Espectroscopia ultravioleta-visible​.

UNICAUCA
D.A. Rodriguez Diaz (102215013460)1​
Ing. Física
R.A. Chamorro Tobar (102214021271)​2 Met. de análisis
J.A. Collazos Pérez (102214021271)​3 27/09/2018
D.A. Palma Rivera (102214011909)4​
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Espectroscopia ultravioleta-visible​.
1​
Ingeniería física, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educación,Universidad del Cauca, ​drodriguezd@unicauca.edu.c​o
2​
Ingeniería física, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educación,Universidad del Cauca, ​raulchamorro@unicauca.edu.co
​3 ​Ingeniería física, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educación,Universidad del Cauca, jesuscollazosp​@unicauca.edu.co
4​
Ingeniería física, Facultad de Ciencias Naturales, Exactas y de la Educación,Universidad del Cauca, danielpalma19​@unicauca.edu.co

RESUMEN ABSTRACT

En el presente informe se muestra el método de análisis
conocido como Espectroscopia ultravioleta-visible, que
utiliza radiación electromagnética (luz) de las regiones
visible e infrarroja cercana del espectro electromagnético.
Este procedimiento permite identificar ​algunos grupos
funcionales de moléculas y en la determinación
cuantitativa de los componentes de soluciones conociendo
el grado de absorbancia o el grado de transmitancia de la
muestra. Se estudió la cafeína ya que la determinación de
ésta ha adquirido mucha importancia, debido a su uso en la
industria farmacéutica y en la industria de alimentos; ya
sea como ingrediente en la elaboración de refrescos y
bebidas energéticas o por su presencia en productos como
el té, el mate, el cacao y el café.
Palabras claves: ​Espectroscopía, cafeína, instrumentación, absorción, transmisión, cuantificación.
Keywords:​.Spectroscopy, caffeine, instrumentation, absorption, transmission, qu​antification.
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1.INTRODUCCIÓN
La espectroscopía describe la interacción entre
la radiación, principalmente la
electromagnética, y la materia. Toda radiación
electromagnética viene caracterizada por una
longitud de onda ( λ) , una frecuencia ( υ ) o
una energía (E). Los efectos de radiación sobre
la materia pueden usarse para obtener
información sobre la estructura de la misma, y
así surgen distintas técnicas espectroscópicas,
una de ellas es la espectroscopía UV que se
estudiará en éste trabajo.
2. MARCO TEÓRICO ​[1]
Espectroscopía UV: L ​ a espectroscopía
ultravioleta-visible o espectrofotometría
In the present report we show the analytical method known
as ultraviolet-visible spectroscopy, which uses
electromagnetic radiation (light) from the visible and near
infrared regions of the electromagnetic spectrum. This
procedure allows to identify some functional groups of
molecules and in the quantitative determination of the
components of solutions knowing the degree of absorbance
or the degree of transmittance of the sample. Caffeine was
studied since the determination of it has become very
important, due to its use in the pharmaceutical industry and
in the food industry; either as an ingredient in the
production of soft drinks and energy drinks or for its
presence in products such as tea, mate, cocoa and coffee.
UV-Vis utiliza la luz en los rangos visible y
adyacentes (el ultravioleta (U
V) cercano y el infrarrojo (IR) cercano cuya
longitud de onda está comprendida entre los
100 y 800 nm. En esta región del espectro
electromagnético, las moléculas se someten a
transiciones electrónicas por absorción
molecular se usa ampliamente en la
determinación cuantitativa de una gran
cantidad de especies inorgánicas, orgánicas y
biológicas.
Absorbancia: ​Cuando la radiación atraviesa
una capa de un sólido, líquido o gas, es posible
eliminar en forma selectiva ciertas frecuencias
mediante absorción, un proceso en el cual la
energía electromagnética se transfiere a los
átomos, iones o moléculas que forman la
muestra.

