IES Politécnico EMI

Sevilla 1º AC

UNIDAD DIDÁCTICA 12: “AGENTES

QUIMIOTERAPEÚTICIOS: ANTIBIÓTICOS”

1. AGENTES QUIMIOTERAPEÚTICOS:

Bajo la denominación de agentes antimicrobianos (o agentes quimioterápicos o

terapeúticos), se incluyen una serie de sustancias químicas que tienen la propiedad de
producir la destrucción de ciertos microorganismos sin dañar (al menos de forma
importante, a las dosis adecuadas), los tejidos orgánicos.
Los antibióticos son un grupo de agentes antimicrobianos sintetizados por
microorganismos y que poseen la capacidad de matar o inhibir el desarrollo de
otros microorganismos.
En la actualidad, esta definición de antibiótico ha quedado superada, puesto que
muchos de ellos que primitivamente eran obtenidos a partir de un microorganismo, son
hoy obtenidos mediante procesos de síntesis química industrial. Por este motivo,
durante el desarrollo del tema, utilizaremos como sinónimos los términos de antibiótico
y agente quimioterapeúticos.
A los agentes antimicrobianos serán «bactericidas» cuando mata las bacterias,
«fungicidas» si mata los hongos, etc. Los agentes antimicrobianos que en lugar de
matar sólo inhiben el desarrollo del microorganismo problema serán bacteriostático o
fungistático etc. Antes de iniciar un tratamiento simultáneo con dos antibióticos hay que
tener en cuenta sus propiedades bacteriostáticas o bactericidas, puesto que pueden
presentar antagonismo e invalidar la efectividad del tratamiento.
Desde el inicio de la terapia antibiótica, a principios del pasado siglo, se ha
observado una tendencia de muchos gérmenes a desarrollar una marcada resistencia
frente a la acción de antibióticos a los que en un principio eran sensibles. Esta es una
de las causas por la cual debe restringirse el uso de antibióticos a los casos
estrictamente necesarios, seleccionando el más idóneo para cada infección. Es
importante la labor del laboratorio a la hora de seleccionar el/los antibiótico/s
adecuados a cada situación mediante las denominadas «pruebas de sensibilidad» o
antibiogramas.

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 1
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

1.1. Antibióticos
Se definen como sustancias producida por ciertos microorganismo que inhiben el
crecimiento o matan a otros microorganismos. En general se incluyen los
semisintéticos y sintéticos.
Deben cumplir las siguientes condiciones:
o Especificidad: actuación frente a un grupo determinado y limitado de
microorganismos.
o Elevada potencia biológica: que sea activo a pequeñas concentraciones.
o Toxicidad selectiva: el efecto del antibiótico sobre las células del organismo debe
ser mínimo. Sin embargo, casi todas presentan efectos secundarios, siendo los
más importantes las reacciones alérgicas en las personas.
o Buena distribución tisular: no todos los antibióticos tienen la misma llegada al
tejido concreto dónde está la infección
o Estables, de bajo costo y fáciles de administrar.

M.O. productores de antibioticos.

BACTERIAS
Streptomyces spp. 1.2. CLASIFICACIÓN
S. griseus Estreptomicin
S. kanamyceticus a
Kanamieina
S. fradiae Neomicina
S. noursei Nistatina
S. mediterranei Rifampicina
S. erythreus Eritromicina
S. aureofaciens Tetraciclinas
S. orientalis Vancomicina
S. nodosus Anfotericina B
S. venezuelae Cloranfenicol
Bacillus spp.
B. subtilis Tracy-1 Bacitracina
B. polymyxa Polimixina B
Micromonospora spp.
M. purpurea Gentamicina
HONGOS
Penicillium spp.
P. notatum, P. chrysogenum Penicilina
P. griseafulvum Griseofulvina
Cephalosporium spp.
C. acremonium Cefalosporina
s

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 2
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

1.2.1. Según su especificidad o espectro de acción

o De amplio espectro: actúan sobre numerosas especies de microorganismo,
normalmente bacterias. Ej: ampicilina, tetraciclina, estreptomicina…
o De espectro medio: actúan sobre bastantes sp bacterianas. Ej: penicilinas,
macrólidos…
o De corto espectro: comportamiento eficaz en pocas especies Ej: polimiximas.

Espectro de algunas sustancias antibacterianas. Los de amplio espectro actúan sobre 2 o más grupos.

