BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACION EN EL LABORATORIO

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

ENTREGADO A: PILAR SARMIENTO TORRES

ENTREGADO POR: MILADIS OROZCO OSPINO
COD:1003124081
MAYLIN ESTEFANNY YELA ORTEGA
COD:1061815803
EDER SALLAS

GRUPO: B

FACULTAD CIENCIAS BÁSICAS

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA
2018
 RESUMEN BIOSEGURIDAD Y ESTERILIZACIÓN
La práctica realizada se basó en reconocer las diferentes técnicas que se aplica
para realizar una adecuada esterilización de los implementos del laboratorio de
microbiología, además de las medidas de bioseguridad que siempre deben ser
tomadas para permitir un uso adecuado de los espacios y que permita la
seguridad ante los riesgos o peligros latentes cuando se entró en contacto con los
utensilios. Con base a lo anterior, la esterilización se pudo realizar por diversas
metodologías tales como: calor húmedo, calor seco, filtrado; las cuales se llevaron
a cabo por la utilización de equipos como Autoclave y Hornos. La utilización en
conjunto de las medidas y técnicas conllevó a una completa eliminación de
microorganismos permitiendo la utilización de los instrumentos, seguros que no
representa ningún foco de contaminación.

PALABRAS CLAVES
Bioseguridad: Parte de la biología que estudia el uso seguro de los recursos
biológicos y genéticos.
Metodologías: Conjunto de métodos que se siguen en una investigación
científica, un estudio o una exposición
Esterilización: proceso por el cual todas las células vivas como esporas viables,
virus, viroides son destruidos.
Instrumentos: término general aplicable a todos los medidores, recipientes y otras
herramientas que uno pueda imaginar para realizar síntesis y análisis en el ámbito
de los diversos trabajos de laboratorio.
Fitopatógenos: se denomina fitopatógeno a un organismo, en general
microorganismo, que genera enfermedades en las plantas a través de disturbios
en el metabolismo celular, al secretar enzimas, toxinas, fitoreguladores y otras
sustancias y, además, absorbiendo nutrientes de la célula para su propio
crecimiento.
 INTRODUCCIÓN PRÁCTICA N°1
La bioseguridad hace referencia a medidas preventivas que pretenden disminuir el
riesgo de contaminación del área de trabajo y proteger la salud de las personas
que laboran e ingresan al laboratorio, las cuales están expuestas a
microorganismos patógenos infecciosos para la salud; por esta razón es de vital
importancia la esterilización de los materiales a utilizar y el uso adecuado de los
mismos. Muchos de los patógenos causantes de enfermedades en las plantas se
pueden aislar y cultivar in vitro, razón por la cual se han llevado múltiples
investigaciones en reconocimiento y clasificación de estos Fitopatógenos. Cuando
se hacen cultivos in vitro se debe tener un campo libre de microorganismos que
puedan contaminar los cultivos, por lo cual es tan importante la esterilización y
desinfección. El objetivo de la práctica fue conocer los aspectos básicos de
bioseguridad y reconocer las metodologías existentes para la esterilización, así
como aplicar algunos métodos para esterilizar medios de cultivo y materiales de
laboratorio.
INTRODUCCIÓN PRACTICA N°2