1​
Daniel Alejandro Rodriguez, 2​ ​ Raúl Chamorro Tobar, 3​ ​ Daniel Palma, 4​ ​ Alejandro Collazos

Imagen 1. Absorbancia
La absorción impulsa a estas partículas desde
su estado normal a temperatura ambiente o
estado fundamental, a uno o más estados
excitados de energía superior. ​[2]
Imagen 2. Transiciones electrónicas
Transmitancia: ​Los métodos cuantitativos de
absorción requieren dos medidas: una antes de
que el haz pase a través del medio que
contiene el analito (P​0​) y otra después (P), que
tiene un espesor de ​b y​ una concentración ​c.
Como consecuencia de las interacciones entre
los fotones y los átomos o las moléculas
absorbentes, la potencia del rayo se atenúa
desde P​0 a P. La transmitancia T del medio es
entonces:
Imagen 3. Transmitancia
Ley de Beer: ​En el caso de la radiación
monocromática, la absorbancia es
directamente proporcional a la longitud ​b de la
trayectoria a través de un medio y la
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Daniel Alejandro Rodriguez, 2​ ​ Raúl Chamorro Tobar, 3​ ​ Daniel Palma, 4​ ​ Alejandro Collazos
concentración ​c ​de la especie absorbente. Esta
relación se representa con:
Donde ​a ​es una constante de proporcionalidad
que se llama absortividad
Imagen 4. Atenuación de un haz de radiación
mediante una solución absorbente.
3. MONTAJE EXPERIMENTAL
3.1 Preparación de la muestra ​[Cafeína]​ ​y
Procedimiento de análisis y caracterización
El primer paso de cualquier análisis
fotométrico o espectrofotométrico es el
establecimiento de condiciones de trabajo que
originen una relación reproducible, de
preferencia lineal, entre la absorbancia y la
concentración del analito.
En la práctica realizada se buscaba determinar
la concentración de cafeína de diferentes
muestras sólidas (café, café descafeinado) y
líquidas(Coca-cola, Coca-cola sin azúcar),
inicialmente se realiza la curva de calibración
con una muestra patrón de alta concentración
de cafeína, para determinar los rangos de
longitud de onda donde la muestra presenta su
mayor absorbancia, para ello se prepararon 4
soluciones de cafeína a concentraciones
diferentes en ​PPM tal y como se muestra en
las mediciones registradas en la ​Tabla 1​.
A la solución de menor concentración de
cafeína pura se le aplicó un espectro de
longitudes de onda desde 190 nm a 1100 nm, y
mediante el ​GENESYS™ 10S UV-Vis
Spectrophotometer - Imagen 7, s​ e determinó la
longitud de onda de mayor absorbancia la cual 2 0,096
corresponde a un valor de λ = 213 nm .
Posteriormente a cada solución se le determinó 4 0,376
el valor de absorbancia a la longitud de onda 8 0,724
determinado con anterioridad.
10 0,886