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 3
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

1.2.2. Según su forma de actuación

Como ya hemos visto:
• Bacteriostáticos: que bloquean el desarrollo
de bacterias sin matarlas. Ej, cloranfenicol
• Bactericidas: que provocan la muerte
bacteriana. Ej: antibióticos β-lactámicos
(penicilinas)

1.2.3. Según su mecanismo de acción

• Agentes que actúan sobre la pared celular:

- Por inhibición de la síntesis de la pared bacteriana (Beta lactámicos: penicilina,
vancomicina)
• Agentes que actúan sobre la permeabilidad de la membrana
citoplasmática:
- Por aumento de la permeabilidad de la membrana (Polimixinas)
• Agentes que actúan sobre la síntesis de proteínas (y enzimas):
- Inhibiendo la síntesis de proteínas a nivel de la subunidad 50 S (Macrólidos:
tetraciclina, cloranfenicol)
- Inhibiendo la síntesis de proteínas a nivel de la subunidad 30 S
(Aminoglucósidos)
• Agentes que inhiben la actividad enzimática (antimetabolitos):
- Inhibiendo la actividad de los enzimas por bloqueo de su centro activo
(Trimetoprim)
- Desplazando al sustrato natural por inhibición competitiva (Sulfonamidas)
NOTA: Veamos cómo actúan las enzimas y sus tipos de inhibición

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 4
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

• Agentes que actúan por alteración de los ácidos nucléicos:

- Por inhibición de la replicación actuando sobre la DNA girasa (Quinolonas)
- Por inhibición de la transcripción bloqueando la ARN polimerasa (Rifampicina)
- Por rotura directa del ADN (Sulfamidas, Metronidazol)

1.3. Resistencia a los antibióticos

Cuando decimos que un microorganismo es resistente a un antibiótico significa

que puede crecer y reproducirse en presencia del mismo. La resistencia antimicrobiana
puede ser natural o adquirida. La resistencia natural a un antibiótico es una
propiedad de la especie microbiana. Con el tiempo, algunas cepas de una especie
sensible pueden llegar a ser resistentes. La resistencia adquirida es una propiedad
debida a alteraciones genéticas.

1.3.1. Resistencia natural

La resistencia natural a los agentes antimicrobianos se debe a varias razones.
Algunas especies carecen de la diana atacada por la droga antimicrobiana.
Por ejemplo, la penicilina interfiere la síntesis del peptidoglicano; pero si un
organismo carece de este compuesto será resistente de forma natural. La
penicilina, por lo tanto, no se prescribe para tratar infecciones causadas por virus,
hongos, protozoos o bacterias que carezcan de pared celular.

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 5
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

Algunas especies son resistentes de forma natural porque el antimicrobiano no

puede penetrar en el interior de la célula y ejercer allí su efecto dañino. Las
bacterias Gram negativas están protegidas contra la acción de muchas drogas,
incluidas la mayoría de las penicilinas, por la impermeabilidad relativa de su
membrana externa.
De acuerdo con el patrón de sensibilidad o resistencia natural, los agentes
antibacterianos se clasifican en compuestos de amplio espectro y compuestos de
espectro reducido. Las drogas antibacterianas de espectro reducido afectan
solamente a un grupo concreto de microorganismos y son la mejor elección cuando se
conoce el agente causal de la infección.
Las drogas antimicrobianas de amplio espectro son activas frente a dos o más
grupos microbianos. La ampicilina, un derivado semisintético de la penicilina, es activa
tanto contra las bacterias G+ como las bacterias G-.
El tratamiento con un agente de amplio espectro se realiza para infecciones
producidas por un agente etiológico desconocido. Sin embargo, las drogas de amplio
espectro son activas frente a muchas clases de microorganismos y, por lo tanto, alteran
de una forma significativa la microbiota del cuerpo humano lo que puede ocasionar
síntomas desagradables o permitir que otros microorganismos se establezcan y
puedan causar una sobreinfección (una infección que tiene lugar solamente en estas
condiciones), además de la infección original. Por ejemplo, los niños que sufren
infecciones de los oídos y que son tratados con ampicilina, padecen frecuentemente
una diarrea causada por una alteración de la microbiota intestinal normal o, si se altera
la microbiota que está en la piel, se presentan una serie de erupciones producidas por
una sobreinfección por un hongo.

