UNIVERSIDAD DE LOS LLANOS

Facultad de Ciencias agropecuarias y recursos naturales

Laboratorio de química orgánica.

La cromatografía: como técnica dentro del laboratorio en compuestos

orgánicos.

Doris Alejandra Murillo Cuéllar1, Marlly Solanlly Tangarife Ovalle2

Yenni Lorena Londoño Yara 3

1. Cod. 117004028, doris.murillo@unillanos.edu.co, Ing. Agroindustrial.

2. Cod: 1110004036, solanllyovalle@outloock.com, Ing. Agronómica.
3. Cod: 111003845, yenni.londono@unillanos.edu.co, Ing. Agronómica

RESUMEN. El método de cromatografía es muy utilizado en la separación y purificación de una sustancia a través
del arrastre de sus componentes, que permite identificarlos. El método a utilizar es el de cromatografía en capa fina
de tipo solido-liquido, por lo que su fase estacionaria fue sólida, gel de sílice. Y su fase móvil fue liquida, que
consistió en una mezcla de disolventes de acetona y tolueno en diferentes proporciones (50% tolueno y 50%
acetona) (60% acetona y 40% tolueno) (80%acetona y 20% tolueno), cuya finalidad era descubrir cual proporción
del eluyente fue más soluble en el soluto (mezcla de azul de bromotimol y p-Nitrofenol) y así poder separar cada uno
de sus componentes. Se ha descubierto que la fuerza de elución dependió más de la polaridad de la Acetona que del
tolueno en el soluto, por lo que se facilito la movilización de los componentes, y así mismo la retención en la fase
estacionaria (gel de sílice). De este modo, la separación selectiva de los componentes de una mezcla, por
cromatografía, se debe a las diferencias en la migración de los componentes individuales a lo largo de la fase
estacionaria.

Palabras claves: Cromatografía en capa fina, fuerza de elución, mezcla de disolventes, retención en gel de sílice,
polaridad del tolueno y acetona.

ABSTRACT. The method of chromatography is very used in the separation and purification of a substance across
the dragging of his components, which allows identifying them. The method to using is that of chromatography in
thin cap of solid - liquid type, for what his stationary phase was solid, a gel of silica. And his mobile phase was
liquid, that consisted of a mixture of solvents of acetone and toluene of different proportions (50 % toluene and 50 %
acetone) (60 % acetone and 40 % toluene) (80%acetona and 20 % toluene), whose purpose was discovered which
proportion of the eluyente was more soluble in the solute (mixture of blue of bromotimol and p-Nitrofenol) and this
way was able to separate each of his components. One has discovered that the force of elution depended mas on the
polarity of the Acetone that of the toluene in the solute, for what I facilitate the mobilization of the components to
him, and likewise the retention in the stationary phase (gel of silica). Thus, the selective separation of the
components of a mixture, for chromatography, owes to the differences in the migration of the individual components
along the stationary phase.

