALIDAD DEL GRUPO B1, B2 Y B3

Rango de linealidad de la enzima

concentrada Inulinasa a diferentes
diluciones del grupo B
7
6
5
EXTRACTO CRUDO 1:1
4
P(g/L)

(DILUSION 1:10)
3 ENZIMA CONCENTRADA 1:3
2 (DILUSION 1:10)
ENZIMA CONCENTRADA 1:2
1
(DILUSION 1:10)
0
0 5 10 15 20 25
TIEMPO (MIN)

Tabla 17. ACTIVIDAD VOLUMETRICA PARA CADA ENZIMA

[ ] de av
Enzima (UI/mL)
E 1:1 39.9833333
E 1:1 100.633333
E 1:2 206

FUENTE: Datos obtenidos en laboratorio de Bioprocesos