15 1,244
Tabla 1. Datos registrados

Imagen 5. Espectrofotómetro

Gráfica 1. Curva de calibración

Imagen 6. Pesado de la muestra de café

Tabla 2. Datos de la regresión lineal para la curva
de calibración
En la siguiente te tabla se muestran los datos
de absorbancia presentado por las soluciones
de cada una de las muestras cuyas
concentraciones de cafeína son desconocidas,
y es el parámetro a hallar con ayuda de la
relación obtenida para las soluciones de
Imagen 7. Preparación de la solución cafeína pura:
Solución de Absorbancia Concentración
4. ANÁLISIS Y RESULTADOS (muestra) de cafeína (ppm)
exp
A continuación se muestra los datos que se
coca-cola 0.305 3,636
obtuvo en el laboratorio para concentraciones normal
de cafeína pura que permiten cuantificar éste
compuesto mediante la curva de calibración ​[3] coca-cola 0.717 8.399
sin azúcar
Tabla 3 . Valores de absorbancia y concentración
Concentración (ppm) Absorbancia
en ppm de soluciones de dos muestras de
coca-cola: coca-cola light y coca-cola normal
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Daniel Alejandro Rodriguez, 2​ ​ Raúl Chamorro Tobar, 3​ ​ Daniel Palma, ​4​ Alejandro Collazos
De la ​Tabla 3 se encuentra la presencia de
cafeína en la gaseosa, además tiene
componentes entre los que se incluyen grasas
azúcares, agua entre otros que justamente son
lo que le dan su sabor característico. Esto a su
vez nos da un ejemplo de la utilidad de la
espectroscopia ya que si bien la gaseosa a
estudiar presenta otros componentes además
de la cafeína, al haber realizado un patrón con
cafeína pura al inicio de la práctica según el
cual se determinó la longitud de onda de
mayor absorción y a la cual fueron expuestos
la muestra es posible determinar de manera
precisa la cantidad de determinada sustancia
en una solución o mezcla. En base a estos
datos y a la definición de concentración en
partes por millón, es posible determinar un
valor promedio de la cantidad de cafeína
presente en la solución, producto de la muestra
a analizar:
Solución Concentración Masa de
de(muestra) de cafeína cafeína(mg)
(ppm) exp
coca-cola 3,636 1.7248
normal
coca-cola sin 8.399 4.199
azúcar
Tabla 4. Cantidad aproximada en gramos de
cafeína para cada solución a estudiar
Cuando un haz de luz incide sobre un cuerpo
traslúcido, una parte de esta luz es absorbida por
el cuerpo, y el haz de luz restante atraviesa dicho
cuerpo. A mayor cantidad de luz absorbida,
mayor será la absorbancia del cuerpo, y menor
cantidad de luz será transmitida por dicho
cuerpo. En base a esta definición se puede
obtener que dados los datos de absorbancia
obtenidos por las muestras de coca-cola tanto
light como normal,ambas presentan evidente
diferencias. La muestra de coca-cola light
presenta una mayor absorbancia, lo cual indica
que absorbió mucha más intensidad de luz, este
hecho implica que la gaseosa light a pesar de
presentar menos azúcares tal y como indica su
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Daniel Alejandro Rodriguez, 2​ ​ Raúl Chamorro Tobar, 3​ ​ Daniel Palma, 4​ ​ Alejandro Collazos
etiqueta que la coca-cola normal, presentaría
posiblemente una mayor concentración de
cafeína en su composición.
5. CONCLUSIONES
● La técnica de espectroscopia UV dentro
de la práctica demostró su utilidad en el
análisis de muestras tanto líquidas como
sólidas, sin existir mayor diferencia del
procedimiento a seguir. También se
evidenció que su nivel de confianza se ve
afectado más por la preparación de las de
las diferentes soluciones [​ 4]​, ya que si el
valor de absorbancia presentado es mayor
que el valor mayor obtenido en la curva
de calibración es necesario realizar una
nueva solución de tal manera que la
absorbancia quede sobre la curva de
calibración, de lo contrario los valores de
concentración que son hallados no serán
del todo verdaderos sino más bien una
aproximación matemática.
● Se determinó el punto máximo de
absorción el cual depende de la longitud
de onda aplicada y la concentración de la
muestra a estudiar, de esta manera se
puede acercar la teoría que nos muestra la
absorbancia como la capacidad que tienen
algunos elementos de absorber radiación
electromagnética, así se encontró una
relación de proporcionalidad entre la
concentración y la absorbancia.
6. BIBLIOGRAFÍA.
[1]Principios de análisis instrumental, Sexta
edición. Skoog, Douglas A, F. James Holler y
Stanley R. Crouch; Cengage Learning Editores
(2008), págs. 336-398.
[2]https://paginas.fe.up.pt/~cigar/html/docume
nts/Monografia2_000.pdf, págs. 43-64.
[3]https://riunet.upv.es/handle/10251/104055
[4]https://www.u-cursos.cl/usuario/2775c7595
e300ed228a801eb8341e457/mi_blog/r/Espectr
ofotometria__Uv___Visible2012.pdf