Key words: Chromatography in thin cap, forces of elution, mixes of solvents, retention in gel of silica, polarity of
the toluene and acetone.
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1. INTRODUCCIÓN
Las separaciones analíticas desde el siglo pasado se
llevaban a cabo por métodos clásicos como la
destilación, extracción y precipitación. Pero todo ha
evolucionado y llego la necesidad de los científicos
por descubrir nuevas técnicas más precisas. La
cromatografía es utilizada como un método de
separación, es muy importante analizar las sustancias
abundantes en soluciones contaminadas. La
cromatografía comúnmente es utilizada para analizar
tipos y cantidad de proteínas contenidas en ella. Las
muestras se pueden separar de acuerdo a su carga.
La cromatografía en capa fina fue el tipo utilizado
para esta práctica es una técnica cromatografía que
utiliza una placa inmersa verticalmente. Esta placa
cromatografía consiste en una fase estacionaria polar
y solida (gel de sílice) que debe ser inerte con los
componentes de la mezcla que se van a separar (azul
de bromotimol y p- nitrofenol). La fase estacionaria
es una capa uniforme de un adsorbente que se
mantiene sobre la placa, que puede ser aluminio,
vidrio u otro soporte. Luego, la elección del eluyente
depende de la polaridad y solubilidad que tiene con
los compuestos, teniendo en cuenta que estos
compuestos también son polares.
. 
El Rf es una forma de determinar el recorrido total del
componente en su mayor pureza, por lo que
previamente el mas apropiado seria el que lograra
mover la mezcla, que era la que contenía los dos
componentes identificados.
La revelación tanto con luz UV (verde), como con
vapores de yodo nos ayuda a visualizar mejor los
recorridos en la fase estacionaria, por medio de una
exaltación de las muestras e incluso del disolvente.
Primero, se somete en la maquina donde la placa
adsorbe luz UV y emite luz visible verde, si esta no
tiene la capacidad de adsorber luz UV se somete al
revelador de vapores. Además ambos facilitan la
determinación del Rf.
2. DISEÑO EXPERIMENTAL
Cromatografía en capa fina
Fase estacionaria: gel de sílice
Fase móvil: Mezcla de acetona y tolueno en las
siguientes proporciones:
 50% tolueno y 50% acetona (1,5ml ±
0,01ml) (1,5ml ± 0,01ml)
 60% acetona (1,8 ml ± 0,01ml) 40% tolueno
(1,2 ml ± 0,01ml)
 80%acetona (2,4 ml ± 0,01ml) y 20%
tolueno (0,6 ml ± 0,01ml)
Muestras: Se sembraron sobre la placa por medio de
capilares.
 Azul de bromotimol ( 3 gotas)
 Mezcla de azul de bromotimol y p-nitrofenol
(3gotas)
P- nitrofenol. (3 gotas).
Placas: las placas eran de aluminio y estaban
cubiertas de gel se sílice. Se trazo una línea de 1cm
desde el borde inferior para realizar la siembra sobre
esta. Se calculó la llegada del eluyente a 1 cm del
borde superior, y se retiró al instante.
Material de procedimiento: Cámara de Cromatografía
Revelación: luz UV verde y vapores de yodo.
3. RESULTADOS Y ANÁLISIS
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1. Azul de Bromotimol (A)

0,7
𝑅𝑓 = = 0,13
5,5
2. Mezcla de azul de bromotimol y p- Nitrofenol (M)
0,7
𝑅𝑓 = = 0,13
5,5
o Uno de sus componentes:
4,9
𝑅𝑓 = = 0,89
5,5
3. P- Nitrofenol (P)

Imagen 1. Placa de cromatografía con disolventes: 4,9

𝑅𝑓 = = 0,89
Acetona 50%, Tolueno 50%. Revelada en luz UV 5,5
verde.

Azul de Bromotimol (A)

0
𝑅𝑓 = =0
5,2
Mezcla de azul de bromotimol y p- Nitrofenol (M)

A M P 0
𝑅𝑓 = =0
5,2
o Uno de sus componentes:
4,7
𝑅𝑓 = = 0,90
5,2
A M P
P- Nitrofenol (P)
Imagen 3.Placa cromatografía de 20% tolueno y 80%
4,7 acetona, revelada en luz UV.
𝑅𝑓 = = 0,90
5,2

1. Azul de Bromotimol (A)

2
𝑅𝑓 = = 0,33
5,5

2. Mezcla de azul de bromotimol y p- Nitrofenol (M)

2,25
𝑅𝑓 = = 0,41
A M P 5,5

Imagen 2. Placa cromatográfica de 40% tolueno y 60% o Uno de sus componentes:

acetona, revelada en luz UV.
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4,8 p-nitrofenol
𝑅𝑓 = = 0,87
5,5
𝐸𝑎 = 0,89 − 0,625 = 0,265
0,89 − 0,625
𝐸𝑟 = = 0,424
3. P- Nitrofenol (P) 0,625
4,8
𝑅𝑓 = = 0,87
5,5
0.89 − 0.625
𝐸𝑝 = ∗ 100 = 42%
0,625
Placa 3- Azul de bromotimol