Un método fundamental para estudiar las bacterias es cultivarlas en un medio

líquido o en la superficie de un medio sólido de agar. Los medios de cultivo
contienen distintos nutrientes que van, desde azúcares simples hasta sustancias
complejas como la sangre o el extracto de caldo de carne. Para aislar o purificar
una especie bacteriana a partir de una muestra formada por muchos tipos de
bacterias, se siembra en un medio de cultivo sólido donde las células que se
multiplican no cambian de localización; tras muchos ciclos reproductivos, cada
bacteria individual genera por escisión binaria una colonia macroscópica
compuesta por decenas de millones de células similares a la original. Si esta
colonia individual se siembra a su vez en un nuevo medio crecerá como cultivo
puro de un solo tipo de bacteria. Muchas especies bacterianas son tan parecidas
morfológicamente que es imposible diferenciarlas sólo con el uso del microscopio;
en este caso, para identificar cada tipo de bacteria, se estudian sus características
bioquímicas sembrándolas en medios de cultivo especiales. Así, algunos medios
contienen un producto que inhibe el crecimiento de la mayoría de las especies
bacterianas, pero no la de un tipo que deseamos averiguar si está presente. Otras
veces el medio de cultivo contiene determinados azúcares especiales que sólo
pueden utilizar algunas bacterias. En algunos medios se añaden indicadores de
pH que cambian de color cuando uno de los nutrientes del medio es fermentado y
se generan catabolitos ácidos. Si las bacterias son capaces de producir
fermentación, generan gases que pueden ser apreciados cuando el cultivo se
realiza en un tubo cerrado. Con otros medios de cultivo se identifica si las
bacterias producen determinadas enzimas que digieren los nutrientes: así, algunas
bacterias con enzimas hemolíticas (capaces de romper los glóbulos rojos)
producen hemólisis y cambios apreciables macroscópicamente en las placas de
agar-sangre. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el
laboratorio de microbiología de un hospital, pues sirven para identificar las
bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que
son sensibles esas bacterias.

MATERIALES PRIMERA Y SEGUNDA PRÁCTICA

1. Cajas de Petri
2. Pipetas
3. Erlenmeyer
4. Papel kraft
5. Cinta de enmascarar
6. Gasa
7. Algodón
8. Vaso precipitado
9. Probeta
10. Balanza
11. Tubos de ensayo
12. Bajalenguas
13. Medios de cultivo sintéticos
14. Papel filtro
15. Gradilla
16. Tapones de caucho

METODOLOGÍA SÓLIDO
1. Se recorta el papel Kraft, para envolver los materiales que se van a
esterilizar.
2. Con la gasa y algodón realizar los tapones para el Vaso precipitado,
Erlenmeyer y Probeta.
3. Se esteriliza el material
4. Recibir el material ya esterilizado para realizar la práctica.
5. Proceder a la preparación de medios de cultivo. Calcular cuando hay que
preparar del agar bacteriano que para 1000 ml se necesitaban 37 gr y para
nuestros 60 ml.
6. Después de calculado agregarlo al Erlenmeyer y colocarlo a calentar en la
estufa hasta obtener una mezcla suave.
7. Agregar 20 ml en cada caja de Petri.
 METODOLOGÍA LÍQUIDO

1. En la probeta medir 40 ml para poner de 10 ml en cada uno de los 4 tubos.

2. Calcular cuántos ml de caldo para aislamiento de bacteria vamos a utilizar
para 40 ml.
3. Agregamos 1,92 ml del caldo para aislamiento de bacteria a los 40 ml y
revolvemos hasta que consigamos se solubilice.
4. Con la pipeta agregamos 10 ml de la solución a cada tubo de ensayo.
5. Tapamos con los tapones de gasa, algodón y cinta bien ajustado. Los
colocamos en el vaso precipitado y procedemos a colocarlo en el autoclave.

DISCUSIÓN SÓLIDO
1. Recibimos el material ya esterilizado por la docente.
2. Realizamos el cálculo para el agar bacteriano:
37gr 1000ml
x 60 ml

x= 37grX60ml x= 2,22gr
1000ml
3. Agregamos los 60 ml de agua destilada al Erlenmeyer.
4. Comenzamos pesando el papel filtro el cual pesó: 0,6gr. Pesamos
igualmente los 2,22gr que nos dio el resultado. (FIGURA N°1)
5. Lo agregamos al Erlenmeyer y se calentó en la estufa del laboratorio.
(FIGURA N°2)
6. Lo retiramos y procedemos a flamear con el mechero la boca del
Erlenmeyer para agregar la muestra en las cajas de Petri hasta cubrir toda
la superficie, para agregar y al acabar de agregar la muestra se flamea la
boca del Erlenmeyer.
7. Finalmente tapamos las tres cajas y se entregaron a la docente. (FIGURA
N°3)
 DISCUSIÓN LÍQUIDO

