INMUNOLOGÍA MÉDICA LABORATORIO

Práctica 10
PERFIL REUMÁTICO

OBJETIVO GENERAL
Realizar las pruebas de PCR, AEL y FR (componentes del perfil reumático) a
través de técnicas de aglutinación pasiva, para coadyuvar al diagnóstico de
enfermedades reumáticas, metabólicas o infecciosas.

MARCO TEÓRICO (INTRODUCCIÓN).

Factor reumatoide:
Entre las respuestas humorales contra componentes propios, encontramos una
variedad de autoanticuerpos, de prácticamente cualquier isotipo, que poseen una
amplia gama de especificidades. Un tipo de estos autoanticuerpos son los factores
reumatoides, dirigidos contra epitopos ubicados en las cadenas pesadas de la IgG,
especialmente en la región que une los dominios CH2 y CH3 de la región Fc.
Algunos de estos epitopos representan estructuras conservadas entre las
inmunoglobulinas de distintas especies. La mayoría de factores reumatoides son
del isotipo IgM y reconocen epitopos de las IgG. Sin embargo, existen factores
reumatoides de todos los isotipos. La subclase IgG3 parece ser uno de sus
blancos más comunes, aunque dependiendo de su especificidad fina, algunos
factores reumatoides reconocen todas las subclases. Interesantemente, algunos
de los epitopos reconocidos aparecen o se exponen cuando los anticuerpos IgG
forman un complejo con su antígeno correspondiente.
El término factor reumatoide se originó del hallazgo inicial de estos
autoanticuerpos en el suero de pacientes con artritis reumatoide. Esta es una
enfermedad autoinmune que se caracteriza por la inflamación crónica de las
articulaciones, que conlleva a dolor, tumefacción y erosión de las mismas, con
pérdida importante de su movilidad y funcionalidad. Aunque un alto porcentaje (75-
80%) de los pacientes con artritis reumatoide presentan altos niveles de factor
reumatoide en su plasma, estos autoanticuerpos también pueden ser hallados en
otras condiciones (autoinmunes o no).

Antiestreptolisinas:
algunos son capaces de ocasionar importantes infecciones. La mayoría de estas

son de tipo supurativo e involucran estreptococos del grupo A. Entre las

infecciones que pueden causar se incluyen faringitis, impétigo, fiebre escarlatina,
erisipela, osteomelitis, pericarditis, sinusitis, endocarditis y meningitis. Algunas
complicaciones o secuelas postestreptocóccicas frecuentes son la fiebre reumática
y la glomerulonefritis aguda.
Además de las técnicas microbiológicas para aislar a estas bacterias, las técnicas
serológicas contribuyen a determinar su presencia, ya sea directamente (mediante
la detección de antígenos específicos), o indirectamente (mediante la detección de
sus correspondientes anticuerpos).
Por lo general, la respuesta de anticuerpos contra antígenos de estreptococos se
eleva en pocos días, y alcanza un pico 2-3 semanas después de la infección
inicial. Las pruebas serológicas evalúan la presencia de anticuerpos contra uno o
más antígenos de la bacteria, tanto celulares como secretados.
Uno de los primeros métodos utilizados para determinar anticuerpos
antiestreptocóccicos fue la prueba de anti-estreptolisina O (ASO), introducida por
Todd. Esta determina la presencia de anticuerpos séricos contra una exotoxina del
estreptococo, la estreptolisina "O". Esta toxina es una potente hemolisina, lábil al
oxígeno e inmunogénica (a diferencia de la estreptolisina "S", que es estable al
oxígeno y no es inmunogénica).

PCR:
La proteína C-reactiva pertenece a un grupo de glicoproteínas séricas
denominadas proteínas de fase aguda. Estas proteínas son sintetizadas en su
mayoría por el hígado y normalmente se pueden encontrar circulando en bajas
concentraciones. Sin embargo, tienen la particularidad de que sus niveles pueden
incrementarse significativamente, hasta en varios órdenes de magnitud, en
respuesta a una variedad de estímulos que se desencadenan durante la
inflamación y el daño tisular. Por ejemplo las infecciones bacterianas,
quemaduras, el infarto de miocardio, traumas, etc., conducen a un aumento de las
proteínas de fase aguda.
Estas proteínas regresan a su concentración normal cuando el proceso
inflamatorio o de daño tisular desaparecen.
En general, las proteínas de fase aguda tienen una vida media (t½) en plasma de
2-3 días. Su síntesis por los hepatocitos es inducida por el grupo de citocinas
proinflamatorias, principalmente la IL-6, y en menor grado la IL-1 y el TNF-α. Se ha
demostrado que la IL-6 estimula directamente la síntesis de PCR en cultivos de
hepatocitos humanos.
Además, la PCR posee actividad opsonizante, constituyendo así un importante
mecanismo innato de inmunidad. Esta proteína es filogenéticamente muy antigua y
se piensa que formó parte de una respuesta inmune primitiva.

PROCEDIMIENTO
Para las tres técnicas el procedimiento es el mismo.
1. Obtener una muestra de suero. Conservar en refrigeración hasta por 24 hr o
congelar para plazos mayores. Antes de iniciar la prueba la muestra y los reactivos
deben estar a temperatura ambiente.
2. En caso de que requerir la prueba cuantitativa diluir la muestra 1:10 con PBS y
preparar una serie de diluciones dobles a partir de dicha dilución.
3. Colocar una gota (50 μl) de cada muestra (o sus diluciones) sobre una lámina
de fondo oscuro limpia. Correr sueros control (+) y (-) en cada lote de muestras.
4. Homogenizar la suspensión del látex-IgG y agregar una gota a cada muestra.
Evitar el contacto del gotero con las muestras.
5. Mezclar con la ayuda de un aplicador, rotar la lámina por 2 min y leer.
6. Dependiendo de cada reactivo comercial, la prueba se considera positiva
cuando se presenta aglutinación en títulos mayores de 1:10, 1:40 o 1:80. Es
recomendable establecer valores de referencia en cada laboratorio, utilizando
sueros normales. A la vez, para el caso del factor reumatoide es importante
considerar la edad del paciente, ya que en edades avanzadas es posible encontrar
individuos sanos con títulos moderados de factor reumatoide, en ausencia de
patología. Hasta un 20-25% de pacientes con artritis reumatoide pueden tener una
prueba de factor reumatoide negativa.
La concentración de PCR en individuos aparentemente sanos es inferior a 3 μg/ml,
cuenta que la presencia de factores reumatoides en la muestra puede causar
falsos positivos con esta técnica.