𝐸𝑎 = 0,33 − 0,625 = 0,295

0,33 − 0,625
𝐸𝑟 = = 0,47
0,625

0.33 − 0.625
𝐸𝑝 = ∗ 100 = 75,5%
0,625
Imagen 4. Placas cromatografías, reveladas en p- Nitrofenol
vapor de yodo. (1)50%acetona-50%tolueno. (2)
80%acetona-20% tolueno. (3) 60%acetona-40% 𝐸𝑎 = 0,87 − 0,625 = 0,25
tolueno.
0,87 − 0,625
𝐸𝑟 = = 0,392
Cálculo de Errores: 0,625

Teóricamente, el máximo valor de RF que se puede

alcanzar es de 1, pero lo ideal es un RF entre 0.55 y 0.7. así
0.87 − 0.625
que promediando los dos valores seria de 0,625. 𝐸𝑝 = ∗ 100 = 39%
0,625
Placa 1: p- Nitrofenol

𝐸𝑎 = 0,90 − 0,625 = 0,3

Mezcla:
0,90 − 0,625
𝐸𝑟 = = 0,44 𝐸𝑎 = 0,41 − 0,625 = 0,22
0,625
0,41 − 0,625
𝐸𝑟 = = 0,34
0,625
0.90 − 0.625
𝐸𝑝 = ∗ 100 = 44% 0.41 − 0.625
0,625 𝐸𝑝 = ∗ 100 = 34%
0,625
Placa 2 …Azul de bromotimol