1. Después de medir los 40 ml en la probeta los colocamos en el vaso

precipitado.
2. Hacemos el cálculo del caldo para aislamiento de bacteria.
24 gr 500 mL
x 40 mL

x= 24grX40mL
500mL

x= 1,92 gr.
3. Pesamos el papel filtro y a este peso le sumamos los 1,92 gr y al final
tendremos que agregar hasta que este balanceada en 2,52 gr.
(FIGURA N°1)
4. Lo agregamos al vaso precipitado y agitamos suavemente para que se
disuelva.(FIGURA N°4)
5. Nos dio un color amarillo claro, pipeteamos y agregamos 10 ml en cada
uno de los tubos de ensayo, tapamos con los tapones de corcho y
colocamos los 4 tubos en el vaso precipitado para que entren al
autoclave. (FIGURA N°5,6 Y 7)

CUESTIONARIO N°1

1. Defina y dé ejemplos de soluciones referentes al término

 Antiséptico: Es una sustancia que impide, bloquea el desarrollo de los

microorganismos patógenos generadoras de las infecciones, o
directamente los elimina de plano.
Ejemplos:
1. La saliva que está presente en nuestra cavidad bucal es un gran auxiliar
a la hora de eliminar microorganismos nocivos que pueden afectar esta
zona.
2. La miel es un antiséptico efectivo al que se le suma una capacidad de
cicatrización muy rápida y generación celular.
3. La cebolla y el ajo.
4. Clorhexidina que entra en acción muy rápidamente y posee una gran
actividad bactericida frente a gérmenes.
  Desinfectante: Productos o elementos naturales que sirven para limpiar,
evitar la presencia de bacterias, virus y otro tipo de microorganismos
peligrosos para la salud. Dependiendo del tipo de producto o elemento del
que se hable, podemos estar haciendo referencia a mayor o menor
agresividad, mayor o menor peligrosidad para el ser humano, mayor o
menor poder de efectividad y duración.
Ejemplos:
1. Alcohol etílico que presenta actividad bactericida, pero su eficiencia es
variable frente a hongos y virus.
2. Blanqueador o hipoclorito de sodio es el desinfectante más usado, ya
que cuenta con ventajas de bajo costo y su amplio espectro bactericida.

 Bacteriostático: Es aquel que aunque no produce la muerte a una bacteria,

impide su reproducción; la bacteria envejece y muere sin dejar
descendencia. Un efecto bacteriostático está reproducido por sustancias
bacteriostáticas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como
medios defensivos contra las bacterias.
Ejemplos:
1. Lactoperoxidasa
2. Espermina del semen
3. Acido láctico

 Bactericida: Produce la muerte a una bacteria y está provocado por alguna

sustancia bactericida. Los organismos secretan sustancias bactericidas
como medios defensivos contra las bacterias.
Ejemplos:
1. Lisozima: Está presente en la saliva, lágrimas y mocos y protege las mucosas
relacionadas con la nasofaringe. Provoca la muerte de las bacterias cuando estas
se están multiplicando.
2. Antibiótico: Sustancia química que mata o impide el crecimiento de ciertas
clases de microorganismos sensibles.

 Germicida: Producto químico que se emplea para destruir gérmenes;

desinfectante.
Ejemplos:
1. Ácido carbólico y ácido bórico.
2. Yodo.
3. Peróxido de hidrogeno.
4. Nitrato de plata.
2. Qué son y cuál es la utilidad de las Cabinas de Seguridad Biológica.
Las cabinas de seguridad biológica son equipos que proporcionan una barrera de
contención para trabajar de forma segura con agentes infecciosos.
Tienen la adecuada capacidad para proteger al trabajador, medio ambiente y
producto.
son equipos que han sido diseñados para mantener un área denominada zona de
trabajo, libre de partículas o de probables contaminantes tales como bacterias que
puedan alterar el producto con el cual se trabaja.
3. Todo laboratorio debe estar provisto de un botiquín de primeros auxilios, situado
en un lugar fácilmente accesible. Especifique lo que el botiquín debe contener.
Un botiquín de primeros auxilios debe contener:
 Material de autoprotección: Guantes de látex o vinilo, toallitas de alcohol y
mascarilla de protección facial.
 Material de hemostasia: vendas hemostáticas para el control de
hemorragias.
 Material de curas: suero fisiológico, antiséptico, gasas, esparadrapo, tijeras
y pinzas.
 Material para protección de heridas, quemaduras y traumatismo articular:
pañuelo triangular y vendas de diferentes tamaños.
4. En caso de que ocurriese un corte o una quemadura, cite las provisiones que
sirven principalmente para este fin.
En cortes: detener el sangrado presionando suavemente sobre ellos con una tela
limpia o vendaje por 20 o 30 minutos si es posible, luego se limpia la herida con
agua limpia ya que una limpieza a fondo reduce el riesgo de infecciones para este
utilizamos jabol y toalla para limpiar alrededor de la herida y vendar el corte para
mantener la herida límpia y asi evitar los dalos causados por las bacterias.
En quemaduras: refrescar la piel usando agua fría, no usar hielo, agua helada,
cremas o sustancias grasas como mantequilla, cubrir la quemadura
temporalmente con una bolsa de plástico, no tocar ni romper las ampollas.