1.3.2. Resistencia adquirida

Las cepas bacterianas pueden volverse resistentes a las drogas debido a
cambios genéticos. La resistencia a las drogas es debida a la presencia de genes que
codifican proteínas que protegen los microorganismos y que se encuentran en
plásmidos que pueden fácilmente transmitirse de unas cepas a otras e incluso a otras
especies bacterianas (factores R). Estos cambios genéticos no son causados
directamente por los antibióticos sino de forma espontánea, como sucede con todas las
mutaciones e intercambios genéticos. Sin embargo, cuando existen grandes
concentraciones de antibióticos en el medio ambiente, las cepas sensibles a los
mismos son eliminadas, mientras que las cepas resistentes (por alguna mutación)
podrán resistir, multiplicarse y llegar a ser dominantes. Por ello cada vez se necesitan
cantidades más elevadas de antibióticos para curar las mismas infecciones, y otros
antibióticos han perdido definitivamente su eficacia.
Por ejemplo, durante la década de 1940, prácticamente todas las cepas
virulentas de Staphylococcus aureus eran sensibles a la penicilina. Actualmente, más
del 90 por ciento de las mismas son resistentes a dicho antibiótico. Ello es

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 6
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

consecuencia de las grandes cantidades de antibióticos que se prescriben, el uso

generalizado en piensos de animales y, sobre todo, el uso incorrecto de los
tratamientos por parte de los pacientes.

1.3.3. Mecanismos de Resistencia a los Antibióticos

Ej: Modificación de la penicilina por la penicilinasa

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 7
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

2. MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA: ANTIBIOGRAMAS

Es el conjunto de técnicas de laboratorio que tienen como misión determinar “in vitro” el
grado de sensibilidad de los microorganismos frente a la acción de distintos agentes
antimicrobianos.
Se mide determinando la cantidad más pequeña del agente que se necesita para inhibir
el crecimiento en unas condiciones normalizadas, de un organismo control. Este valor
se conoce como “concentración mínima inhibitoria” (CMI ó MIC).
Para determinar la MIC se pueden utilizar dos métodos:

2.1. TÉCNICAS DE DILUCIÓN.

Su objetivo es obtener datos cuantitativos sobre la sensibilidad de un microorganismo
problema frente a la acción de un antibiótico aplicado a distintas concentraciones. Hay
dos tipos:

2.1.1. Pruebas de dilución en caldo.

Se utiliza un medio de cultivo líquido. Se preparan una serie de tubos
conteniendo cada uno de ellos una concentración diferente y creciente del agente
antimicrobiano, y se inoculan (introducir el organismo en una sustancia, transferir)
todos los tubos de la serie.
Después de la incubación se observa en qué tubos no ha habido crecimiento (lo
indica la ausencia de turbidez visible) y así se determina la MIC.
El crecimiento, reflejado por la turbidez tiene lugar en los tubos con una concentración
por debajo de la MIC.
Cuando todas las condiciones están rigurosamente estandarizadas, es posible
comparar entre sí distintos agentes antimicrobianos.

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 8
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

La MIC no es una constante para un determinado agente microbiano. Depende de una

serie de factores como son:

a) Naturaleza del organismo utilizado como control en la prueba.

b) El volumen del inóculo.
c) La composición del medio de cultivo.
d) El tiempo de incubación y las condiciones de incubación como temperatura, pH,
aireación...

A partir de la CMI, se siembra una cantidad conocida de inóculo de cada uno de los
tubos de caldo que no tienen turbidez en placas de agar, y el número de colonias que
crece en estos subcultivos, después de incubar durante la noche, se compara con el
número de UFC/ml del cultivo original. La mínima concentración del agente
antibacteriano que permite sobrevivir a menos de 0,1 % del inóculo original se
denomina concentración bactericida mínima (CBM). La Concentración Mínima
Bactericida (CMB) es la mínima cantidad de antibiótico capaz de destruir el 99,9% de
una muestra inoculada en condiciones estandarizadas.

Determinación de la CBM

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 9
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

2.1.2. Pruebas de dilución en agar.

Se suele utiliza el medio sólido Mueller-Hinton, por ejemplo. Cuando el medio es

todavía fluido se añade un volumen determinado del antibiótico a ensayar y se lleva a
placa de petri, donde solidifica. Luego se siembra el inóculo problema y se comprueba
el crecimiento. La placa de concentración más baja de antibiótico (método estándar
internacional) capaz de inhibir el crecimiento del microorganismo será la CMI.

2.2. MÉTODO DE DIFUSIÓN O MÉTODO KIRBY-BAUER

Consiste en preparar una placa que contenga un medio con agar y se inocula
uniformemente con el organismo control. Se añaden cantidades conocidas del agente
antimicrobiano a pequeños discos de papel de filtro que luego se colocan sobre la
superficie del agar.
Durante la incubación el agente difunde desde el papel de filtro al agar. Se crea una
zona de inhibición. El diámetro de esta zona es proporcional a la cantidad de agente
antimicrobiano añadido al disco y a su efectividad, cuanto más se aleje el agente
antimicrobiano y mayor sea la zona de inhibición, mayor es la susceptibilidad y
sensibilidad del microorganismo al antibiótico.