𝐸𝑎 = 0,13 − 0,625 = 0,49

Con los anteriores resultados se pudo analizar que la
0,13 − 0,625 placa 50/50(imagen 1), no presento totalmente el
𝐸𝑟 = = 0,792
0,625 desplazamiento de la mezcla, pero si alcanzo a mover
uno de sus componentes (p-nitrofenol). El p-
nitrofenol se caracteriza por ser muy soluble en
0.13 − 0.625 disolventes polares, además de que su estructura no es
𝐸𝑝 = ∗ 100 = 79% compleja: primero se considera un alcohol, es un
0,625
benceno y con un sustituyente amida. Por lo tanto la
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acetona es un buen disolvente polar que interactúa
perfectamente con la fase estacionaria y con el
compuesto, formando puentes de hidrogeno. En
cambio, el tolueno es un eluyente no muy polar casi
llegando a ser apolar, por lo tanto su fuerza de elución
es lenta y poca. Además, el azul de bromotimol se
caracteriza por ser insoluble en disolventes como
tolueno, ya que el azul de bromotimol es polar y su
estructura es muy compleja, ya que contiene grupos:
bromo, sulfuro, y alcoholes. Entonces al haber igual
cantidad de acetona y tolueno, el tolueno impide su
interacción intermolecular y hay mayor facilidad que
interactúe el p- nitrofenol con la acetona y un poquito
con el tolueno.. Por consiguiente el azul de
bromotimol permanece inmóvil.
En la placa 60/40 (imagen 2) se pudo analizar que
hubo un mejor arrastre que la placa 50/50 (figura 1),
esto se debe a que hay una mayor proporción en la
acetona debido a que es mucho más polar que el
tolueno, estos reaccionaron de la misma forma tanto
en el azul de bromotimol y la mezcla de azul
bromotimol y p-Nitrofenol. En la placa de 80/20 hubo
un mejor arrastre debido a que el tolueno es insoluble
en azul de bromotimol y este contenía menos cantidad
que en la placa de 60/40
Para la placa que contiene 80%de acetona y 20% de
tolueno ( imagen 3) podemos analizar que hubo un
mejor arrastre a comparación de las otras dos placas
,así que la polaridad y la proporción de acetona es lo
que nos ayudó para un mejor arrastre por la
formación de puentes de hidrogeno con cada
componente. El tolueno al ser menos polar y estar en
menor proporción se permite mayor fuerza de elución
e interacción y por ende una mejor retención, por esa
razón podemos deducir que, entre menor cantidad de
tolueno, y mayor cantidad de acetona se adicione, el
arrastre será mucho mejor, porque la dificultad fue
vista en el azul de bromotimol, que se solubilizo
mejor en la acetona. El cálculo de errores sistemáticos
demuestra que esta placa es en la única en que la
mezcla se encuentra en un estado de equilibrio.
Finalmente, se concluye que la placa que presento
mayor separación de los componentes de la mezcla y
por consiguiente mejores resultados fue la placa 3.
El Rf demostró que hubo mejor retención de los
compuestos azul de bromotimol y n-nitrofenol en la
fase estacionaria debido a una buena interacción con
la fase móvil y se logro el objetivo con un mayor
desplazamiento de la mezcla en la última placa con
0.43. (Imagen 3).
CONCLUSIONES.
Se logró aplicar la cromatografía en capa delgada de
compuestos orgánicos, como lo son la acetona-
tolueno.
Se logra reconocer la relación entre la polaridad del
disolvente, la polaridad de la muestra y su fase
estacionaria, basándonos en los resultados arrojados
de la acetona-tolueno según sus propiedades y
polaridad.
Se logró aplicar la cromatografía de absorción en la
acetona que es un disolvente polar que reacciona muy
bien en el azul de bromotimol y p-Nitrofenol, a
diferencia del tolueno que es menos soluble en ellos.
ANEXOS
Aspectos complementarios.
¿Cuál es el disolvente o mezcla de disolventes más
adecuado para la separación de la mezcla azul de
bromotimol y p-nitrofenol?
El disolvente más adecuado es un disolvente polar
entre más polar mejor va ser, debido a que el azul de
bromotimol es un ácido débil en solución.
Si no se obtiene separación de la mezcla, explique
posibles causas de dicho comportamiento.
Puede ser debido a que no se utilizan los disolventes
indicados.
Consultar otras aplicaciones de la cromatografía en su
campo de estudio.
Como menciona García, a., forero, y. &
Riaño, n. Esta es una aplicación de
cromatografía aplicada a la agronomía.
Uno de los mayores inconvenientes en la
extracción y purificación de biomoléculas a
partir de plantas del género Coffea, es un alto
contenido de polifenoles y compuestos
tánicos. En el presente artículo se describe
una metodología que permite obtener ADN
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de alta pureza. La extracción del ADN del

homogeneizado de tejido foliar en siete
genotipos de Coffea sp., se realizó mediante
la técnica citada por Chaparro (1993) y su
purificación se logró mediante cromatografía
de exclusión molecular sobre una fase
estacionaria de Sephacryl S-1000. Los
resultados muestran que la alta eficiencia de
separación de ARN degradado, proteínas,
pigmentos y compuestos que absorben entre
220 y 300 nm, permiten obtener un ADN de
alta pureza a juzgar por los datos
espectrofotométricos y electroforéticos. (P.)

REFERENCIAS
García, A., Forero, Y. & Riaño, N. (2015).
Aplicación de una Técnica de
Cromatografía de Exclusión Molecular
para la Purificación de ADN en Plantas
de Coffea sp. Revista Facultad Nacional
de Agronomía Medellín.59 (2), 3499-
3507. Recuperado de:
https://revistas.unal.edu.co/index.php/ref
ame/article/view/24345
Bruice, P. (2007).
Química Orgánica (5ta. Edición).
México: Pearson Educación.2.

CEAC, (2007). Materiales de Construcción.

Ediciones CEAC, Barcelona,
España.Pp.125.3.

Climent, J. (2005).
Valencia: Universidad Politécnica de Valencia.4.