5. ¿Qué es esterilización?
La esterilización es la destrucción o eliminación de todas las formas de vida y se
puede llevar por medio de un proceso físico o químico.
6. ¿Dibuje un autoclave con sus partes y describa su función?

Asadera: permite retirar la parte superior del equipo.

Válvula de control: válvula de apertura y cierre de purga que permite controlar la
presión dentro del autoclave.
Tubo de purga: conducto por donde es liberado vapor.
contenedor de aluminio: chasis del autoclave.
Asadera completa: asadera en la parte lateral para levantar el autoclave.
Tuerca de tapa superior: dispositivo parte del mecanismo de seguridad.
soporte de contenedor interno: base de aluminio del contenedor.
Tornillo asegurador: dispositivo parte del mecanismo de aseguramiento.
Fijador del tornillo asegurador: sujetador que evita el movimiento del tornillo
asegurador.
Tapo de sobrepresión: tapón liberador de presión excesiva.
Manómetro de vapor: indicador de presión dentro de la cámara.

7. ¿Qué medidas podría tomar usted para verificar la efectividad de la

esterilización por autoclavado?
Con calor húmedo en autoclave tener los objetos a 121ºC durante 20 minutos y a una presión
superior a la atmosférica, también se podría realizar con el indicador biológico Bacillus
Estearothermophilus si
la muestra presenta un cambio de coloración de amarillo a violeta está indicando que la
esterilización fue incorrecta.
8. ¿Qué otros procesos físicos permiten disminuir la carga microbiana?
Otros procesos físicos que permiten disminuir la carga microbiana son: El calor
seco (Horno Pasteur) que produce desecación de la célula.
Radiaciones: No ionizantes como rayos ultravioleta e infrarrojo.
Ionizantes como rayos x y g.
9. ¿Qué otros tipos de rayos a diferentes longitudes de onda se emplean para
esterilización?
Los rayos cósmicos: proceden del espacio profundo y su frecuencia supera los 3,0
x 1022 Hz (30 ZHz). Esos rayos se componen de ondas cósmicas de la más
elevada frecuencia y una alta carga de energía que llegan, incluso, hasta la
superficie terrestre. Su efecto resulta mortal si alguien se expone directamente a
las mismas en el espacio cósmico sin la debida protección de una escafandra,
como las utilizadas por los cosmonautas.

CUESTIONARIO N°2

1. Identifique las fuentes de bioelementos en los medios preparados en el

laboratorio.

2. Al preparar el agar sangre, cual es la razón por la cual esta es adicionada

después de esterilizar el medio de cultivo.

La razón por la cual ésta es adicionada después de esterilizar el medio de

cultivo es porque tenemos el objetivo que en el agar sangre crezca nuestro
microorganismo en específico y por eso se esteriliza para que otros
microorganismos que están en el medio no nos contaminen la muestra y el
cultivo crezca solamente con lo que queremos estudiar.

3. Cite dos ejemplos de medios que no se esterilicen en autoclave.

4. Cite dos ejemplos de medios listos para su uso.

 5. Como se realiza el control de calidad de los medios después de su
preparación.

EVIDENCIAS

FIGURA N°1 FIGURA N°2

FIGURA N°3
FIGURA N°4 FIGURA N°5

FIGURA N° 6 FIGURA N°7