Este método se utiliza para ensayos de sensibilidad a los antibióticos y tienen

también como objetivo el comparar la eficacia de una serie de antibióticos frente a un
microorganismo problema obtenido en un cultivo puro.
En las técnicas de difusión el antibiótico no es diluido en el medio de cultivo, sino que
difunde a través de él. Se satura un papel de filtro circular con una disolución del
antibiótico y se colocan sobre placas que han sido sembradas previamente con un
cultivo puro. Las placas se incuban en condiciones apropiadas (16h 37ºC). En ese
tiempo los antibióticos difunden hacia alrededor del disco, inhibiendo el crecimiento de
los microorganismo. El tamaño del halo de inhibición alrededor del disco indica la
susceptibilidad de una bacteria frente a un germicida.
Existen tablas estandarizadas que relacionan el tamaño del halo de un microorganismo
específico con su sensibilidad correspondiente.

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 10
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

Evaluación de germicidas mediante el método del disco de papel. Estas placas muestran el
estudio de cuatro germicidas: hipoclorito sódico (genera cloro), o-fenilfenol, cloruro de benzalconio
y hexaclorofeno. Los papeles de filtro se saturan con una solución de los germicidas y se
colocan en placas que han sido sembradas previamente con diferentes bacterias; las placas se
incuban en las condiciones apropiadas. El tamaño del halo de inhibición indica la susceptibilidad
de una bacteria frente a un germicida. Por ejemplo, a la concentración ensayada, Escherichia
coli es sensible al o-fenilfenol pero resistente al hexaclorofeno; Staphylococcus aureus es
sensible a ambos y Pseudomonas aeruginosa no es sensible a ninguno.

2.3. Método E-test (antibiográma por difusión + dilución)

Es uno de los métodos más recientes del mercado y resulta de la combinación de los
métodos anteriores. Se trata de una técnica cuantitativa en placa que permite obtener
una lectura directa de CMI en µg/ml, ya que se emplean tiras plásticas impregnadas en
concentraciones crecientes de antibiótico indicadas en una escala graduada sobre la
propia tira.

El microorganismo a investigar se inocula en una placa y sobre ella se deposita la tira

del antibiótico (o antibióticos) a ensayar. Tras la incubación de 16-24 horas a 35ºC se
observan las placas y se valora la zona de inhibición, de forma elíptica, alrededor de
cada tira. La CMI se lee directamente observando el punto más bajo de la elipse que
presente crecimiento.

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 11
IES Politécnico EMI
Sevilla 1º AC

2.3. PRUEBAS DE SENSIBILIDAD BACTERIANA IN VITRO

Métodos automatizados
La mayoría de estos novedosos métodos utilizan sistemas de microdilución en medio
líquido sobre microplacas con pocillos en "U" e interpretan el crecimiento bacteriano en
los diferentes pocillos por medio de un autoanalizador (mediciones por turbidez o
fluorescencia)
Su manipulación suele ser fácil y rápida, generalmente automatizada o
semiautomatizada, lo que los convierte en métodos ideales para grandes volúmenes de
trabajo.
Una de sus grandes limitaciones es que sólo ofrecen garantía para investigar
microorganismos de crecimiento rápido y que no tengan requerimientos especiales.
Antibiograma realizado por método automático
En esta fotografía se muestra un ejemplo de antibiograma realizado por un método
automatizado. En la imagen de la izquierda se muestra una vista general de una
microplaca para autoanalizador que incluye fase de identificación y fase de
antibiograma (panel microScan). Las tres filas superiores de la microplaca son la zona
de "identificación" del microorganismo, las cinco filas inferiores son el apartado
"antibiograma".
La foto de la derecha, un plano más cercano de la mitad inferior izquierda de la
microplaca, permite observar con más detalle algunas filas de pocillos con diluciones
seriadas de algunos antibióticos. La dosificación de cada antibiótico aumenta, en cada
fila, de izquierda a derecha (obsérvese los rótulos bajo cada pocillo: 8-16 ... 1-2-8-16 ...
2-8-32). Los pocillos que en la imagen muestran un color verde intenso tienen
crecimiento bacteriano, o sea, el antibiótico en cuestión no impide el desarrollo del
microorganismo a estudio. Los pocillos transparentes marcarían los puntos de
inhibición de cada antibiótico.

UD 12 – AGENTES ANTIQUIMIOTERAPEÚTICOS 12